CC BY
53
экология и природопользование
структурно-функциональная организация факторов патогенности и антигенная структура
Legionella pneumophila (обзор литературы) Г.Л. Карбышев, Ю.М. Ломов, А.Н. Терентьев
Впервые характеристика возбудителя болезни легионеров описана специалистами Центра по контролю за заболеваемостью, находящегося в США, - Дж. МакДейдом и К. Шепардом в 1977 г. [1]. Возбудитель получил название Legionella pneumophila штамм Philadelphia 1 [2]. Уже к началу 80-х годов были проведены исследования по изучению антигенной структуры L. pneumophila, в результате которых показано, что клеточные стенки микроба содержат сложные антигенные комплексы.
главный белок наружной мембраны. Анализ литературы на начало 1984 г. [3-5] свидетельствовал о том, что мембрана L. pneu-mophila представлена тремя слоями: цитоплаз-матической мембраной, пептидогликановым слоем и наружной мембраной (outer membrane). При электрофорезе определялись три белка с молекулярными массами 29, 33 и 45 kDa и с мажорной полосой - 29 kDa. Установлено, что данные белки термостабильны. Белковые профили наружных мембран у восьми серогрупп L. pneumophila являются идентичными [6, 7]. MOMP ковалентно связан с пептидогликаном через "якорный" белок с молекулярной массой 31 kDa. Показано, что неденатурированная молекула MOMP имеет молекулярную массу 100 kDa и под воздействием редуцирующих агентов диссоциирует на мономеры 28 и 31 kDa в соотношении 1:2 или 1:3 [8].
Карбышев Гарий Львович кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отдела диагностики особо опасных инфекций Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института.
Ломов Юрий Михайлович - доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, директор того же института.
Терентьев Александр Николаевич - доктор медицинских наук, заведующий отделом диагностики особо опасных инфекций того же института.
Клонирован структурный ген MOMP -ompS, кодирующий две субъединицы: 28 и 31 kDa. Ген состоит из 891 пар оснований и определяет синтез полипептида из 276 аминокислот. ДНК ompS-гена высококонсервативна, и он представлен у всех серогрупп L. pneumophila и других видов легионелл, что подтверждает его родоспецифичность [9].
MOMP (OmpS) выполняет ряд важных функций, главной из которых, является его поринобразующая способность. MOMP участвует в процессах распознавания, прикрепления и поглощения L. pneumophila, которые происходят с участием рецептора к комплементу [10]. MOMP связывает C3b и C3bi факторы комплемента и таким образом участвует в фагоцитозе [11] и адгезии на моноциты и макрофаги [12], он формирует слабый серологический и выраженный клеточный иммунный ответ, обеспечивающий защиту морских свинок против летальной дозы возбудителя [13]. Структурно MOMP через субъединицу 31 kDa связан с пептидог-ликаном, а также с ЛПС и Hsp-60 антигеном и создает мембранный структурный каркас поверхности бактериальной клетки.
Таким образом, MOMP (OmpS) является родоспецифическим белком, который обеспечивает важные структурные и функциональные свойства бактериальной клетки и является хорошим иммуногеном.
Жгутиковый антиген. Наличие жгутикового аппарата у L. pneumophila показано на ранних стадиях исследований [14-17]. Значение жгутиков как факторов вирулентности доказано экспериментально: LD50 для штаммов L. pneumophila, не содержащих жгутики, составил 1011 КОЕ/мл для морских свинок, в то время как LD50 для штаммов, содержащих жгутики, составил 1,5*105 КОЕ/мл [18]. При электронно-микроскопическом исследовании культуры L. pneumophila всех серогрупп
имели один полярно расположенный жгутик. При электрофорезе препаратов жгутиков отмечалась единственная полоса с молекулярной массой 47 kDa. Антифлагеллярная сыворотка, полученная к L. pneumophila серогруппы 1 агглютинировала штаммы L. pneumophila других серогрупп и не реагировала с культурами, прогретыми при 100 оС в течение 1 ч.
Анализ нуклеотидной последовательности клонированного гена flaA, кодирующего жгутик, позволил установить наличие открытой рамки считывания длиной 1428 нуклеотидов [19]. Ген flaA кодирует мономерный белок, состоящий из 475 аминокислотных остатков с молекулярной массой 47 kDa. Родоспецифичность жгутикового антигена подтверждена иммуноблоттингом, при котором гипериммунная сыворотка против 47 kDa антигена L. pneumophila серогруппы 1 реагировала со жгутиками L. micdadei, L. hackelia серогрупп 1 и 2 и L. longbeachae серогруппы 1 и 2 [20]. Антифлагеллярная кроличья сыворотка против L. pneumophila серогруппы 1 в реакции непрямой иммунофлюоресценции и иммуноблоттинге выявляла 24 из 30 коллекционных штаммов L. pneumophila серогрупп 1-15 и 16 из 24 штаммов других видов леги-онелл [21].
