CC BY
55
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
Исследование выполнено за счёт гранта Российского научного фонда (проект № 14-35-00105) и гранта Президента НШ-9069.2016.4.
ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
Авдеева Ж.И.1, Солдатов А.А.1, Киселевский М.В.2, Бондарев В.П.1, Меркулов В.А.
1ФГБУ«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия 2 ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Онкологические заболевания в большинстве промыш-ленно развитых стран занимают второе место по причинам летального исхода вслед за сердечно-сосудистыми заболеваниями. Несмотря на значительные успехи клинической онкологии, многие вопросы лекарственной терапии остаются нерешенными. Используемые для химиотерапии препараты подавляют пролиферацию всех быстро делящихся клеток. В отличие от них препараты таргентной терапии воздействуют на конкретные молекулы, задействованные в механизмах канцерогенеза и роста опухолей. Для таргентной терапии в основном используются биотерапевтические препараты с иммунотропной направленностью действия. Эффективность таких препаратов обеспечивается за счет формирования и стимуляции противоопухолевого иммунитета или за счет направленного действия, вызывающего подавление роста, гибель опухолевых клеток или нарушение васкуляризации опухолевой ткани. Современные достижения биотехнологии позволили разрабатывать лекарственные препараты моноклональных антител (МкАТ), обладающих направленным действием на опухолевые клетки, ростовые факторы или стимулирующих противоопухолевый иммунитет. При разработке препарата МкАТ с противоопухолевой активностью, прежде всего, проводят исследования по определению антигена (АГ), локализованного на поверхности опухолевой клетки, либо рецепторов, участвующих в передаче активационных сигналов. При этом следует учитывать следующее—АГ должен экспрессироваться преимущественно на опухолевых клетках, принимать важное участие в развитии опухоли и быть представленным на клетках наиболее часто встречающихся опухолей. Основные трудности при разработке противоопухолевых препаратов МкАТ связаны с гетерогенностью опухолевых АГ, «нежелательной» иммуногенностью МкАТ и способностью опухолей включать механизмы «ускользания» от противоопухолевого иммунитета. Вследствие генетической нестабильности в клетках опухолевой ткани происходят частые мутации, что сопровождается изменением поверхностных АГ и уровнем их экспрессии, в связи с этим препараты МкАТ могут терять клиническую эффективность. Для снижения «нежелательной» иммуно-генности с целью повышения эффективности и снижения безопасности разрабатывают препараты МкАТ, структура которых приближена или полностью соответствует структуре иммуноглобулина (Ig) человека. Однако даже в этом случае нельзя в полной мере прогнозировать проявление иммуногенности МкАТ при клиническом применении. За счет продукции метаболитов, иммуносупрессирую-
щих цитокинов, хемокинов опухолевые клетки, а также клетки микроокружения опухоли способны блокировать развитие иммунного ответа на любом из его этапов, обеспечивая иммунотолерантность опухолей. Одним из механизмом, обеспечивающих недоступность клеток опухоли для воздействия цитотоксических Т-Лф, является потеря экспрессии молекул ГКГ, участвующих в формировании комплекса с опухолевым АГ, распознаваемым Т-Лф. Отсутствие экспрессии молекул ГКГ чаще наблюдается на клетках наиболее злокачественных опухолей. Опухолевые клетки могут экспрессировать молекулы Fas лиганда (известного как «фактор смерти») и вызывать ответный апоп-тоз иммунокомпетентных клеток, экспрессирующих Fas молекулы, в частности, цитотоксических Т-Лф, нормальных киллеров и ДК. Клетки опухоли способны продуцировать вещества, подавляющие функциональную активность ДК, направлять дифференцировку Т-Лф по ТЪ2-фенотипу, снижать количество клеток Thl-фенотипа, более необходимого с точки зрения формирования цитотоксических клеток; подавлять механизмы внутриклеточной передачи сигналов, что затрудняет активацию Т-клеток. Продукция опухолевыми клетками трансформирующего фактора роста (TGF-P) приводит и подавлению активности, как Т-Лф, так и АПК; синтез фактора ангиогенеза опухолей (ФАО) стимулирует развитие сосудов и способствует инва-зивному, росту опухолевой ткани; продуция IL-ф, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и ГМ-КСФ стимулирует пролиферацию иммуносупрессивных миелоидных клеток. Синтез веществ, проявляющих иммуносупрессивную активность, ингибирующих функциональные свойства ДК, как АПК, а также определяющих путь дифференцировки Т-клеток, существенно влияет на развитие и реализацию противоопухолевого иммунного ответа. В основе механизма действия лекарственных препаратов МкАТ нового поколения лежит их способностью вызывать активацию цитотоксических Т-Лф, осуществляющих естественную иммунную защиту от опухолевых процессов, и воздействовать на механизмы подавляющие их активность. К таким препаратам относятся МкАТ, воздействующие на лиганды, подавляющие активность Т-Лф (лиганд-1 программируемой гибели клеток (PD-L1) и костимулирующие молекулы, такие как CTLA-4). Успешно применяются препараты МкАТ, специфичные к опухолеассоциированным АГ, ростовым факторам, конъюгированные препараты.
СУБПОПУЛЯЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ КАК ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ПРОГРЕССИИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Багина У.С.1, Игнатьев К.С.2, Волкова Т.О.1
1ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет», Петрозаводск, Россия 2 ГБУЗ «Республиканский онкологический диспансер», Петрозаводск, Россия
Исследования последних лет показали, что рост большинства злокачественных опухолей сопровождается значительными нарушениями различных звеньев иммунного ответа организма. Традиционно роль иммунной системы в патогенезе онкологических заболеваний рассматривают в аспекте ее взаимодействия с опухолью, направленного на отторжение злокачественного новообразования, либо способствующего его росту и прогрессии. Главную роль
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
в противоопухолевом иммунитете играет клеточный иммунный ответ, ключевыми участниками которого являются Т-лимфоциты. Т-лимфоциты экспрессируют ддифференци-ровочные антигены, которые объединены в кластеры диф-ференцировки (CD). Субпопуляции CD-клеток различны по функциям, стадиям развития и активации Т-лимфоцитов и могут служить иммунологическими маркерами онкогене-за, в том числе и рака молочной железы (РМЖ).
Цель и задачи. Определение соотношения лимфоцитов разных популяций, выбранных в качестве предполагаемых иммунологических маркеров, установление взаимосвязи между уровнем содержания этих клеток в периферической крови и стадией опухоли в молочных железах.
Материалы и методы. Исследовали венозную кровь 95 пациенток ГБУЗ «Республиканский Онкологический Диспансер» (г. Петрозаводск), имеющих гистологически подтвержденный РМЖ: ст. I — 20, ст. II — 30, ст. III — 45. В качестве контроля использовали кровь 30 небеременных женщин, сопоставимых по возрасту, данным анамнеза и не имеющих онкологических заболеваний. Субпопуляции мононуклеарных клеток периферической крови выявляли методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител, специфичных к диффе-ренцировочным антигенам (CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD25, CD95) (Sigma, США). Оценивали относительное количество CD-позитивных клеток от общего числа лимфоцитов. Для сравнения выборок использовали непараметрический U-критерий Уилкоксона—Манна—Уитни.
Результаты. Согласно результатам иммунофенотипи-рования клеток периферической крови ст. I РМЖ характеризовалась статистически значимым повышением относительного количества CD16-клеток: 17,06±0,74, по сравнению с контрольной группой (13,15±0,94). Одновременно происходило снижение относительной численности CD3 и CD4-клеток (от 62,74±1,98 контроля до 53,65±1,20 и от 39,94±2,79 контроля до 34,05±0,77 соответственно), и повышение уровня CD8-клеток (до 36,17±0,84 против 31,98±1,62 контроля), что отражается на соотношении CD4+/CD8+ и свидетельствует о наличии хелперного дефекта. По мере развития опухоли, начиная со II стадии, у больных отмечалось прогрессирование иммунодефицитного состояния: относительное количество CD3 и CD4-клеток достоверно снижалось. Содержание CD4+CD25+, напротив, в крови увеличивалось: 8,01±0,11 для больных III стадией РМЖ. У здоровых женщин данный показатель составил 4,11±0,48. Содержание CD20-клеток в крови оставалось без изменения. Количество CD95-лимфоцитов достоверно повышалось по мере прогрессирования опухоли.
