CC BY
29
https://doi.org/10.33647/2074-5982-17-4-18-37
(«0
BY 4.0
ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОЛУЧЕНИЯ СУБСТАНЦИИ
СТАБИЛИЗИРОВАННЫХ В ЛИПИДАХ УСТОЙЧИВЫХ НАНОЧАСТИЦ, СОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКС БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ МУСКУСА
КАБАРГИ
С.Л. Люблинский1, И.Н. Люблинская2*, Е.М. Колоскова2, А.М. Азизов2, В.Н. Каркищенко1, М.С. Нестеров1, А.В. Капцов1, Р.А. Агельдинов1,4, В.Н. Герасимов3,
Д.В. Гриненко3
1ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России» 143442, Российская Федерация, Московская обл., Красногорский р-н, п. Светлые горы, 1
2 ООО «Научно-производственная фирма "МОБИТЕК-М"» 249010, Российская Федерация, Калужская обл., Боровск, п. Институт, 6
3 ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» 142279, Российская Федерация, Московская обл., Серпуховский р-н, п. Оболенск
4 ФГБОУ ВО «Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева» 125047, Российская Федерация, Москва, Миусская пл., 9
С целью сохранения и повышения биологической эффективности комплекса биологически активных веществ (БАВ), выделенных из мускуса кабарги, изучены технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс БАВ, и выполнена оценка ее стабильности. Установлено, что оптимальным способом получения является гомогенизация под высоким давлением. Разработаны режимы приготовления липосомаль-ной формы БАВ с заранее заданными параметрами дисперсности — средним диаметром частиц 250±100 нм, индексом полидисперсности 0,3±0,1 и дзета-потенциалом от -5 до -35 мВ. Установлено, что гомогенизатор высокого давления «Донор-5» позволяет получать липосомальные дисперсии со стандартными параметрами и степенью включения БАВ мускуса до 60%, а также обеспечивает минимальное окисление и гидролиз фосфолипидов (индекс окисленности 0,3). Исследования показали, что использование отечественного фосфатидилхолина является экономически оправданным и позволяет получать липосомальные формы надлежащего качества. Показатели качества полученной липосомальной субстанции охарактеризованы соответствующими методами анализа (динамическое светорассеяние, электронная микроскопия, гель-размерная хроматография, хромато-масс-спектро-метрия и др.). На основании полученных результатов разработан проект спецификации на липо-сомальную субстанцию (порошок), содержащую комплекс БАВ, выделенных из мускуса кабарги. Разработанную технологию получения липосомальной формы БАВ из мускуса кабарги можно масштабировать в соответствии с требованиями ОМР.
Ключевые слова: кабарга, мускус, липосомы, гомогенизатор высокого давления Конфликт интересов: авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Люблинский С. Л., Люблинская И.Н., Колоскова Е.М., Азизов А.М., Каркищенко В.Н., Нестеров М.С., Капцов А.В., Агельдинов Р.А., Герасимов В.Н., Гриненко Д.В. Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги. Биомедицина. 2021;17(4):18-37. https://doi.org/10.33647/2074-5982-17-4-18-37
Поступила 20.08.2021
Принята после доработки 11.11.2021
Опубликована 10.12.2021
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, РА. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
TECHNOLOGICAL ASPECTS OF OBTAINING LIPOSOMES CONTAINING A COMPLEX OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES ISOLATED FROM DEER MUSK
Stanislav L. Lyublinskiy1, Irina N. Lyublinskaya2*, Elena M. Koloskova2, Arif M. Azizov2, Vladislav N. Karkischenko2, Maksim S. Nesterov1, Alexander V. Kaptsov1, Ruslan A. Ageldinov1,4, Vladimir N. Gerasimov3, Dmitrii V. Grinenko3
1 Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia 143442, Russian Federation, Moscow Region, Krasnogorsk District, Svetlye Gory Village, 1
2 Scientific and Production Company "MOBITEK-M" 249010, Russian Federation, Kaluga Region, Borovsk, Institute Village, 6
3 State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology 142279, Russian Federation, Moscow Region, Serpukhov District, Obolensk Settlement
4 Mendeleev University Chemical Technology of Russia 125047, Russian Federation, Moscow, Miusskaya Square, 9
In order to preserve and increase the biological effectiveness of biologically active substances isolated from deer musk, we studied technological aspects of obtaining a substance of lipid-stabilized stable nanoparticles from deer musk. The stability of the obtained substance was evaluated. It was found that homogenization under high pressure is an optimal approach to obtaining biologically active substances from deer musk. The modes of preparation of a liposomal form of biologically active substances with predetermined dispersion parameters (average particle diameter 250 ± 100 nm, polydispersity index 0.3 ± 0.1, and zeta potential from -5 to -35 mV) were determined. It was found that the high-pressure homogenizer "Donor-5" makes it possible to obtain liposomal dispersions with standard parameters and the degree of inclusion of musk biologically active substances up to 60%, at the same time as providing minimal oxidation and hydrolysis of phospholipids (oxidation index 0.3). Our studies showed that the use of a domestic phosphatidylcholine is economically justified and allows obtaining liposomal forms of proper quality. The quality indicators of the obtained liposomal substance were characterised by conventional analytical methods (dynamic light scattering, electron microscopy, gel chromatography, chromatography-mass spectrometry, etc.). On the basis of the results obtained, a draft specification was developed for a liposomal substance (powder) containing a complex of biologically active substances isolated from deer musk. The developed technology for obtaining a liposomal form of biologically active substances from deer musk can be scaled up in accordance with GMP requirements.
Keywords: musk deer, musk, liposomes, high pressure homogenizer Conflict of interest: the authors declare no conflict of interest.
For citation: Lyublinskiy S.L., Lyublinskaya I.N., Koloskova E.M., Azizov A.M., Karkischenko V.N., Nesterov M.S., Kaptsov A.V., Ageldinov R.A., Gerasimov V.N., Grinenko D.V. Technological Aspects of Obtaining Liposomes Containing of a Complex of Biologically Active Substances Isolated from Deer Musk. JournalBiomed. 2021;17(4):18-37. https://doi.org/10.33647/2074-5982-17-4-18-37
Submitted 20.08.202i Revised ii.ii.202i Published i0.i2.202i
Введение гии доставки лекарств. Основной целью Из пяти основных областей применения этих технологий является максимальное нанотехнологий в медицине и фармации использование «фармацевтических фактов последние годы особенно интенсивно ров» для обеспечения высокого качества развиваются наноконтейнерные техноло- приготовляемых лекарственных средств,
что совпадает со стратегической задачей биофармации [11], которая заключается в максимальном повышении эффективности лекарственных средств и снижении до минимума возможного нежелательного их действия на организм.
