CC BY
28
2004 ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА. Сер. 3 Вып. 2
ГЕНЕТИКА
УДК 572.2:581.132.1
Я. В. Савельева, Е.М. Чекунова
СУПРЕССИЯ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ 1Ш,
КОНТРОЛИРУЮЩЕМ СВЕТОНЕЗАВИСИМЫЙ СИНТЕЗ ХЛОРОФИЛЛА
у стамувомотб яешнаквтп
Введение. Биохимические аспекты процесса биосинтеза хлорофилла - основного пигмента фотосинтезирующих организмов - в целом установлены. В настоящее время ведутся исследования генетического контроля путей биосинтеза пигмента и ультраструктурной организации фотосинтезирующего аппарата (рис.1). За последнее десятилетие были идентифицированы гены, кодирующие большинство ферментов биосинтеза хлорофилла и определена их структура [10,18,21,22]. Наиболее актуальными в генетике фотосинтеза становятся исследования, направленные на изучейие генетической регуляции биосинтеза хлорофилла.
Глутамат
I •
5-АЛК
отя 05А
Гем
Протопорфирин IX
Ьгс 1 сМ 1
ЛЬАБ СРОХ РРОХ
СНШ, Р. I
Ьгс! 1183
и-
М<>-протопорфирин мономегиловый эфир
Протохлорофиллид
СШ,В. I... N уеПоте
I
темнота
рс-
Хлорофиллид
\
Хлорофилл а
РОК свет
С АО
Хлорофилл Ь
Рис. 1. \нетический контроль биосинтеза хлорофилла у СЫату<1отопа& гетИагЖИ. Строчными буквами обозначены мутации, блокирующие указанные этапы биосинтеза хлорофилла, прописными - идентифицированные к настоящему времени гены, которые кодируют ферменты, осуществляющие указанные реакции.
> Н. В. Савельева, Е. М. Чекунова, 2004
Зеленая водоросль Chlamydomonas reinhardtii - классический модельный объект генетики фотосинтеза [23]. Это - уникальный микроорганизм, позволяющий изучать генетический контроль светонезависимого (темнового) биосинтеза хлорофилла. Высшие растения в темноте не синтезируют хлорофилл и накапливают его предшественник - протохлорофиллид (ПХЛД), поскольку фермент, осуществляющий дальнейшее превращение ПХЛДа в хлоро-филлид (ХЛД) - протохлорофиллид-оксидо-редуктаза (ПОР), функционирует только на свету. В отличие от покрытосеменных растений, клетки хламидомонады (как и многих голосеменных) способны синтезировать хлорофилл в темноте, благодаря наличию энзиматического комплекса, конвертирующего протохлорофиллид в хлорофиллид, светонезависимо [9, 14, 22].
Основой для изучения генетической детерминации обоих (темнового и светового) путей биосинтеза хлорофилла стали генетические коллекции пигментных мутантов [2,15]. В отделе генетики Биологического НИИ СПбГУ работы A.B. Столбовой [3] положили начало созданию коллекции бесхлорофильных и светочувствительных мутантов хламидомонады, которые и стали предметом генетического анализа. Подобный подход оказался наиболее эффективным для идентификации мутаций, блокирующих различные этапы в цепи последовательных реакций биосинтеза хлорофилла (см. рис.1), и, в дальнейшем, клонирования генов, их контролирующих [7,21,22].
У хламидомонады известно 3 хлоропластных и 7 ядерных генов, контролирующих све-тонезависимый синтез ХЛД из ПХЛД [11, 12, 13, 16]. Мутантные по данным генам клетки в темноте теряют способность синтезировать хлорофилл и, подобно этиолированным растениям, формируют колонии, имеющие желтую окраску. Такое изменение пигментации обусловлено отсутствием хлорофилла, накоплением ПХЛДа и наличию желтых пигментов каротинои-дов. При освещении синтез хлорофилла у этих мутантов восстанавливается. Начиная с 1954 г. у хламидомонады значительное количество подобных мутантов было изолировано и описано [11-14,16,20].
