CC BY
73
HayKOBMM BiCHMK ^tBiBCtKoro Ha^OHa^tHoro yHiBepcMTeTy
BeTepMHapHoi Megw^HM Ta öioTexHO^oriw iMeHi C.3. I^M^Koro
Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies
ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online
doi: 10.32718/nvlvet8813 http://nvlvet.com.ua
UDC 619:611.1/.8: 611.018
Structural-functional characteristics of thymus in piglets with signs of latent and subclinic PCV2-infection
V.V. Evert
Dnipro State Agrarian and Economic University, Dnipro, Ukraine
Article info
Received 16.08.2018 Received in revised form
11.09.2018 Accepted 12.09.2018
Dnipro State Agrarian and Economic University, Dnipro, Mandrikovskaya Str., 276, 49100, Ukraine. Tel.: +38-099-545-33-31 E-mail: morfologagro@gmail.com
Evert, V. V. (2018). Structural-functional characteristics of thymus in piglets with signs of latent and subclinic PCV2-infection. Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies, 20(88), 72-79. doi: 10.32718/nvlvet8813
Circovirus type II disease is an infectious disease with significant economic impacts on the pig industry, which has become global in the pig population (PCVD). The most common form of PCV2-infection has long been considered a PCV2-systemic disease, but recently latent and subclinical forms of PCV2-infection have become of particular importance. The main "target" for PCV-2 is the immune system, and the multiplication of PCV-2 in the cells of the immune system leads to their death and development of immunodeficiency state. The immune system, together with the nervous and endocrine systems, plays an important role in maintaining the body's homeostasis and ensures its adaptation to the effects of unfavorable environmental factors. The organs of the immune system of pigs include bone organs, thymus, spleen, lymph nodes, as well as diffuse and aggregated lymphatic formations of the walls of the digestive canal and respiratory tract. Thymus is the central organ of lymphocytopoiesis and imunopoiesis, in it occurs differentiation of all cellular forms of mature T-lymphocytes in the pre-T-lymphocyte stage, which migrate from the bone marrow to the bloodstream. The growth and development of the thymus, as well as the bone organs, is in direct interaction with the growth and development of the spleen, lymph nodes and is reflected in the structure of the interstitial connective tissue and lymphoid parenchyma, and the question of the structural and functional characteristics of the thymus piglets with signs of latent and subclinical PCV-2 infection in accessible the scientific literature is not sufficiently elucidated and requires a detailed study. Purpose: determination of the structural and functional characteristics of the thymus of piglets with signs of latent and subclinical PCV-2-infection. The work was carried out in pig farms of Ukraine, with intensive technology of pig rearing, at the department of normal and pathological anatomy of agricultural animals and the Scientific and Research Center for Biosafety and Environmental Control of the Agroindustrial Complex Resources of Dnipro State Agrarian and Economic University. To determine the structural and functional characteristics of the thymus ofpiglets at different forms of the of PCV-2-infection, monitoring studies of blood sera were carried out by quantitative PCR-analysis. A total of275 samples of blood serum from piglets of 5-16 weeks of age were investigated. For pathomorphological studies with the method of acute bleeding, animals with signs of latent PCV2-infection (in 1 cm3 of blood serum of 103-104 copies of the genome of PCV-2 equivalents) were slaughtered and animals with signs of subclinical PCV2 infection (in 1 cm3 of blood serum 105106 copies of the gene equivalents of PCV-2) 6 heads. By anatomical preparation, the thymus was removed, fixed in a 10% solution of neutral formalin, poured into paraffin, sections were stained with hematoxylin and eosin and azur II eosin according to generally accepted techniques. In the paraffin sections, the presence of PCV-2 antigen (immunohistochemical staining) was also determined. In the lymphoid parenchyma of the thymus, the percentage ratio between individual cells (large, medium, small lymphocytes, plasmocytes and reticular cells), macrophages and other cells was determined. Cell counting of parenchyma was performed on dasgs stained with azur II eosin at an increase of 10 x 100 under the immersion for every 100 cells on ten preparations in 20 fields of vision for each individual group of animals. Based on the data obtained, the average percent content of each cell type was determined. The author, on the basis of patho-histological and immunohistochemical studies, determined the structural and functional characteristics of the thymus of piglets with signs of latent and subclinical PCV2-infection. It has been established that in piglets with signs of subclinical and latent PCV2-infection, pathogistological changes of the thymus do not differ significantly from the corresponding thymus parameters of clinically healthy animals free from PCV-2. At the same time, there is a tendency to decrease the number of lymphoid cells, mainly immunoblasts and lymphocytes, and, accordingly, the area of the particle cortex, which is more pronounced in thymus of pigs with signs of subclinical PCV2-infection.
Key words: PCV2-infection, subclinical and latent forms, viral load, thymus, immunohistochemistry.