Наибольшую популярность среди нано-контейнерных технологий завоевали технологии с применением липосом [1, 5, 17]. Благодаря своим физико-химическим свойствам, мембранотропности и биосовместимости липосомы в наибольшей степени соответствуют всем качествам, необходимым для эффективной доставки функциональных молекул к месту их действия. Поэтому из простой модели, имитирующей клеточные мембраны, липосомы превратились в объект активных научных исследований и практического применения.
На сегодняшний день известно более 100 липосомальных препаратов, как коммерчески доступных, так и проходящих различные стадии клинических исследований. Об особом интересе к разработке лекарств в липосомальной форме свидетельствуют данные реферативного сборника «Изобретения стран мира», где опубликовано более тысячи патентных документов, являющихся результатом изучения этого вопроса.
Создание липосомальных форм имеет большое практическое значение для разработки новых органопрепаратов в качестве систем эффективной доставки различных биологически активных веществ (БАВ), полученных из природного сырья, в т. ч. из мускуса кабарги [18].
Липосомы, что в переводе с греческого означает «жировое тело», — это искусственно создаваемые липидные везикулы (пузырьки), состоящие из одного или нескольких фосфолипидных бислоёв толщиной 4-20 нм, разделённых водной фазой. Впервые они были описаны в 1965 г. британским учёным А. Бэнгхемом и его коллегами.
Для практического применения липо-сом исключительно важно понимание их взаимодействия с мембраной клетки. Установлено, что липосома может увеличивать проницаемость мембраны, вызывая образование дополнительных каналов, проходящих через неё; может прикрепляться (адсорбироваться) к мембране; может поглощаться клеткой, и в этом случае вещество, принесённое ею, попадает непосредственно внутрь этой клетки; мембраны липосомы и клетки могут сливаться друг с другом; клеточная мембрана и липосома могут обмениваться липидами [15, 16]. Т. о., благодаря применению липосом появился новый способ направленного воздействия на клетку, который называют «мембранной инженерией» [19].
В настоящее время установлены основные критические точки и их параметры для процесса производства липосомальных препаратов (рис. 1), подлежащие тщательному контролю [4]. При разработке данных технологий необходимо учитывать многочисленные случаи, когда эффективные и безопасные липосомальные препараты, полученные в лабораторных условиях, не всегда удавалось воспроизвести в условиях промышленного производства. Это связано со множеством различных факторов: неоднородностью липидных компонентов, экспозицией биохимически важных функциональных групп на наружной поверхности липосом, фиксированной толщиной водного слоя, числом липидных бислоёв и так далее, а также во многом зависит от используемого технологического оборудования и масштаба производства.
В настоящее время существует около 20-ти основных способов получения ли-посом [12, 20]. Для практического применения необходимо, чтобы разрабатываемые технологии позволяли сочетать стандартность состава и стабильность получаемых липосом, минимальное окисление и гидролиз фосфолипидов, сохранность вводимого
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, РА. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
С Т А Д И И П Р О И З В О Д С Т В А Л И П О С О М
1. Субстанция липидов 2. Получение липосом 3. Стерилизующая фильтрация 4. Лиофилизация
- содержание основного - температура; - подбор материала; - параметры замораживания;
вещества; - давление; - скорость и давление; - параметры сублимации;
- степень окисленности; - количество циклов; - температура; - тип и количество криопро-
- МБЧ; - степень включение АФС; - объём и концентрация тектора;
- температура фазового - размер и заряд ЛС; - выбор первичной упаковки;
перехода; - рН; - содержание остаточной
- тяжёлые металлы; - стабильность субстанций влажности;
- эндотоксины; (ФЛ + АФС); - условия герметизации
- содержание лизоформ; - стабильность липосом; и хранения;
- остаточные раствори- - содержание криопро- - стабильность;
тели тектора - условия регидратации
Рис. 1. Основные критические стадии процесса производства липосомальных препаратов и их параметры. Fig. 1. Main stages in the production of liposomal preparations and their parameters.
лекарственного препарата с высокой производительностью и простотой способа их получения. Существенное значение имеет наличие стандартного промышленного оборудования и получение препарата в асептических условиях в закрытом режиме, а также возможность регулирования и контроля основных параметров в ходе технологического процесса валидации.
Поскольку мускус кабарги представляет собой сложнейший комплекс, состоящий не только из белков, пептидов, простых и сложных липидов, стероидов, восков, ароматических соединений, сложных эфиров холестерина, но и включает в себя целые клетки, кусочки тканей, шерстинки, песчинки и др. посторонние примеси, многие способы липосомиро-вания для этого биологического объекта не применимы. Поэтому для получения липосом, содержащих БАВ из мускуса, из существующих на сегодняшний день технологий был выбран, как наиболее перспективный, способ гомогенизации под высоким давлением.
Выбор этого метода для получения ли-посом определяется его высоким гомогенизирующим эффектом, возможностью максимально сохранить биологическую активность липосомируемых компонентов, скоростью и производительностью процесса липосомирования, а также возможно-
стью масштабирования технологии в дальнейшем.
Необходимость создания отечественных устройств для приготовления специализированных гомогенных высокодисперсных эмульсий и липосомальных дисперсий медико-биологического назначения была обусловлена возрастающей потребностью в них в медицине, фармакологии и биотехнологии в последние десятилетия прошлого века. Одним из основных разработчиков данного оборудования был талантливый изобретатель Капцов В.В. (Институт биохимии клетки РАН, г. Пущино). С помощью созданного им гомогенизатора высокого давления (ГВД) «Донор» [7, 21] в этом институте впервые в мире был разработан искусственный кровезаменитель с газотранспортной функцией «Перфторан».
Дисперсность, или размер липосом в значительной степени влияет на скорость элиминации и характер распределения лекарственных веществ в организме, их концентрацию в биологических жидкостях и тканях. Эти показатели являются важным параметром, который определяет механизм интернализации клеток [14]. Показано, что частицы диаметром менее 200 нм вводятся в клетки с помощью клатрин-опосре-дованного эндоцитоза, а частицы размером 200-500 нм поступают через кавеоло-опос-редованный эндоцитоз [24]. Установлено,
что частицы диаметром более 200 нм могут активировать систему комплемента в организме человека и удаляться из кровотока купферовскими клетками. Кроме того, во время фильтрации в селезёнке захватываются частицы, размер которых превышает 200-250 нм, а во время печёночной фильтрации задерживаются частицы диаметром более 150 нм.
Таким образом, липосомы меньшего диаметра имеют преимущество перед липосома-ми больших размеров, поскольку они могут избегать фагоцитоза клетками ретикулоэн-дотелиальной системы и способны легко проникать в межклеточное пространство. Однако необходимо учитывать, что частицы размером менее 100 нм имеют высокую тенденцию к образованию кластеров и агрегатов, которые в дальнейшем могут приводить к эмболизации и вызывать инсульты, инфаркты миокарда и др. осложнения.