Среди мутантов, неспособных синтезировать хлорофилл в темноте, наряду" с вышеописанными, были выделены штаммы, клетки которых накапливали более ранний по отношению к ПХЛДу предшественник хлорофилла - протопорфирин IX и формировали в темноте колонии оранжевого цвета. Такие мутанты были описаны как в России [3], так и в США [23, 24]. Генетический анализ показал, что накопление протопорфирина у этих мутантов обусловлено рецессивными мутациями в двух генах: СНЫ и LTS3, представленных рядом аллелей [4, 8]. Также была показана аллельность мутаций, описанных A.B. Столбовой: chll и lts3, и В. Ван-гом: brs-1 и brc-.l соответственно [5]. В отличие от гибнущих на свету мутантов по гену СИ LI (chll. и brs-1), культуры штаммов хламидомонады, несущих аллельные мутации lts3 и brcl в гене LTS3, при освещении зеленеют, т. е. сохраняют способность к светозависимому биосинтезу хлорофилла. Если предположить, что реакции биосинтеза хлорофилла осуществляются двумя энзиматическими системами, одна из которых функционирует на свету (светозависи-мая), а другая - в отсутствие света (светонезависимая), то у мутантов по гену LTS3 светонеза-висимый путь генетически заблокирован, а функционирует только светозависимый энзимати-ческий комплекс.
Одним из подходов к поиску альтернативных путей биосинтеза является изучение супрессии мутантных признаков. Предметом нашего исследования стал выделенный из культуры штамма, несущею мутацию brcl, спонтанный ревертант, способный синтезировать хлорофилл в темноте. Генетический анализ показал, что восстановление темнового синтеза хлорофилла у этого ревертанта обусловлено рецессивной мутацией sup3 в гене SUP3, локализованном в ядре и сцепленном с исходной мутацией brcl. Мутация sup3 также супрессировала проявление другой мутантной аллели гена LTS3 - lts3, демонстрируя отсутствие аллелоспецифичнос-
Выявление механизмов, обеспечивающих восстановление светонезависимого пути биосинтеза хлорофилла у мутантов хламидомонады, приблизит нас к пониманию генетического контроля процессов регуляции биосинтеза хлорофилла в целом, и его светонезависимых реакций - в частности.
Материалы и методы. В работе были использованы штаммы Chlamydomonas reinhardtii из коллекции Генетического Центра Хламидомонады [15]: Brei (генотипа: brcl, mt+), СС38 (генотипа: pab2 ас 14, mt-), CF-30 (генотипа: arg7, mt-) и Arg2 (генотипа: arg7-8, mt-), и Петергофской Генетической Коллекции [2] - Ltc3 (генотипа: lts3, mt+)], а также их рекомбинанты, полученные в ходе экспериментальной работы. Культуры хламидомонады выращивали в чашках Петри на стандартной трис-ацетат-фосфатной (ТАР) авизированной (1,5%) среде при температуре 24 °С в гетеротрофных и миксотроф-ных условиях [15]. Для культивирования ауксотрофных штаммов в среду добавляли аргинин (до конечной концентрации 100 мг/л) и парааминобензойную кислоту (100 мг/л). Скрещивания и тетрадный анализ осуществляли по методу, описанному A.B. Столбовой с модификациями [1]. Получение и анализ диплоидов осуществляли по методу В. Эберсольда с модификациями [6]. Оценку расстояния между маркерами (d) в сантиморганах (сМ) проводили, используя формулу:
d(сМj = (jV+0,5 T)/(P+N+ Т)х 100 [ 15],
где: Р, N, Г-родительский дитип, неродительский дитип итетратип соответственно. Хлорофил-лы из клеток хламидомонады извлекали 80%-ным ацетоном [8] и определяли его содержание в растворе, регистрируя оптическую плотность при длинах волн: 646 и 664 нм [17].