Структурно-функщональна характеристика тимуса поросят з ознаками латентно1 та суoклiшчноl цирковiрушоl iнфекцil П типу
В.В. Еверт
Днтровський державний аграрно-економiчний ^верситет, м. Днтро, Украша
РСУ2-гнфекцгя набула глобального значення серед популящг свиней та мае значний економ1чний вплив на галузь свинарства. Найбтьш розповсюдженою формою прояву РСУ2-1нфекцгг тривалий час вважали - РСУ2-системне захворювання, але останнм часом особливого значення набувае латентна та субкл1тчна форми прояву РСУ2-1нфекцгг. Основною "мШенню" для РСУ-2 е Iмунна система, а розмноження збудника у клгтинах гмунно'г системи приводить до гх гибел11 розвитку 1мунодеф1цитного стану. Тимус - центральний орган лмфоцитопоеза та ¡мунопоеза, в ньому зактчуеться диференцгацгя всгх клгтинних форм зртих Т-лмфоцит1в на стадп пре-Т-лшфоцит1в, що м1грують з тсткового мозку з кровотоком. Р1ст I розвиток тимуса, як I ксткових оргатв, перебувае в прямш взаемодИ з ростом I розвитком селезтки, лгмфатичних вузлЬв, що вЬдображаеться в будов1 м1жчасто-чковог сполучног тканини та лмфогдног паренх1ми, а питання структурно-функщональних характеристик тимуса поросят з ознаками латентног та субклт1чног РСУ2-тфекцп потребують детального вивчення. Метою досл1дження було визначення стру-ктурних та функщональних характеристик тимуса поросят з ознаками латентног та субклт1чног РСУ2-тфекцп. Для досягнення мети проведено мошторингов1 досл1дження 275 проб сироваток кров( 5-16-тижневих поросят методом ктьккного ПЛР-аналгзу. Для патоморфологгчних дослгджень методом гострого знекровлення проводили забш поросят з ознаками латентног РСУ2-1нфекцгг (в 1 см3 сироватки кров( 103-104 копш геном екв1валент1в РСУ-2) та субкл1н1чно'г РСУ2-1нфекцгг (в 1 см3 сироватки -105-106 копш геном екв1валент1в РСУ-2). Шляхом анатом1чного препарування в1дбирали тимус, фжсували в 10% розчиш нейтрального формал1щ>, заливали в парафгн, зр1зи забарвлювали гематоксилтом та еозином та азур II еозином. В парафтових зр1зах також визначали наявнсть антигену РСУ-2 (гмуноггстохгмгчне забарвлення). Автором на тдставг патоггстолог1чного та ¡муно-г1стохгм1чного дослгджень визначена структурно-функщональна характеристика тимуса свиней з ознаками латентног I субклт1-чнш РСУ2-тфекцп. Встановлено, що у поросят з ознаками субкл1н1чнш I латентнш РСУ2-тфекцп патог1столог1чж змти тимуса не мають суттевих в1дм1нностей пор1вняно з вгдповгдними показниками тимуса кл1н1чно здорових та вшьних в1д РСУ-2 тварин. Водночас спостеркаеться тенденщя до зменшення ктькост1 лшфогдних клгтин, в основному ШунобластЬв I лшфоцитЬв, а також, в1дпов1дно, площ1 корковог речовини часточок, що бтьше виражено в тимуЫ свиней з ознаками субклт1чног РСУ2-тфекцп.
Ключовi слова: РСУ2-гнфекцгя, субклт1чна I латентна форми, в1русне навантаження, тимус, 1муног1стох1м1я.
Вступ
Цирков1русна хвороба II типу - шфекцшне захворювання, що набуло глобального значення серед популяцп свиней та мае значний економ1чний вплив на галузь свинарства (Chianini et al., 2003; Opriessnig et al., 2007; А1агсоп et al., 2013; Oliver-Ferrando et al., 2016).
Найбшьш розповсюдженою формою прояву PCV2-шфекцп тривалий час вважали - PCV2-системне захворювання, але останшм часом особливого значення набувае латентна та субклшчна форми прояву PCV2-шфекцп. Для д1агностики цих форм прояву PCV2-шфекцп визначають в1русне навантаження PCV-2 за допомогою кшьшсного ПЛР у сироватках кров1 тварин (Brunborg et al., 2004; Mcintosh et al., 2009; Young et al., 2011; Lopez-Rodriguez et al., 2016).
Основною "мшенню" для PCV-2 е 1мунна система, а розмноження збудника у клгтинах 1мунно! системи призводить до !х гибел1 i розвитку 1мунодефщитного стану. 1мунна система з нервовою та ендокринною системами виконуе важливу роль у пвдтриманш гоме-остазу оргашзму i забезпечуе його адаптацш до ди несприятливих факторiв зовшшнього середовища. До оргашв гмунно! системи свиней, вщносяться кiстковi органи, тимус, селезшка, лiмфатичнi вузли, а також дифузш та агреговаш лiмфатичнi утвори стшок травного каналу i дихальних шляхiв (Krakowka et al., 2001; Goralsky et al., 2011; Nauwynck et al., 2012; Gavrilin and Evert, 2015; Gavrilina and Evert, 2016).
Тимус - центральний орган лiмфоцитопоеза та iмунопоеза, в ньому зашнчуеться диференщащя вах клгтинних форм зрiлих Т^мфоципв на стадп пре-Т-
лiмфоцитiв, що мнрують з шсткового мозку з кровотоком. Рют i розвиток тимуса, як i шсткових оргашв, перебувае в прямш взаемодп з ростом i розвитком селезшки, лiмфатичних вузлТв, що вщображаеться в 6удовГ м1жчасточково! сполучно! тканини та лГмфо!д-но! паренхiми, а питання структурно-функцюнальних характеристик тимуса поросят з ознаками латентно! та субктшчно! PCV-2 шфекцп у доступнш науковш лiтературi не висвилеш та потребують детального вивчення (Baimishev et al., 2009; Doster et al., 2010; Dvorak et al., 2013; Gavrilin et al., 2017).
Мета i завдання дослгдження: визначення струк-турно-функцюнально! характеристики тимуса поросят з ознаками латентно! та субктшчно! PCV2-iнфекцi!.
MaTepiai i методи дослщження
Робота виконувалась у свинарських господарствах Укра!ни з шгенсивною технолопею вирощування свиней, на кафедрi нормально! i патолопчно! анатомп с.-г. тварин i науково-дослвдному цен^ бюбезпеки та еколопчного контролю ресурав АПК Дншровського державного аграрно-економiчного ушверситету.
