Таксономическое положение вирусов Бханджа и Кисмайо (семейство Bunyaviridae) Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 578.833.1.083.2

A. С. Климентов1'2, А. П. Гмыль2, А. М. Бутенко1, Л. В. Гмыль2, О. В. Исаева2,

B. Ф. Ларичев1, Н. В. Хуторецкая1, Г. Г. Карганова2

ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ ПОЛОЖЕНИЕ ВИРУСОВ БХАНДЖА И КИСМАЙО (СЕМЕЙСТВО ВиЫУАУтЮАЕ)

1ФГБУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского Минздравсоцразвития РФ, 123098, Москва, ул. Гамалеи, 16; 2ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН, 142782, Московская обл., Ленинский район, поселок сельского типа Институт полиомиелита, 27 км Киевского шоссе

Частично определены нуклеотидные последовательности сегментов M (1398 нуклеотидов) и L (6186 нуклеотидов) генома вируса Бханджа и L-сегмента (1297 нуклеотидов) вируса Кисмайо. Филогенетический анализ выведенной аминокислотной последовательности показал, что данные вирусы являются новыми представителями рода флебовиру-сов в составе семейства Bunyaviridae.

Ключевые слова: вирус Бханджа, вирус Кисмайо, вирус BHAV, KISV, флебовирус, буньявирус

A. S. Klimentov12, A. N. Gmyl2, A. M. Butenko1, L. V. Gmyl2, O. V. Isaeva2, V. F. Larichev1, N. V. Khutoretskaya1, G. G. Karganova2. TAXONOMIC STATUS OF BHANJA AND KISMAYO VIRUSES (FAMILY BUNYAVIRIDAE)

'Federal State Budgetary Institution "D.I. Ivanovsky Institute of Virology" of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation, 16, Gamaleya str., Moscow, 123098

2Federal State Budgetary Institution "M. P. Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides" of the Russian Academy of Medical Sciences, 27th km. of Kiev Highway, Leninsky District, Moscow Region, 142782 Moscow region

The nucleotide sequence ofM= (1398 nucleotides and L= (6186 nucleotides) segments of the genome of Bhanja virus and L-segment (1297 nucleotides) of Kismayo virus has been partially determined. Phylogenetic analysis of deduced amino acid sequences showed that these viruses are novel members of the Flebovirus (Phlebovirus) genus in the family Bunyaviridae

Keywords: Bhanja virus, virus BHAV, virus Kismayo, KISV, Flebovirus, Bunyaviridae

Прототипный штамм вируса Бханджа IG-690 был впервые изолирован в 1954 г. из клещей Haemaphy-salis intermedia, собранных с козы в Индии [13]. Впоследствии циркуляция вируса Бханджа была установлена во многих странах Африки, Азии и Европы [7,8]. Вирус Бханджа наряду с двумя африканскими переносимыми клещами арбовирусами Кисмайо и Форекария на основании перекрестных связей, выявленных в реакции связывания комплемента (РСК) и реакции торможения гемагглютинации (РТГА), объединены в антигенную группу Бханджа [2, 3, 5]. На основании данных электронной микроскопии вирус Бханджа был включен в состав семейства Bunyaviridae в категорию Бунья-подобных вирусов [11]. Для вирусов Бханджа, Кисмайо и Форекария не установлено антигенных связей с другими представителями семейства Bunyaviridae, и их таксономическое положение до настоящего времени не определено.

Известно, что вирус Бханджа обладает патоген-ностью для человека, вызывая острые лихорадочные гриппоподобные заболевания [1, 4, 12]. Описан случай тяжелого менингоэнцефалита при естествен-

Для корреспонденции: Климентов Александр Сергеевич, аспирант ФГБУ НИИ вирусологии, мл. науч. сотр. ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов, e-mail:aklimentov@ mail.ru

ном заражении через укус клеща [14]. Имеющаяся в литературе информация о вирусах Форекария и Кисмайо весьма ограничена. На настоящий момент какие-либо данные молекулярно-генетических исследований вирусов группы Бханджа отсутствуют.

