CC BY
33
© Булько I. В.
УДК 616-001.16+616.155.32+616-092.9 Булько I. В.
СТРУКТУРЫ ЗМ1НИ В СЕЛЕЗ1НЦ1 ЩУР1В У П1ЗН1Х СТАД1ЯХ ОП1КОВО1ТРАВМИ
П1СЛЯ КОРЕКЦП 1НФУЗ1ЙНИМ РОЗЧИНОМ HAES-LX-5%
Вшницький нацiональний медичний унiверситет iMeHi М.1. Пирогова (м. Вiнниця)
bulkomikola@gmail.com
Дослщження е фрагментом НДР Вiнницького на-цiонального медичного унiверситету iменi М.1. Пирогова «Морфогенез та патоморфоз захворювань шлунково-кишкового тракту, сечостатево!, нейро-ендокринно! та iмунноI системи». № державно! рее-страцп: 0111 и 010551.
Вступ. Частота опiкiв в Укра!ы останнiми роками знижуеться. Разом з тим, ступiнь тяжкост опiкiв значно зростае, особливо серед пащенпв похилого i старечого в^, а також у дiтей до 3 роюв [4]. Недав-н дослiдження показали, що опiки шкiри пов'язанi iз запаленням та iмунною дисфункцiею [9]. Опiкова травма викликае складну реакцiю хворого, руйнуе го-меостаз iмунно! системи та призводить до розвитку iнфекцiйних i запальних ускладнень [8].
Селезiнка е найбтышим лiмфо!дним органом в ор-ганiзмi людини i ссавцiв, який пщтримуе клiтинну та гу-моральну iмуннi вiдповiдi, вродженого i придбаного iмунiтету, кiлькiсний та якiсний склад iмуноцитiв кровi, лiмфи й iнших лiмфо!дних органiв [3,5]. На зовнiшнi i внутрiшнi чинники селезiнка реагуе змЫою морфологи, цитологи, бiохiмil', iмунологi! i фiзiологií. Збiльшення фактора некрозу пухлини -альфа у селезiнкових ма-крофагiв пiсля опiку уже задокументована [7].
За правилами штенсивно! або реаымацмно! те-рапп необхiдно забезпечення адекватного венозного доступу (катетериза^я центрально! або периферич-но! вени в залежност вiд тяжкостi травми) i початок Ыфузмно! терапп. Завданням Ыфузмно! терапп при опiковiй травмi е зниження ступеня мiкроциркулятор-них порушень, особливо у внутрiшнiх органах, на тгл наростаючо! пповолемп. В експеримент на крiлях на моделi токсичного гепатиту, який викликаний прове-денням пщшюрних iн'екцiй чотирихлористого вугле-цю, застосування розчину НАЕБ-1_Х-5 % в дозi 10 мл/ кг маси тта виявляло наявнiсть значних дезЫтокси-кацiйних властивостей препарату [1]. Однак доот-дження д1! iнфузiйного препарату НАЕБ-1_Х-5% пiсля опiку на пстоструктуру селезiнки щурiв у пiзнiх терм^ нах спостереження (14, 21та 20 доба) не проведено.
Мета дослщження. Визначити структуры змши селезiнки на тзых стадiях експериментально! опко-во! травми пiсля фармаколопчно! корекцп новим н фузiйним розчином НАЕБ-1_Х-5%.
Об'ект i методи дослiдження. Експерименталь-н дослiдження експериментально! опково! хвороби (контрольна група, 14-а, 21-а та 30-а доба пiсля опiку) були виконан на 30 бiлих щурах самцях масою 150-
170 г Bei щури, якi було отримано i3 вiварiю 1нституту фармакологiI та токсикологи АМН Укра!ни, утримува-лись у BiBapi! Biнницького нацiонального медичного уыверситету iм. M.I. Пирогова (ВНМУ) на стандартному водно-харчовому рацюы при втьному доступi до води та ш. Тварини отримували харчування у ви-глядi збалансованого корму за встановленими нормами. Пщ час роботи з лабораторними тваринами дотримувались рекомендацм бвропейсько! комiсiI щодо проведення медико-бюлопчних дослiджень з використанням тварин та методичними рекомен-дaцiями Державного фармаколопчного центру МОЗ Укра!ни. Дослщи проводились з урахуванням «Правил доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP)».