Субстанцию липосом, содержащую БАВ из мускуса кабарги, планируется применять для производства пероральных препаратов трансмукозального введения. Известно, что в этом случае БАВ попадают непосредственно в большой круг кровообращения в обход желудочно-кишечного тракта и минуя метаболизм первого прохода в печени. Их абсорбция осуществляется посредством пассивной диффузии через мембраны и по скорости в единицу времени превышает пероральный приём в 3-10 раз, уступая только подкожным инъекциям. Это позволяет использовать меньшее количество действующего вещества при одной и той же биодоступности или увеличивать эффективную действующую концентрацию. В связи с этим в ходе работы планировалось добиться оптимального размера основной фракции липосом в экспериментальных образцах субстанции в диапазоне 250±100 нм.
Целью настоящей работы являлась разработка технологии получения стабилизи-
рованных в липидах устойчивых наноча-стиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги, с помощью гомогенизации при высоком давлении.
Материалы и методы
Для получения липосом в ходе эксперимента в качестве сырья были использованы 70% фосфатидилхолин (производство «АЛМ», Россия) и 80% фосфатидилхолин (производство «Липоид», Германия), а также концентрат БАВ из мускуса кабарги (ТУ 01.49.24-001-58709973-2017).
Получение липосом осуществляли с помощью отечественного гомогенизатора высокого давления в последней модификации «Донор-5» (рис. 2). Перед началом гомогенизации диспергируемые компоненты приготавливаемого продукта после предварительного перемешивания в механическом смесителе заливаются в расходную ёмкость. Из неё они поступают в экс-трузионную камеру (гомогенизирующее устройство), в которой они продавливаются через микрощель из области высокого давления (от 40 до 1000 МПа) в область нормального атмосферного давления.
Процессы диспергирования, гомогенизации или дезинтеграции осуществляются за счет резкого падения давления и действия гидродинамических сил турбулентного потока, возникающих в области микрощели. Капли или частицы, испытывая усилия растягивания и среза, дробятся на части. Величина давления характеризует степень этих усилий и служит основным технологическим показателем трудоемкости процесса. Процесс повторяется несколько раз до достижения необходимого качества продукта, в т. ч. величины липосом.
По своим технологическим параметрам гомогенизатор «Донор-5» превосходит все серийно выпускаемые отечественные и зарубежные аналоги. К его основным преимуществам относятся:
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, Р.А. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
Рис. 2. Внешний вид гомогенизатора высокого давления «Донор-5». Fig. 2. External view of the high-pressure homogenizer "Donor-5".
- высокая степень разрушения клеток и тканей;
- высокая дисперсность конечных продуктов и широкий диапазон величины частиц (от 10 нм до 10 мкм);
- высокая производительность (до 2530 л/ч), возможность приготовления малых порций продукта (100-200 мл), а также независимого приготовления двух продуктов одновременно;
- отсутствие окисляющего действия на компоненты продуктов;
- быстросъемность и автоклавируемость гомогенизирующих узлов (головок), обеспечение стерильного получения конечных продуктов;
- отсутствие загрязнения продукта механического примесями;
- широкий диапазон регулирования давления, температуры и производительности;
- визуализация основных параметров технологического процесса и возможность его валидации;
- соответствие нормам GMP;
- небольшие габариты и масса.
Изучение подлинности (наличия липосом) проводили в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (г. Оболенск) методом негативного контрастирования в трансмиссионном электронном микроскопе Tecnai G2 Spirit bioTWIN (фирма «FEI», США) при ускоряющем напряжении 120 кВт и увеличениях от 5000 до 80 000 крат. Электронно-микроскопические изображения полей каждого образца, усеянных
липосомами, фотографировали с разных участков (25-30 участков) экрана микроскопа с помощью программы FEI Digital Micrograph, выбирая при этом всегда случайные поля. Полученные изображения ли-посом были проанализированы и обработаны с помощью программного обеспечения Tecnai Imaging & Analysis (фирма «FEI», США).
Для определения размера липосом, индекса полидисперсности и дзета-потенциала использовался метод динамического рассеяния света (ДРС) с помощью лазерного корреляционного спектрометра Photocor Compact-Z с применением программного обеспечение Photocor Software [26].
Индекс окисленности липидов в составе липосом определялся фотометрическим методом при 232 нм [2]. Определение общего белка проводили по методу Бредфорда без предварительного осаждения белка в соответствии с ГФ РФ, ЩФС. 1.2.3.0012.15 «Определение белка».
Количественное определение БАВ из мускуса кабарги и процент их включения в липосомы проводилось методами, разработанными ФМБА России [8].
Молекулярно-массовое распределение липосомальной дисперсии оценивали методом гель-размерной хроматографии (ГРХ) высокого разрешения на жидкостном изо-кратическом хроматографе среднего давления NGC Discovery («Bio-Rad», США). Степень включения БАВ из мускуса кабарги в липосомы определяли методом хро-мато-масс-спектрометрии высокого разрешения ВЭЖХ-МС ВР 1290 QTOF 6545 XT («Agilent Technologies», США) для фракций, собранных после гель-размерной хроматографии. Маркерными компонентами включения выбраны стероидная фракция, холестерин и общий белок.
Результаты и их обсуждение
При разработке технологии получения липосом, содержащих БАВ из мускуса
кабарги, учитывались доступные отечественные и зарубежные информационные материалы, собственный практический опыт, а также технологические принципы получения липосомальных лекарственных препаратов в условиях GMP [13].
В ходе эксперимента предварительно подготовленные 10% водные р-ры фосфо-липидов и БАВ из мускуса кабарги в соотношении 5:1 подвергали гомогенизации. Получение липосом на гомогенизаторе высокого давления производили в течение 9-ти циклов по 3-5 мин каждый при температуре 33±3 °C, с постепенным повышением давления от 20 до 90 МПа. В процессе гомогенизации постоянно контролировался гидродинамический диаметр образующихся липосом. Его определение проводилось с помощью анализатора размера частиц «Photocor Mini» методом лазерной дифракции света (638 нм).
Указанный параметр определяли после проведения каждого цикла, следя за тем, чтобы диаметр липосом уменьшался с каждым циклом. Это позволяет оперативно выявить нарушения регламентируемых параметров процесса: температуры, значения рН, ионной силы, давления и др. При достижении частицами среднего размера 250±100 нм гомогенизацию завершали. В липосомальную дисперсию добавляли криопротектор и высушивали с помощью лиофилизации.
