CC BY
34
№ 1 - 2013 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки УДК 617-001.32:612.351]-092
СУБКЛЕТОЧНЫЕ АСПЕКТЫ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ СИНДРОМЕ ДЛИТЕЛЬНОГО СДАВЛЕНИЯ
Е. С. Лукьянова, А. В. Ефремов, Д. Б. Кузьменко
ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава
России (г. Новосибирск)
Методами электронной микроскопии и морфометрии при синдроме длительного сдавления средней степени тяжести установлено, что декструктивные процессы достигают максимума на 7-е сутки после декомпрессии, а к 14-м суткам наблюдали явные признаки внутриклеточной реганерации.
Ключевые слова: ультраструктура, гепатоциты, деструкция, регенерация.
Лукьянова Елена Семеновна — кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон 8 (383) 225-39-78, е-mail: dr173@mail.ru
Ефремов Анатолий Васильевич — доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН, заведующий кафедрой патологической физиологии и клинической патофизиологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон 8 (383) 225-39-78
Кузьменко Дмитрий Борисович — кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон 8 (383) 225-39-78, е-mail: dr172@mail.ru
Введение. Ультраструктурные морфометрические параметры патоморфогенеза синдрома длительного сдавления (СДС) недостаточно изучены. СДС актуален для медицины катастроф [1]. Патогенез развития СДС основывается на морфологических изменениях основных органов гомеостаза. Поступление в кровь продуктов распада миоглобина при декомпрессии сдавленных тканей обусловливают высокую концентрацию этих веществ в печени в связи с активностью ее клеток в эндоцитозе [2].
Материал и методы. В работе использовали 35 крыс-самцов Вистар массой 180-200 г, содержавшихся на стандартной лабораторной диете. Моделирование СДС средней
степени тяжести проводили наложением тисков площадью 4 см2 на левую тазовую конечность на 4 часа [3].
В 1-й группе крысы — без СДС (п = 7), 2-я — с СДС 1-е сутки декомпрессии (п = 7), в 3-й
— через 3-е суток после декомпрессии (п = 7), 4-я группа — 7-е сутки декомпрессии (п = 7), 5-я группа — 14-е сутки декомпрессии (п = 7). Образцы печени получали из центральной части левой доли печени через 1, 3, 7, 14-е сутки после декомпрессии конечности, что соответствует раннему, промежуточному, началу позднего, отдаленному периоду СДС. Для электронной микроскопии образцы фиксировали в 1 % раствора OsO на фосфатном буфере (pH 7,2-7,4), дегидратировали в спиртах возрастающей концентрации и заключали в эпон. Из образцов печени готовили по 5 блоков от каждого животного. Полученные полутонкие срезы окрашивали водным раствором толуидинового синего, а ультратонкие — водными растворами уранилацетата и цитрата свинца. Для морфометрии клетки с развитым вакуолярным аппаратом фотографировали в электронном микроскопе JEM-100S при увеличении в 3500 раз. У крыс каждой группы во все периоды наблюдения фотографировали по 40-50 клеток с развитым вакуолярным аппаратом. Морфометрию выполняли, как описано ранее [5]. Различия между сравниваемыми средними величинами считали достоверными при р < 0,05 по 1 критерию Стьюдента.
Результаты исследования. Объемная плотность первичных лизосом гепатоцитов к 3-м суткам не претерпела видимых изменений, к 7-м суткам возросла на 87,5 %, к 14-м суткам возросла в 2,5 раза.
Объемная плотность вторичных лизосом к 3-м суткам имела тенденцию к снижению. К 7м суткам снизилась в 2,8 раза, к 14-м суткам декомпрессии снизилась в 4,67 раза.
Объемная плотность пероксисом к 3-м суткам выросла в 1,88 раза, на 7-е и 14-е сутки вернулась к уровню первых суток декомпрессии.
Объемная плотность цитоплазматических липидов к 3-м суткам снизилась в 11,3 раза, к 7м суткам оставалась сниженной в 5,67 раза, к 14-м суткам также оставалась сниженной в 3,4 раза.
Объемная плотность цитоплазматических включений гликогена к 3-м суткам снизилась в 1,92 раза, к 7-м суткам оставалась сниженной в 2,08 раза, к 14-м суткам восстановилась до 90,6 % от уровня первых суток декомпрессии.
Показатель отношения вторичных лизосом к первичным к 3-м суткам снизился в 1,16 раза, к 7-м суткам — в 5,38 раза, к 14-м суткам — в 11,67 раза.
Численная плотность митохондрий к 3-м суткам выросла на 33,3 %, к 7-м суткам показатель оставался на уровне первых суток, на 14-е сутки декомпрессия уменьшилась на 16,7 %.
Объемная плотность митохондрий к 3-м суткам выросла на 11,3 %, к 7-м суткам оставалась увеличенной на 5 %, на 14-е сутки была на 3,2 % меньше по сравнению с первыми сутками после декомпрессии.
Поверхностная плотность внутренних мембран митохондрий к 3-м суткам была неизменной, к 7-м суткам уменьшилась на 30,3 %, к 14-м суткам была меньше на 37,2 %.
Поверхностная плотность наружных мембран митохондрий к 3-м суткам была увеличена на 33,3 % на 7-е и 14-е сутки показатель не отличался от первых суток после декомпрессии.
Объемная плотность гладкого эндоплазматического ретикулома к 3-м суткам увеличилась на 21,25 %, к 7-м суткам имела тенденцию к увеличению, к 14-м суткам была увеличена на 28, 75 %.