Рядом авторов показано, что экспрессия и сборка жгутика у L. pneumophila координировано регулируется вместе с другими факторами вирулентности, такими как чувствительность к NaCl, цитотоксичностью, осмотической резистентностью и феноменом блокады слияния фагосом с лизосомами, который рассматривается как ведущий механизм внутриклеточного выживания в человеческих макрофагах и клетках простейших [21-23]. Дальнейшие исследования показали, что экспрессия флагеллина необходима для инфицирования простейших и фагоцитирующих клеток человека [24].
Таким образом, жгутик обеспечивает процесс адгезии, инвазии, а в постреплика-тивной стадии - лизис клетки хозяина.
пили. Впервые наличие пилей у L. pneumophila показано при электронно-микроскопическом исследовании культур возбудителя, выделенных от больных [25]. L. pneumophila образует пили различной длины: короткие 0,1-0,6 мкм и длинные 0,81,5 мкм, причем длинные пили выявлялись у 10 % клеток, а короткие - у 40 % клеток [26].
Около 50 % бактериальных клеток не имели пилей. Авторы выделили и охарактеризовали ген pilEL , кодирующий образование пилей у L. pneumophila. Роль гена pilEL связана с его способностью усиливать адгезию, инвазию и выживание L. pneumophila в клетках простейших. Это имеет важное значение в патологии человека, поскольку установлено, что L. pneumophila существенно усиливает способность к инвазии человеческих макрофагов и развитию инфекционного процесса после предварительного ко-культивирования с клетками простейших [27].
Липополисахарид. Строение липопо-лисахарида (ЛПС) хорошо изучено на модели представителей семейства Enterobacteriaceae. лПс состоит из трех структурных регионов: липида А, коровых полисахаридов и о-ан-тигенной боковой цепи. липид А является консервативной структурой и присутствует у всех грам-отрицательных микробов, является неспецифическим и обладает эндотоксической активностью. в свою очередь, о-боковые цепи обладают антигенной специфичностью, серологически активны и представляют основу серологической классификации различных видов Enterobacteriaceae [28].
Установлено, что, несмотря на сходство различных штаммов легионелл по питательным потребностям и гомологии ДНК, сыворотки к штаммам различных серогрупп взаимодействуют только со своей серогруп-пой [29].
группа российско-немецких исследователей [30-33] опубликовали серию работ, в которых показали, что ЛПС L. pneumophila имеет необычный химический состав. о-цепь содержит гомополимеры необычных сахаров 5-acetamidino-7-acetamido-8-O-acetyl-3,5,7,9-tet-radeoxy-D-glycero-L-galacto-non-ulosonic acid, получивших название легионаминовая кислота, - и может содержать 10-75 их остатков. гомополимеры обладают высокими гидрофобными свойствами и обеспечивают адгезию микроорганизма к клеткам-мишеням. липид А обладает уникальной структурой и содержит бисфосфорилированные ß-GlcpN3N-(1-->6)-GlcpN3N дисахариды, содержащие от 14 до 22 атомов углерода. Цепи жирных кислот в составе ЛПС L. pneumophila в два раза длиннее, чем аналогичные цепи в составе ЛПС других энтеробактерий, они нарушают фосфолипидный слой мембраны фагосомы и
блокируют слияние фагосомы с лизосомами. ЛПС на поверхности клеток играет важную роль в процессах адгезии и инвазии клеток-мишеней, а также является фактором вирулентности.
Клонирован днК-фрагмент, состоящий из 1074 нуклеотидов, названный lag-1-геном (lipopolysaccharide-associated gene). Ген lag-1 кодирует синтез белка, состоящего из 357 аминокислотных остатков с молекулярной массой 40 Da. Продукт гена lag-1 является о-ацетилтрансферазой, катализирующей процесс ацетилирования остатков легионамино-вой кислоты в О-цепи ЛПС, который является ведущим при формировании вирулентности L. pneumophila [34].
В дальнейшем изучены ЛПС 430 штаммов Legionelfa, выделенных от больных и из объектов окружающей среды [35]. Показано, что ЛПС имели вид "лесенки" в двух зонах распределения: низкомолекулярной - 14-30 kDa и высокомолекулярной 30-95 kDa. на большом количестве штаммов L. pneumophila и других видов LegionelШ авторы обосновали положение о возможности типирования L. pneumophila по особенностям электрофоретических ЛПС-профилей. Основное внимание предлагается уделять совпадению полос в зонах распределения 14-30 kDa, в то время как несоответствие полос в высокомолекулярной зоне предлагается игнорировать.