Для лучшего понимания процесса получения липосом следует отметить, что дисперсными системами являются гетерогенные системы из двух или большего числа фаз с сильно развитой поверхностью раздела между ними. Обычно одна из фаз образует непрерывную дисперсионную среду (в нашем случае это водно-солевой буферный р-р), в объёме которой распределена дисперсная фаза (или несколько дисперсных фаз) в виде мелких кристаллов, твёрдых аморфных частиц, капель или пузырьков (в т. ч. липосом).
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, Р.А. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
В грубодисперсных системах частицы имеют размеры от 1 мкм и выше (удельная поверхность —не более 1 м2/г), а в тонко- (высоко-) дисперсных, или коллоидно-дисперсных, системах — от 1 нм до 1 мкм (удельная поверхность достигает сотен м2/г) [6].
Нередко в научной литературе встречаются выражения «суспензия липосом», «липосомальная эмульсия», что применительно к сложной структуре липосом не совсем верно. Так, согласно ГФ ХШ, суспензия представляет собой гетерогенную дисперсионную систему, содержащую одно или несколько твёрдых действующих веществ, распределённых в жидкой дисперсионной среде, а эмульсия — гетерогенную двухфазную дисперсную систему с жидкой дисперсной фазой и жидкой дисперсионной средой. Липосомы являются одной из разновидностей коллоидно-дисперсных систем, а именно липосомальной дисперсией.
Помимо структуры, липосомальную дисперсию от обычных крупнодисперсных жировых эмульсий отличают меньшие размеры частиц, меньшая вязкость, огромная суммарная площадь контакта со средой, большая устойчивость (т. е. не требуется введение стабилизатора-эмульгатора), от наноэмульсий — состав, а от грубых, быстро оседающих суспензий с низкой кинетической устойчивостью — условия вы-сокодисперсности.
На стадии разработки и получения ли-посомальной лекарственной формы (ЛФ) очень важна характеристика и оценка аг-регативной и кинетической (седимента-ционной) устойчивости (стабильности) полученного продукта [3]. Различная диспергируемость частиц мускуса при одинаковых условиях измельчения определяется их структурой, механической прочностью и механизмом диспергирования в различных экстрагирующих буферных растворах. Этот процесс чрезвычайно важен не только для полноты извлечения био-
логически активных компонентов, но и для проведения при необходимости дальнейшего их выделения и очистки.
Таким образом, одним из основных показателей, определяющим подбор технологического оборудования для дальнейшего производственного процесса получения липосом и последующую биологическую активность фармацевтической субстанции на основе мускуса кабарги, является степень дисперсности получаемой суспензии (средний размер частиц и их распределение по размерам).
Несомненную практическую значимость на стадии разработки и получения липосо-мальной ЛФ представляет характеристика и оценка устойчивости полученного продукта по трём основным показателям — размеру везикул, индексу полидисперсности и дзета-потенциалу [22, 23, 25, 27].
Размер липосом применяется как основной показатель качества, определяющий стабильность производимой субстанции и её биодоступность. Это обусловлено тем, что изменение дисперсности влияет на агрегатное состояние дисперсной фазы. Необходимо отметить естественное стремление липосом к формированию более крупных структур (конъюгатов, агломератов и т. п.). К этому их принуждают силы поверхностной активности, не уравновешенные внутренним состоянием атомарно-молекулярного взаимодействия.
Размер частиц зависит от двух основных факторов — компонентного состава (концентрации и свойств активного и вспомогательных веществ) и технологии получения. На размер липосом влияет также концентрация и соотношение твёрдых и жидких липидов. Отмечено, что увеличение общей концентрации липидов, а также доли твердых липидов в составе относительно жидких способствует увеличению размера липосом.
Пример отображения экспериментальных данных о количественном распределе-
нии размеров липосом, полученных с помощью анализатора «Photocor», приведён на рис. 3 и 4. В липосомальной дисперсии мускуса кабарги, на основе 70% и 80% фос-фатидилхолина, 95,9% составляют частицы с размером 131±30 нм и 92,7% соответственно 120±28 нм. Сравнение результатов свидетельствует о том, что применение отечественного фосфатидилхолина позволяет получать липосомы необходимого качества.
Результаты исследования восстановленных образцов сублимированных липосом (табл. 1) подтверждают, что размеры частиц после повторного растворения в воде не изменяются.
В большинстве наномолекулярных и на-нодисперсных систем молекулы и частицы неодинаковы. При описании свойств систем необходимо использовать функции распределения частиц по их параметрам, т. е. при исследовании реальных систем учитывать их полидисперсность, т. к. монодисперсные приближения могут приводить к неверным заключениям о свойствах частиц. Ширину распределения частиц по размерам характеризуют по индексу полидисперсности (polydispersity index — PDI).
Значения PDI ранжируются от нуля до единицы. Чем ближе значение PDI к нулю, тем частицы более гомогенные. Как и размер частиц, значение PDI зависит от состава продукта и способа получения липосом и является очень чувствительным к присутствию агрегатов или загрязнений (пыли, инородных объектов). Ожидаемое значение PDI для монодисперсных образцов не должно превышать 0,5.
Экспериментальные данные, полученные с помощью анализатора «Photocor» и приведённые в табл. 1, показывают, что этот параметр в экспериментальных образцах липосомальной субстанции соответствует установленной норме.
Дзета (2)-потенциал — один из основных параметров, влияющих на стабильность
дисперсных систем. Он является важнейшим индикатором поверхностного заряда липосом и мерой электростатического взаимодействия (отталкивания или притяжения) между частицами. Согласно физической теории устойчивости коллоидных систем ДЛФО (теория Дерягина, Ландау, Фервея и Овербека), стабильность коллоидных систем определяется двойным электрическим слоем (т. н. «энергетическим барьером») и образованием ван-дер-ваальсовых сил, которые обуславливают приближение частиц друг к другу. Если этот энергетический барьер, представленный силами отталкивания, будет преодо-лён за счёт сил Ван-дер-Ваальса, частицы будут взаимодействовать друг с другом и слипаться, что является нежелательным для липосомальных систем доставки различных ЛВ. Кроме того, измерение дзета-потенциала — одна из возможностей сокращения периода проверки стабильности липосомальных ЛВ за счёт уменьшения длительности и затрат на тестирование и увеличение срока хранения.
Экспериментальные данные, полученные с помощью анализатора «Photocor» и приведённые в табл. 1, показывают, что дзета-потенциал в образцах липосомальной субстанции соответствует установленной норме.
