CC BY
34
ЭЛЕКТРОННЫЙ ЖУРНАЛ
Оп-1 I пе версия жу рнала на сайте
http://www.elmag.uran.ru
ОРЕНБУРГСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА УрО РАН
Ьуеаепа ШегБатоп (ЕБрег, 1784) Червонец блестящий Шовкун Д.Ф.
»
ОРЕНБУРГСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР УрО РАН
© Морозова Н.В., 2019 УДК 579.62
Н.В. Морозова
ТАКСОНОМИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА И УСТОЙЧИВОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ МИКРОФЛОРЫ, ИЗОЛИРОВАННОЙ ИЗ МОЧИ ПЛОТОЯДНЫХ ПРИ МОЧЕКАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ
Оренбургский федеральный исследовательский центр УрО РАН (Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН), Оренбург, Россия
Цель. Определить видовой состав и оценить антибиотикорезистентность микроорганизмов, выделенных из мочи при мочекаменной болезни (МКБ) плотоядных.
Материалы и методы. Изучен бактериальный спектр и антибиотикорезистентность микрофлоры, выделенной из мочи животных с мочекаменной болезнью, бактериологическим и диско-диффузионным методом соответственно.
Результаты. Показано, что в видовой структуре микроорганизмов доминировали стафилококки (44,4%), преимущественно Staphylococcus aureus (33,3%); Escherichia coli изолированы в 18,5% случаев; реже встречались Enterococcus faecalis (14,9%), а также неферментирующие бактерии, представленные двумя видами псевдомонад - Pseudomonas aeruginosa (7,4%) и P. luteola (3,7%); в единичных случаях (по 3,7%) обнаружены Proteus mirabilis, Morganella morganii и Bacillus subtilis. Микроорганизмы выделены в монокультуре, двух- и трехкомпонентных ассоциациях. Проведенные исследования показали, что препаратами выбора при терапии МКБ могут являться неомицин и стрептомицин (за исключением случаев выделения энтерококков).
Заключение. Видовая структура микроорганизмов, выделенных из мочи плотоядных с МКБ характеризовалась разнообразием, при этом доминировали бактерии рода Staphylococcus spp. Выявленную вариабельность антибиотикорезистентности выделенных уроизолятов необходимо учитывать при эмпирическом выборе препарата (-ов) для проведения антимикробной терапии плотоядных с МКБ.
Ключевые слова: микроорганизмы, антибиотикорезистентность, мочекаменная болезнь, плотоядные.
N. V. Morozova
TAXONOMIC STRUCTURE AND ANTIBIOTIC RESISTANCE OF MICROFLORA ISOLATED FROM CARNIVOROUS URINE IN UROLITHIASIS
Orenburg Federal Research Center, UB RAS (Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis, UB RAS), Orenburg, Russia
Objective. To determine the species composition and evaluate antibiotic resistance of microorganisms isolated from urine in urolithiasis (ICD) of carnivores.
Materials and methods. Bacterial spectrum and antibiotic resistance of microflora isolated from urine of animals with urolithiasis were studied by bacteriological and disco-diffusion method respectively.
Results. It was shown that the species structure of microorganisms was dominated by staphylococci (44.4%), mainly Staphylococcus aureus (33.3%); Escherichia coli was isolated in 18.5% of cases; Enterococcus faecalis (14.9%) was less common, as well as non - fermenting bacteria represented by two species of Pseudomonas - Pseudomonas aeruginosa (7.4%) and P. luteola (3.7%); in isolated cases (3.7% each) Proteus mirabilis, Morganella morganii and Bacillus subtilis were found. Microorganisms were isolated in monocular, two- and three-
component associations. Studies have shown that neomycin and streptomycin may be the drugs of choice in the treatment of ICD (except for cases of enterococcal excretion).
Conclusion. The species structure of microorganisms isolated from the urine of carnivores with ICD was characterized by diversity, with bacteria of the genus Staphylococcus spp dominating. The revealed variability of antibiotic resistance of isolated uroisolates should be taken into account when empirically selecting the drug (s) for antimicrobial therapy of carnivores with ICD.
Key words: microorganisms, antibiotic resistance, urolithiasis, carnivores.