Mip-белок (macrophage infectivity potentiator). Н. Цианното с соавторами [36] выделили ген, кодирующий белок с молекулярной массой 24 kDa. Мутанты оказались не способными инфицировать человеческие альвеолярные макрофаги и восстанавливали инфективную способность после введения ин-тактного гена. Ген получил название mip-гена, его продукт представляет собой полипептид, состоящий из 233 аминокислот с молекулярной массой 24 Da и высокой концентрацией лизина [37]. Mip-белок определяет внутриклеточное выживание L. pneumophila в клетках свободноживущих простейших - Hartmannella amoebae и Tetrahymena ciliates [38]. Авторы полагают, что механизмы внутриклеточной персистенции, контролируемые mip-геном, являются сходными для человеческих альвеолярных макрофагов и свободно живущих простейших. Более того, предполагается, что способность L. pneumophila выживать в аль-
веолярных макрофагах и формировать воспалительный процесс в легочной ткани, напрямую зависит от предшествующей адаптации возбудителя к условиям внутриклеточного выживания в амебах. Дальнейшие исследования выявили важнейшее для внутриклеточной персистенции свойство Mip-белка - его ферментативную пролил-пептидил-цис-транс-изомеразную активность (PPIase). Указанный белок является димером, локализованным на мембране бактериальной клетки, каждый мономер состоит из двух доменов и катализирует цис-транс-превращения пептидных связей с участием пролина в олигопептидах и белках [39, 40].
Сравнительное изучение нуклеотидной последовательности генов mip у 35 видов рода Legionella позволило установить их высокую гомологию, что свидетельствует о консервативности mip-гена у всех видов рода Legionella [41]. Предложена схема генотипиро-вания видов Legionella на основе выявления mip-гена [42], посредством которой идентифицировано 39 из 40 референтных штаммов различных видов Legionella и 105 штаммов, выделенных от больных и объектов окружающей среды.
Таким образом, Mip-белок является ро-доспецифическим, представлен у всех видов рода Legionella, имеет мембранную локализацию, индуцирует серологический ответ и является важных фактором вирулентности.
Белок теплового шока (Hsp-60). Белок теплового шока (heat shock proteins) синтезируется эу- и прокариотическими клетками при изменении условий окружающей среды, носящих характер экстремальных (стрессовых) воздействий. синтез белков теплового шока является защитной реакцией клетки в ответ на летальный сигнал, прежде всего за счет воздействия на неконтролируемую денатурацию белка, возникающую при стрессе. Hsp-белок - наиболее широко распространенный антиген бактерий и представляет собой самую высококонсервативную молекулу в биосфере [43]. Он выполняет важнейшие функции в процессах денатурации, деградации и транслокации белков, а также при сборке белковых комплексов. В силу своих указанных хелперных функций, Hsp-белок получил название молекулярного шаперона.
Исследователи из Центра по контролю заболеваемости (США) [44] установили, что
сыворотки больных выявляли общий для всех видов и серогрупп белковый антиген с молекулярной массой 58 kDa. Установлено, что сыворотка к Hsp-белку является родоспе-цифичной, определяет в реакции иммуно-флюоресценции 23 вида Legionella 38 серо-групп и не выявляет его у 39 других видов микроорганизмов [45]. Показано, что белок L. pneumophila с массой 58-60 kDa способен перекрестно взаимодействовать с поликло-нальной сывороткой против аналогов белков теплового шока E. coli - семейства белков groEL [46]. Авторы полагают, что этот белок имеет как уникальные, так и общие с другими микроорганизмами эпитопы.
Клонированы два гена htpA и htpB, кодирующие два белка с молекулярными массами 15 kDa и 60 kDa [47]. htpB-ген содержит 1644 нуклеотидных оснований и кодирует белок с молекулярной массой 57 952 Da. Установлено, что №р60-антиген находится как в цитоплазматической, так и в мембранной фракциях [48]. Авторы полагают, что L. pneumophila синтезирует два №р60-белка и вероятно имеет два hsp60-гена. Показано, что Hsp60 на поверхности L. pneumophila тесно связан с пептидогликан-MOPM комплексом и ЛПС. Авторы предполагают, что Hsp60-антиген играет важную роль в патогенезе внутриклеточной инфекции и, в частности, в процессе адгезии и внутриклеточной пер-систенции.