Свойства липосом во многом определяются жирнокислотным составом и химическим состоянием липидов, входящих в их состав. Основным деструктивным процессом в липидах является окисление, поэтому они должны быть минимально окислены по двойным связям. Обнаружено, что в процессе хранения липосомального препарата pH среды в контроле снижается. Это объясняется тем, что в процессе окисления липидов наблюдается возрастание концентрации карбоновых кислот, детектирование которых проводят фотометрически. Существуют экспериментально подтвержденные рекомендации о том, что для по-
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, Р.А. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
Рис. 3. Среднее интегральное значение размера частиц 10% исходного р-ра липосом мускуса кабарги, полученных на основе 70% фосфатидилхолина (Россия).
Fig. 3. Mean integral value of the particle size of a 10% precursor solution of musk liposomes obtained on the basis of 70% phosphatidylcholine (Russia).
Рис. 4. Среднее интегральное значение размера частиц 10% исходного р-ра липосом мускуса кабарги, полученных на основе 80% фосфатидилхолина (Германия).
Fig. 4. Mean integral value of the particle size of a 10% precursor solution of musk liposomes obtained on the basis of 80% phosphatidylcholine (Germany).
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, РА. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
Таблица 1. Размер, вариабельность и дзета-потенциал частиц в восстановленных образцах липосомальной субстанции мускуса
Table 1. Particle size, variability, and zeta potential in reduced musk liposomal substance samples
Показатели Норма Образец № 1 Образец № 2
Размер частиц, нм 250±100 175 (75%) 240 (65%)
Индекс полидисперсности менее 0,5 0,33 0,32
Дзета-потенциал, мВ -5...-35 -25 -33
Индекс окисленности не более 0,5 0,31 0,34
лучения липосом необходимо применять фосфолипидное сырье с индексом окис-ленности не выше 0,5. С целью предотвращения и замедления процессов окисления не только фосфолипидов бислоя липосом, но и большого числа различных БАВ ли-пидной природы, содержащихся в мускусе кабарги, в состав липосом были добавлены антиоксиданты (антиокислители и ингибиторы окисления).
При отработке получения липосом методом гомогенизации под высоким давлением было установлено (табл. 1), что индексы окисленности экспериментальных образцов отличаются незначительно (от 0,28 до 0,34) и соответствуют заданному параметру.
На этапе первичной оценки липосомаль-ной формы необходимо удостовериться, что в её составе действительно присутствуют липосомы. Основным методом определения присутствия липосом и морфологии их поверхности является электронная ми-
кроскопия, которая единовременно предоставляет информацию о форме, структуре и размере липосом.
На рис. 5 приведен снимок, полученный с помощью электронной микроскопии, на котором хорошо видны микронных размеров частицы исходного концентрата мускуса до его гомогенизации и липосомиро-вания.
Исследования в электронном микроскопе структуры дисперсии липосом, содержащих БАВ мускуса, до лиофильной сушки показали, что липосомы в образце представляют собой везикулы регулярной округлой, овальной и очень редко каплевидной формы диаметром от 50 до 1000 нм (рис. 6). При этом липосомы диаметром от 50 до 200 нм составляют около 60% от всех липосомальных частиц в образце (рис. 7).
Во внутренней структуре липосом видны мелкие образования нерегулярной формы с разной электронно-оптической плотно-
Рис. 5. Микрофотография частиц исходного концентрата мускуса кабарги.
Fig. 5. Micrograph of particles of the precursor deer musk concentrate.
Рис. 6. Микрофотография липосом в исходной липосомальной дисперсии.
Fig. 6. Micrograph of liposomes in the precursor liposomal dispersion.
>1 мкм 4%
0.5-1 мкм 7%-
■ <0.2 мкм
□ 0.2-0.5 мкм
□ 0.5-1 мкм
□ >1 мкм
Рис. 7. Распределение частиц в исходной липосомальной дисперсии. Fig. 7. Particle distribution in the precursor liposomal dispersion.
стью диаметром 5-20 нм — по всей вероятности, частицы БАВ мускуса.
На микрофотографиях (рис. 6 и 8) представлены данные о морфологии и гидродинамическом диаметре (размере) частиц двух восстановленных в воде липосо-мальных образцов мускуса, полученных при помощи гомогенизации под высоким давлением. На них чётко видны отдельные моноламеллярные липосомы сферической формы. Липосомы размером от 100 до 300 нм хорошо окрашены гидрофильными (внутренний объем везикул) и гидрофобными (пространство внутри бислоя везикул, образованного фосфолипи-дами) компонентами, входящими в состав мускуса кабарги. Диаграммы распределе-
Рис. 8. Микрофотография восстановленных липосом (образец № 1).
Fig. 8. Micrograph of reduced liposomes (sample No. 1).
ния частиц по размерам (рис. 7 и 9) также показывают, что основная фракция липо-сом представлена частицами с диаметром около 200 нм. Важно подчеркнуть, что эти данные хорошо коррелируют с результатами, полученными с помощью анализатора размеров частиц (табл. 2).
Изображения на рис. 8 и 10 свидетельствуют, что липосомальная форма субстанции сохраняется и после восстановления лиофилизированного порошка липосом мускуса.
Необходимо отметить, что возможны основные четыре пути включения БАВ в липосомы: водорастворимые вещества включаются во внутренний водный объём, в гидрофобную область бислоя, адсорбируются на поверхности либо химически связываются с компонентами бислоя. Возможна также комбинация способов включения, особенно для БАВ из мускуса, который содержит огромный спектр органических соединений гидрофильной и гидрофобной природы.
В составе мускуса можно выделить три группы соединений с наиболее выраженным биологическим эффектом: стероидные компоненты, жирные кислоты, пептиды и белки [8, 9, 10]. Поэтому продолжение исследований по разработке методов количественной оценки включения основных
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, РА. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
I <0.2 мкм 0.2-0.5 мкм 0.5 -1 мкм >1 мкм
Рис. 9. Распределение частиц по размерам в р-ре восстановленных липосом (образец № 1). Fig. 9. Particle size distribution in a solution of reduced liposomes (sample No. 1).
фармацевтически активных компонентов мускуса в липосомы является актуальным.
Изучение основных параметров, характеризующих качество липосомальной субстанции (подлинность, процент включения БАВ и их количественное определение), проведенное в ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России» (табл. 2), свидетельствует о том, что более 60% БАВ из мускуса кабарги включается в липосомы.
На основании вышеизложенных литературных данных, результатов собственных исследований (рис. 11-13), а также «Требований к показателям качества и исследованию лекарственных средств на основе липосом, мицелл и лекарственных средств, содержащих покрытие из наночастиц» разработан проект спецификации
Рис. 10. Микрофотография восстановленных липосом (образец № 2).
Fig. 10. Micrograph of reduced liposomes (sample No. 2).
(табл. 2) на липосомальную субстанцию (порошок), содержащую комплекс БАВ, выделенных из мускуса кабарги (рис. 14).
