CC BY
51
ОСОБЕННОСТИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПРИ УГРОЗЕ ПРЕРЫВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ
8. Clonal expansions in acute EBV infection are detectable in the CD8+ and not the CD4+ subset and persist with a variable CD45 phenotype /Maini M.K. et al. //J. Immun. - 2000. - V. 165. - P. 5729-5737.
9. Koch, S. Multiparameter flow cytometric analysis of CD4 and CD8 T cell subsets in young and old people /S. Koch, A. Larbi, E. Derhovanes-sian et al. //Immun. Ageing. - 2008. - V. 5. - P. 6.
10. Сидорова, И.С. Клинико-диагностические аспекты фетоплацентарной недостаточности /И.С. Сидорова, И.О. Макаров. - М., 2005. -296.с.
11. Life and death of lymphocytes: a role in immunesenescence /S. Gupta, H. Su, R. Bi et al. //Immun. & Ageing. - 2005. - V. 2. - P. 1-15.
12. Systemic inflammatory priming in normal pregnancy and pre-eclampsia: the role of circulating syncytiotrophoblast microparticles /S.J. Germain, G.P. Sacks, S.R.Sooranna et al. //J. Immun. - 2007. - V. 178. - Р. 5949-5956.
Кадырова Л.В., Сотникова Н.Ю.
Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова,
г. Иваново
СЫВОРОТОЧНЫЙ УРОВЕНЬ IL-2 И IL-15 В ДИНАМИКЕ БЕРЕМЕННОСТИ
Цитокины участвуют в осуществлении практически всех этапов гестационного процесса. Помимо этого, система цитокинов является относительно доступной для исследования при различных физиологических и патологических состояниях, а изменение характера продукции цитокинов могут служить дополнительным диагностическим критерием нарушений гомеостаза.
Цель исследования - определить особенности продукции IL-2 и IL-15 при неосложненном течении беременности и при угрозе прерывания беременности в 1 триместре гестации.
Материалом для исследований служила периферическая венозная кровь из локтевой вены 68женщин. Обследовались 15 небеременных женщин и 40 женщин с неосложненным течением беременности, обследованных трехратно в 1, 2 и 3 триместрах гестации. А также 13 женщин 1 триместра гестации с клиническими признаками угрозы прерывания беременности. Содержание IL-2 и IL-15 в сыворотке крови определяли методом ELISA на микропланшетном ридере Multiscan EX Labsystems. Результаты исследований показали, что наступление беременности сопровождалось достоверным увеличением содержания IL-2 и IL-15 в сыворотке периферической крови по сравнению с аналогичным показателем группы небеременных доноров. Во 2 триместре беременности нами также отмечалось увеличение уровня исследуемых цитокинов. В 3 триместре беременности наблюдалось снижение уровня IL-2 относительно аналогичного показателя 2 триместра гестации. При угрозе невынашивания в ранние сроки беременности мы отмечали увеличение количества IL-2 и IL-15 по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации. Таким образом, при беременности мы отмечаем выраженные изменения цитокинового профиля как при неосложненной беременности, так и при угрозе прерывания беременности в 1 триместре гестации.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: IL-2: IL-15; беременность; угроза самопроизвольного выкидыша.
Kadyrova L.V., Sotnikova N. Yu.
Ivanovo Research Institute of Maternity and Childhood by V.N. Gorodkov, Ivanovo THE SERUM LEVEL OF IL-2 AND IL-15 IN THE DYNAMIC OF PREGNANCY
Cytokines participate practically in mediation of all stages of gestational process. Besides, the cytokine system is relatively available for the investigation during different physiological and pathological conditions, and changes in the character of cytokine production can be used as additional diagnostic criterion for the homeostasis impairment.
The aim of the study - to assess the character of IL-2 and IL-15 production during normal pregnancy and threatened spontaneous abortion in the first trimester of gestation.
Peripheral venous blood from 68 women was used as the material for the investigation. 15 non pregnant and 40 women with normal pregnancy were examined three times in the 1, 2 and 3 trimesters of gestation. 13 patients with clinical manifestations of threatened abortion in the 1 trimester of gestation were examined as well. The serum level of IL-2 and IL-15 was studied by ELISA method using Multiscan EX Labsystems reader.