Настоящая работа посвящена определению таксономического положения вирусов Бханджа и Кис-майо в пределах семейства Bunyaviridae.

Материалы и методы

В работе были использованы вирусы из коллекции лаборатории биологии и индикации арбовиру-сов ФГБУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского Минздравсоцразвития РФ, Москва.

Штамм IG-690 вируса Бханджа был выделен в 1954 г. в Вирусологическом центре, г. Пуна, штат Орисса, Индия. Источником выделения послужили клещи Haemaphysalis intermedia [13]. Вирус поддерживался в пассажах через мозг новорожденных белых мышей (н. б. м.), детальная пассажная история штамма недоступна.

Штамм Rh91 вируса Кисмайо был выделен в 1974 г. в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН CCCP из клещей Rhipicephallus pul-chellus, собранных с домашних животных в Сомали [2]. Штамм прошел 17 пассажей через мозг н. б. м.

Тотальную РНК из вируссодержащего материала выделяли реагентом "Тризол" ("Gibco BRL") и переводили в двунитевую ДНК с использованием рандомизированного олигонуклеотида с адаптером FR28-RT-N: 5'-GCCGGAGCTCTGCAGATATC-NNNNNNNN-3'(Синтол), как для синтеза первой цепи при помощи обратной транскриптазы SuperScrip-tII ("Invitrogen"), так и для синтеза второй цепи при помощи фрагмента Klenow exo-ДНК-полимеразы I E. coli ("Fermentas"). Амплификацию проводили с использованием олигонуклеотида, комплементарного адапторному участку. Продукты ПЦР разделяли в 1% агарозном геле, фрагменты длиной 300—1200 п. н. выделяли из геля с помощью коммерческого набора QIAquick Gel Extraction Kit ("Qiagene") и клонировали с использованием набора InsTAclone PCR Cloning Kit ("Fermentas").

Секвенирование клонов проводили с использованием универсальных праймеров M13/pUC ("Fermentas"/"Promega") на автоматическом секвена-торе Beckman Coulter CEQ 8000.

Рис. 1. Иммуноблоты фракций сахарозных градиентов, содержащие вирусы Бханджа (BHAV) и Кисмайо (KISV), окрашенные антителами к вирусам Бханджа (а) и Кисмайо (б). Справа от блотов указано положение маркеров молекулярных масс в кД, слева — расчетные массы и положения окрашиваемых вирус-специфических белков.

Для обработки последовательностей использовали программы SeqMan и SeqBuilder (пакет программ LaserGene DNAStar v7.0). Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с помо-

Рис. 2. Фрагмент множественного выравнивания выведенных аминокислотных последовательностей L-сегмента генома вирусов Бханджа и Кисмайо с 709-й по 925-ю аминокислоту (нумерация по выведенной аминокислотной последовательности полимеразы вируса Бханджа), флебовирусов (объединены в рамку) и прототипных представителей других родов семейства Bunyaviridae.

Белыми буквами на черном фоне обозначены аминокислоты, которые консервируются более чем в 60% аминокислотных последовательностей, использованных для построения выравнивания. Серым цветом выделены гомологичные аминокислоты. Тире обозначены пропуски в аминокислотных последовательностях, образовавшиеся при построении выравнивания. Для вирусов Бханджа и Кисмайо приведены общепринятые сокращения BHAV и KISV соответственно. STFSV — Severe fever with thrombocytopenia syndrome (код доступа в NSBI: ADZ04509); UUKV — Uukuniemi virus (NP941973); SFSV — Sandfly Sicilian Turkey virus (YP004382743); SFNV — Sandfly fever Naples (YP089669); RVFV — Rift Valley fever virus (YP003848704); HTNV — Hantaan virus (NP941982); BUNV — Bunyamwera virus (NP047211); DUGV — Dugbe virus (NP690576); TSWV — Tomato spotted wilt virus (NP049362).

щью подпрограммы ClustalW в программе Mega5 [9]. Филогенетический анализ проводили методом ближайших соседей (neighbour-joining). При построении филогенетического дерева использовали p-дистанцию (p-distance). Статистическую значимость топологии полученных деревьев оценивали "bootstrap''-тестом (1000 реплик).

