Научная статья на тему 'Структурно-функциональные особенности элементов поджелудочной железы у животных с различной толерантностью к глюкозе'

Структурно-функциональные особенности элементов поджелудочной железы у животных с различной толерантностью к глюкозе Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
350
77
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Медицинский альманах
ВАК
Область наук
Ключевые слова
ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ГЛЮКОЗЕ / ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА / МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ / PANCREAS / GLUCOSE TOLERANCE / MORPHOLOGICAL EXCHANGES

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Никонова Лариса Геннадьевна

У собак с нормальной (n=10) и нарушенной толерантностью к глюкозе (n=10) гистологическими и электронно микроскопическими методами проводилось изучение компонентов экзокринной и эндокринной частей поджелудочной железы собак. Выявлены морфологические различия в строении обеих частей железы на органном, тканевом и клеточном уровнях в зависимости от состояния углеводного обмена организма и толерантности к глюкозе.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Никонова Лариса Геннадьевна

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Structural-functional peculiarities of elements of pancreas of animals with different tolerance to glucose

The aim of this study was to determine the differences in the pancreas structure of dogs with normal and impaired glucose tolerance. The experiment was conducted in 20 dogs. Pancreas elements were studied using histological, electron microscopic and morphometric methods. The differences in the structure were found at the level of organs, tissues and cells in the acinar parenchyma and islets.

Текст научной работы на тему «Структурно-функциональные особенности элементов поджелудочной железы у животных с различной толерантностью к глюкозе»

IVh

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

УДК Б1Б.37-091-092.9

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭЛЕМЕНТОВ ПОАЖЕЛУАОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ЖИВОТНЫХ С РАЗЛИЧНОЙ ТОЛЕРАНТНОСТЬЮ К ГЛЮКОЗЕ

Л.Г. Никонова, ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»

Никонова Лариса Геннадьевна - e-mail: [email protected]

У собак с нормальной (п=10) и нарушенной толерантностью к глюкозе (п=10) гистологическими и электронно микроскопическими методами проводилось изучение компонентов экзокринной и эндокринной частей поджелудочной железы. Выявлены морфологические различия в строении обеих частей железы на органном, тканевом и клеточном уровнях в зависимости от состояния углеводного обмена организма и толерантности к глюкозе.

Ключевые слова: толерантность к глюкозе, поджелудочная железа, морфологические особенности строения.

The aim of this study was to determine the differences in the pancreas structure of dogs with normal and impaired glucose tolerance. The experiment was conducted in 20 dogs. Pancreas elements were studied using histological, electron microscopic and morphometric methods. The differences in the structure were found at the level of organs, tissues and cells in the acinar parenchyma and islets.

Key words: pancreas, glucose tolerance, morphological exchanges.

Введение

В последнее время в практической медицине большое внимание уделяется вопросам изучения состояний, предшествующих развитию основного заболевания. Термином «предиабет» принято обозначать нарушения углеводного обмена, связанные с изменением толерантности к глюкозе и приводящие к развитию сахарного диабета. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 2000 года, число лиц, у которых выявляются предиабетические нарушения углеводного обмена, в два раза превышает число больных инсулинозависимым сахарным диабетом [1, 2]. В настоящее время большое количество морфологических исследований посвящено изучению состояния поджелудочной железы при экспериментальных диабетах, при действии раздражителей, вызывающих повышенную секрецию островковых гормонов [3, 4, 5, 6, 7]. Работы, рассматривающие структурно-функциональные особенности поджелудочной железы при нарушении углеводного обмена и толерантности к глюкозе, немногочисленны и затрагивают, в основном, эндокринную часть железы.

Цель исследования: выявить морфологические различия строения элементов экзокринной и эндокринной частей поджелудочной железы у собак с нормальной и нарушенной толерантностью к глюкозе.