Тварини були розподтеы на 3 групи по 10 щуpiв у кожнй I - Ытакты тварини, у кpовi яких визначали фоновий piвень дослiджувaних показниюв; II, III -щури з опком та встановленим катетером у стегно-вiй венi, яким проводилась окрема iнфузiя 0,9% розчину NaCl (контрольна група), 5% розчину HAES-LX у дозi 10 мл/кг. Для цього в умовах пропофолового наркозу виконували катетеризацю стегново! вени та просували катетер до нижньо! порожнисто! вени. Катетер встановлений у стегновм венi пiдшивaвся пiд шюру, його пpосвiт по всiй довжин заповнювався титрованим розчином гепарину (0,1 мл гепарину на 10 мл 0,9% розчину NaCl) пюля кожного ведення ре-човин. IнфузiI виконувались раз на добу. УЫм твари-нам перед моделюванням пaтологiчного стану, бiчнi повеpхнi тулуба брили мехаычною машинкою та без-печною бритвою. Опковий шок викликали шляхом прикладання 4-ох мiдних пластинок (по двi пластинки з кожного боку), як попередньо тримали протягом 6-ти хв у водi на деpев'янiй пщставщ з постiйною температурою 100еС. Загальна площа опiку у щуpiв за-значено! маси складае 21-23% при експозицп 10 сек, що е достатым для сформовування отку III ступеня та викликання шокового стану середнього ступеня важкостк Евтаназю щуpiв проводили шляхом пере-дозування пропофолу через 7, 14 та 30 дiб пюля отку. Ц теpмiни вибpaнi вiдповiдно до певних пеpiодiв от-ково! хвороби [2].
Для гютолопчного дослiдження фрагменти се-лезiнки фiксувaли в 10% розчин нейтрального фоpмaлiну, промивали в проточнм водi, обезвод-нювали в батаре! спиртових pозчинiв зростаючо! кон-центрацп та заключали в парапласт. Зpiзи товщиною
3-5 мкм. Виготовляли на ротацмному мкротом^ за-барвлювали гематоксилiн еозином та за Ван-Пзон. Мiкроскопiчнi дослщження проводили на 30 добу. Пстолопчы препарати дослiджували в свiтловому ми кроскопi ОиУМРЫБ ВН-2 з використанням об'eктивiв х10 та х40, окуляра х10.
Результати дослiджень та Тх обговорення. Ре-зультати дослiдження показали, що на 14 добу л^-вання пiсля опiку в червонм пульпi селезiнки на тлi повно^в'я визначаеться розсiяна лiмфоТдна тканина у виглядi селезiнкових тяжiв i лiмфатичних периар-терiальних пiхв, а також окремих i групових мегака-рiоцитiв як ознак селезiнкового екстрамедулярного гемопоезу, дуже помiрно вираженого (рис. 1).
Бта пульпа представлена середыми i великими селезiнковими лiмфоТдними ттьцями з усiма Тх зонами. До вузлика наближена лiмфатична периартери альна пiхва, спостерiгаеться розширення марпналь-ноТ зони.
Вузлики класично мютять всi належнi зони та й мають значнi розмiри. У св^лих реактивних центрах багато лiмфобластiв. Представницькою е пери арте-рiальна Т-залежна зона, а також помiрно цитогенна мантмна зона навколо свiтлого центру. В цих дтянках помiтнi ппертрофоваы ретикулярнi клiтини i макрофаги. У останых однак немае активованоТ фагоцитар-ноТ активностi. Вiдмiчаеться наявнють розширених маргiнальних зон (рис. 2).
У св^ловому реактивному центрi вузлиюв виявля-ються лiмфобласти, моноцити, поодинок фiгури ми тозу, набухання ендотелюци^в у капiлярах; переваж-но темы лiмфоцити в мантiйнiй зонi. Кттинний склад маргiнальноТ зони: бiльшiсть лiмфобластiв, моноцити - помiж ними повнокровн капiляри.
На 21 добу лкування щурiв розчином НАЕБ-ЬХ повнокровнють червоноТ пульпи супроводжуе значну цитогеннють таких ТТ лiмфоцитарних утворень як се-лезiнковi тяжi Бiльрота та лiмфатичнi периартерiальнi пiхви. Крiм того, серед ретикулярних стромальних клiтин присутн осередки гемоцитопоезу, котрi мю-тять мегакарюцити (рис. 3).
Саме на цей термЫ такого лiкування щурiв з от-ком бiльше, ыж на 14-ту добу, збуджуеться зазна-чений селезiнковий гемопоез: на площi пстолопч-них зрiзiв частiше можна бачити незначн та значнi колони мегакарюци^в серед клiтин моноцитарного та лiмфоцитарного рядiв. Активнiсть таких осередюв пiдтверджуеться, мабуть, ще наявнiстю премегакари оцитiв - великих з еозинофтьно цитоплазмою та великим базофтьним ядром клiтини. Там iще й багато плазмоблас^в i плазмоцитiв, котрi покинули марп-нальну зону.