При постановке иммуноблота белки разделяли с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях в присутствии до-децилсульфата натрия по Лэммли. Использовали стандарты молекулярных масс PageRuller Prestained Protein Ladder ("Fermentas") или SeeBlue Plus2 Pre-Stained Protein Standard ("Invitrogen"). В качестве первичных антител использовали ИАЖ мышей, иммунизированных вирусами Бханджа или Кисмайо, а в качестве вторичных — кроличьи антимышиные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена ("Promega").

Результаты и обсуждение

Подход, использованный нами для определения нуклеотидной последовательности геномов виру-

сов Бханджа и Кисмайо, был основан на методе неспецифичной амплификации нуклеиновых кислот с одного рандомизированного праймера с адаптером (sequence independent single primer amplification (SISPA)) [6]. В качестве исходной матрицы для создания геномных библиотек была использована тотальная РНК, изолированная из частично очищенных в градиенте плотности сахарозы препаратов вирусов Бханджа и Кисмайо. Вируссодержащие фракции определяли методом иммуноферментного анализа с использованием поликлональных антител к вирусам Бханджа и Кисмайо, а также иммунобло-та. На рис. 1 приведены результаты анализа фракций сахарозных градиентов, использованных для выделения РНК, с помощью иммуноблота с использованием антител к вирусам Бханджа и Кисмайо (а и б соответственно). Как видно, антитела к вирусу Бханджа окрашивают во фракции, содержащей вирус Бханджа, два белка с мол. массами 26 и 27 кД (см. рис. 1, а). Антитела к вирусу Кисмайо в этой же фракции достоверно окрасили по крайней мере один белок массой 26 кД (см. рис. 1, б). Во фракции, содержащей вирус Кисмайо, антитела к этому виру-

SADPHCGSDTVBQIGDR^F'

lvhk pfcvvis ygJtrvi rnqvsBVAVBHТ кнGS VAPGA|pIE|yYi !I LRR Н S А VI ЕДЫ V HftNGSBlVQIQVSl

30

I

40

. I.

60

10

I

. I.... I.... I.... I.... I..

, VvfsQQF F^KSHVPVLQ-QPSGС ¡jSRMMAT LgVNE'PEQRIG-r SLWSiRKPLSKRSVTVQQE

eravKlrJm pppvetsedt|ds|yse

E E VLTORT S LKME DT S 3 R ЕЩЕ'Т JL'.'I E

ERvVJKRJL sА к PIQRVE P

ITTEGISISSIKDELKDVT JIN GG VRLITL T S E LR SgT ■ iKVDHIlJlVRHFYPDHYC) ILDSHI JRSTGFMISGI IGKN KL1ИКТН G PKIV Y IE PHGL VHR STGFKISSI

S T RVSKG S КVWKIE FNNQY P S S S SA S SG К К SgEHH FH S G S LVG-

|lt grak DKE F лП p fkmadrl s d

SLT-IMPSjj ЦМ1PYPGMAS-

|кз vm-qkpa*fv ylpypgnse-

tgs-qsf$ei0t г: кy pgisq-

bhav

sftsv

uukv

sfsv

sfnv

rvfv

bhav sftsv

uukv sfsv sfnv rvfv

110 120

I.... I.... I.... I

---|sgaq arg tt vgges felt a(

—ktaihvkgalvdgteftfeg:

---shfeiriwdkersneyfles:

sigBdHgihlshdevqvsshyrvhI

ivg». и vhmteesspsnihmvah ssgh- u ivhmahddqsvsskivah

160 170 ISO 190 200

I .... I.... I.... I.... I -... I.... I.....[ .... I.... I

Illflm--lavfyifialBktimri imtclsilygHfmivikisrc

150 ]

YPYGK1

Bpakkw1fmiT-|l1gya fskeqv|ilva1s—slcil: Ihtalsafvvvtl-vvlvvlm;

HTL FSAgLISTT-VMSILT L! HTALSAFVWFV - FSSIAII

210

.... I.... I,

lgrlgkrkgerty lmrtvsclvgklmi

vIli

IDJGI

TCSKRLNKRAERLKE3IHSLEEGLNNV

tsrklklsterrIaIine-—

MIKSWKKKVGSAISgTND-- ■ IYKKMVARVA DMINQVWR---

220

. I. . ILMEAID-

RQ----

230

. I ..