I <0.2 мкм
10.2-0.5 мкм
0.5-1 мкм I >1 мкм
Рис. 11. Распределение частиц по размерам в растворе восстановленных липосом (образец № 2). Fig. 11. Particle size distribution in a solution of reduced liposomes (sample No. 2).
Рис. 12. Препаративная гель-размерная хроматограмма р-ра липосом мускуса кабарги. Fig. 12. Preparative gel-size chromatogram of the deer musk liposome solution under study.
2 DAD1 - G:Sig=280,4 Ref=3S0.100 KG18-1S07-1_180718_GRA23min_Poroshell120C8_20mgmL5mk
0 12345S789
esoonse Units (%) vs. Acauisiton Time (min)
12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
Рис. 13. Типичная ВЭЖХ-УФ хроматограмма компонентов БАВ липосом мускуса кабарги. Fig. 13. Typical HPLC-UV chromatogram of biologically active substances of deer musk liposomes.
Рис. 14. Экспериментальный образец липосомированной субстанции мускуса. Fig. 14. Experimental sample of the liposomal musk substance under study.
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, РА. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
Таблица 2. Проект спецификации на липосомальную субстанцию (порошок), содержащую комплекс БАВ, выделенных из мускуса кабарги
Table 2. Draft specification for a liposomal substance (powder) containing a complex of biologically active substances isolated from musk of musk deer
Показатель Метод Норма
Описание Органолептический ГФ XIII, ОФС 1.1.0006.15, ч. 1 Лиофилизированный аморфный порошок светло-коричневого цвета с характерным запахом и вкусом мускуса
Растворимость ГФ РФ XIII, ОФС 1.2.1.0005.15, ч. 1, с. 531 Мало растворим в воде, мало растворим в спирте 96%, практически не растворим в гексане
Подлинность: - присутствие липосом; Электронная микроскопия (метод негативного контрастирования) Моноламеллярные липосомы сферической формы
- наличие БАВ мускуса ГХ-МС (ГХ-ПИД) Время удерживания основных пиков на хромато-грамме испытуемого р-ра должно соответствовать времени удерживания основных пиков на хрома-тограмме стандартного образца липосом мускуса кабарги
ВЭЖХ-УФ Время удерживания основных пиков на хромато-грамме испытуемого р-ра должно соответствовать времени удерживания основных пиков на хрома-тограмме стандартного образца липосом мускуса кабарги
Размер частиц ГФ ХМ, ч. 2 Фотодинамическое и лазерное светорассеяние 50-500 нм
Индекс полидисперсности Фотодинамическое и лазерное светорассеяние 0,5±0,1
Дзета-потенциал Динамическое светорассеяние - 5...-35 мВ
Степень включения БАВ мускуса Гель-хроматография ВЭЖХ-МС Не менее 50% Не менее 50%
Индекс окисленности Спектрофотометрия Не более 0,5
рН ГФ РФ, ОФС 1.1.0006.15 (потенциометри-ческий метод) От 6,0 до 8,0 (1% р-р)
Вода ГФ РФ, ОФС 1.2.3.0002.15 Не более 5,0%
Общий белок ГФ РФ, ОФС. 1.2.3.0012.15 Метод Бредфорд (колориметрический) Не более 4%
Сульфатная зола ГФ РФ, ОФС 1.2.2.2.0014.15 Не более 5,0%
Тяжелые металлы ГФ РФ, ОФС 1.2.2.2.0012.15 Не более 0,002%
Остаточные органические растворители ГХ РФ Этанола — не более 0,5%; изопропилового спирта — не более 0,5%
Микробиологическая чистота ГФ РФ, ОФС. 1.2.4.0002.15 Категория 3.2
Количественное определение ВЭЖХ Не менее 90,0% и не более 110,0% в пересчете на безводное вещество
Хранение В сухом защищенном от света месте при температуре не выше 20 °С
Срок годности Устанавливается
Выводы
1. Гомогенизация под высоким давлением является оптимальным способом получения стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс БАВ, выделенных из мускуса кабарги.
2. На основании проведённых исследований разработаны режимы приготовления липосомальной формы БАВ с заранее заданными параметрами дисперсности (средним диаметром частиц 250±100 нм, индексом полидисперсности 0,3±0,1 и дзета-потенциалом от -5 до -35 мВ).
3. Гомогенизатор высокого давления «Донор-5» позволяет получать липосо-мальные дисперсии со стандартными параметрами и степенью включения БАВ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ | REFERENCES
1. Баллюзек Ф.К., Куркаев А.С., Сенте Л. Нанотехнологии для медицины. СПб.: Сезам-Принт, 2008:104. [Ballyuzek F.K., Kurkayev A.S., Sente L. Nanotekhnologii dlya meditsiny [Nanotechnology for medicine]. Saint-Petersburg: Sesam-Print Publ., 2018:104. (In Russian)].
2. Борщевский Г.И. Определение индекса окисленно-сти липосомальных наночастиц. Химия и химические технологии. 2015;9:25-26. [Borshchevskiy G.I. Opredeleniye indeksa okislennosti liposomal'nykh nanochastits [Determination of the oxidation index of liposomal nanoparticles]. Khimiya i khimicheskiye tekhnologii [Chemistry and chemical technologies]. 2015;9:25-26. (In Russian)].
3. Борщевський Г.1., Комаров I.В., Кутшч А.В. Фактори, як впливають на стабшьшсть препарату Лесфаль. Управлшня, економта тазабезпеченняяко-стi в фармацН. 2013;6:10-14. [Borshchevs'kiy G.I., Komarov I.V., Kulinich A.V. Faktory, yaki vplyvayut' na stabil'nist' preparatu Lesfal' [Factors affecting the stability of the drug Lesfal]. Upravlinnya, ekonomika ta zabezpechennya yakosti v farmatsiyi [Management, economics and quality assurance in pharmacy journal]. 2013;6:10-14. (In Ukrainian)].
4. Быковский С.Н., Василенко И.А., Демина Н.Б., Шохин И.Е., Новожилов О.В., Мешковский А.П., Спицкий О.Р. Фармацевтическая разработка: концепция и практические рекомендации. Научно-практ. рук-во для фармацевтической отрасли. М.: Перо, 2015:472. [Bykovskiy S.N., Vasilenko I.A., Demina N.B., Shokhin I.Ye., Novozhilov O.V., Meshkovskiy A.P., Spitskiy O.R. Farmatsevticheskaya razrabotka: kontseptsiya i prakticheskiye
мускуса до 60%, а также обеспечивает минимальное окисление и гидролиз фосфоли-пидов (индекс окисленности 0,3).
4. На основании полученных результатов разработан проект спецификации на липо-сомальную субстанцию (порошок), содержащую комплекс БАВ, выделенных из мускуса кабарги.