Материал и методы

Объектом наблюдения являлись беспородные собаки-самцы в возрасте 2-4 лет, средняя масса тела 16,12+0,81 кг. Исследование на собаках проводили в соответствии с приказами Минвуза СССР № 742 от 13.11.84 г. «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных». При обследовании животных проводили анализ «тощакового» уровня глюкозы венозной крови и стандартный тест толерантности к глюкозе (СТТГ), который является достаточно эффективным методом выявления скрытых нарушений углеводного обмена. Тест толерантности к глюкозе в виде однократной углеводной нагрузки проводился утром натощак после 10-14 часов голодания. После

забора крови из латеральной подкожной вены левой голени животному давали сахар из расчета 1,75 г на 1 кг веса. Через 60 и 120 минут повторно определяли концентрацию глюкозы венозной крови. Затем строили гликемические кривые, где отражали начальное содержание, высоту подъема и конечный уровень глюкозы крови. Методом отбора по результатам СТТГ и уровню глюкозы крови формировали две группы животных: с нормальной (группа А, п=10) и нарушенной (группа В, п=10) толерантностью к глюкозе. Критерием нормальной толерантности к глюкозе у собак считали следующие показатели: исходный уровень глюкозы венозной крови 4,3-5,0 ммоль/л, повышение гликемии через 60 минут не более, чем на 80%; снижение концентрации глюкозы через 120 минут до уровня, не превышающего 30% исходного. Нарушение толерантности к глюкозе определялось по следующим показателям:исходный уровень глюкозы венозной крови выше 5,0 ммоль/л; высота подъема гликемии через 60 минут 80% и больше; снижение концентрации глюкозы через 120 минут до уровня выше исходного на 30% и более. Для изучения состояния углеводного обмена проводили биохимическое исследование венозной крови, определяя содержание глюкозы, лактата и пирувата, радиоизотопным методом - концентрацию инсулина в крови.

Забор материала осуществляли под тиопенталовым наркозом из расчета 0,5 мл 10% раствора тиопентала натрия на 1 кг массы животного. В условиях управляемого дыхания рассекали переднюю брюшную стенку, извлекали поджелудочную железу, осматривали и взвешивали. Из хвостовой части выделяли кусочки для гистологического и электронномикроскопического исследования. Для световой микроскопии ткань железы фиксировали в жидкости Буэна с последующей заливкой в парафин. Парафин-целлоидиновые срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилин-эозином, альдегид-фуксином, хром-гематоксилин-флоксиновым методом по Гомори. Для электоронно-микроскопического исследования кусочки фиксировали в 2,5% глутаральдегиде, обрабатывали 2% раствором четырёхокиси осмия, заливали

в эпон-аралдит. Для идентификации панкреатических островков с последующей прицельной заточкой с каждого блока получали полутонкие срезы на ультратоме Ultracut фирмы Reichert-jung, окрашивали метиленовым синим, азуром II, основным фуксином. Ультратонкие срезы контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом. Исследовали на электронном микроскопе Morgagni 268D фирмы FEI в трансмиссионном режиме с помощью программы Analysis.

Морфометрические показатели получали с помощью программы Image Tools 3.0 и установки анализа изображения МАКС - 1005 [8].

На срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, определяли относительные объемы (ОО) экзокринной части и панкреатических островков (объектив 60), исследовали аци-нарные клетки. По соотношению объемов эндокринной и экзокринной частей железы вычисляли коэффициент Ричардсона/Янга. На срезах, окрашенных альдегид-фуксином и трехцветной смесью Гомори, подсчитывали количество панкреатических островков, А- и В-клеток в них (объектив 60), измеряли относительные объемы А- и В-клеток, затем вычисляли «функциональный» индекс панкреатических островков (соотношение количества А- и В-клеток) и «объемный» индекс (соотношение относительных объемов А- и В-клеток).

Цифровой материал обрабатывали с применением методов вариационной статистики с учетом изменчивости признака в пределах каждого организма в программах Microsoft Excel 7.0 и Statistica 5.5. Для установления направления и тесноты связей между варьирующими функциональными и морфологическими признаками применяли корреляционный анализ [9].