Введение
В настоящее время отмечается тенденция к увеличению числа животных, страдающих болезнями мочевой системы [1, 2]. Результаты анализа отечественной литературы свидетельствуют о том, что на долю патологий мочевыделительной системы приходится 7,5-11,0% от всех выявленных заболеваний, причем подавляющее число случаев в этой группе принадлежит уролитиазу - 60-70 % [3]. Мочекаменная болезнь (МКБ) диагностируется у 66,0 % животных с признаками воспаления мочевыводящего тракта, при этом чаще всего (86,7% случаев) заболевают животные в возрасте от 1 до 7 лет, у 23,0 % животных отмечаются рецидивы болезни [4].
Нередко микроорганизмы, выделенные из мочи при МКБ, обладают полиантибиотикорезистентностью к широко применяемым в клинической b ветеринарной практике антимикробным препаратам [5], что затрудняет терапию заболевания, в то время как эффективность лечения и прогноз болезни зависят от рациональной стартовой эмпирической антибактериальной терапии [6].
В связи с вышеизложенным целью нашего исследования явилось определение видового состава и оценка антибиотикорезистентности микроорганизмов, выделенных из мочи плотоядных с мочекаменной болезнью.
Материалы и методы
В исследование были включены 17 животных (11 кошек и 6 собак) разных пород, возрастов и пола, находящихся на лечении в ветеринарном центре «ВЕТДОКТОР» (главный врач - Шатунов А.В.) и ветеринарной клинике ООО «НПЦ «Инновационная ветеринария» (директор - к.б.н. Сорокин В.И.).
Пробы мочи из мочевого пузыря отбирали в стерильные пробирки с соблюдением правил асептики и доставляли в бактериологическую лабораторию в течение 1 -2 часов. Выделение микроорганизмов в чистой культуре проводили бактериологическим методом. Количество микроорганизмов в
1 мл мочи (степень бактериурии) определяли методом секторных посевов [7].
Микроорганизмы идентифицировали до вида, учитывая морфологические, тинкториальные и культуральные свойства; биохимический профиль определяли с помощью тест-систем «Lachema» («Erba Lachema s.r.o.», European Union).
Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам (АБП) определяли диско-диффузионным методом согласно [8]. В работе использовали стандартные диски промышленного производства (ЗАО «Научно-исследовательский центр фармакотерапии», г. Санкт-Петербург) для ветеринарных лабораторий.
Результаты и обсуждение
При бактериологическом исследовании было выделено 27 штаммов из всех проб мочи, при этом степень бактериурии варьировала от 103 КОЕ/мл до 108 КОЕ/мл.
В видовой структуре микроорганизмов доминировали стафилококки (44,4%), преимущественно Staphylococcus aureus (33,3%), S. epidermidis выделены в 7,4%, а S. saprophyticus в 3,7% случаев. Escherichia coli были изолированы в 18,5% случаев; реже встречались Enterococcus faecalis (14,9%), а также неферментирующие бактерии, представленные двумя видами псевдомонад - Pseudomonas aeruginosa (7,4%) и P. luteola (3,7%). В единичных случаях (по 3,7%) обнаружены Proteus mirabilis, Morganella morganii и Bacillus subtilis (рис. 1).
50 45 40 35
30 -I—
25 — 20 — 15 —
10 -I—
5 0
JUL
JUL
^ > 0<4> 0V> Д^
л\с ^ с ,лЧ\° леР ,Х)4 л<у \$>
^ / У v X ^ ^ . ^
о$ч я г х
Рис. 1. Частота выделяемых видов бактерий из мочи у животных при МКБ.
От 7 животных (41,2%) штаммы выделены в монокультуре, которая, наряду с преобладающим в общей структуре S. aureus (42,9%), была представлена E. coli (28,5%), M. morganii и P. luteola (по 14,3%).
В 58,8% наблюдений микроорганизмы выделялись в двух и трех компонентных бактериальных ассоциациях. В бактериальных ассоциациях, состоящих из двух микроорганизмов, преобладали также золотистые стафилококки, которые выделяли совместно с E. coli и P. aeruginosa (по 25,0%); отмечены также ассоциации E. coli с S. saprophyticus и B. subtilis (по 12,5%); E. faecalis с P. mirabilis и S. epidermidis (по 12,5%). У одного животного была зарегистрирована ассоциация из трех микроорганизмов, представленная E. coli, B. subtilis и S. saprophyticus.