Для визначення структурно-функцюнальних характеристик тимуса поросят за рГзних форм перебну PCV2-iнфекцi! проводили мошторишовГ дослвдження сироваток кровГ методом кшьшсного ПЛР-аналiзу. Всього було дослщжено 275 зразшв сироваток кровГ вГд поросят 5-16-тижневого вГку. За результатами дослiджень зпдно з рекомендацiями (Т. Opriessnig et al.) ва тварини були подшеш на 4 групи: 1 група -менше 103 копГй геном еквiвалентiв в 1 см3 сироватки кровГ - умовно негативнi по ввдношенню до PCV-2
(n = 63); 2 rpyna - 103-104 Konin reHOM eKBiBajeffriB b 1 cm3 CHpoBaTRH - TBapHHH 3 o3HaKaMH jaTeHTHoi PCV2-iH$eK^l (n = 57); 3 rpyna - 105-106 Konin reHOM eKBiBaneHTiB y 1 cm3 cupoBarKH - TBapHHH 3 03HaKaMH cyÖK^iHinHOi PCV2-iH$eK^l (n = 48); 4 rpyna - 107 Ta öijibme Konin reHOM eKBiBajieHTiB b 1 cm3 CHpoBaTRH -TBapHHH KjiHinHO xBopi Ha PCV2-iH$e^iM (n = 107) (Opriessnig et al., 2007).
,3,ja naTOMop^ojorinHHx gocjig®eHb MeiogoM rocT-poro 3HeKpoBjeHHH npoBoguju 3a6in nopocaT gpyroii Ta rpeTboi' rpyn no 6 rojiB. ffljaxoM aHaTOMiHHoro npena-pyBaHHa Big6upajH THMyc, ^iKcyBajH b 10% po3HHHi HeÖTpajbHoro $opMajiHy, 3ajHBajH b napa^iH (ricron-jacr), 3pi3H 3a6apBjMBajH reMaTOKCHjiHOM Ta eo3HHOM Ta a3yp II eo3HHOM 3a 3arajbHonpHHH3THMH MeTogHKaMH (Goralsky et al., 2011). B napa^iHOBHx 3pi3ax TaKo® BH3HanajH HaaBHicrb aHTHreHiB PCV-2 (iMyHoricroxiMi-HHe 3a6apBjeHHa) (Gavrilina and Evert, 2016).
y THMyci MeTogoM KpanKOBoro nigpaxyHKy BH3Hana-JH BigHOCHy njO^y Mi®HaCTOHKOBOl CnOjyHHOl TKaHHHH Ta mM^oigHol napeHxiMH, a TaKO® BigHOCHy njo^y KipKOBOi Ta MO3KOBOI 3OH HacTOHOK. ,3,ja цboro npoBO-gHjH gu^epeH^noBaHHÖ nigpaxyHOK KpanoK, aKi noT-panHjH Ha BignoBigHy CKjagoBy ricTonpenapaTy, He MeHme Hi® Ha n'aTH 3pi3ax, OTpHMaHHx 3 KO®Horo $pa-rMeHTy, 3a ^opMyjoM S BigH = Pt : P3 • 100%, ge S BigH - BigHOCHa njo^a BignoBigHHx KOMnoHeHTiB, %; Pt -KijbKicTb KpanoK, ^o norpanHjH Ha BignoBigHi TKaHHH-Hi KOMnoHeHTH; P3 - 3arajbHa KijbKicTb KpanoK, ^o noTpanHjH Ha bcm njo^y ricTonpenapaTy.
B mM^oigmä napeHxiMi THMyca BH3HanajH BigcoT-
KOBe cniBBigHomeHHH Mi® OKpeMHMH KjiTHHaMH (BejH-
Ki, cepegHi, Maji mм$oцнтн, nja3MaTHHHi Ta peTHKyja-pHi KjiTHHH), MaKpo^arH Ta iHmi KjiTHHH. nigpaxyHOK KjiTHH napeHxiMH npoBoguju Ha npenapaTax 3a6apBje-hhx a3yp II eo3HHOM npH 36ijbmeHHi 10 x 100 nig iMep-cieM i3 po3paxyHKy Ha KO®Hi 100 KjiTHH Ha gecaTH npe-
napaTax y 20 nojax 3opy no KO®Hin OKpeMin rpyni TBa-pHH. Ha ocHOBi ogep®aHHx gaHHx BH3HanajH cepegmn
BigCOTKOBHH BMiCT KO®HOrO BHgy KjiTHH.
^^poBi noKa3HHKH pe3yjbraTiB gocjig®eHb o6po6-jajH BapiaqinHO CTaTHCTHHHHMH MeTogaMH Ha nepcoHa-jbHOMy KOMn'MTepi 3a gonoMoroM KOMn'MTepHoii npo-rpaMH "Excel" 3 naKeTOM "Microsoft Office 2010". ric-TOJoriHHi npenapaTH nporjagaju 3a gonoMoroM CBirao-Boro MiKpocKona Olympus CX, a Mkpo^OTOipa^yBaHHa 3giöcHMBajH 3 BHKopHcraHHaM BigeoKaMepu MiKpocKona CHCTeMH Leica DM 1000.