Результаты исследования

Сравнение показателей глюкозы, инсулина, лактата и пирувата крови позволяет говорить о разном состоянии углеводного обмена у животных с различной толерантностью к глюкозе.

В группе с нарушенной толерантностью по сравнению с группой А наблюдается повышенное содержание глюкозы (на 30,8%), меньшая концентрация инсулина в крови (на 33,3%), более низкие показатели лактата (на 26%) и пирувата (на 11%), что свидетельствует о недостаточной утилизации глюкозы и невысокой степени активности гликолиза. Данные корреляционного анализа показывают наличие сильных положительных связей между глюкозой и пирува-том (p=0,78), инсулином и лактатом (p=0,84) в группе В и отрицательных взаимодействий средней силы между глюкозой и инсулином (p= -0,68), глюкозой и лактатом (p= -0,68) в группе А.

На органном уровне у животных с нарушенной толерантностью к глюкозе масса железы на 11,6% (р=0,03) и коэффициент соотношения массы железы к весу тела на 20% (р=0,032) ниже показателей группы А. Относительный объем ацинарной части на 11% (р=0,041) меньше, объем островков на 9,8% (р=0,02) больше и соответственно индекс Ричардсона/Янга на 13,7% (р=0,023) выше показателей группы А (рис. 1). Количество островков в обеих группах животных практически одинаково. У собак с нормальной толерантностью к глюкозе преобладают панкреатические островки средних и крупных размеров, округлой или неправильно отростчатой формы, окруженные тонкой соедини-

тельнотканной капсулой. У животных группы В островки, в основном, средних размеров, часто встречаются мелкие, состоящие из 8-10 клеток, преимущественно инсулиноци-тов. Их соединительнотканная капсула выражена слабо, у части островков по периметру выявляется тесный контакт В-клеток с окружающей экзокринной паренхимой. Вблизи или по краю островков отмечено большое количество ацино-островковых клеток с инсулиновой зернистостью и гранулами зимогена различной степени зрелости.

Морфометрически у собак группы А выше относительный объем инсулиноцитов на 14% (р=0,041), их количество на 13,4% (р=0,031), глюкагоноцитов на 11,3% (р=0,014). Относительный объем А-клеток меньше на 5% (р=0,05), поэтому объемный индекс ниже показателей второй группы животных на 10,2% (рис. 2). Функциональный индекс существенно не отличается между группами. Корреляционный анализ показывает наличие отрицательной связи (р=-0,7) глюкозы с количеством А-клеток и функциональным индексом в группе животных с нормальной толерантностью. В группе В выявлена сильная положительная связь глюкозы с относительным объемом панкреатических островков (р=0,74), индексом Ричардсона/Янга (р=0,78), количеством островков (р=0,75) и количеством А-клеток (р=0,71).

70

группа А

I группа В

ОО ацинарной части

ОО

панкреатических

островков

индекс

Ричардсона/Янга

РИС. 1.

Сравнительная характеристика относительных объемов ацинарной и островковой частей и индекса Ричардсона/Янга у животных с нормальной(группа А) и нарушенной (группа В) толерантностью к глюкозе.

Обращает на себя внимание различие корреляционных взаимодействий между элементами островков (рис. 3). В группе с нормальной толерантностью к глюкозе только две сильные положительные связи: между количеством и относительным объемом В-клеток (р=0,75) и между относительным объемом островков и относительным объемом А-клеток (р=0,64). В группе с нарушенной толерантностью к глюкозе количество взаимодействий между морфометрическими и количественными показателями увеличивается в несколько раз. Относительный объем островков коррелирует с относительными объемами как В- (р=0,82), так и А-клеток (р=0,71). У инсулиноцитов и глюкагоноцитов формируются связи между объемом (р=0,75), количеством (р=0,86) и индексами соотношений.

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

00 В-клеток 00 А-клеток количество В - количество А -

клеток клеток

РИС. 2.

Сравнительная характеристика относительных объемов островковых клеток у животных с нормальной (группа А) и нарушенной (группа В) толерантностью к глюкозе.