Система 2-го типа секреции. У всех микроорганизмов транспорт различных белков через цитоплазматическую мембрану осуществляется посредством секреторных систем. система 2-го типа секреции кодируется, по крайней мере, 12 генами и обеспечивает транспорт белков через две мембраны и пе-риплазматическое пространство с участием сигнальных протеаз. Белки, секретируемые данной системой, включают такие факторы вирулентности как протеазы, целлюлазы, пек-тиназыз фосфолипазы, липазы и различные токсины [49].
Формирование системы 2-ого типа секреции контролируется опероном pilBCD, кодирующим ряд белков, которые участвуют, в том числе и, в процессе биогенеза пилей [50]. Если референтный штамм L. pneumophila се-рогруппы 1 секретирует, по крайней мере, 7 экзобелков с молекулярными массами 66, 64, 56, 43, 38, 35-36 и 26 kDa, то мутант по гену
препили-пептидазы - pilD не секретирует ни одного белка [51]. Представленные данные впервые убедительно свидетельствуют о важной роли белков 2-го типа секреции в процессе внутриклеточного размножения L. pneumophila. Идентифицирован набор генов, названных lspFGHIJK (Legionella secretion pathway). Эти гены кодируют ряд белков, имеющих сигнальные последовательности, локализованных на внутренней и наружной мембранах и периплазматическом пространстве и, участвующих в формировании 2-й секреторной системы [52].
В процессе формирования 2-й секреторной системы большую роль играет препили-пептидаза (PilD) - фермент, способствующий биогенезу IV типа пилей. Установлено, что препили-пептидаза (PilD) обеспечивает важный этап в механизме 2-й секреторной системы - отщепление сигнальной последовательности от секретируемых белков в периплазме. У PilD-дефектных штаммов резко уменьшается секреция таких белков как кислая фос-фатаза, моноацилглицеррол-липаза, РНК-аза, фосфолипаза А и нитрофенилфосфорилхолин (pNPPQ-гидролаза [53]. Кроме того, у мутантов по локусам lspDE и lspG отмечается резкое снижение секреции шести PilD-зависимых белков: протеазы, кислой фосфатазы, нитро-фенилфосфорилхолин (pNPPQ-гидролазы, липазы, фосфолипазы А и лизофосфолипазы А [54]. Авторы полагают, что 2-я секреторная система играет большую роль при внутриклеточной инфекции простейших, чем при инфекции макрофагов. Представленные данные свидетельствуют о том, что перечисленные белки, являющиеся важными факторами вирулентности L. pneumophila, секретируются посредством 2-й секреторной системы.
DotA-белок. Комплекс dot/icm. Исследования в начале 1990-х годов позволили выявить кластер генов, необходимых для эффективного внутриклеточного размножения L. pneumophila [55]. Дальнейшие исследования позволили выявить 25 генов, которые формируют репликативную фагосому с последующим внутриклеточным размножением L. pneumophila. Эти гены получили название dot (defect in organelle trafficking)/ icm (intracellular multiplication) комплекса. Указанный комплекс генов организован в два региона: регион I, содержащий 7 генов (dotDCB, icmWX и icmV/dotA) и регион II, со-
держащий 18 генов (icmTSRQPONMLKEGCDJB и icmF/ tphA) [56-58]. Дальнейшие исследования показали, что продукты 17 из 18 генов региона II необходимы для внутриклеточного размножения L. pneumophila и киллинга макрофагов.
Наиболее детально изучена структурно-функциональная организация DotA-белка [13]. Показано, что DotA является интегральным мембранным белком и локализуется на внутренней мембране. Он представлен восемью трансмембранными доменами, одним маленьким и двумя большими периплазматическими доменами и длинной С-концевой цитоплаз-матической петлей. Важное значение имеет С-концевая петля, нарушение аминокислотной последовательности которой приводит к нарушению способности L. pneumophila к внутриклеточному размножению. Охарактеризованный авторами DotA-белок по своей структурной организации оказался весьма сходным с так называемыми ABC-транспортными белками [59]. DotA-белок L. pneumophila имеет молекулярную массу 113 kDa и выполняет определенные функции: два больших периплазматических домена взаимодействуют между собой, а также с белками периплазма-тического пространства и наружной мембраны, восемь трансмембранных доменов обеспечивают транспорт веществ через внутреннюю мембрану, а цитоплазматическая С-концевая петля играет регуляторную роль и обеспечивает связь с энергодающими структурами цитоплазмы.