Результаты и обсуждение. Получение ревертанта и его фенотипическая характеристика. Мутанты хламидомонады, несущие аллельные мутации: lts3 и brcl в гене LTS3, в отличие от штаммов дикого4типа, способны синтезировать хлорофилл только на свету. В темноте, в условиях гетеротрофного роста, клетки этих мутантов накапливают предшественники хлорофилла протопорфирины [8] и формируют желто-коричневые колонии. В культуре рекомбинантного штамма генотипа: brcl, arg7, mt+, полученного в потомстве скрещивания штаммов Brcl и Arg7, на свету в условиях фототрофного роста был отобран спонтанный ре-вертант Вгс8, клетки которого сохраняли способность синтезировать хлорофилл и в темноте. В условиях постоянной освещенности содержание хлорофилла в клетках ревертанта и мутанта Brcl было одинаковым и составляло примерно 60% от уровня штамма дикого типа (табл.1). При выращивании в темноте ревертант синтезировал то же количество хлорофилла, что и на свету, и не отличался по этому показателю от штамма дикого типа, выращенного в темноте. Таким образом, светонезависимый синтез хлорофилла у ревертанта оказался восстановленным до уровня штамма дикого типа.
Таблица 1. Содержание хлорофилла в клетках мутантов хламидомонады по гену ¿753 и их ревертанта(|Лмоль/клетку), выращенных в темноте и на свету
Штамм Генотип Содержание хлорофилла
Свет Темнота
СС124 дикий тип 3,2 2,48
Lts3 lts3 2,21 0,09
Brcl brsl . 2,42 -У 0,08
\ Brc8 brsl,arg7,sup 2,51 2,32
Генетический анализ ревертанта. Восстановление светонезависимого (темнового) биосинтеза хлорофилла у ревертанта Вгс8 могло произойти или в случае обратной мутации в гене ЬТБЗ, либо, с большей вероятностью, в результате мутации другого гена, способной супрес-сировать мутантную аллель Ьгс1. Для определения генетической природы реверсии был про-
веден гибридологический анализ этого ревертанта. В тетрадном анализе потомства скрещивания штамма Вгс8 и исходного мутанта Вгс1 расщепление по окраске колоний в темноте было моногенным (2 зеленых : 2 оранжевых), демонстрируя, что реверсия произошла в результате единичной ядерной мутации. Штамм Вгс8 скрещивали с зеленым в темноте штаммом СС38, несущим аллель дикого типа по гену ЬТБЗ. Выживаемость зигот и спор в этом скрещивании СС1792 была достаточно высока (выше 50%), что позволило нам проанализировать потомство методом тетрадного анализа (табл. 2).
Таблица 2. Результаты тетрадного анализа мейотического потомства скрещивания СС 1792
Шифр скрещива- „ ния Родители Генотипы родителей P:N:T* Маркеры: brcl/sup3 Расстояние (d) brcl - sup3
mt+. mt- mt+ mt-
СС 1792 Вгс 8 СС38 brcl,sup3 arg7 pab2 ас 14 85:16:25 22,6 cM
'Р- родительский дитип; N- неродительский дитип; Г- тетратип; mt - тип спаривания.
Появление сегрегантов мутантного фенотипа (формирующих в темноте колонии оранжевой окраски) в потомстве скрещивания двух зеленых штаммов (СС 1792) свидетельствует, что мутация brcl сохранилась в генотипе ревертанта Вгс8, а восстановление темнового биосинтеза хлорофилла произошло в результате еще одной (супрессорной) мутации в гене, который был назван SUP3. Результаты анализа 126 тетрад скрещивания СС1792 (см. табл. 2) демонстрируют, что количество тетрад родительского дитипа (Р) фенотипа: (4 зел.: 0 ор.) значительно превосходит число тетрад неродительского дитипа (N) (фенотипа: 2 зел.: 2 ор.) и тетратипов (Т) (фенотипа: 3 зел. : 1 ор.). Расщепление 85P:16N:25T достоверно, с вероятностью, большей 99,999%, отличается от соотношения 1P:1N:4T, характерного для случая независимого наследования генов. Данные эксперимента позволяют сделать заключение о сцеплении мутаций brcl и sup3 и оценить расстояние между ними, которое составило 22,6 сМ.