The results of the investigation had shown, that the onset of pregnancy was followed by the significant elevation of IL-2 and IL-15 serum level in comparison to that of non pregnant donors. In the 2 trimester of pregnancy we had also noted the increase of the studied cytokines level. In the 3 trimester of pregnancy the decrease of IL-2 and IL-15 level comparing to that in the 2 trimester of gestation. In threatened abortion at early stages of pregnancy we noted rise of IL-2 and IL-15 serum level comparing to that in women with early normal pregnancy. Thus, the cytokine profile during pregnancy shifted significantly both in the dynamic of normal pregnancy and early threatened abortion as well.
KEY WORDS: IL-2; IL-15; pregnancy: threatened spontaneous abortion.
Корреспонденцию адресовать:
КАДЫРОВА Людмила Викторовна,
153045, г. Иваново, ул. Победы, д. 20,
ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России. Тел.: 8 (4932)-33-83-20.
E-mail: [email protected]
Цитокины традиционно были предметом особого внимания со стороны исследователей, занимающихся проблемами иммунологии репродукции. Это связано с тем, что цитокины участвуют в осуществлении практически всех этапов гестационного процесса [1]. Помимо этого, система ци-
№2(57) 2014 с/^ть и^пя вс7|узбассе
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ■
токинов является относительно доступной для исследования при различных физиологических и патологических состояниях, а изменения характера продукции цитокинов могут служить дополнительным диагностическим критерием нарушений гомеостаза. В иммунорегуляции гестационного процесса важную роль играют лимфоциты и естественные киллеры (ЕК). Так, неосложненное течение беременности во многом определяется балансом соотношения Th1/Th2 типов и функциональной активностью регуляторных Т-лимфоцитов. Процессы имплантации, роста и инвазии трофобласта находятся под контролем действия ЕК [1]. Факторами, определяющими пролиферацию этих клеток, являются IL-2 и IL-15. Известно, что IL-2 является фактором роста лимфоцитов, а IL-15 в большей степени определяет рост популяции ЕК. Однако в настоящее время должного внимания изменению этих цитокинов при неосложненной беременности практически не уделяется. Имеются лишь единичные работы, показывающие изменения IL-2 и IL-15 при патологии беременности. Так, ранее было показано, что при угрозе прерывания беременности отмечалось увеличение содержания IL-2 в сыворотке крови по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности [2]. Другие исследователи отмечали снижение сывороточного уровня IL-2 при угрозе прерывания беременности в 1 триместре гестации [3]. Также в литературе имеются данные о более высоком значении уровня сывороточного IL-15 у беременных женщин 3 триместра гестации с развившейся преэклампсией, по сравнению с беременными женщинами с нормальным артериальным давлением [4].
Цель исследования — определить особенности сывороточного содержания IL-2 и IL-15 при неосложненном течении беременности и при угрозе прерывания беременности в 1 триместре гестации.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом для исследований служила периферическая венозная кровь из локтевой вены 68 женщин. Из них, 15 соматически здоровых небеременных женщин с реализованной репродуктивной функцией (контрольная группа) и 40 женщин с неосложненным течением беременности, обследованных трехкратно: в 1 триместре (6-10 недель), во 2 триместре (16-20 недель) и в 3 триместре гестации (30-34 не-
дели). А также 13 женщин 1 триместра гестации с клиническими признаками угрозы прерывания беременности.
Содержание IL-2 и IL-15 в сыворотке крови определяли методом ELISA на микропланшетном ридере Multiscan EX Labsystems. Для проведения анализа использовали тест-системы. Чувствительность тест-систем составила для IL-2 от 4 пг/мл, для IL-15 от 11 пг/мл.
Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы Microsoft Excel из комплекта Microsoft Office 2000. Результаты представлены как среднее арифметическое ± ошибка среднего арифметического. Достоверность различий сравниваемых показателей оценивали с использованием критериев Стьюдента. Различия считали достоверными при p < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты проведенных исследований показали, что уровни как IL-2, так и IL-15 значительно менялись в течение беременности, причем динамика этих изменений имела однонаправленный характер. Так, наступление беременности сопровождалось увеличением содержания IL-2 и IL-15 в сыворотке периферической крови по сравнению с аналогичным показателем группы небеременных доноров (р = 0,050 в обоих случаях). Во 2 триместре беременности нами также отмечалось увеличение уровня исследуемых цитокинов в сыворотке периферической крови по сравнению с показателями небеременных доноров (IL-2 р = 0,024; IL-15 р = 0,032) и тенденция к росту данных показателей по сравнению с аналогичными параметрами 1 триместра беременности. Содержание IL-2 в периферической крови женщин в 3 триместре гестации не имело достоверных различий по сравнению с группой небеременных женщин, относительно же 2 триместра наблюдалось достоверное снижение уровня исследуемого цитокина (р = 0,049). Сывороточный уровень IL-15 в 3 триместре беременности оставался таким же высоким, как во 2 триместре гестации, и был достоверно выше, чем в группе небеременных доноров (р = 0,009) (табл. 1).
При угрозе невынашивания в ранние сроки беременности мы отмечали значительный разброс в полученных значениях сывороточного содержания IL-15, но среднее значение содержания этого цитокина в периферической крови было достоверно выше, чем
Сведения об авторах:
КАДЫРОВА Людмила Викторовна, мл. науч. сотрудник, лаборатория клинической иммунологии, ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново, Россия. E-mail: [email protected]
СОТНИКОВА Наталья Юрьевна, доктор мед. наук, профессор, зав. лабораторией клинической иммунологии, ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Го-родкова» Минздрава России, г. Иваново, Россия. E-mail: [email protected]
Information about authors:
KADYROVA Ludmila Viktorovna, junior researcher, laboratory of clinical immunology, Ivanovo Research Institute of Maternity and Childhood by V. N. Gorodkov, Ivanovo, Russia. Е-mail: [email protected]
SOTNIKOVA Natalya Yurevna, doctor of medical sciences, professor, head of the laboratory of clinical immunology, Ivanovo Research Institute of Maternity and Childhood by V.N. Gorodkov, Ivanovo, Russia. Е-mail: [email protected]
с/$(ръ и^ггя в^^узбассе
№2(57) 2014
СЫВОРОТОЧНЫЙ УРОВЕНЬ IL-2 И IL-15 В ДИНАМИКЕ БЕРЕМЕННОСТИ____
в группе женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (р = 0,050). Достоверных различий в сывороточном содержании IL-2 при угрозе невынашивания в 1 триместре беременности по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности мы не отмечали, эти изменения были лишь на уровне тенденции к его повышению (табл. 2).
ОБСУЖДЕНИЕ
Проведенные исследования показали, что в сывороточном содержании IL-2 и IL-15 наблюдается сходная динамика изменений с момента наступления беременности до 3 триместра гестации.
Как известно, основными продуцентами IL-2 являются CD4+ лимфоциты. Причем, активация гена IL-2 в лимфоцитах происходит только после взаимодействия антигена с Т-клеточным рецептором [5]. Полученные нами данные позволяют предположить, что, начиная с ранних сроков беременности, на системном уровне происходит активация Т-хелперов под действием АГ, специфичных для гестационного процесса. Таковыми могут являться АГ плодового происхождения, т.к. в периферический кровоток матери во время беременности проникают фрагменты синцитиотрофобласта, ДНК и лимфоциты плода. При акушерской патологии проницаемость плацентарного барьера усиливается, что приводит к большему поступления антигенов плодового происхождения в кровоток матери [5]. Возможно, именно это обусловило тенденцию к повышению сывороточного содержания IL-2 у женщин с угрозой прерывания беременности в 1 триместре гестации.