Pe3ymTara Ta 'ix oßroBopeHHH
THMyc e ^HipajbHHM opraHOM iMyHHoro 3axucTy ccaвцiв i nтнцi. y HbOMy Big6yBaeTbca aHTHreHHe3aje-®Ha npoji^epa^a i gu^epeH^a^ T-mм$oцнтiв Ta eHgoKpHHHa $yH^ia, ^o nojarae y BHpo6jem 6iojori-HHO aKTHBHHx peHOBHH (THpO3HH, th MyjiT, THMonoe-THH).
y nopocaT THMyc e c^opMOBaHHM napeHxiMaTO3HHM OpraHOM, aKHH aHaTOMiHHO nogijeHHn Ha munHy Ta rpygHy HacTKH, munHa HacTKa CBoeM HeproM po3gijeHa Ha napHy Ta HenapHy gijaHKH.
y nopocaT 3a PCV2-iH$eKqiI THMyc MaKpocKoniHHO He MaB naTOJoriHHHx 3MiH. y nopocaT i3 jaTeHTHOM $opmom iH^eKnii a6cojMTHa Maca CKjaja 10,83 ± 1,01 r, a BigHOCHa - 0,06 ± 0,006% (Ta6j. 1). ^OB®HHa mHHHOi napHOi' gijaHKH THMyca caraja 71,23 ± 6,65 MM, mHnHoi HenapHoi - 65,55 ± 6,12 MM, a rpygHOi jume 28,13 ± 2,63 mm.
y nopocaT 3a cy6KjiHiHHOi $opMH PCV2-iH$eKnii gaHi noKa3HHKH cyrreBO He Bigpi3HaMTbca. TaK, a6co-jMTHa Maca opraHy b cepegHbOMy CTaHOBHTb 9,30 ± 0,87 r, BigHOCHa - 0,05 ± 0,004%, goB®HHa mun-hoi HacTKu: napHOi gijaHKH - 69,14 ± 6,46 mm, HenapHOi gijaHKH - 64,41 ± 6,01 mm, a rpygHOi' - 31,47 ± 2,93 mm.
Тa6^нцн 1
OpraHOMeTpuHHi noKa3HHKH THMyca nopocaT 3a PCV2-iH$eKniI, (M ± m, n = 6)
Mop^oMeTpHHHi noKa3HHKH
OopMH PCV2-iн^eкцil
^aTeHTHa
Cy6KjiHiHHa
A6cojMTHa Maca, r 10,83 ± 1,01 9,30 ± 0,87
BigHOCHa Maca, % 0,06 ± 0,006 0,05 ± 0,004
goB®HHa muftHol napHOi HacTKH, mm 71,23 ±6,65 69,14 ± 6,46
goB®HHa muHHoi HenapHOi HacTKH, mm 65,55 ± 6,12 64,41 ± 6,01
goB®HHa rpygHOi HacTKH, mm 28,13 ±2,63 31,47 ± 2,93
ricTOJoriHHO THMyc CKjagaeTbca 3 cnojyHHOTKa-HHHHoI CTpoMH, ^o npegcTaBjeHa TOHeHbKOM KancyjOM i Mi®HacTOHKOBHMH cnojyHHOTKaHHHHHMH nepeTHHKaMH i3 HHCneHHHMH KpOBOHOCHHMH Ta jiM^aTHHHHMH cygu-HaMH, ejeMeHTaMH HepBOBOl TKaHHHH. CnojyHHOTKa-HHHHa CTpoMa no6ygoBaHa nyxKOM cnojyHHOM TKaHH-hom Ta agнnoцнтaмн, KijbKicTb aKHx, pa3OM i3 iHmHMH noKa3HHKaMH, e O3HaKOM BiKOBOi iнвoJMцil gaHoro opraHy. napeHxiMy opraHy yTBopMe jiM^olgHa TKaHH-Ha, ^o npegcTaBjeHa OKpeMHMH HacTOHKaMH, po3gije-hhmh Mi® co6oM npomapKaMH Mi®HacTOHKOBOi cnojyH-Hol' TKaHHHH. y KO®Hiö нacтoнцi po3pi3HaMTb KipKOBy nepu^epiÖHy 3OHy i MO3KOBy - ^mpajbHy.
Mop$o$yHKqioHajbHi oco6jHBOCTi TKaHHHHux kom-noHeHTiB THMyca nopocaT xapaKTepu3yMTbca 3HaHHHM po3bhtkom jiM^ol'gHoI TKaHHHH i cja6KHM CTpoMajbHHx CTpyKTyp. TaK, KijbKiCTb jiM^OlgHOl TKaHHHH y BCix HacTKax THMyca e MaKCHMajbHOM He3aje®Ho Big $opMH iH^eKniÖHoro npoцecy Ta Bapiroe y Me®ax 80-86% (Ta6j. 2).
HaÖMeHma BigHOCHa njo^a mM^oigHoI TKaHHHH BigMineHa y mHHHiä naprnö нacтцi THMyca, THMHacoM aK y mHHHiö HenapHiö i rpygHiö naci^i cyrreBO He Bigpi3-HaeTbca. npH nopiBHaHHi KijbKOCTi jiM^oiigHoi TKaHHHH THMyca nopocaT 3a pi3Hoi' $opMH iH^eKniÖHoro npoцecy BCTaHOBjeHo, ^o y nopocaT i3 jaieHTHOM $opmom BOHa
вища, н1ж 1з субклшчною. Так, у тимус поросят 1з латентною формою PCV2-iнфекщi ввдносна площа л1мфовдно1 тканини у шийнiй парнiй частщ складае 82,16 ± 7,67%, у шийнш непарнiй - 85,25 ± 7,96%, у груднiй - 86,64 ± 8,09%. У тимусi поросят за субкль
шчно! шфекци даний показник не перевищуе 80,03 ± 7,47% у шийнiй парнiй частщ, 83,19 ± 7,76% у шийнш непарнш частцi та 82,96 ± 7,75% у груднiй частцi.