Показано, что DotA-белок L. pneumophila секретируется посредством аппарата, кодируемого комплексом dot/icm генов [60]. Авторы обнаружили в супернатантах культур два белка с молекулярными массами 70-80 kDa и 15 kDa. В то же время, показано, что DotA-белок формирует поровые структуры и совместно с белками IcmQ, IcmR, IcmS, IcmW образует IV тип секреторной системы для секреции белков L. pneumophila во внутриклеточное пространство макрофагов и клеток простейших. Dot/Icm транспортный аппарат присутствует у всех серогрупп L. pneumophila и других видов легионелл и, в частности, L. micdadei и L. longbeachae [56, 61].
Таким образом, DotA-белок является интегральным белком внутренней мембраны, кодируется комплексом icm/dot генов, обеспечивает транспорт веществ, формирует
поровые структуры и совместно с другими белками icm/dot комплекса образует IV тип секреторной системы.
цитолизин. В 1985 г. впервые показана высокая степень гемолитической активности L. pneumophila, L. bozemanii, L. micdadei, L.dumoffii, L. gormanii, L. longbeachae, L. jordanis на кровяном агаре [62]. Вскоре была выделена и описана внеклеточная проте-аза L. pneumophila [63]. Авторы получили препарат, в котором присутствовали два белка, обладающих протеолитической активностью, с молекулярными массами 38 и 40 kDa. Ферментативная активность белков подавлялась хелаторами металлов и восстанавливалась после добавления ионов Zn2+, Fe2+, Mn2+, Cu2+ и Fe3+. Авторы полагают, что экстрацеллюляр-ная протеаза L. pneumophila является цинк-ме-таллопротеазой, сходной с соответствующими протеазами других бактерий.
Наиболее полные исследования по цитолизину проведены в институте им. Н.Ф. Гамалеи под руководством С.В. Прозоровского. Впервые обнаружена цитолити-ческая активность фильтратов бульонных культур L. pneumophila на клетках линии CHO [64]. Получен очищенный препарат цитолизина, который в электрофорезе давал единственную полосу с молекулярной массой 37 kDa [65]. Цитолитическая активность проявлялась в виде гемолиза эритроцитов морской свинки в диапазоне доз от 1 до 25 мкг/мл и образовании геморрагического пятна при внутрикожном введении. Авторы полагают, что цитолизин обладает видовой специфичностью и является фактором вирулентности L. pneumophila.
Выделен и очищен экзопротеин L. pneumophila, названный главным секреторным белком (MSP), при иммунизации которым отмечается выраженная стимуляция клеточного и гуморального иммунного ответа, а также формирование высокой степени протек-тивной защиты [66, 67]. Исследователями из Колумбийского университета (США) удалось клонировать ген mspA, кодирующий главный секреторный белок. MSP-белок локализуется как в периплазматическом пространстве, так и в цитоплазме [68]. Важнейшим свойством цитолизина является его способность лизировать сурфактант альвеол легочной ткани.
Таким образом, анализ литературы по антигенной структуре L. pneumophila сви-
детельствует о сложном строении и дает достаточно полную картину структурной организации и функциональных особенностей основных антигенов L. pneumophila, что имеет решающее значение при конструировании диагностических тест-систем.
ЛИТЕРАТУРА
1. McDade J.E., Shepard C.C., Fraser D.W. et al. Legionnaires' disease. Isolation of a bacterium and demonstration of its role in other respiratory disease // N. Engl. J. Med. 1977. V. 297. P. 1197-1203.
2. Brenner D.J., Streigerwalt A.G., McDade J.E. Classification of the Legionnaires' disease bacterium: Legionella pneumophila, genus novum, species nova, of the family Legionellaceae, familia nova // Ann. Int. Med. 1979. V. 90. P. 656-658.
3. Flesher A.R., Ito S., Mansheim B.J., Kasper D.L. The cell envelope of Legionnaires' disease bacterium: morphologic and biochemical characteristics // Ann. Int. Med. 1979. V. 90. P. 628-630.
4. Flesher A.R., Jennings H.J., Ludowski C., Kasper D.L. Isolation of a serogroup 1 specific antigen from Legionella pneumophila // J. Infect. Dis. 1982. V. 145. №. 2. P. 224-233.
5. Rodgers F.G., Davey M.R. Ultrastructure of the cell envelope layers and surface details // J. Gen. Microbiol. 1982. V. 128. P. 1547-1557.
6. Ehret W., Anding G., Ruckdeschel G. Characterization of membrane proteins from various strains and serogroups of Legionella pneumophila and other Legionella species // Legionella. Proceedings of the Second International Symposium. American Society for Microbiology, Washington, 1984. P. 265268.