I

240

. I . .

I

-VikH;

mmvdB: -—g

250 260 270

I I I I I

dekepeapk pmat an kakq pr iv l f11 liG ifvh vaf

|e i ge ngegn q d dvr i emar prr vrhwm ys f v i lt i lax g l aei p re qnn paravar pn vrqkm fnl trl s p v v VGtdjc l ac p'

igwrpeearathrmrdrd---rrpiprsavylai1flisv

tigwrdnrrygrdveraqytggapgakysfygvmiBgllgm' 0igwmeggqlvlgnpapipr--hapiprystylml|liv3i.

IGVWGSWVI. VIATFTWKII

I VgKR Cg V L FR VAPA VLL II |LL V KG AK OL VKKL F YWLIT

i И yr vJkc l к i a pr к vln|

¡vklmfai ikk

IfwHilsllcr

IfsbiIKLACW IlcBlsvfcgw Ilmbitafirw

280 ■

. I ..

310

.... I.... I , bhav VITIKELRj sftsv RALLPAVNE uukv SSLLQVSP] sfsv LVNVKAGPIl

sfnv tvimklgpiI

rvfv TALI RAGS'

320

330

t

340 . I . .

350 . I . .

360

GGSLSNPIK

Igsfdskcle

GTAVDSIRi |DSADKKFLT KDNEKQFIS /KEDQTKFLK

VILDIVGRS DL L D ifl FflYNGHAN i/KR I HBKBKKS SHF V PDARS R»T|

г di kBeBvr R ЙДУР RVTHRBIGTl |BAS Ml Is EGCfcfflfllsOYGVEgl g. |isse|t|rege|fJtlytpvB B. IssHsIrE GcSfflfGSFS PKH g

370

. I .

380

290 | |

ispgsdnifl rqgsgmmk: stssdgvn, kfakg-sks'

ttsg-sst: |steg-vnt:

390

. I .... I .... I .... I .... I .... I

IrwaBsBgnsg-JvgvgkedydrJigeqess—thpnwrd |rw aIdIqsgc p-p h ft sSs fSe dw a gkm drag—lgfsg

_kg e a-B S e FKI|lj>Y Й pBwg H Е ee LM a-qlgk 3 Yg vaejkg d a-bqrwnn t l vhrhfq g itn n - - s vis enr sdr-blkwktHe thahft gkahg--evmhenr HVNR-ilswrdietiaifs f vge s - - ttm renk

bhav sftsv

uukv

sfsv sfnv rvfv

420 430 440 450 460 470 480

. t .... I .... I .... I .... 1 .... 1 .... 1 .... I .... I .... I .... I .... I .... I .... I ■■ ■

,kr ygtn a dsrv f^Hjk plaBflstkivvdtathkedttlkSGeakvidkvsfhyrtdknlfagitip rkkvenphgt tw^sfSaahvpsav iHlHmpsgevrtfhpmsgiptqvfkJvsvtyJgsdmevsglt IfylrktfshlsqdafniyeBsehsyrinvlvstnsthsnltlklgvpdsiphglislssvsqppaiays-

HARLRATKREAll^BlMSHRLVLginDFNGKKEKVSMTGMTTQFFSMBSMTLAiDFEGITGTNS Y VH SILKS V Y KN G FMHRS V АЯМ H RIR Ш vfc HS R - К F РМ V LMAM S TQ РТ Dwis IG LIIDSEGIT GTN A HTYLQSVRKEA LRJHNJ I ifl VH К l'l' L§ 10 О F DG S V £ TIDLGAS S SR FT Nlfls V S L S|D AEG IS G S N S

Рис. 3. Множественное выравнивание выведенной аминокислотной последовательности М-сегмента генома вируса Бханджа с 305-й по 778-ю аминокислоту (нумерация аминокислот согласно аминокислотной последовательности предшественника гликопротеинов ЗБТЗУ) и флебовирусов. Потенциальный сайт отщепления поверхностного гликопротеина Ос от белка-предшественника указан стрелкой.