Таблиця 2
Вщносна площа тканинних компонеипв тимуса поросят за латентно! i субклiнiчноi PCV2-iнфекцii, % (М ± т, п = 6)
Показиики Шийна Шийна непарна Грудна Середне
парна частка частка частка значення
за латентно! форми PCV2-iифекцii
Лiмфоiдна тканина, % 82,16 ±7,67 85,25 ± 7,96 86,64 ± 8,09 84,68
юркова зона, % 55,93 ± 5,22 60,23 ± 5,63 59,81 ± 5,59 58,66
мозкова зона, % 26,23 ± 2,45 25,02 ± 2,34 26,83 ± 2,51 26,03
Стввщношення юрково! / мозково! зони 1 : 2,13 1 : 2,41 1 : 2,23 1 : 2,26
Сполучиоткаииииа строма, % 17,84 ± 1,67 14,75 ± 1,38 13,36 ± 1,25 15,32
Середня кiлькiсть тимусиих тшець (Гасаля) иа одну 1,70 ± 0,09 1,4 ± 0,13 1,5 ± 0,14 1,53
часточку
Середнiй дiаметр тимусиих тшець, мкм 28,03 ± 2,62 30,16 ±2,82 19,11 ± 1,78 25,77
за субклшчио! форми PCV2- ■шфекци
Лiмфоiдна ткаиииа, % 80,03 ± 7,47 83,19 ±7,76 82,96 ± 7,75 82,06
юркова зоиа, % 53,19 ±4,97 57,09 ± 5,33 54,32 ± 5,07 54,87
мозкова зона, % 26,84 ±2,51 26,10 ± 2,43 28,64 ± 2,67 27,19
Стввщношення юрково! / мозково! зоии 1 : 1,98 1 : 2,19 1 : 1,90 1 : 2,02
Сполучнотканинна строма, % 19,97 ± 1,86 16,81 ± 1,57 17,04 ± 1,59 17,94
Середня кiлькiсть тимусиих тшець (Гасаля) иа одну 1,6 ± 0,15 1,5 ± 0,14 1,1 ± 0,10 1,40
часточку
Середнш дiаметр тимусиих тшець, мкм 18,9 ± 1,76 21,34 ± 1,99 20,71 ± 1,93 20,32
Вщносна площа сполучнотканинно! строми тимуса поросят ввдповщно варше ввд 13 до майже 20%. Найбiльше значения даного показника характерне для тимуса поросят iз субклшчною формою PCV2-шфекци: 19,97 ± 1,86% у шийнш парнш частцi та 17,04 ± 1,59% у груднiй частщ, 16,81 ± 1,57 у шийнш непарнш частщ. За латентно! шфекци вщносна площа сполучнотканинно! строми тимуса у парнш шийнш частщ не перевищуе 17,84 ± 1,67%, у непарнш шийнш 14,75 ± 1,38%, i груднiй 13,36 ± 1,25%.
При пстолопчних дослiджениях встаиовлена добре виражена часточковiсть тимуса. Форма часточок рiзномаиiтна - округла, овальна, трикутна, полиона-
льна, розмiри варшють вiд дрiбних до крупних. Деяш часточки неповнiстю роздiленi мiж собою прошарка-ми пухко! сполучно! тканини. .Шмфо1дна тканина у часточках роздшена на периферiйну темнiшу i центральну свiтлiшу зони, межа м1ж якими чiтко виражена. У вах без винятку часточках тимуса перифе-рiйна (к1ркова) зона переважае над центральною (моз-ковою).
При морфометричних дослщженнях було встанов-лено, що у поросят iз латентною формою PCV2-шфекцп у часточках тимуса вщносна площа к1рково! зони вища порiвняно з поросятами iз субклiнiчною формою (рис. 1).
Рис. 1. Пстолопчш препарати грудно! частки тимуса поросяти: а - з ознаками латентно! форми PCV2-iнфекцii; б - з ознаками субклшчно! форми PCV2-iнфекцi!. Зменшения площi к1рково! речовини за субклшчно! форми
PCV2-iнфекцi!. Гематоксилш та еозин. х 200
TaK y тиму« пopocят зa лaтeнтнoï PCV2-iнфeкцiï мaкcимaльнy вiднocнy плoщy кipкoвoï зoни чacтoчoк вiдмiчeнo y шийнш нeпapнiй чacтцi 6G,23 ± 5,63% тa гpyднiй 59,81 ± 5,59, i мaйжe нa 5% мeншe y пapнiй шийнiй чacтцi 55,93 ± 5,22%. Зa cyбклiнiчнoï iнфeкцiï дaний пoкaзник y шийнш нeпapнiй чacтцi тимyca cягae 57,G9 ± 5,33%, i нe пepeвищye 54,32 ± 5,G7% y гРуднш тa 53,19 ± 4,97% y шийнш пapнiй чacтцi. Cлiд з^гачти, щo вiднocнa плoщa кipкoвoï зoни чacтoчoк тимyca тa ïï товщига e пoкaзникoм фyнкцioнaльнoï aктивнocтi дaнoгo oprarn. Звяжеючи нa цe мoжнa cкaзaти, щo виявлeнi пoкaзники вкязують ня дocить виcoкий мopфoфyнкцioнaльний айн opгaнa i ввдшвь дae м^зни^м здopoвиx твapин.