группа А

I группа В

Электронномикроскопическое исследование позволило выявить структурные особенности организации ацинарных и островковых клеток у животных с различной толерантностью к глюкозе. У собак группы А ацинарные клетки, располагающиеся вблизи, или контактирующие, с островками (периинсулярные клетки) большего размера с выраженными гранулами зимогена в апикальной зоне. Шероховатый эндоплазматический ретикулум представлен в виде плотных цистерн, везикул и вакуолей. Ядро локализуется преимущественно в базальном отделе, имеет округлую форму. В цитоплазме большое количество митохондрий с многочисленными, иногда фрагментированными кристами, располагающимися в области плазматической мембраны и комплекса Гольджи.

А-клетки локализуются преимущественно по краю островка, имеют округлую или овальную форму. В их цитоплазме достаточное количество равномерно расположенных секреторных гранул в виде округлых телец высокой электронной плотности, окруженных четко различимой мембраной. Между содержимым гранулы и ее мембраной имеется электроннопрозрачная зона (ореол). Ядро округлое с заметными сгущениями хроматина в центре. Эндоплазматический ретикулум развит слабо, его элементы распределены по всей клетке. Митохондрии удлиненной формы с небольшим количеством крист, расположены чаще вблизи ядра и вокруг комплекса Гольджи, в расширенных концевых отделах которого обнаруживаются локальные сгущения, идентичные по электронной плотности содержимому зрелых секреторных гранул.

В-клетки полигональной формы, располагаются чаще в центре островка. В цитоплазме - большое количество секреторных гранул в виде удлиненных «палочек». В некоторых В-клетках наряду с гранулами средней плотности встречаются более плотные гранулы округлой формы, напоминающие А-гранулы. Электроннопрозрачная зона более широкая. Шероховатый ретикулум образован короткими канальцами и небольшими вакуолями, его элементы равномерно распределены по всей цитоплазме. Между клеточными органеллами видны одиночные или небольшие группы свободных рибосом. Митохондрии

удлиненные с косо располагающимися кристами, сосредоточены в основном вблизи достаточно хорошо развитого комплекса Гольджи подковообразной формы.

У животных с повышенной толерантностью к глюкозе выявляются структурные особенности в клетках обеих частей железы. Экзокринноциты периинсулярных ацинусов меньших размеров более тесно прилегают друг к другу. Зимогеновая зернистость выражена слабее, больше незрелых гранул. В инсулиноцитах панкреатических островков уменьшенное содержание «палочковидных» гранул, преобладают гранулы округлой формы с широким электроннопрозрачным промежутком между секретом и окружающей мембраной. Наряду с В-гранулами обычной осмиофильно-сти отмечены гранулы с размытыми нечеткими формами слабой осмиофильности, локализующиеся в гиперплазиро-ванном эндоплазматическом ретикулуме. Комплекс Гольджи расширен, в его структурах определяется большое количество секреторного материала различной электронной плотности (рис. 3). В некоторых В-клетках ядра имеют изрезанный контур, хроматин повышенной электронной плотности располагается вблизи ядерной оболочки, иногда образует скопления в виде глыбок. У части клеток митохондрии набухшие с просветленным матриксом, в цитоплазме достаточно большое количество лизосом (рис. 4). А-клетки без выраженных изменений, глюкагоновые гранулы высокой осмиофильности локализованы вблизи плазматических мембран.

Обсуждение

Полученные результаты показывают, что в состоянии пре-диабета структурно-функциональные особенности строения проявляются на всех уровнях организации поджелудочной железы и наиболее отчетливо выражены в эндокринной части.

Сравнение показателей углеводного обмена у животных с нормальной и нарушенной толерантностью к глюкозе позволяет говорить о различном протекании реакций утилизации и усвоения глюкозы тканями организма, в связи с чем гипергликемия, по мнению ряда авторов, может быть обусловлена нарушением нормальных взаимоотношений между функцией В-клеток поджелудочной железы и чувствительностью к инсулину на уровне периферических тканей или печени [10,11].

РИС. 3.