Использованы обозначения и сокращения, как и на рис. 2. Коды в базе МСБ1: ЗТБЗУ — ЛБг04471, ИИКУ — №941979, ЗБЗУ — УР004382742, ЗБОТ — УР089671 и ЯУБУ — УР003848705.

су окрашивают полосу, соответствующую мол. массе ~24 кД, которая, вероятнее всего, представляет собой 2 белка с близкими молекулярными массами (см. рис. 1, б). Антитела к вирусу Бханджа также окрашивают в этой фракции по крайней мере один белок мол. массой 24 кД (см. рис. 1, а). Основным иммуногеном при буньявирусной инфекции является белок нуклеокапсида. Следовательно, можно предположить, что выявленные в иммуноблоте белки, вероятнее всего, являются белками нуклеокап-сида. В пользу этого свидетельствует и наличие перекрестного окрашивания, поскольку именно белок нуклеокапсида распознается в реакции связывания комплемента, а исследуемые вирусы в этой реакции имеют перекрестную антигенную связь [5]. Соответствующую выявленным нами белкам вирусов Бханджа и Кисмайо молекулярную массу имеют белки нуклеокапсида, только представители родов Phlebovirus и Ог^оЬипуау^ш.

Нами было секвенировано более 200 клонов библиотеки вируса Бханджа и около 50 клонов — вируса Кисмайо. Большинство секвенированных клонов содержали вставки ДНК генома мыши (98% для библиотеки вируса Бханджа и 92% — вируса Кис-

майо), как правило, нуклеотидные последовательности 18S либо 28S рибосомальных РНК. Тем не менее в каждой из геномных библиотек было обнаружено по 4 клона, содержащих последовательности нукле-отидов, не имевших значимой гомологии ни с одной из нуклеотидных последовательностей баз данных NCBI. В связи с этим было проведено сравнение выведенных аминокислотных последовательностей с базами данных NCBI. В результате было обнаружено, что 5 из 8 выведенных аминокислотных последовательностей имеет родство с белками, кодируемыми геномами представителей рода Phlebovirus. В одном из клонов библиотеки вируса Бханджа содержалась нуклеотидная последовательность, которая на аминокислотном уровне имела сходство в 39% с участком, расположенным между 694-й и 750-й аминокислотами предшественника поверхностных гликопротеинов (кодируется средним (M) сегментом генома) вируса тяжелой лихорадки с синдромом тромбоцитопении (Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV), JQ684872). Выведенные аминокислотные последовательности еще двух клонов этой же библиотеки имели сходство в 38% с участком со 160-й по 216-ю аминокислоту и в 52% с

Рис. 4. Филогенетические деревья построены на основании выравнивания практически полной аминокислотной последовательности полимеразы (отсутствуют 23 C-концевые аминокислоты, согласно аминокислотной последовательности SFTSV) (а) и фрагмента предшественника поверхностных гликопротеинов (б) вируса Бханджа и представителей всех родов семейства Bunyaviridae.

Цифры в узлах деревьев соответствуют бутстреп-поддержке. Положение вируса Бханджа на деревьях указано стрелкой. Вирус Gouleako на деревьях отмечен звездочкой, поскольку предложено выделить его в отдельный от флебовирусов род [9]. Для вирусов, не приведенных на рис. 2 и 3, использованы следующие сокращения (в скобках приведены коды доступа в NCBI для L- и M-сегментов): AGUV — Aguacate virus (YP004414703, YP004414702); CDUV — Candiru virus (YP004347993, YP004347992); GOUV — Gouleako virus (ABP68557, AEJ38174); WSMoV — Watermelon silver mottle virus (NP620752, NP620767); GBNV — Groundnut bud necrosis virus (NP619688, NP619703); TZSV — Tomato zonate spot virus (YP001740047); TSWV — Tomato spotted wilt virus (NP049362, NP049359); CaCV — Capsicum chlorosis virus (YP717924); INSV — Impatiens necrotic spot virus (NP619710, NP619691); MYSV — Melon yellow spot virus (YP717933, YP717935); ANDV — Andes virus (NP604473, NP604472); DOBV — Dobrava-Belgrade virus (NP942555, NP942554); SEOV — Seoul virus (NP942558, NP942557); SNV — Sin Nombre virus (NP941976, NP941974); TPMV — Thottapalayam virus (YP001911124); TULV — Tula virus (NP942124, NP942586); BUNV — Bunyamwera virus (NP047212, NP047211); OROV — Oropouche virus (NP982304, NP982303); AKAV — Akabane virus (YP001497159, YP001497160); LACV — La Crosse virus (NP671968, NP671969); DUGV — Dugbe virus (NP690576, NP690575); CCHFV — Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (YP325663, NP950235).