Biднocнa плoщa мoзкoвoï зoни чacтoчoк тимyca у пopocят зя cyбклiнiчнoï PCV2-iнфeкцiï мaйжe oднaкo-вя у шийнiй пapнiй чястщ - 26,23 ± 2,45% i ^уднш чacтцi 26,83 ± 2,51% тя дeщo нижчe у шийнш ^rnp-нiй чacтцi 25,G2 ± 2,34%. Зя лaтeнтнoï PCV2-iнфeкцiï дяний пoкaзник у шийнiй пapнiй чacтцi мaйжe oднa-кoвий iз вiдпoвiднoю чacткoю тимyca пopocят з лaтe-нтнoю фopмoю 26,84 ± 2,51%, дeщo вищий у шийнiй нeпapнiй чacтцi - 26,1G ± 2,43% тя вищe у гpyднiй чacтцi 28,64 ± 2,67%.
Щoдo cпiввiднoшeння кipкoвoï i мoзкoвoï зoни чя-cтoчoк, тo бaчимo, щo вoнo виcoкe у чacтoчкax тимyca
пopocят iз лaтeнтнoю фopмoю i дeщo нижчe у пopocят iз cyбклiнiчнoю фopмoю. TaK, у шийнiй пapнiй чacтцi тимyca пopocят з лaтeнтнoю PCV2-iнфeкцieю ^введ-нoшeння кipкoвoï i мoзкoвoï зoни cклaдae 1 : 2,13, a з cyбклiнiчнoю - 1 : 1,98; у шийнш нeпapнiй - 1 : 2,41 тя 1 : 2,19; у ^удий - 1 : 2,23 тя 1 : 1,9 в^тав^та.
У мoзкoвiй зoнi чacтoчoк тимyca виявляютьcя em-тeлiaльнi тимycнi тшьця (Гacaля), пpoтe ïxнi poзмipи нeoднaкoвi, у дeякиx чacтoчкax вoни мoжyть бути вiдcyтнi, пooдинoкi чи yтвopювaти cкyпчeння. Taкoж зycтpiчaютьcя пpocтi тиму^ тiльця, вoни oднopiднi, гoмoгeннi, eoзинoфiльнi з нeвeликими poзмipaми тя шapyвaтi, yтвopeнi бaгaтьмa eпiтeлiopeтикyлoцитaми у cram диcтpoфiï, вoни пepeвaжнo бiльшi зя poзмipa-ми i yтвopюють cкyпчeння.
Bcтaнoвлeнo, щo у тимyci пopocят iз лaтeнтнoю фopмoю PCV2-iнфeкцiï cepeдня кiлькicть тимycниx тiлeць ня oднy чacтoчкy нe пepeвищye 1,7G ± G,G9 iз cepeднiм дiaмeтpoм 28,G3 ± 2,62 мкм у шийнш пapнiй чacтцi, дeщo мeншe 1,4 ± G,13, aлe iз бшьшим cepeд-нiм дiaмeтpoм - 3G, 16 ± 2,82 мкм у шийнш нeпapнiй чacтцi тя cepeдньoю кiлькicтю 1,5 ± G,14 i мшмяль-ним дiaмeтpoм 19,11 ± 1,78 мкм у гpyднiй чacтцi (pиc. 2).
Рис. 2. Гicтoлoгiчний пpeпapaт гpyднoï чacтки тимyca пopocяти: a - з знякями лaтeнтнoï фopми PCV2-iнфeкцiï; б - з oзнaкaми cyбклiнiчнoï фopми PCV2-iнфeкцiï. Змeншeння кiлькocтi тя дiaмeтpy тимycниx тжць зя cyбклiнiчнoï фopми PCV2-iнфeкцiï. ^мяте^ил^ тя eoзин. x 2GG
Пopiвнянo мeншy кiлькicть тимycниx тiлeць i мeнший ïx дiaмeтp вiдмiчeнo у тимуа пopocят iз cyб-клшчшю PCV2-iнфeкцieю. Тяк, у нaймeншy cepeдню кiлькicть тимycниx тiлeць мяють чacтoчки тимyca гpyднoï чacтки 1,1 ± G,1G, пpoтe вoни дocтaтньo вeли-киx poзмipiв, ïxнiй cepeднiй дiaмeтp cягae 2G,71 ± 1,93 мкм. У чacтoчкax шийнoï нeпapнoï чacтки тимyca cepeдня кiлькicть тимycниx тжць cклaдae 1,5 ± G,14 iз cepeднiм дiaмeтpoм 21,34 ± 1,99 мкм. У шийнш пapнiй чястш тимyca cepeдня кiлькicть тиму-crhx тiлeць дocтaтньo виcoкa - 1,6 ± G,15, пpoтe ïxнiй дiaмeтp нaймeнший i нe пepeвищye 18,9 ± 1,76 мкм.
Отжe, ня ткaниннoмy piвнi cтpyктypнoï opгaнiзaцiï у тимуа те вiдмiчeнo cyттeвиx пopyшeнь зя PCV2-
iнфeкцiï дpyгoгo типу, oкpiм нeзнaчнoгo знижeння вiднocнoï плoщi кipкoвoï зoни чacтoчoк тимyca, змe-ншeння cepeдньoï кiлькocтi тимycниx тжць i ïx шя-pyвaтoï cтpyктypи, щo бiльшe виpaжeнo зя cyбклiнiч-нoï фopми iнфeкцiï.
Цитoapxiтeктoнiкa чacтoчoк тимyca пopocят пpeд-cтaвлeнa piзнoмaнiтними клiтинaми гeмaтoгeннoгo тя eпiтeлiaльнoгo пoxoджeння. Дo клiтин гeмaтoгeннoгo пoxoджeння вiднocять yci фopми лiмфoцитiв (мaлi, cepeднi, вeликi, iмyнoблacти), мaкpoфaги тя клгтини кpoвi (epитpoцити, eoзинoфiли, бaзoфiли, нeйтpoфi-ли). Щiльнicть ïx poзмiщeння нeoднaкoвa у кipкoвiй i мoзкoвiй зoнax чacтoчoк, тяк, у кipкoвiй зoнi клiтини,
ocoбливo лiмфoцити poзтaшoвaнi щiльнo, a у мoзкoвiй - знaчнo piдшe.