В утвореннях бто'Т пульпи на цей час впливу НАЕБ-ЬХ активiзуеться фагоцитарна активнють мак-рофагiв, яка була майже притаманною для дiТ лак-топротеТна. Вона вiзуалiзуеться у Т-залежнм зонi i реактивних центрах сумiжних лiмфоТдних вузликiв (рис. 4). Подекуди вщбуваеться послаблення цито-генностi в сегментах мантмно'Т зони (рис. 4).
На 30 добу л^вання щурiв з опiком та веденням НАЕБ-ЬХ - мiкроскопiчно в селезiнцi спостер^аеть-ся повнокрiв'я червоноТ пульпи, мюця розмноження i ущiльнення ТТ ретикулярноТ основи. Бiля трабекуляр-
Рис. 1. Червона пульпа з гемопоетичними й лiмфопоетичними складовими. Опiк. Лiкування НАЕБ-ЬХ, 14 доба. Забарвлення гематоксилiн-еозин, х400.
Рис. 2. Структуроване селезiнкове тшьце з розширеною маргiнальною зоною. Опiк. Лiкування НАЕБ-ЬХ, 14 доба. Забарвлення гематоксилш-еозин, х100.
Рис. 3. Осередок гемоцитопоезу, мегакарюцит. Опiк. Лiкування НАЕБ-ЬХ, 21 доба. Забарвлення гематоксилiн-еозин, х400.
них смуг - лiмфоТднi дтянки з макрофагами. На великому збтьшены мiкроскопу рiзноманiтнi форми лiмфоТдних клiтин, клiтин мiелоТдного ряду, в тому чиот мегакарiоцити.
Значно насичен клiтинами лiмфатичнi периар-терiальнi тхви. У центральнiй частинi В-лiмфоцити, плазмоцити, чимало плазмобластв. На периферiТ -
Рис. 4. Активац1я макрофаг1в у р1зних зонах бшо'Г пульпи з широкими реактивними центрами I розширеними марпнальними зонами.
Оп1к. Л1кування НАЕБ-ЬХ, 21 доба. Забарвлення гематоксил1н-еозин, х100.
малi темнi лiмфоцити. Оточуеться це утворення по-внокровною червоною пульпою з форменими еле-ментами й мiелоцитами (рис. 5).
У бшм пульпi на цей термiн слщ визначити наступ-нi морфофункцiональнi особливостк По-перше, -зростання лiмфатичних вузлиюв у розмiрах, як i в по-передньому термiнi; по-друге, - фактичне зростання !х кiлькостi. Адже часто як i в попередньому терм^, помiтнi нiби переходи одного вузлика в другий. Ха-рактерним також можна рахувати розвинутють пери-артерiальноí Т-залежно! зони i св^лого реактивного центру. Як i на 21 добу, функцюнально-активы макрофаги - або переважно в одый зоы, або фактично в Т- i в В-зонах вузликiв, маргiнальна зона розшире-на, скупчення мегакарюци^в у дiлянцi мiелогенезу.
Отже, виявляеться ыби стала ознака дií НАЕБ-_Х, - розширення маргiнальноí зони вузлиюв. Дiйсно, багато рисункiв можна перелiчити з цiею ознакою саме в селезЫц щурiв без отку, на яких випробо-вувалася дiя НАЕБ як дослiджуваного нового лкар-ського засобу. В селезiнцi щурiв цiеí серií виникало це явище. Та при л^ваны щурiв з опком в поеднаннi НАЕБ-_Х ця ознака нагадуе про себе. ^м того, до-даеться ще й значне розмноження макрофапв i ак-тивацiя !х фагоцитарно! активностi, яка, е вiзитiвкою, що супроводжуе дю на органiзм контрольних щурiв лактопроте!ну.
Рис. 5. Лiмфатична периартерiальна шхва. OniK. Лiкування HAES-LX, 30 доба. Забарвлення гематоксилш-еозин, х400.