7. Hindahl M.S., Iglewski B.H. Outer membrane protein from Legionella pneumophila serogroups and other Legionella species // Infect Immun. 1986. V. 51. №. 1. P. 94-101.
8. Butler C.A., Hoffman. P.S. Characterization of a major 31-kilodalton peptidoglycan-bound protein of Legionella pneumophila // J. Bacteriol. 1990. V. 172. P. 2401-2407.
9. Hoffman. P.S., Ripley M., Weeratna R. Cloning and nucleotide sequence of a gene (ompS) encoding the major outer membrane protein of L. pneumophila // J. Bacteriol. 1992. V. 174. P. 914-920.
10. Horwitz M. A. Phagocytosis of the Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila) occurs by a novel mechanism: engulfment within a pseudopod coil // Cell. 1984. V. 36. P. 27-33.
11. Payne N.R., Horwitz M.A. Phagocytosis L. pneumophila is mediated by human monocyte complement receptors // J. Exp. Med. 1987. V. 166. P. 1377-1389.
12. Bellinger-Kawahara C., Horwitz M.A. Complement component C3 fixes selectively to the major outer membrane protein (MOMP) of Legionella
pneumophila and mediates phagocytosis of liposome-MOMP complexes by human monocytes // J. Exp. Med. 1990. V. 172. P. 1201-1210.
13. Roy C.R., Isberg R.R. Topology of Legionella pneumophila DotA: an Inner Membrane Protein Required for Replication in Macrophages // Infect. Immun. 1997. V. 65. P. 571-578.
14. Chandler. P.W., Roth I.I., Callaway C.S. et al. Flagella on Legionnaires' disease bacteria // Ann. Int. Med. 1980. V. 93. P. 711-714.
15. Rodgers F.G., Greaves. P.W., Macrae A.D. Flagella and fimbriae on Legionella organism // Lancet. 1979 ii. P. 753-754.
16. Rodgers F.G., Greaves. P.W., Macrae A.D., Hollis D.G. Electron microscopic evidance of flagella and pili on Legionella pneumophila // J. Clin. Pathol. 1980. №. 12. P. 1184-1188.
17. Thomason B.M., Chandler. P.W., Hollis D.G. Flagella on Legionnaires' disease bacteria: an interim report // Ann. Int. Med. 1979. V. 91. P. 224-226.
18. Elliot J.A., Johnson W. Immunological and biochemical relationship among flagella isolated from Legionella pneumophila serogroups 1, 2 and 3 // Infect. Immun. 1981. V. 33. P. 602-610.
19. Heuner K., Bender-Beck L., Brand B.C. et al. Cloning and genetic characterization of the flagellum subunit gene (flaA) of Legionella pneumophila serogroup 1 // Infect. Immun. 1995. V. 63. P. 2499-2507.
20. Ott M., Messner P., Heesemann J. et al. Temperature-dependent expression of flagella in Legionella // J. Gen. Microbiol. 1991. V. 137. P. 19551961.
21. Bosshardt S.C., Benson R.F., Fields B.S. Flagella are a positive predictor for virulence in Legionella // Microb. Pathog. 1997. V. 23. P. 107-112.
22. Byrne B., Swanson M.S. Expression of Legionella pneumophila virulence traits in response to growth conditions // Infect. Immun. 1998. V. 66. P. 3029-3034.
23. Gao L.Y., Harb O.S. Abu Kwaik Y. Utilization of similar mechanisms by Legionella pneumophila to parasitize two evolutionarily distant host cells, mammalian macrophages and protozoa // Infect. Immun. 1997. V. 65. P. 4738-4746.
24. Pruckler J.M., Benson R.F., Moyenuddin M. et al. Association of flagellum expression and intracellular growth of Legionella pneumophila // Infect. Immun. 1995. V. 63. P. 4928-4932.
25. Rodgers F.G., Greaves. P.W., Macrae A.D., Hollis D.G. Electron microscopic evidance of flagella and pili on Legionella pneumophila // J. Clin. Pathol. 1980 №. 12. P. 1184-1188.
26. Stone B.J., Abu Kwaik Y. Expression of Multiple Pili by Legionella pneumophila: Identification and Characterization of a Type IV Pilin Gene and Its Role in Adherence to Mammalian and Protozoan Cells // Infect. Immun. 1998. V. 66. P. 1768-1775.
27. Cirillo J.D., Tompkins L.S., Falkow S. Growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castel-
lanii enhances invasion // Infect. Immun. 1994. V. 62. P. 3254-3261.
28. Rietschel E.T., Kirikae T, Schade F.U. et al. Bacterial endotoxin: molecular relationships of structure to activity and function // FASEB Journal. 1994. V. 8. P. 217-225.