В отличие от IL-2, интерлейкин-15 может синтезироваться различными типами клеток во многих органах, но в периферической крови основными его продуцентами являются моноциты [6]. Характерной особенностью данного цитокина является способность накапливаться в везикулах клетки в отсутствии активационного сигнала без секреции во внеклеточное пространство. Кроме того, IL-15 в значительной степени может существовать в виде биологически активной мембранной формы [6]. Все это затрудняет идентификацию IL-15 в крови. По нашим данным, при беременности уровень сывороточного IL-15 возрастал
Таблица 1
Содержание IL-2 и IL-15 в сыворотке периферической крови при неосложненном течении беременности в динамике гестационного процесса (пг/мл)
Группы обследуемых женщин IL-2 IL-15
Доноры 0 (n = 14) 1,75 ± 0,60 (n = 9)
1 триместр беременности 0,89 ± 0,44* (n = 41) 9,06 ± 3,09* (n = 35)
2 триместр беременности 2,51 ± 1,05* (n = 35) 15,55 ± 6,11* (n = 29)
3 триместр беременности 0,29 ± 0,29° (n = 26) 14,82 ± 4,45*** (n = 20)
Примечание: в скобках дано число проведенных исследований;
* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (* p < 0,05; ***- p < 0,01);
° - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (° p < 0,05).
Таблица 2
Содержание IL-2 и IL-15 в сыворотке периферической крови
у женщин при угрозе самопроизвольного выкидыша в 1 триместре гестации (пг/мл)
Группы обследуемых женщин IL-2 IL-15
Неосложненное течение 0,89 ± 0,44 (n = 41) 9,06 ± 3,09 (n = 35)
беременности
Угроза самопроизвольного выкидыша 1,27 ± 1,05 (n = 13) 88,90 ± 36,85* (n = 14)
Примечание: в скобках дано число проведенных исследований;
* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (* p < 0,05).
многократно, что могло быть обусловлено как его синтезом de novo, так и повышенной секрецией из цитоплазматических везикул или шеддингом с мембраны клеток. IL-15 является основным фактором роста и финальной стадии дифференцировки для ЕК, блокирует их апоптоз, способствуя тем самым пролонгированию иммунного ответа. В литературе имеются данные о том, что IL-15, производимый на ранних сроках беременности, является регулятором инвазии трофобласта [7]. Однако на системном уровне роль IL-15 при беременности остается неясной, но можно предположить, что в норме он способствует усилению противоинфекционной защиты матери и плода, а при угрозе невынашивания беременности — развитию патологических цитотоксических реакций, направленных на отторжение плаценты и гибель плода.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Иммунологическая загадка беременности /Н.Ю. Сотникова, Ю.С. Анциферова, А.В. Кудряшова и др. - Иваново, 2005. - 275 с.
2. Кравченко, Е.Н. Прогнозирование течения беременности и профилактика преждевременных родов посредством определения цитокинов /Е.Н. Кравченко, Л.В. Кадырова, А.В. Мишутина //Мед. и образов. в Сибири. - 2012. - № 6. - С. 45-47.
3. Оценка продукции цитокинов при беременности, осложненной угрозой прерывания в первом триместре /Г.Н. Чистякова, И.А. Га-зиева, И.И. Ремизова, Г.А. Черданцева //Фундамент. исслед. - 2005. - № 5. - С. 96-98.
4. Serum levels of tumor necrosis factor-б, interleukin-15 and interleukin-10 in patients with pre-eclampsia in comparison with normotensive pregnant women /F. Kalantar, S. Rajaei, A.B. Heidari et al. //Iran. J. of Nurs. and Midwif. Research. - 2013. - N 18. - P. 463-466.
5. Кетлинский, С.А. Цитокины /С.А. Кетлинский, А. С. Симбирцев. - СПб., 2008. - 548 с.
6. Systemic inflammatory priming in normal pregnancy and pre-eclampsia: the role of circulating syncytiotrophoblast microparticles /S.J. Germain, G.P. Sacks, S.R. Sooranna et al. //J. Immun. - 2007. - N 178. - P. 5949-5956.
7. Expression profiles of interleukin-15 in early and late gestational human placenta and in pre-eclamptic /R. Agarwal, А. Loganath, A.C. Roy et al. //Mol. Hum. Reprod. - 2001. - N 7. - P. 97-101.
^ ^ ^
№2(57) 2014 с/^ть h^Stm вс7|узбассе