5. Использование отечественного фосфа-тидилхолина является экономически оправданным и позволяет получать липосомаль-ные формы надлежащего качества.
6. Разработанную технологию получения липосомальной формы БАВ из мускуса кабарги можно масштабировать в соответствии с требованиями вМР.
rekomendatsii. Nauchno-prakt. ruk-vo dlya farmat-sevticheskoy otrasli [Pharmaceutical Development: Concept and Practical Guidelines. Scientific and practical guide for the pharmaceutical industry]. Moscow: Pero Publ., 2015:472. (In Russian)].
5. Грегориадис Г., Аллисон А. Липосомы в биологических системах. М.: Медицина, 1983:384. [Gregoriadis G., Allison A. Liposomy v biologich-eskikh sistemakh [Liposomes in biological systems]. Moscow: Medicine Publ., 1983:384. (In Russian)].
6. Зефиров Н.С., Кнунянц И.Л., Кулов Н.Н. Химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия. 1990:80-82. [Zefirov N.S., Knunyants I.L., Kulov N.N. Khimicheskaya entsiklopediya [Chemical encyclopedia] . Moscow: Soviet encyclopedia Publ., 1990:80-82. (In Russian)].
7. Капцов В.В., Алымов А.В., Шибаев Н.В., Кукушкин В.И., Маевский Е.И. Выбор способов и устройств диспергирования для приготовления газопереносящих эмульсий ПФС. ВИНИТИ. 1984;148. [Kaptsov V.V., Alymov A.V., Shibayev N.V., Kukushkin V.I., Mayevskiy Ye.I. Vybor sposobov i ustroystv dispergirovaniya dlya prigotovleniya gazo-perenosyashchikh emul'siy PFS [The choice of methods and devices for dispersing for the preparation of gas-transfer emulsions PFC]. VINITI [VINITI J.]. 1984;148. (In Russian)].
8. Каркищенко В.Н., Дуля М.С., Агельдинов Р.А., Люблинский С.Л., Каркищенко Н.Н. Липосомированная форма экстракта препу-циальной железы кабарги — новое средство адаптогенного действия. Биомедицина. 2019;15(4):34-45. [Karkischenko V.N., Dulya M.S.,
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, Р.А. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
Ageldinov R.A., Lyublinskiy S.L., Karkischenko N.N. Liposomirovannaya forma ekstrakta preputsial'noy zhelezy kabargi — novoye sredstvo adaptogennogo deystviya [A liposomal composition of musk deer preputial gland extract as a new agent of adaptogenic]. Biomeditsina [Journal Biomed]. 2019;15(4):34-45. (In Russian)].
9. Каркищенко В.Н., Дуля М.С., Хвостов Д.В., Агельдинов Р.А. Люблинский С.Л. Анализ биологически активных соединений мускуса кабарги Moschus moschiferus методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Биомедицина. 2018;1:34-45. [Karkischenko V.N., Dulya M.S., Khvostov D.V., Ageldinov R.A., Lyublinskiy S.L. Analiz biologicheski aktivnykh soyedineniy musku-sa kabargi Moschus Moschiferus metodom gazo-voy khromatografii s mass-selektivnym detektorom [Analysis of biologically active musk compounds of musk deer (Moschus Moschiferus) by gas chroma-tography with mass selective detector]. Biomeditsina [JournalBiomed]. 2018;1:34-45. (In Russian)].
10. Каркищенко В.Н., Дуля М.С., Хвостов Д.В., Агельдинов Р.А., Люблинский С.Л., Карки-щенко Н.Н. Протеомный анализ в идентификации белковых компонентов препуциальной железы кабарги сибирской. Биомедицина. 2019;15(1):34-45. [Karkischenko V.N., Dulya M.S., Khvostov D.V., Ageldinov R.A., Lyublinskiy S.L. Proteomnyy analiz v identifikatsii belkovykh komponentov preputsial'noy zhelezy kabargi sibirskoy [Proteomic analysis in the identification of active components in the preputial gland secretion of the Siberian musk deer]. Biomeditsina [JournalBiomed]. 2019;15(1):34-45. (In Russian)].
11. Каркищенко В.Н., Каркищенко Н.Н., Шустов Е.Б. Фармакологические основы терапии. Тезаурус. Изд. 3-е — новая ред. М., СПб: Айсинг, 2018:288. [Karkischenko V.N., Karkischenko N.N., Shustov E.B. Farmakologicheskie osnovy terapii [The pharmacological therapeutics basis]. Thesaurus. Ed. 3th — new ed. Moscow, Saint-Petersburg: Ajsing Publ., 2018:288. (In Russian)].
12. Краснопольский Ю.М., Дудниченко А.С., Швец В.И. Фармацевтическая биотехнология: би-онанотехнология в фармации и медицине. Харьков: Издательский центр НТУ «ХПИ», 2011:227. [Krasnopol'skiy Yu.M., Dudnichenko A.S., Shvets V.I. Farmatsevticheskaya biotekhnologiya: bionanotekh-nologiya v farmatsii i meditsine [Pharmaceutical biotechnology: bionanotechnology in pharmacy and medicine]. Kharkov: Publishing Center NTU "KhPI", 2011:227. (In Russian)].
13. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Технологические аспекты получения ли-посомальных препаратов в условиях GMP. Биофармацевтический журнал. 2009; 1(3): 1829. [Krasnopol'skiy Yu.M., Stepanov A.Ye., Shvets V.I. Tekhnololgicheskiye aspekty polucheni-
ya liposomal'nykh preparatov v usloviyakh GMP [Technological aspects of obtaining liposomal preparations under GMP conditions]. Biopharmaceutical journal. 2009;1(3):18-29. (In Russian)].
14. Кузякова Л.М., Ефременко В.И. Медикаментозное преодоление анатомических и клеточных барьеров с помощью липосом. Ставрополь: Б.и., 2000:169. [Kuzyakova L.M., Yefremenko V.I. Medikamentoznoye preodoleniye anatomicheskikh i kletochnykh bar 'yerov s pomoshch'yu liposom [Drug overcoming of anatomical and cellular barriers using liposomes]. Stavropol: B.I., 2000:169. (In Russian)].
15. Посте Дж. Взаимодействие липидных везикул (липосом) с клетками в культуре и их использование как переносчиков лекарств и макромолекул. В кн.: Липосомы в биологических системах. М.: Медицина, 1988:107-155. [Poste Dzh. Vzaimodeystviye lipidnykh vezikul (liposom) s klet-kami v kul'ture i ikh ispol'zovaniye kak perenoschi-kov lekarstv i makromolekul [Interaction of lipid vesicles (liposomes) with cells in culture and their use as carriers of drugs and macromolecules]. V kn.: Liposomy v biologicheskikh sistemakh [In the book: Liposomes in biological systems]. Moscow: Medicine Publ., 1988:107-155. (In Russian)].