У мapгiнaльнiй зонi для яко! характерно и розширення i пpосвiтлення, в стpуктуpi бiлоI пульпи спо-стер^аеться масове заселення моноцитiв, серед яких пом^ы плазмобласти, плазмоцити, мaлi темы лiмфоцити. У сусiднiй чеpвонiй пульт ппертрофоваы pетикуляpнi клiтини, селезiнковi тяжi Бiльpотa з по-мipною цитогеннютю. Структура функцiонaльних зон селезiнки бтьшою мipою залежить вiд функцюналь-ного стану iмунноI та кровотворно! систем, як визна-чають стан гемопоезу, Ытенсивнють iмунноI вiдповiдi й Ыдивщуальну pеaктивнiсть [6].
Висновки. Пiсля застосування для лкування опiковоI травми 5% розчину HAES-LX на 14 добу в селезЫц пожвавлюються процеси мiелопоезу, якi посилюються на 21 добу. Для цього термЫу ствер-джуються стpуктуpнi ознаки aктивностi гуморального iмунiтету та клiтинного iмунiтету, зростае чисельнють та фагоцитарна aктивнiсть мaкpофaгiв. Характерною ознакою впливу HAES-LX е значне розширення марп-нально! зони навколо лiмфоцитapних осеpедкiв бiлоI пульпи, починаючи з 14 доби спостереження.
Перспективи подальших дослщжень. В подал ьш их дослiдженнях доцiльно вивчити компен-саторно-пристосувальн змiни селезiнки пiсля опiку шюри II-III ступеня при викоpистaннi комплексних Ыфузмних колоIдно-гiпеpосмоляpних pозчинiв лак-топроте!ну з соpбiтолом i HAES-LX-5%.
Лтература
1. Кондрацький Б.О. Вплив нового шфузмного препарату HAES-LX-5% на nepe6ir експериментального токсичного гепатиту /
Б.О. Кондрацький, В.Л. Новак, Я.Б. Кондрацький [та iH.] // Експериментальна та клЫчна фiзiологiя i бiохiмiя - 2015. - № 2. -С.19-27.
2. Крылов К.М. Роль раневой инфекции в развитии системного воспалительного ответа у пострадавших с тяжёлой термиче-
ской травмой / К.М. Крылов, О.В. Филиппова, И.В. Шлык, В.А. Ильина // Скорая медицинская помощь. - 2006. - Т. 7, № 3. -С.61-62.
3. Мороз Г.О. Динамка вщносноУ маси наднирникових залоз, тимуса i селезшки щурiв шд впливом пперграв^аци / Г.О.Мороз //
Морфолопя. - 2009. - Т. 3, № 2. - С. 42-46.
4. Нагайчук В.1. Сучасн пщходи до надання допомоги хворим з ошками / В.1. Нагайчук // Мистецтво л^вання. - 2010. - № 5(71). -
С.24-27.
5. Прасолова Л.А. Влияние рестрикционного стресса на некоторые морфофункциональные характеристики селезенки у крыс
разного поведения / Л.А. Прасолова, И.Н. Оськина, С.Г. Шихевич // Морфология. -2004. - Т. 125. С. 59-63.
6. Kebede T. Spleen length in childhood with ultrasound normal based on age at Tikur Anbessa Hospital / T. Kebede, D. Admassie //
Ethiop. Med. J. - 2009. Vol. 47, № 1. - P. 49-53.
7. Noel G. Postburn monocytes are the major producers of TNF-alpha in the heterogeneous splenic macrophage population / G. Noel,
X. Guo, Q. Wang [et al.] // Shock. - 2007. - Vol. 27, № 3. - P. 312-319.
8. Stoecklein V.M. Trauma equals danger- damage control by the immune system / V.M. Stoecklein, A. Osuka, J.A. Lederer // J. Leukoc.
Biol. - 2012. - Vol. 92, № 3. - P. 539-551.
9. Zhao G. Simvastatin reduces burn injury-induced splenic apoptosis via downregulation of the TNF-n/NF-nB pathway / G. Zhao, YM. Yu,
M. Kaneki [et al.] // Ann. Surg. - 2015. - Vol. 261, № 5. - P. 1006-1012.
УДК: 612.46:616.61-089.878:611.61.018
СТРУКТУРН1 ЗМ1НИ В СЕЛЕЗ1НЦ1 ЩУР1В У П1ЗН1Х СТАД1ЯХ ОП1КОВОТТРАВМИ П1СЛЯ КОРЕКЦП 1Н-ФУЗ1ЙНИМ РОЗЧИНОМ HAES-LX-5%
Булько I. В.