29. Horwitz M.A. Formation of a novel phagosome by the Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila) in human monocytes // J. Exp. Med. 1983. V. 158. P. 1319-1331.
30. Helbig J.H., Lück.P. C., Knirel Y.A. et al. Molecular characterization of a virulence-associated epitope on the lipopolysaccharide of Legionella pneumophila serogroup 1 // Epidemiol. Infect. 1995. V. 115. P. 71-78.
31. Helbig J.H., Kurtz J.B., Pastoris M.C. et al. An-tigenic lipopolysaccharide components of Legionella pneumophila recognized by monoclonal antibodies: possibilities and limitations for division of the species into serogroups // J. Clin. Microbiol. 1997. V. 35. P. 2841-2845.
32. Knirel Y.A., Moll H., Zahringer U. Structural study of a highly O-acetylated core of Legionella pneumophila serogroup 1 lipopolysaccharide // Carbohydr Res. 1996. V. 293. P. 223-234.
33. Knirel Y.A., Rietschel E.T., Marre R., Zahringer U. The structure of the O-specific chain of Legionella pneumophila serogroup 1 lipopolysaccharide // Europ. J. of Bioch. 1994. V. 221. P. 239-245.
34. Zou C.H., Knirel Y.A, Helbig J.H. et al. Molecular Cloning and Characterization of a Locus Responsible for O Acetylation of the O Polysaccharide of Legionella pneumophila Serogroup 1 Lipopolysaccharide // J. Bacteriol. 1999. V. 181. P. 4137-4141.
35. Jürgens D., Fehrenbach F.J. Identification of Legionella Species by Lipopolysaccharide Antigen Pattern // J. Clin. Microbiol. 1997. V. 35. P. 3054-3057.
36. Cianciotto N.P., Eisenstein B.I., Mody C.H. et al. A Legionella pneumophila Gene Encoding a Species-Specific Surface Protein Potentiates Initiation of Intracellular Infection // Infect. Immun. 1989. V. 57. P. 1255-1262.
37. Engleberg N.C., Carter C., Weber D.R. et al. DNA Sequence of mip, a Legionella pneumophila Gene Associated with Macrophage Infectivity // Infect. Immun. 1989. V. 57. P. 1263-1270.
38. Cianciotto N.P., Fields B.S. Legionella pneumophila mip Gene Potentiates Intracellular Infection of Protozoa and Human Macrophages // Proc. Nation. Acad. Sci. 1992. V. 89. P. 5188-5191.
39. Fischer G., Bang H, Ludwig B. et al. Mip protein of Legionella pneumophila exhibits peptidyl-prolyl cis/trans isomerase (PPI-ase) activity // Mol. Micro-biol. 1992. V. 6. P. 1375-1383.
40. Ludwig B., Rahfeld J., Schmidt B. et al. Characterization of Mip proteins of Legionella pneumophila // FEMS Microbiol. Lett. 1994. V. 118. P. 23-30.
41. Ratcliff R.M., Donnelian S.C., Lanser J.A. et al. Interspecies sequence differences in the Mip protein
from the genus Legionella: implications for function and evolutionary relatedness // Mol. Biol. 1997. V. 25. P. 1149-1158.
42. Ratcliff R.M., Lanser J.A., Manning. P.A., Heuzen-roeder M.W. Sequence-Based Classification Scheme for the Genus Legionella Targeting the mip Gene // J. Clin. Microbiol. 1998. V. 36. P. 1560-1567.
43. Zügel U., Kaufmann S.H. Role of Heat Shock Proteins in Protection from and Pathogenesis of Infectious Diseases // Clin. Microbiol. Rev. 1999. V. 12. P. 19-39.
44. Sampson J.S., Plikatys B.B., Wilkinson H.W. Immunologic response of patients with legionel-losis against major protein-containing antigens of L. pneumophila serogroup 1 as shown by immunoblot analysis // J. Clin. Microbiol. 1986. V. 23. P. 92-98.
45. Plikaytis B.B., Carlone G.M., Pay C.P., Wilkinson H.W. Purified 60-kilodalton Legionella protein antigen with Legionella-specific and nonspecific epitopes // J. Clin. Microbiol. 1987. V. 25. P. 2080-2084.
46. Lema M.W., Brown A., Butler C.A., Hoffman P.S. Heat shock response in Legionella pneumophila // Can. J. Microbiol. 1988. V. 34. P. 1148-1153.