Окpiм клiтин гeмaтoгeннoгo пoxoджeння, ocтoв чacтoчoк тимyca фopмyють eпiтeлiopeтикyляpнi кль тини дeкiлькox видiв: oпopнi клгтини, з якиx yтвope-ний кopтикo-мeдyляpний бap'ep, зipчacтi клiтини, щo пpoдyкyють бioлoгiчнo aктивнi peчoвини, тя клтгини-няньки, як1 й зaбeзпeчyють aнтигeннeзaлeжнy пpoлi-фepaцiю тя дифepeнцiaцiю лiмфoцитiв. Цi клiтини пpиcyтнi як у ^^вш, тяк i в мoзкoвiй зoнi чacтoчoк тимyca, пpoтe у зв'язку iз piзнoю щiльнicтю poзмi-
щeння лiмфoцитiв, eпiтeлiopeтикyлoцити кpaщe ^o-глядaютьcя у мoзкoвiй зoнi, гipшe у кipкoвiй.
Клiтинний cклaд чacтoчoк тимyca пopocят xapa^ тepизyeтьcя пepeвaжaнням клiтин лiмфoïднoгo pядy, нacaмпepeд мaлиx i cepeднix лiмфoцитiв, блacтiв i вeликиx лiмфoцитiв. Зaгaльнa кiлькicть цт клiтин знaчнo вищя у ^товт зoнi чacтoчoк тимyca, cягaючи 9G-8G%, i дeщo нижчя у мoзкoвiй зoнi - лишe 8G-75%. Пopiвнюючи звряльну кiлькicть лiмфoïдниx клiтин у чacтoчкax тимyca пopocят зя PCV2-iнфeкцiï, бaчимo, щo зя cyбклiнiчнoï ïï фopми кiлькicть ïx мeншa нЬк у тимyci пopocят зя лaтeнтнoï фopми (pиc. 3).
Рис. 3. Гicтoлoгiчний пpeпapaт гpyднoï чacтки тимyca пopocяти (кipкoвa peчoвинa): a - з oзнaкaми лaтeнтнoï' фopми PCV2-iнфeкцiï'; б - з oзнaкaми cyбклiнiчнoï фopми PCV2-iнфeкцiï'. Змeншeння кiлькocтi лiмфaтичниx клiтин зя cyбклiнiчнoï фopми PCV2-iнфeкцiï'. Гeмaтoкcилiн тя eoзин. x 1GGG
Cepeд лiмфoïдниx клiтин мaкcимaльнy шлькють cклaдaють мaлi лiмфoцити як у ^pro^rn, тяк i в мoз-кoвiй зoнi чacтoчoк, нeзaлeжнo вщ фopми пepeбiгy PCV2-iнфeкцiï. У пopocят зя лaтeнтнoï фopми PCV2-iнфeкцiï у кipкoвiй зoнi чacтoчoк тимyca ïx вiднocнa кiлькicть cклaдae 75,15 ± 7,G2%, a у мoзкoвiй -68,93 ± 6,43% (тябл. 3). Дpyгoю зя кiлькicтю шпуля-
цieю лiмфoцитiв e cepeднi, ïx вiднocнa кiлькicть c^a-ля у ^^вш 12,33 ± 1,15%, i 1G,16 ± G,95% у мoзкoвiй зoнax. Iмyнoблacти i вeликi лiмфoцити виявляли тя-кoж у o6ox зoнax чacтoчoк, ïxkh кiлькicть у ^товт зoнi cягaлa 3,8G ± G,35%, a у мoзкoвiй He пepeвищyвa-ля 1,6G ± G,15%.
Таблиця 3
Динaмiкa вiднocнoï кiлькocтi клiтин кipкoвoï' тя мoзкoвoï' зoни тимyca пopocят зя PCV2-iнфeкцiï, % (M ± m, n = 6)
Клiтиккi кoмпoнeнти
Фopми PCV2-iкфeкцiï
Лaтeкткa
Cyбклiкiчкa
Кipкoвa зoнa Moзкoвa зoкa Кipкoвa зoкa Moзкoвa зoкa
Iмyнoблacти i вeликi лiмфoцити 3,8G ± G,35 1,6G±G,15 2,31 ± G,22 1,1G±G,1G
Cepeднi лiмфoцити 12,33 ± 1,15 1G,16±G,95 7,3G ± G,68 6,14 ± G,57
Mani лiмфoцити 75,15 ±7,G2 68,93 ± 6,43 72,G7 ± 6,73 66,89 ± 6,25
Maкpoфaги 1,83 ± G,17 1,6G±G,15 3,8G ± G,35 3,4G ± G,32
Епiтeлio-peтикyлoцити 5,67 ± G,53 15,G1 ± 1,4G 1G,19 ± G,95 16,33 ± 1,53
IHmi клiтики1 1,22 ± G,11 2,7G ± G,25 4,33 ± G,4G 6,14 ± G,57
Примтка: 1 - кeйтpoфiлькi, eoзикoфiлькi гpaкyлoцити, epитpoцити
У пopocят зя cyбклiнiчнoï' PCV2-iнфeкцiï у чacтoч-rax тимyca кiлькicть лiмфoцитiв буля нижчoю. Тяк, вiднocнa кiлькicть мaлиx лiмфoцитiв у кipкoвiй i мoз-товш зoнax cклaлa 72,G7 ± 6,73 i 66,89 ± 6,25%; cepeд-híx лiмфoцитiв: 7,3G ± G,68 i 6,14 ± G,57%; iмyнoблac-тiв i вeликиx лiмфoцитiв: 2,31 ± G,22, 2,31 ± G,22 i 1,1G ± G,G1, 1G ± G,1G% вiдпoвiднo.