Далее мы изучили резистентность уроштаммов бактерий, выделенных от животных, больных МКБ, к 9 антибактериальным препаратам (рис. 2).
Рис. 2. Доля микроорганизмов, выделенных у животных при МКБ, резистентных к антибактериальным препаратам.
Полученные результаты показали, что все выделенные микроорганизмы были устойчивы к бензилпенициллину и ампициллину.
К тилозину проявляли резистентность все изолированные штаммы E. coli, M. morganii, E. faecalis, P. mirabilis, B. subtilis и псевдомонад обоих видов, тогда как все штаммы S. epidermidis и S. saprophyticus и половина изо-лятов S. aureus были чувствительны к данному антибиотику.
К неомицину все штаммы S. epidermidis и S. saprophyticus оказались чувствительными; штаммы P. luteola, P. mirabilis, M. morganii, B. subtilis характеризовались умеренной устойчивостью к нему; E. coli и P. aeruginosa были в 40,0 и 50,0% случаев умеренно-устойчивыми, а в 60,0 и 50,0% случаев соответственно - чувствительными. Среди штаммов E. faecalis половина изолятов была чувствительна к данному АБП, а половина - умеренно-устойчива; среди выделенных штаммов S. aureus 16,7% культур были резистентными, 50,0% -умеренно-устойчивыми и 33,3% чувствительными к нему.
К энрофлоксацину штаммы S. epidermidis и P. mirabilis были резистентны; штаммы S. saprophyticus, P. luteola и E. faecalis, напротив, чувствительны; M. morganii и B. subtilis - умеренно-устойчивы. Культуры E. coli и P. aeruginosa были в 60,0 и 50,0% случаев умеренно-устойчивыми, в 40,0 и 50,0% случаев соответственно - чувствительными. Среди выделенных штаммов S. aureus 16,7% культур были резистентными, 33,3% - умеренно-устойчивыми и 50,0% - чувствительными к данному АМП.
К полимиксину были устойчивы все штаммы E. faecalis и P. mirabilis; чувствительны - S. epidermidis и P. aeruginosa; умеренно-устойчивы -S. saprophyticus, P. luteola, M. morganii и B. subtilis; среди выделенных изолятов S. aureus 16,7% культур были резистентными, 33,3% - умеренно-устойчивыми и 50,0 % чувствительными, а в выборке штаммов E. coli - 60,0% чувствительными и 40,0% умеренно-устойчивыми.
К тетрациклину характеризовались резистентностью штаммы S. saprophyticus, P. luteola, P. mirabilis; умеренной устойчивостью - M. mor-ganii и B. subtilis, а S. epidermidis и E. faecalis были чувствительны к нему. Среди штаммов P. aeruginosa устойчивые штаммы отсутствовали, у 50,0% отмечена чувствительность и 50,0% были умеренно-устойчивыми. Среди выделенных штаммов S. aureus 16,7% культур были резистентными, 33,3% -умеренно-устойчивыми и 50,0% - чувствительными, а в выборке E. coli это распределение было 40,0, 40,0 и 20,0% соответственно.
Все изученные штаммы, за исключением E. faecalis и P. mirabilis (резистентный и умеренно-устойчивый соответственно), были чувствительны к
стрептомицину.
К левомицетину штаммы S. saprophyticus, E. faecalis, M. morganii и P. mirabilis были резистентны, штаммы S. epidermidis, P. luteola и B. subtilis чувствительны. Среди штаммов P. aeruginosa устойчивые к левомицетину штаммы отсутствовали - у 50,0% отмечена чувствительность, а 50,0% были умеренно-устойчивыми. Среди выделенных штаммов S. aureus 16,7% культур были резистентными, 16,7% - умеренно-устойчивыми и 66,6% - чувствительными, а E. coli в 40,0% случаев были резистентными, а 60,0% - устойчивыми. Заключение
При изучении видового состава микроорганизмов, выделенных из мочи плотоядных при МКБ, установлено, что доминирующим видом являлся S. aureus, реже высевались E. coli, E. faecalis, Pseudomonas spp.
Одной из основных проблем в лечении инфекционных заболеваний животных является распространение штаммов, устойчивых к антимикробным препаратам [9].