Инсулиноцит поджелудочной железы при нарушенной толерантности к глюкозе. кГ- комплекс Гольджи, Мх - митохондрии, Л- лизосомы, В-гр - гранулы инсулиноцита (^).

РИС. 4.

Инсулиноцит поджелудочной железы при нарушенной толерантности к глюкозе. Я - ядро, Мх - митохондрии.

Нарушение толерантности к глюкозе на уровне органа проявляется в увеличении объема инсулярного аппарата и индекса Ричардсона/Янга, что можно расценивать как усиление активности островковой ткани [12]. Наряду с этим меньший относительный объем и количество В-клеток, увеличение объемного индекса свидетельствуют об изменениях в эндокринной паренхиме железы при повышенном содержании глюкозы [13]. Согласно общепринятым теориям патогенеза инсулинозависимого сахарного диабета не существует заболевания только с дефицитом секреции инсулина или только с «чистым» периферическим эффектом. При начальных нарушениях толерантности к глюкозе уже имеет место снижение чувствительности к инсулину и компенсаторное увеличение секреции инсулина [14, 15], что находит отражение в наших исследованиях. Уменьшение количества гранул высокой электронной плотности в виде «палочек», преобладание гранул округлой формы и наличие гранул с размытыми нечеткими контурами является проявлением различных стадий секреторного цикла В-клеток [16, 17], преимущественно подготовки к секреции и гранулолизиса. Наблюдаемая локализация гранул различной электронной плотности в гранулярном эндоплазматическом ретикулуме и комплексе Гольджи отражает регулируемый секреторный путь инсулина [18] при усилении активности В-клеток. Доказано, что при повышенной потребности организма в гормоне последний может частично или полностью синтезироваться и оформляться в секреторные гранулы в канальцах цитоплазматической сети [19].

Хроническая, даже невысокая, гипергликемия приводит к формированию адаптивной реакции со стороны островко-вых клеток в виде структурных изменений инсулиноцитов (ядро в состоянии гиперфункции, набухшие митохондрии с просветленным матриксом, большое количеством первичных лизосом, гипертрофированный комплекс Гольджи).

Состояние «глюкозотоксичности» по результатами корреляционного анализа вызывает увеличение функциональных взаимосвязей элементов внутри островка, что свидетельствует об усилении жесткости организации системы. Новые сильные корреляционные взаимодействия между ацинар-ной частью и относительным объемом и количеством В-клеток на структурном уровне выражаются в уменьшении

размеров клеток периинсулярных ацинусов и ослаблении их зимогеновой зернистости. Такая «тесная» взаимосвязь элементов экзокринной и эндокринной частей через островково-ацинарную ось наблюдается рядом исследователей [20, 21] и объясняется усиленным воздействием на ацинарные клетки инсулина или глюкагона. В связи с этим правомерно говорить о «пластичности» элементов обеих частей поджелудочной железы при изменяющихся потребностях организма в инсулине.

Появление большого количества ацино-островковых клеток с инсулиновой зернистостью вблизи или по краю островков у животных с нарушенной толерантностью к глюкозе можно трактовать как компенсаторные преобразования, направленные на поддержание углеводного гомеостаза. Идентичную реакцию наблюдали при исследовании поджелудочной железы крыс после многократного введения глюкозы [22].

Заключение

Таким образом, выявленные морфологические различия в строении обеих частей поджелудочной железы при различной толерантности к глюкозе подтверждают наличие

выраженной структурно-функциональной взаимосвязи элементов на уровне клеток, тканей и органа в зависимости от состояния углеводного обмена организма.

ш

ЛИТЕРАТУРА

1. Diabetes Prevention Research Group. Reduction in the evidence of type 2 diabetes with life-style intervention or metformin. N. Engl. J. Med. 2002. № 346. Р. 393-403.

2. Hanefeld M., Chiasson J., Koehler C. et all. Acarbose slows progression of intima-media thickness of the carotid arteries in subjects with impaired glucose tolerance. Stroke. 2004. № 35. Р. 1073-1078.