участком с 825-й по 937-ю аминокислоту флебовирус-ной полимеразы (кодируется большим (L) сегментом генома) вирусов Армеро (Armero, HQ661805) и SFTS (JQ684871) соответственно. Аминокислотные последовательности двух клонов библиотеки вируса Кис-майо имели сходство в 48% с 549-й по 689-ю и с 865-й по 978-ю аминокислоту полимеразы вируса SFTS.

На основании полученных нуклеотидных последовательностей были сконструированы специфические олигонуклеотиды, которые были использованы для праймерной "прогулки" и создания библиотек. В результате нам удалось определить 1398 (~40% длины сегмента) и 6186 (~96% длины сегмента) ну-клеотидов последовательности М- и L-сегментов соответственно генома вируса Бханджа и 1297 (~20% длины сегмента) нуклеотидов последовательности L-сегмента генома вируса Кисмайо.

Для определения таксономического положения вирусов Бханджа и Кисмайо выведенные аминокислотные последовательности белков, кодируемых L- и M-сегментами генома, были проанализированы при помощи множественного выравнивания с белками других представителей семейства Bunyaviridae (рис. 2 и 3). Анализ показал, что наиболее высокое сходство белка, кодируемого L-сегментом исследуемых вирусов, наблюдается с L-белками представителей флебовирусов: 36% идентичности с SFTSV и 32% с другими представителями рода. Гомология между вирусами Бханджа и Кисмайо на этом участке составляет 77%. M-сегмент вируса Бханджа также кодирует белок, наиболее близкородственный поверхностным гликопротеинам флебовирусов (30% идентичности с SFTSV, 25% с UUKV и флебовирусами, переносимыми москитами).

Таким образом, можно сделать заключение, что исследуемые вирусы являются новыми представителями рода флебовирусов. Данный вывод был дополнительно подтвержден при помощи филогенетического анализа. На филогенетических деревьях, построенных для белков, кодируемых сегментами L (рис. 4, а) и M (рис. 4, б) представителей семейства Bunyaviridae, частично секвенированный нами вирус Бханджа с высокой степенью достоверности (100% для L-сегмента и 92% для M-сегмента) группируется с вирусами, входящими в род Phlebovirus. Следует отметить, что ближайшим родственником (хотя весьма дальним) является вирус, вызывающий тяжелую лихорадку с синдромом тромбоцитопении в Китае (SFTSV).

Вирус Форекария, имея серологическое родство с вирусом Бханджа, также, вероятно, является фле-бовирусом.

Заключение

Результаты проведенного нами молекулярно-генетического анализа частично секвенированных сегментов генома, кодирующих поверхностные гли-копротеины и вирусную полимеразу вируса Бхан-джа, и геномного сегмента, кодирующего полимера-зу вируса Кисмайо, позволяют сделать заключение, что исследованные вирусы являются новыми пред-

ставителями рода Phlebovirus в составе семейства Bunyaviridae.

ЛИТЕРАТУРА

1. АзарянА. Р., ГришановаА. П., БутенкоА. М. и др. Серологическая диагностика арбовирусных инфекций в Астраханской области // Материалы расширенного пленума Проблемной комиссии "Арбовирусы" и Научно-практической конф. "Ар-бовирусы и арбовирусные инфекции", Астрахань, 17—20 окт. 2006 г. — М., 2007. — С. 115—119.