16. Рингсдорф Г., Шмидт Б. Системы полимерных носителей лекарств. Журнал всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. 1987;32(5):487-501. [Ringsdorf G., Shmidt B. Sistemy polimernykh nositeley lekarstv [Systems of polymer carriers of drugs]. Zhurnal vsesoyuznogo khimicheskogo ob-shchestva im. D.I. Mendeleyeva [Journal of the AllUnion Chemical Society named after D.I. Mendeleev]. 1987;32(5):487-501. (In Russian)].
17. Сейфулла Р.Д. Фармакология липосомальных препаратов. М.: Глобус Контитенталь, 2010:241. [Seyfulla R.D. Farmakologiya liposomal'nykh pre-paratov [Pharmacology of liposomal preparations]. Moscow: Globus Continental Publ., 2010:241. (In Russian)].
18. Уйба В.В., Котенко К.В., Коржачкина Н.Б., Петрова Н.Б., Михайлова А.А. Применение мускуса кабарги в клинической практике. Метод. реком. М., 2013:18. [Uyba V.V., Kotenko K.V., Korzhachkina N.B., Petrova N.B., Mikhaylova A.A. Primeneniye muskusa kabargi v klinicheskoy praktike [Application of musk of musk deer in clinical practice]. Methodical recommendations. Moscow, 2013:18. (In Russian)].
19. Чазов Е.И., Смирнов В.Н., Торчилин В.П. Липосомы как средство направленного транспорта лекарств. Журнал всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева, 1987;32(5):502-513. [Chazov Ye.I., Smirnov V.N., Torchilin V.P. Liposomy kak sredstvo napravlennogo transporta lekarstv [Liposomes as a Means of Directed Transport of Drugs]. Zhurnal vsesoyuznogo khimicheskogo ob-
shchestva im. D.I. Mendeleyeva [Journal of the AllUnion Chemical Society named after D.I. Mendeleev]. 1987;32(5):502-513. (In Russian)].
20. Швец В.И., Краснопольский Ю.М., Сороко-умова Г.М. Липосомальные формы лекарственных препаратов: технологические особенности получения и применения в клинике. М.: Ремедиум, 2017:197. [Shvets V.I., Krasnopol'skiy Yu.M., Sorokoumova G.M. Liposomal'nyye formy lekarstven-nykh preparatov: tekhnologicheskiye osobennosti po-lucheniya i primeneniya v klinike [Liposomal forms of drugs: technological features of production and use in the clinic]. Moscow: Remedium Publ., 2017:197. (In Russian)].
21. Kaptsov V.V. Production PPG submicron emulsions and liposomes with high pressure homogenizer. "Donor-1". Artificial cells, blood substitutes, and biotechnology, 1994;22(5):110.
22. Kaszuba M., McKnight D., Connah M.T., McNeil-Watson F.K., Nobbmann U. Measuring sub nanometer
sizes using dynamic light scattering. J. of Nanoparticle Research, 2008;10:823-829.
23. Mahmud M., Piwoni A., Filipczak N., Janicka M., Gubernator J. Long-Circulating Curcumin-Loaded Liposome Formulations with High Incorporation Efficiency, Stability and Anticancer Activity towards Pancreatic Adenocarcinoma Cell Lines in vitro. PLoS One. 2016;11(12):e0167787.
24. Rejman J., Oberle V., Zuhom I.S., Hoekstra D. Size-dependent internalization of particles via the pathways of clatrin and caveolae-mediated endocytosis. Biochem. Journal, 2004;377(1):159-169.
25. Tohver V., Smay J.E., Braem A., Braun P.V., Lewis J.A. Nanoparticle halos: A new colloid stabilization mechanism. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2001;98(16):8950-8954.
26. https://bio.pnpi.nrcki.ru/wp-content/uploads/2020/01/ Photocor-Compact-Z_Manual.pdf
27. https://www.malvernpanalytical.com/ru/products/ measurement-type/zeta-potential
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ | INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Люблинский Станислав Людвигович, к.б.н., ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»; e-mail: [email protected]
Люблинская Ирина Николаевна *, ООО «Научно-производственная фирма "МОБИТЕК-М'»; e-mail: [email protected]
Колоскова Елена Михайловна, к.б.н.,
ООО «Научно-производственная фирма "МОБИТЕК-М"»; e-mail: [email protected]
Азизов Ариф Мурсали Оглы, ООО «Научно-производственная фирма "МОБИТЕК-М"»; e-mail: [email protected]
Каркищенко Владислав Николаевич, д.м.н., проф., ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»; e-mail: [email protected]
Нестеров Максим Сергеевич, ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»; e-mail: [email protected]
Капцов Александр Владимирович, ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»; e-mail: a v [email protected]
Stanislav L. Lyublinskiy, Cand. Sci. (Biol.), Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: [email protected]
Irina N. Lyublinskaya*, Scientific and Production Company "MOBITEK-M"; e-mail: [email protected]
Elena M Koloskova, Cand. Sci. (Biol.), Scientific and Production Company "MOBITEK-M"; e-mail: [email protected]
Arif M. Azizov, Scientific and Production Company
"MOBITEK-M";
e-mail: [email protected]
Vladislav N. Karkischenko, Dr. Sci. (Med.), Prof., Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: [email protected]
Maksim S. Nesterov, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: [email protected]
Alexander V. Kaptsov, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: a v [email protected]
С.Л. Люблинский, И.Н. Люблинская, Е.М. Колоскова, А.М. Азизов, В.Н. Каркищенко, М.С. Нестеров,
А.В. Капцов, Р.А. Агельдинов, В.Н. Герасимов, Д.В. Гриненко «Технологические аспекты получения субстанции стабилизированных в липидах устойчивых наночастиц, содержащих комплекс биологически активных веществ, выделенных из мускуса кабарги»
Агельдинов Руслан Андреевич, ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»; ФГБОУ ВО «Российский химико-технологический университет имени Д.И. Менделеева»; e-mail: [email protected]
Герасимов Владимир Николаевич, д.б.н., ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»; e-mail: [email protected]
Гриненко Дмитрий Владимирович, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»; e-mail: [email protected]
Ruslan A. Ageldinov, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; Mendeleev University Chemical Technology of Russia; e-mail: [email protected]
Vladimir N. Gerasimov, Dr. Sci. (Biol.), State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology;
e-mail: [email protected]
Dmitrii V. Grinenko, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology; e-mail: [email protected]
* Автор, ответственный за переписку / Corresponding author