Таким образом, восстановление темнового синтеза хлорофилла у спонтанного ревертанта Вгс8 произошло в результате возникновения мутации в супрессорном гене, который сцеплен с исходной мутацией brcl,
Основным критерием определения типа генной супрессии является выявление специфичности супрессоров. Из тетрады неродительского дитипа (N) в потомстве скрещивания СС 1792 был выделен зеленый в темноте и на свету сегрегант 1792-39а, содержащий супрес-сорную мутацию sup3 на фоне аллели дикого типа гена LTS3. Этот штамм был подвергнут генетическому анализу для выяснения аллелоспецифичности супрессорной мутации и уточнения данных по локализации гена SUP3.
Генетический анализ мутации sup3. Штамм 1792-39а (несущий супрессорную мутацию sup3) скрещивали с мутантами ВгсЗ и Lts3 (несущими аплельные мутации в гене LTS3: brcl и lts3 соответственно) и анализировали потомство этих скрещиваний методом тетрадного анализа (табл. 3,4).
Сопоставление данных тетрадного анализа скрещиваний СС 1810 и СС 1811 позволяет получить информацию об аллелоспецифичности супрессорного эффекта мутации sup3. При отсутствии аллелоспецифичности, в потомстве скрещиваний с участием обеих аллелей гена LTS3 (lts3 и brcl) ожидается сходное дигенное расщепление с появлением трех типов тетрад: родительского дитипа (2 зел. : 2 ор.), неродительского дитипа (4 зел.: 0 ор.) и тетратипов (3 зел.:1 ор.). В случае, если эта мутация супрессирует только одну из двух анализируемых
Таблица 3. Характеристика скрещиваний, использованных в генетическом
анализе мутации эирЗ
Шифр скрещивания Родители Генотипы родителей | Выживаемость, %
mt + mt- mt+ mt- \ зигот спор
СС 1810 СС 1811 ВгсЗ Lts3 1792-39а 1792-39а brcl lts3 sup3,arg7 pab2 j 66,0 sup3,arg7 pab2 \ 54,0 88,0 72,0
Таблица 4. Результаты тетрадного анализа потомства скрещиваний СС 1810 иСС 1811
Шифр скрещивания Число типов тетрад в расщеплении по маркерам brcl/sup3 и Its3/sup 3 Дистанция, сМ
Р (2ор.:2 зел.) N (0ор.:4 зел.) 7" (1ор.:3 зел.) brcl(Its3)~ sup3
СС 1810 28 21 17 44,7
СС 1811 33 18 3 • 36,1.
аллелей - brcl, расщепление по окраске колоний в темноте в потомстве скрещивания СС 1811 (с участием аллели lts3) будет моногенным (2 зел.: 2 ор.).