2. Бутенко А. М., Громашевский В. Л., Львов Д. К. и др. Вирус Кисмайо — представитель антигенной группы Бханджа // Вопр. вирусол. — 1979. — Т. 24, № 6. — С. 661—665.

3. Boiro I., Lomonossov L. N. Malenko G. V. et al. Forecariah virus, a new representative of the Bhanja antigenic group, isolated in the Republic of Guinea. // Bull. Soc. Pathol. Exot. Filiales. — 1986. — Vol. 79, N 2. — P. 183—186.

4. Calisher C. H., Goodpasture H. C. Human Infection with Bhanja Virus // Am. J. Trop. Med. Hyg. — 1975. — Vol. 24, N 6. — P. 1040—1042.

5. Digoutte J. P., Heme G. // Institut Pasteur. International Catalogue of arboviruses. Supplement. Dakar. Senegal. — 1985. — P. 111.

6. Djikeng A., Halpin R., Kuzmickas R. et al. Viral genome sequencing by random priming methods // BMC Genom. — 2008. — Vol. 9, N 5.

7. Hubalek Z. Geographic distribushion of Bhanja virus // Folia Parasitol. (Praha). — 1987. — Vol. 34, N 1. — P. 77—86.

8. Hubalek Z. Biogeography of Tick-Borne Bhanja virus (Bunyaviridae) in Europe // Interdiscip. Perspect. Infect. Dis. — 2009. — Vol. 2009, doi:10.1155/2009/372691.

9. Kimar S., Tamura K., Nei M. MEGA: Molecular evolutionary genetics analysis software for microcomputers // Comput. Applicat. Biosci. — 1994. — Vol. 10, N 2. — P. 189—191.

10. Marklewitzl M., Handrick S., Grasse W. et al. Gouleako virus isolaied from West African mosquitoes constitutes a proposed novel genus in the family Bunyaviridae // J. Virol. — 2011. — Vol. 85, N 17. — P. 9227—9234.

11. Murphy F. A., Harrison A. K., Whitfield S. G. Bunyaviridae: morphologic and morphogenetic similarities of Bunyamwera serologic supergroup viruses and several other arthropod-borne viruses // Intervirology. — 1973. — Vol. 1. — P. 297—316.

12. Punda V., BeusI., Calisher C. H. et al. Laboratory infections with Bhanja virus // Zbl. Bakteriol. — 1980. — Suppl. 9: Arboviruses in the Mediterrnean Countries. — P. 273—275.

13. Shah K. V., Work T. H. Bhanja virus is a new arbovirus from ticks Haemaphysalis intermedia // Indian J. Med. Res. — 1969. — Vol. 57, N 5. — P. 793—798.

14. Vesenjak-Hirjan J., Calisher C. H., Beus I. et al . First natural clinical human Bhanja virus infection // Zbl. Bakteriol. — 1980. — Suppl. 9: Arboviruses in the Mediterrnean Countries. — P. 297—301.

Поступила 07.06.12

Сведения об авторах:

Гмыль Анатолий Петрович, канд. биол. наук, доцент, зав. лаб. биохимии Института полиомиелита и вирусных энцефалитов, e-mail:apgmyl@mail.ru; Бутенко Александр Михайлович, доктор биол. наук, проф., зав. лаб. биологии и индикации арбовирусов, НИИ вирусологии, e-mail:arboelisa@ mail.ru; Гмыть Лариса Вениаминовна, канд. биол. наук, вед. науч. сотр. Института полиомиелита и вирусных энцефалитов, e-mail:lvgmyl@mail.ru; Исаева Ольга Владиславовна, канд. биол. наук, зав. отд. секвенирования (центр коллективного пользования) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов; Ларичев Виктор Филиппович, канд. мед. наук, вед. науч. сотр. НИИ вирусологии, e-mail:vlaritchev@mail. ru; Хуторецкая Наталья Владимировна, канд. биол. наук, вед. науч. сотр. НИИ вирусологии, e-mail:arboelisa@mail.ru; Карганова Галина Григорьевна, доктор биол. наук, доцент, зав. лаб. биологии арбовирусов, Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов, e-mail:karganova@bk.ru