В результате проведенных исследований изучена чувствительность / резистентность бактерий разных видов, выделенных у животных из мочи при мочекаменной болезни, к антимикробным средствам. Определены наиболее эффективные препараты для лечения заболевания.
Проведенные исследования показали, что препаратами выбора при терапии МКБ могут неомицин и стрептомицин (за исключением случаев выделения энтерококков).
Поскольку антимикробная терапия должна проводиться с учётом региональных особенностей, полученные нами данные будут способствовать выбору препаратов для эмпирической терапии плотоядных с МКБ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барышев Д.Ю., Шаманов И.А., Пахмутов А.И. Морфофункциональные и биохимические показатели крови и мочи у кошек в норме и при комплексном лечении мочекаменной болезни. Ветеринарная практика. 2005. 1(28): 19-23.
2. Овчиникова Р.С. Грибковые и бактериальные инфекции мочевыделительной системы мелких домашних животных. Ветфарма. 2013. 2: 24-30.
3. Миколенко О.Н., Ватников Ю.А. Анализ проявления мочекаменной болезни у кошек. Российский ветеринарный журнал. 2015. 6: 14-16.
4. Миколенко О.Н., Ватников Ю.А. Методы коррекции при мочекаменной болезни у кошек. Российский ветеринарный журнал. 2015. 6: 14-16.
5. Складнева Е.Ю. Терапия уролитиаза у домашних плотоядных: научно-методические рекомендации. Черногорск: Издательство ООО «РИЦ», 2011. 19 с.
6. Усольцева А.Н., Курочкина Н.Г. Диагностика и терапия мочекаменной болезни у плотоядных. Молодежь и наука. 2017. 4: 2-3.
7. Фельдман Ю.М., Маханева А.В., Шапиро А.В. Количественное определение бактерий в клиническом материале. Лабораторное дело. 1984. 10: 616-619.
8. МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». М.: Минздрав России, 2005. 62 с.
9. Данилевская Н.В. Особенности применения антибиотиков в ветеринарной практике. Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2010. 3(7): 37.
Поступила 8 сентября 2019 г.
(Контактная информация: Морозова Наталья Викторовна - научный сотрудник лаборатории персистенции и симбиоза микроорганизмов Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН; адрес: 460000, г. Оренбург, ул. Пионерская, 11; тел. 8 (3532) 77-54-17; e-mail: natascha210994@mail.ru)
LITERATURE
1. Baryshev D.Yu., Shamanov I.A., Pakhmutov A.I. Morphofunctional and biochemical parameters of blood and urine in cats in normal and complex treatment of urolithiasis. Veterinary practice. 2005. 1 (28): 19-23.
2. Ovchinikova R.S. Fungal and bacterial infections of the urinary system of small domestic animals. Of vetfarm. 2013. 2: 24-30.
3. Mykolenko O.N., Vatnikov U.A. Analysis of urolithiasis in cats. Russian veterinary journal. 2015. 6: 14-16.
4. Mykolenko O. N., Vatnikov U.A. Correction Methods in urolithiasis.-tion of the disease in cats. Russian veterinary journal. 2015. 6: 14-16.
5. Skladneva E. Yu. Therapy of urolithiasis in domestic carnivores: scientific and methodological recommendations. Chernogorsk: Publishing house LLC "RITS", 2011. 19 p.
6. Usoltseva A.N., Kurochkina N.G. Diagnosis and therapy of urolithiasis in carnivores. Youth and science. 2017. 4: 2-3.
7. Feldman J.M., Mahadeva A.V., Shapiro A.V. Quantitative op-definition of bacteria in clinical material. Laboratory business. 1984. 10: 616-619.
8. MOOK 4.2.1890-04 "Determination of sensitivity of microorganisms to antibacterial preparations". Moscow: Ministry Of Health Of Russia, 2005. 62 p.
9. Danilevskaya N.V. Features of application of antibiotics in veterinary practice. Topical issues of veterinary biology. 2010. 3(7): 37.
Образец ссылки на статью:
Морозова Н.В. Таксономическая структура и устойчивость к антибиотикам микрофлоры,
изолированной из мочи плотоядных при мочекаменной болезни. Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2019. 3. 7с. [Электр. ресурс] (URL: http://elmag.uran.ru:9673/
magazine/ Numbers/2019-3/Articles/MNV-2019-3.pdf). DOI: 10.24411/2304-9081-2019-13028