Экспериментальные данные тетрадного анализа потомства скрещиваний СС 1810 и СС 1811, представленные в табл. 4, демонстрируют появление класса тетрад: 4 зел.: 0 ор. в обоих скрещиваниях. Таким образом, мутация sup3 способна подавлять фенотипическое проявление обеих анализируемых мутантных аллелей гена LTS3, т.е. ее супрессорный эффект не аллелос-пецифичен. Отсутствие аллелоспецифичностипри межгенной супрессии позволяет предполагать, что восстановление темнового синтеза хлорофилла у ревертанта Вгс8 могло произойти в результате включения дополнительного пути биосинтеза, альтернативного тому, который оказался нарушенным исходной мутацией ЬгсЗ. Блокирование синтеза токсичных интермедиатов также может приводить к супрессированию мутантного фенотипа. Однако порфирины, накапливаемые в клетках мутантов по гену LTS3, являясь сильными фотосенсибилизаторами, высоко токсичны для клеток только при освещении. Хотя по данным тетрадного анализа скрещиваний СС1810 и СС1811 дистанция между генами LTS3 и SUP3 несколько больше, чем генетическое расстояние, рассчитанное нами ранее (см. табл. 2 й табл. 4), они подтверждают прежние результаты об их сцеплении. Соотношения тетрад в обоих случаях достоверны, с вероятностью 99,999 %, отличаются от соотношения 1P:JN:4T, характерного для независимо наследуемых генов. Увеличение расстояния между этими генами, в частности, может быть результатом недостаточно большого объема выборки по сравнению со скрещиванием СС 1792 или преимущественным выживанием тетрад неродительского дитипа (фенотипа: 4 зел.: 0 ор.).
Анализ доминантности/рецессивности супрессорного эффекта мутации sup3. Вегетативные клетки хламидомонады имеют гаплоидный набор хромосом, поэтому для выяснения доминантности/рецессивности супрессорного эффекта мутации sup3 по отношению к исходной мутации brcl были сконструированы гетерозиготные диплоиды, по методу, описанному Эберсольдом, с модификациями [6]. Для этого скрещивали ауксотрофные по аргинину штаммы Вгс8 и ВгсЗа, несущие помимо brcl и sup3 комплементирующие мутации в гене ARG7 (arg7 и аУ^7-8), локализованном в первой группе сцепления хламидомонады, а затем на среде Tmm отбирали прототрофные вегетативные диплоиды, колонии которых появлялись через 5 дней после начала эксперимента (рис. 2). Критериями диплоидности служили размер диплоидных клеток, который контролировали под микроскопом, и тип спаривания, поскольку аллель mt локуса типа спаривания доминирует в гетерозиготе генотипа: mt+/mt-. Диаметр диплоидных клеток был приблизительно вдвое больше, чем диаметр вегетативных клеток исход-
Гаплоид Brc8
[ brcl. sup3. arg7 ]
Диплоид brcl, sup3, arg7
brcl, SUP3, arg7,8
Рис. 2. Схема получения диплоидов Chlamydomonas reinhardtii, гетерозиготных по мутации sup3.
ных штаммов хламидомонады, и все они имели тип спаривания mt-. Ожидалось, что в случае доминантного эффекта мутации sup3 у диплоидов, гомозиготных по мутации brcl и гетерозиготных по sup3, светонезависимый биосинтез хлорофилла будет восстановлен, т. е. колонии таких диплоидов будут зелеными как в темноте, так и на свету. Если же супрессорный эффект мутации окажется рецессивным, то диплоидные колонии сохранят фенотип исходного мутанта ВгсЗ (оранжевая окраска в темноте, зеленая на свету). В наших экспериментах колонии диплоидов, гетерозиготных по мутации sup3 и гомозиготных по мутации brcl, имели оранжевую окраску в темноте, демонстрируя, что супрессорный эффект мутации sup3 является рецессивным по отношению к исходной мутации brcl.