Резюме. В експеримент на щурах вивчен структурн1 зм1ни селез1нки при дИ нового колощно-пперосмо-лярного Ыфузмного розчину HAES-LX-5 %. Встановлено морфолопчы зм1ни структурних компонент1в селе-з1нки на п1зн1х стад1ях експериментально! опково! травми п1сля фармаколог1чно1 корекцИ новим 1нфуз1йним розчином HAES-LX-5%. Пюля застосування для л1кування опково! травми 5% розчину HAES-LX на 14 добу в селез1нц1 виникають процеси м1елопоезу, як1 посилюються на 21 добу. Характерною ознакою впливу HAES-LX е значне розширення марпнально! зони навколо л1мфоцитарних осередк1в бто! пульпи, починаючи з 14 доби спостереження.
^^40Bi слова: селез1нка, морфолог1чн1 зм1ни, оп1кова травма, HAES-LX-5%.
УДК: 612.46:616.61-089.878:611.61.018
СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СЕЛЕЗЕНКЕ КРЫС В ПОЗДНЕЙ СТАДИИ ОЖОГОВОЙ ТРАВМЫ ПОСЛЕ КОРРЕКЦИИ ИНФУЗИОННЫМ РАСТВОРОМ HAES -LX -5 %
Булько И. В.
Резюме. В эксперименте на крысах изучены структурные изменения селезенки при действии нового кол-лоидно-гиперосмолярного инфузионного раствора HAES-LX-5%. Установлены морфологические изменения структурных компонентов селезенки на поздних стадиях экспериментальной ожоговой травмы после фармакологической коррекции новым инфузионным раствором HAES -LX-5 %.
После применения для лечения ожоговой травмы 5% раствора HAES -LX на 14 сутки в селезенке возникают процессы миелопоэза, которые усиливаются на 21 сутки. Характерным признаком влияния HAES-LX является значительное расширение маргинальной зоны вокруг лимфоцитарных ячеек белой пульпы, начиная с 14 суток наблюдения.
Ключевые слова: селезенка, морфологические изменения, ожоговая травма, HAES-LX-5 %.
UDC: 612.46:616.61-089.878:611.61.018
STRUCTURAL CHANGES IN THE SPLEEN OF RATS' IN THE LATER STAGES OF BURN INJURY AFTER CORRECTION INFUSION HAES-LX- 5%
Bul'ko I. V.
Abstract. Introduction. The bodies of the immune system and immunocompetent blood cells are able to very quickly and finely respond to changes in environmental conditions. The combination of benign qualities crystalloid component and low starch tetra occurred during the process of creating a new hyperosmolar colloid infusion solution HAES-LX- 5 %.
The purpose of the study - to establish morphological signs of damage and compensatory-adaptive changes in rats' spleen after 14, 21 and 30 days after the burn skin II-III degree and manifestations of damage correction resulting from use of integrated infusion of colloid-hyperosmolar solutions HAES-LX- 5%.
Materials and methods. Experimental studies of burn injury were made on 30 rats of both sexes weighing 150170 g. In the group number 1 (control group - 10 animals) were rats without care after for 5-6 minutes intravenous infusion of the inferior vena cava 0,9% NaCl solution at a dose of 10 ml/kg. The group number 2 (10 animals) - rats with burns, which was performed for 5-6 minutes intravenous infusion of the inferior vena cava solution of 0,9% NaCl solution at a dose of 10 ml/kg. The group number 3 - the rats with thermic injuries, which was performed for 5-6 minutes intravenous infusion of the inferior vena cava solutions HAES-LX- 5% (10 animals).
Results and discussion. The morphological changes of the structural components of the spleen in the later stages of the experimental burn injury after a pharmacological correction of a new infusion solution HAES-LX-5% have been installed.
On the 14 day there was statistically significant increase of cell growth continued by 14.8 % in comparsion with intact animals. In the future, the number of cells in S- phase decreased. Compared to intact animals on the 30, 60, 90 days the cells in this phase were less by 13.2%, 22.0%, 40.0% respectively. Comparison of distribution of nuclei in the kidney cortex cell cycle of immature and mature animals showed that the number of cells in S phase 7 and 14 days was statistically more higher (by 23.6% and 17.5% respectively) in immature.
Conclusions. After use in the treatment of burn trauma 5% solution HAES-LX on the 14 day in the spleen myelopoi-esis processes become more intensive and are enhanced by 21 days. A characteristic feature of the effect of HAES-LX is a significant expansion of the marginal zone surrounding the white pulp lymphocytic cells, starting from the 14 - day observation period.
Keywords: spleen, morphological changes, burn injury, HAES-LX-5%.
Рецензент - проф. Старченко 1.1.
Стаття надшшла 22.03.2016 року