47. Hoffman P.S., Butler C.A., Quinn F.D. Cloning and temperature-dependent expression in Escherichia coli of a Legionella pneumophila gene coding for a genus-common 60-kilodalton antigen // Infect. Immun. 1989. V. 57. P. 1731-1739.
48. Lema M.W., Brown A. Legionella pneumophila has two 60-kilodalton heat shock proteins // Curr. Microbiol. 1995. V. 31. P. 332-335.
49. Sandkvist M. Type II Secretion and Pathogenesis // Infect. Immun. 2001. V. 69. P. 3523-3535.
50. Liles M.R., Viswanathan. V.K., Cianciotto N.P. Identification and Temperature Regulation of Legionella pneumophila Genes Involved in Type IV Pilus Biogenesis and Type II Protein Secretion // Infect. Immun. 1998. V. 66. P. 1776-1782.
51. Liles M.R., Edelstein. P.H., Cianciotto N.P. The prepilin peptidase is required for protein secretion by and the virulence of the intracellular pathogen Legionella pneumophila // Mol. Microbiol. 1999. V. 31. P. 959-970.
52. Hales L.M., Shuman H.A. Legionella pneumophila Contains a Type II General Secretion Pathway Required for Growth in Amoebae as Well as for Secretion of the Msp Protease // Infect. Immun. 1999. V. 67. P. 3662-3666.
53. Aragon V., Kurtz S., Flieger F. et al. Secreted Enzymatic Activities of Wild-Type and pilD-Defi-cient Legionella pneumophila // Infect. Immun. 2000. V. 68. P. 1855-1863.
54. Rossier R., Cianciotto N.P. Type II Protein Secretion Is a Subset of the PilD-Dependent Processes That Facilitate Intracellular Infection by Legionella pneumophila // Infect. Immun. 2001. V. 69. P. 20922098.
55. Marra A., Blander S.J., Horwitz M.A., Shu-man H.A. Identification of a L. pneumophila locus
required for intracellular multiplication in human macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. V. 89. P. 9607-9611.
56. Feldman M., Segal G.A. Specific Genomic Location within the icm/dot Pathogenesis Region of Different Legionella Species Encodes Functionally Similar but Nonhomologous Virulence Proteins // Infect. Immun. 2004. V. 72. P. 4503-4511.
57. Segal G., Purcell M., Shuman H.A. Host cell killing and bacterial conjugation require overlapping sets of genes within a 22-kb region of the Legionella pneumophila genome // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. V. 95. P. 1669-1674.
58. Vogel J.P., Andrews H.L., Wong S.K., Isberg R.R. Conjugative transfer by the virulence system of Legionella pneumophila. // Science. 1998. V. 279. P. 873876.
59. Higgins C.F. The ABC of channel regulation // Cell. 1995. V. 82. P. 693-696.
60. Nagai H., Roy C.R. The DotA protein from Legionella pneumophila is secreted by a novel process that requires the Dot/Icm transporter // EMBO J. 2001. V. 20. P. 5962-5970.
61. Ko K.S., Hong S.K., Lee H.K. et al. Molecular Evolution of the dotA Gene in Legionella pneumophila // J. Bacteriol. 2003. V. 185. P. 6269-6277.
62. Baine W.B. Cytolytic and phospholipase C activity in Legionella species // J. Gen. Microbiol. 1985. V. 131. P. 1383-1391.
63. Dreyfus L.A., Iglewski B.H. Purification and characterization of an extracellular protease of L. pneumophila // Infect. Immun. 1986. V. 51. P. 736-743.
64. Белый Ю.Ф., Тартаковский И.С., Неустроева В.В. и др. Изучение условий культивирвоания Legionella pneumophila, влияющих на продукцию ци-токсина // Журн. микробиол. 1986. № 4. С. 34-37.
65. Белый Ю.Ф., Вертиев Ю.В., Тартаковский И.С. и др. Характеристика цитолизина L. pneumophila // Журн. микробиол. 1988. № 2. с. 4-7.
66. Blander S.J., Horwitz M.A. Vaccination with L. pneumophila membranes induces cell mediate and protective immunity in a guinea pig model of Legionnaires disease. Protective immunity independent of major secretory protein of L. pneumophila // J. Clin. Invest. 1991. V. 87. P. 1054-1059.
67. Jidem. Vaccination with the major secretory protein of L. pneumophila induced cell mediate and protective immunity in a guinea pig model of Legionnaires disease // J. Exp. Med. 1989. V. 169. P. 691-705.
68. Szeto L., Shuman H.A. The L. pneumophila major secretory protein, a protease, is not requires for intracellular grows or cell killing // Infect. Immun. 1990. V. 58. P. 2585-2592.
16 марта 2006 г.