Таким образом, генетическое исследование ревертанта Вгс8, полученного отмутантного по гену LTS3 штамма Brcl "-Chlamydomonas reinhardtii, неспособного синтезировать хлорофилл в темноте, показало, что восстановление светонезависимого синтеза хлорофилла у этого ревертанта произошло в результате рецессивной ядерной мутации sup3. Эта мутация также супрессировала фенотипическое проявление другой мутантной аллели гена LTS3 - lts3, демонстрируя отсутствие аллелоспецифичности. Данные тетрадного анализа позволяют сделать заключение о сцеплении мутаций sup3 и brcl, и, следовательно, гены LTS3 и его супрессор SUP3 локализованы в одной хромосоме. Такая генная супрессия, по-видимому, связана с возникновением альтеративного заблокированному у мутанта brcl пути темнового синтеза хлорофилла. Клетки аллельных мутантов по гену LTS3 накапливают в темноте комплекс пигментов: . протопорфирин IX, магний-протопорфирин IX, магний-протопорфирин IX монометиловый эфир и протоХлорофиллид, демонстрируя, что у них темновой биосинтез хлорофилла нарушен на этапе более раннем, чем редукция протохлорофиллида. Возможно, что ген SUP3,в норме репрессирует включение дополнительного, существующего в клетке пути светонезависимого синтеза хлорофилла, а мутация sup3 включает этот альтернативный механизм.
Статья рекомендована акад. РАН С. Г. Инге-Вечтомовым. Summary
Savelieva N.V., Chekunova Е.М. Supression of the mutations in the LTS3 gene, controlling the light-independent chlorophyll biosynthesis in Chlamydomonas reinhardtii.
The spontaneous revertant obtained from the Brcl strain mutated in LTS3 gene which was unable to synthesize chlorophyll in the dark has been studied. Dark chlorophyll biosynthesis in the revertant was shown to be rec^ered as a result of single recessive mutation in the nuclear suppressor gene SUP3. Hybridological analysis revealed a genetic linkage between LTS3 and SUP3 genes. The absence of allelospecifity of suppression affect of the sup3 mutation in respect of other mutant allele of the LTS3 gene -lts3, also was shown. Possible mechanisms for genetic regulation of light-independent chlorophyll biosynthesis are discussed.
Литература
1. Александрова Н.Н., Крэла Л.П., Тугаринов В.В. Генетическая детерминация признаков хлоропласта у хламидомонады. Сообщ. I. Создание множественно-маркированных линий // Исследования по генетике. 1979. Вып. 8. С. 139-149. 2. Квитко К.В., Борщевская Т.Н., Чунаев А.С., Тугаринов В.В. Петергофская генетическая коллекция штаммов зеленых водорослей Chlorella, Scenedesmus, Chlamydomonas // Культивирование коллекционных штаммов водорослей. Л., 1983. С. 28-56. 3. Столбова А.В. Генетический анализ пигментных мутаций Chlamydomonas reinhardtii. Сообщ. I. Идентификация основных пигментов и описание коллекции пигментных форм // Генетика. 1971. Т. 7 (№ 9). С.90-94. 4. Чекунова Е.М., Квитко К. В. Генетическое изучение мутантов хламидомонады, накапливающих протопорфирин IX // Исследования по генетике. 1986. № 10. С. 104-112. 5. Чекунова Е.М., Чунаев А.С. Взаимодействие генов, контролирующих биосинтез хлорофилла в зигоспорах Chlamydomonas reinhardtii II Молекулярные механизмы генетических процессов: Тез. докл. VII Всесоюзного симпозиума. 1990. С. 291-292. 6. Чемерилова В.И., Квитко К.В. Изучение модифицирующих пигментацию мутаций у штаммов Chlamydomonas reinhardti разной плоидности. Сообщ. I. Диплоиды, гетерозиготные по мутации lts-31 II Генетика. 1976. Т.12 (№9). С.44-49. 