Заключение. Не смотря на то, что изменение соотношения субпопуляций Т-лимфоцитов дает только ориентировочные выводы, в первую очередь, акцентируя внимание на прогрессировании онкопатологии, использование Т-лимфоцитов в качестве дополняющих диагностических и прогностических иммунологических маркеров при раке молочной железы позволит повысить точность постановки диагноза и эффективность лечения, основываясь на индивидуальном иммунологическом «портрете» пациентки.
Исследование проведено в рамках выполнения государственного задания Минобрнауки России, проект 6.5111.2017/БЧ.
ВАРИАНТЫ ИММУННОГО РЕАГИРОВАНИЯ ПРИ РАКЕ ПОЧКИ
Борисов А.Г., Савченко А.А., Кудрявцев И.В., Модестов А.А., Тоначева О.Г., Мошев А.В.
Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера, Красноярск, Россия
Механизмы нарушения противоопухолевого иммунитета многообразны и связаны в конечном итоге с невозможность распознавать и уничтожать опухолевые клетки. Стратификация больных в подгруппы со сходными показателями иммунного реагирования является важнейшим шагом в реализации индивидуального подхода к лечению онкологических больных.
Цель. Используя кластерный анализ, описать варианты иммунного реагирования у больных почечноклеточ-ным раком (ПКР) и дать характеристику течения заболевания в этих группах.
Обследовано 63 больных ПКР в возрасте 40-55 лет проходивших лечение в КГБУЗ «Красноярский краевой клинический онкологический диспансер имени А.И. Кры-жановского». Диагноз у всех больных верифицирован гистологически. В качестве контрольной группы были обследованы 78 практически здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипа лимфоцитов крови проводили методом проточной цито-метрии на проточном цитофлуориметре FC-500 (Beckman Coulter, USA). Использовалось пятицветное иммунофе-нотипирование по панелям: CD3/CD4/CD8/CD45/CD25 и CD3/CD19/CD16+56/CD45/HLA-DR. Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых в соответствии с этическими нормами Хельсинкской декларацией (2013 г.). Кластеризацию осуществляли методом одиночной связи (Single linkage). Число кластеров определяли на основании вычисления величин Евклидовых расстояний между среднегрупповыми величинами.
При изучении иммунологических данных обнаружено большая вариабельность иммунологических показателей, несмотря на то, что у больных ПКР определяется лимфопения за счет снижение числа Т-, NK- и NKT-лимфоцитов, при индивидуальном анализе практически у 45% больных не выявлены отклонения от нормы.
Последующий кластерный анализ основных иммунологических показателей позволил выделить четыре кластера, определенных нами как варианты иммунного ответа. Первый с увеличением числа клеток врожденного иммунитета и прежде всего, нейтрофилов выявлен в 4,76%. Второй с увеличением числа цитотоксических Т-лимфоцитов и иммуноглобулинов класса G диагностирован в 19,05% случаев. Третий со снижением иммуноглобулинов, нейтрофилов и Т-лимфоцитов — иммунодефи-цитный в 31,75%. Наиболее распространенным оказался ареактивный вариант (44,44%), иммунологические показатели которого у больных ПКР не выходили за контрольный диапазон. Анализируя особенности клинического течения в этих группах установлено, что только у больных ПКР T1-2N0M0, встречался вариант иммунного реагирования с активацией врожденного иммунитета. Помимо этого у больных этой группы диагностировались варианты с активацией адаптивного иммунитета (19,35%), иммуно-дефицитный (32,26%) и ареактивный (38,71%). У больных ПКР T3N0M0 так же в 2/3 случаях диагностировался им-мунодефецитный (21,05%) и ареактивный (47,37%) вариант иммунного реагирования и в 31,58% случаях активация адаптивного иммунитета. У больных ПКР T3-4N0-1M1