3. Бабичев В.Н. Влияние сульфаниламидов второй генерации на активность АТФ-зависимых К-каналов В-клеток поджелудочной железы. Проблемы эндокринологии. 2002. № 3. С. 44-46.

4. Валов С.Д., Стадников А.А. Влияние нейроэндокринных факторов на репаративный гистогенез поджелудочной железы при культивировании в организме. Морфология. 2001. № 2. С. 52-55.

5. Дружинина, Ю.Г., Пальчикова Л.А., Дружинина Н.А. Влияние пробиотика «Биовестин-Лакто» на течение аллоксанового диабета и регенерацию панкреатических островков у крыс. Бюллетень сибирской медицины 2005. Т. 4. Приложение 1. 86 с.

6. Колесник Ю.М., Абрамов А.В., Василенко Г.В. Изменение эндокринной части поджелудочной железы белых лабораторных крыс при сахарном диабете, адаптации к гипоксии и их сочетании (иммуноцитохимическое исследование). Морфология. 1996. № 1. С. 91-95.

7. Bernard C., Berthault M.F., Saulniere C., Ktorza A. Neogenesis vs. apoptosis as main components of pancreatic beta cells as changes in glucose-infused normal and midly diabetic adult rats. FASEB J. 1999. № 13. Р. 1195-1205.

8. Кочетков А.Г., Силин Е.В., Савельев В.Е.и др. Система морфометрического анализа изображения МАКС-1000 в медико-биологических исследованиях. Нижегородский мед. журнал. 1999. № 1. С. 54-57.

9. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1989. С. 303.

10. Ахметов А.С. Инсулиносекреция и инсулинорезистентность: две стороны одной медали. Прoблемы эндокринологии. 2002. № 3. С. 31-37.

11. Bernard-Kargar C. Diabetes. 2001. № 50. 30 р.

12. Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии. М.: Медицина, 1984. С. 285.

13. Sawicki P. T., Kaiser T. Response to Chiasson et al.: Acarbose for the prevention of Type 2 diabetes, hypertension and cardiovascular disease in subjects with impaired glucose tolerance: facts and interpretations concerning the critical analysis of the STOP-NIDDM Trial data. Diabetologia. 2004. № 47. Р. 976-977.

IVh

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

14. Chiasson J., Josse R., Gomis R. et all. Acarbose for prevention of type 2 diabetes mellitus: the STOP-NIDDM randomized trial. Lancet. 2002. № 359 (9323). Р. 2072-2077.

15. Khaw KT., Wareham N., Bingham S. et all. Assosiation of hemoglobin A1c with cardiovascular disease and mortality in adults: the European prospective investigation into cancer in Norfolk. Ann. Intern. Med. 2004. № 141. Р. 413-420.

16. Пузырев А.А., Иванова В.Ф., Костюкевич С.В.Ультраструктура эндокринных клеток поджелудочной железы собаки. Морфология. 2006. № 6. С. 68-72.

17. Govendir M., Canfield P.J., Church D.B. Morphometric study of the beta-cells volume of the canine pancreas with consider-ation on the axis of tissue transaction. J. Vet. Med/ Sci. 1999. № 61. Р. 737-742.

18. Банин В.В. Механизмы обмена внутренней среды. М.: Изд-во РГМУ, 2000. С. 276.

19. Пузырев А.А., Иванова В.Ф. Электронно-микроскопическое изучение островков Лангерганса поджелудочной железы человека. Арх. Пат. 1974. № 7. С. 42-47.

20. Bonner-Weir S. Perspective: Postnatal pancreatic - cell growth. Endocrinology. 2000. № 141. Р. 1926-1929.

21. Bouwens L., Rooman I. Regulation of pancreatic betacellmass. Physoil. Rev.

2005. № 85. Р. 1255-1270.

22. Иванова В.Ф., Пузырев А.А. Структурно-функциональные изменения в поджелудочной железе белой крысы при введении глюкозы. Морфология.

2006. № 1. С. 67-71.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.