7. Чунаев А.С„ Столбова А.В., Квитко К.В., Александрова Н.Н., Чекунова Е.М., Мирная 0:Н„ Тугаринов В.В. Генетический контроль биосинтеза хлоропластных пигментов у зеленых водорослей // Генетика. 1974. Т. 30 (№ 8). С. 1075-1084. 8. Шалыго Н.В., Чекунова Е.М., Чунаев А.С., Аверина Н.Г. Анализ состава порфиринов в мутантах Chlamydomonas reinhardtiiII Известия АН БССР. Сер. Биол. наук. 1990. № 4. С. 53-57. 9. Armstrong G.A. Greening in the dark: Ligth-independent chlorophyll biosynthesis from anoxygenic photosynthetic bacteria to gymnosperms // J. Photochem. Photobiol. B: Biology. 1998. Vol. 43. P. 87-100. 10. Beale S I,. Enzymes of chlorophyll biosynthesis // Photqsynthesis Research. 1990. Vol. 60. P. 43-73. 11. Choquet Y., Rahire M, Girard-Bascou J., EricksonJ., Rochaix J.-D.Achloropiast gene is required for light-independent accumulation of chlorophyll in Chlamydomonas reinhardtii //J. EMBO. 1992. Vol. 11, N. 5. P. 1697-1704. 12. Ford С., MitchellS., Wang W. Y. Protochlorophyllide photoconversion mutants of Chlamydomonas reinhardtii II Mol. Gen. Genet. 1981. Vol. 184. P.460-464. 13. Ford C., Mitchell S. & Wang W.-Y. Characterization of NADPH:protochlorophyllide oxidoreductase in they-7 and pc-l,y-7 mutants of Chlamydomonas reinhardtii II Mol. Gen. Genet. 1983. Vol. 192. P. 290-292. 14. Forreiter C. and Apel K. Ligth-independent prDtochlorophyllide-reducing activities and two distinct NADPH-protochlorophyllide oxidoreductase polypeptides in mountain pine (.Pinus mugo) II Planta 1993. Vol. 190. P. 536-545. 15. Harris E.H. The Chlamydomonas Sourcebook: a comprehensive guide to biology and laboratory use. San Diego; California, 1989. 16. Li J. & Timko M.P. The pc-l phenotype of Chlamydomonas reinhardtii results from a deletion mutation in the nuclear gene for NADPH protochlorophyllide oxidoreductase // Plant. Mol. Biol. 1996. Vol. 30. P. 15-37.17. PorraR.L., Thompson W.A., Kriedemann P.E. Determination of accurate extintion coefficients simultaneous equations for assaying chlorophylls a and b extracted with four different solvents: verification of the concentration of chlorophyll standarts by atomic absorption spectroscopy // Biochim. Biophys. Acta. 1989. Vol. 975. P. 384-394. 18. Reinbothe S. and Reinbothe C. The regulation of enzymes involved in chlorophyll biosynthesis // Eur. J. Biochem. 1996. Vol. 237. P. 323-343. 19. Rochaix J.-D. Chlamydomonas as the photosynthetic yeast II Annu. Rev. Genet. 1995. Vol. 29. P. 209-230. 20. Sager R. and Palade G.E. Chloropiast structure in green and yellow strains of Clamydomonas II Exp. Cell Res. 1954. Vol. 7. P. 584-588. 21. Suzuki J.Y.,Bollivar D.W., Bauer C.E. Genetic analysis of chlorophyll biosynthesis // Annu. Rev. Genet. 1997. Vol. 31. P. 61-89. 22. Timko M.P. Pigment biosynthesis: Chlorophylls, Heme, and Carotenoids // J.-D. Rohaix et al. The molecular biology of chloropiast and mitohondria in Chlamydomonas. Kluwer Academic Pablishers 1998. P. 377-341. 23. Wang W.-Y. Genetic Control of Chlorophyll Biosynthesis in Chlamydomonas reinhardtii II International review of cytology. Suppl. 8. New York; London, 1978. P. 335-354. 24. Wang W-Y, Wang W.L, Boynton J.E., Gillham N.E. Genetic Control of Chlorophyll Biosynthesis in ChlamydomonasYinalysis of mutants at two loci mediating the conversion of protoporthyrin-IX to magnesium-protoporthyrin // J. Cell Biology. 1974. Vol. 63. P. 806-823.
Статья поступила в редакцию 14 декабря 2003 г.