Объемная плотность шероховатого эндоплазматического ретикулома к 3-м суткам имела тенденцию к уменьшению, к 7-м суткам была уменьшена на 21,4 %, к 14-м суткам была уменьшена на 29,6 %.
Количественная плотность прикрепленных рибосом на 3-и сутки уменьшилась на 10,2 %, на 7-е сутки была меньше на 53 %, на 14-е сутки меньше на 60,79 %.
Количественная плотность свободных рибосом в цитоплазме гепатоцитов на 3-и сутки была больше на 12,68 %, на 7-е сутки после декомпрессии была больше на 70,9 %, на 14-е сутки после снятия тисков с конечности была больше на 67,2 %.
Количественная плотность полисом на 3-и сутки декомпрессии имела тенденцию к уменьшению, на 7-е сутки — тенденцию к увеличению, на 14-е сутки декомпрессии выявлена тенденция к увеличению.
Обсуждение результатов. При развитии СДС в гепатоцитах наблюдались деструктивные процессы — увеличение суммарного объема первичных и вторичных лизосом, тяжелые повреждения митохондрий, объемная плотность митохондрий и плотность внутренней мембраны митохондрий резко уменьшались и достигали минимума к 7-м суткам после декомпрессии. Уменьшение площади шероховатого ретикулома свидетельствует о снижении функциональных возможностей митохондрий. Снижение уровня пластических процессов обусловлено снижением энергообеспеченности синтетических процессов [4], наблюдается отек цитоплазмы. Существенно снижается трофика гепатоцитов. Явные признаки внутриклеточной регенерации наблюдали к 14-м суткам декомпрессии.
Выводы. Таким образом, деструктивные процессы достигают максимума на 7-е сутки после декомпрессии, а к 14-м суткам наблюдаются явные признаки внутриклеточной регенерации.
Список литературы
1. Синдром длительного раздавливания / П. Г. Брюсов, В. Н. Булдин, М. И. Руденко [и др.]. — М. : Медицина. — 1989. — С. 10-14.
2. Захарова Г. Н. Диагностика и лечение краш-синдрома / Г. Н. Захарова, В. А. Фурсаев, Л. Б. Полозов // Вестн. хирургии им. И. И. Грекова. — 1987. — № 2.
— С. 109-114.
3. Ефремов А. В. Лимфология экстемальных состояний / А. В. Ефремов, А. Р. Антонов, Ю. В. Начаров. — М. : «Триада-Х», 2005. — С. — 248.
4. Челмакина В. Н. Острая печеночно-почечная недостаточность токсической этиологии и ее лечение / В. Н. Челмакина, Ф. Г. Шель, Л. А. Спиридонова // III Всесоюзный съезд реаниматологов и анестезиологов. — Рига, 1983. — С. 494-495.
5. Шкурупий В. А. Электронно-микроскопические исследование эндоцитарной способности парениматозных и синусоидальных клеток печени
в экспериментальных условиях / В. А. Шкурупий, И. И. Индикова // Цитология. — 1977. — № 1. — С. 23-26.
SUBCELLULAR ASPECTS OF HEPATOCYTES AT EXPERIMENTAL SYNDROME OF LONG COMPRESSION
E. S. Lukyanova, A. V. Efremov, D. B. Kuzmenko
SBEIHPE «Novosibirsk State Medical University ofMinistry of Health» (Novosibirsk c.)
It is established that destructive processes reach a maximum on the 7th days after decompression by submicroscopy and morphometry methods at syndrome of long compression of moderate severity and by 14th day obvious signs of intracellular regeneration were observed.
Keywords: metastructure, hepatocytes, destruction, neogenesis.
About authors:
Lukyanova Elena Semenovna — candidate of medical sciences, assistant professor of pathological physiology and clinical pathophysiology chair at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», office phone 8 (383) 225-39-78, e-mail: dr173@mail.ru
Efremov Anatoly Vasilyevich — doctor of medical sciences, professor, corresponding member of the RAMS, head of pathological physiology and clinical pathophysiology chair at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», office phone 8 (383) 22539-78
Kuzmenko Dmitry Borisovich — candidate of medical sciences, senior teacher of pathological physiology and clinical pathophysiology chair at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», office phone 8 (383) 225-39-78, e-mail: dr172@mail.ru
List of the Literature:
1. Syndrome of long compression failure / P. G. Bryusov, V. N. Buldin, M. I. Rudenko [etc.]. — M: Medicine. — 1989 . — P. 10-14.
2. Zakharova G. N. Diagnostics and treatment of crash-syndrome / G. N. Zakharov, V. A. Phursayev, L. B. Polozov // Bull. of surgery n. a. I. I. Grekova. — 1987. — № 2.
— P. 109-114.
3. Efremov A. V. Lymphology of extreme states / A. V. Efremov, A. R. Antonov, Y. V. Nacharov. — M: «Triada-H», 2005. — P. — 248.
4. Chelmakina V. N. Acute hepatonephric failure of toxic etiology and its treatment / V. N. Chelmakin, F. G. Shel, L. A. Spiridonov // III All-Union congress of resuscitators and anesthesiologists. — Threshing barn, 1983. — P. 494-495.
5. Shkurupy V. A. Electron and microscopic research of endocitus ability of parenimatosis and sinusoidal cells of liver in experimental states / V. A. Shkurupy, I. I. Indikova // Cytology. — 1977. — № 1. — P. 23-26.