Bapтo зaзнaчити, щo cepeд лiмфoïдниx клiтин ^ara^Ho He зycтpiчaлиcя клiтини з фiгypaми мiтoзy, a y чacтини лiмфoцитiв ядpa були y cтaнi peramy чи пiккoзy, ocoбливo у тимуа пopocят iз cyбклiнiчнoю фopмoю PCV2-iнфeкцiï.
Biднocнa кiлькicть eпiтeлiopeтикyлoцитiв буля мь нiмaльнoю у кipкoвiй peчoвинi чacтoчoк пopocят iз лaтeнтнoю фopмoю iнфeкцiï' i He пepeвищyвaлa
5,67 ± 0,53%, дещо бшьше !х спостерпали у ирковш зон1 часточок тимуса за субклшчно! форми -10,19 ± 0,95%. У мозковш зош часточок тимуса на даний вид клггин припадало 15,01 ± 1,40 i 16,33 ± 1,53% вiдповiдно у поросят i3 латентною i субклiнiчною PCV2-iнфекцiею.
Найбiльшi змiни нами були вiдмiченi у макрофагах часточок тимуса i !х вiдноснiй кiлькостi. Так, у тимуа поросят i3 латентною формою РСК2-шфекцп в1дносна кiлькiсть макрофагiв у шрковш зонi часточок була на рiвнi 1,83 ± 0,17%, а у мозковш не пере-вищувала 1,60 ± 0,15%. Самi клiтини були звичних розмiрiв i мали помiрну кiлькiсть фагоцитованого матерiалу. У тимусi поросят i3 субклшчною формою PCV2-iнфекцi! у кiрковiй зош в1дносна кiлькiсть мак-рофагiв склала 3,80 ± 0,35%, а у мозковш 3,40 ± 0,32%. Ц клiтини часто були гiпертрофованi i мiстили значну к1льк1сть фагоцитованого матерiалу, що вказуе на активнi процеси загибелi клiтин у данiй функцюнальнш зонi.
Серед iнших клiтин у зонах часточок тимуса зу-стрiчалися клiтини кровi та сполучно! тканини. Ми у сво!х досл1дженнях враховували лише клiтини кровi, а саме еритроцити, еозинофiльнi, базофiльнi та нейт-рофiльнi гранулоцити. 1х в1дносна кшьшсть була мь нiмальною у тимуа поросят за латентно! шфекци, i у шрковш зош часточок тимуса не досягала навпъ 1 % (1,22 ± 0,11%), а у мозковш зош не перевищувала 2,70 ± 0,25%. У поросят iз субклшчною PCV2-iнфекцieю даний показник був значно вище, так у ирковш зонi часточок тимуса вш склав 4,33 ± 0,40%, а у мозковш - 6,14 ± 0,57%.
За результатами iмуногiстохiмiчних дослщжень в обох групах свиней встановлений незначний рiвень експресi! антигенiв збудника в лiмфо!дних клiтинах. Характерно, що позитивне iмунозабарвлення виявля-еться переважно в мозковiй речовинi часточок. При цьому рiвень експресi! iмуногiстохiмiчних маркерiв цирковiрусно! хвороби у свиней з ознаками латентно! шфекци не перевищував 1-2% ввд загально! кiлькостi лiмфоlдних клiтин, а у свиней з ознаками субклшчно! PCV2-iнфекцi! - 2-4%.
Висновки
Структурнi характеристики тимуса у свиней з ознаками латентно! та субклшчно! PCV2-iнфекцi! не мають суттевих вiдмiнностей порiвняно з в1дпов1дни-ми показниками тимуса клшчно здорових та вшьних вiд PCV-2 тварин. Водночас спостериаеться тенденцiя до зменшення кшькосп лiмфоi¡дних клiтин, в основному iмунобластiв та лiмфоцитiв, а також вщповщно площi к1рково! речовини часточок, що бшьше вира-жено в тимуа свиней з ознаками субклшчно! PCV2-шфекцп.
За результатами iмуногiстохiмiчних дослiджень в обох групах свиней встановлений незначний рiвень експресi! антигешв збудника в лiмфо!дних клiтинах. Позитивне iмунозабарвлення найбiльш виражено в мозковш речовин часточок, де рiвень експреси вщпо-вiдних маркерiв PCV2-iнфекцi! у свиней з ознаками латентно! шфекци не перевищував 1-2% ввд загально!
K№KOCTi mM^oi'gHHx kotthh, a y CBHHen 3 03HaKaMH cy6KmmHHo! PCV2-iH$eKm! - 2-4%.
nepcnexmueu nodanbwux docmdwenb. noganbmi gocnig^eHHa crpyKrypHo-^yHKmoHanbHux xapaKrepuc-thk THMyca y nopocar 6ygyrb cnpaMoBaHi Ha BcraHoB-neHHa 0C06^HB0CTeH naroricTOfloriHHHx 3MiH mM^ofg-Ho! napeHxiMH opraHa Ha pi3HHx cragiax po3BHTKy Kni-hhho BHpa^eHo! PCV2-iH$eKm! - Big cragi! paHHbo! aKTHBHo! iH$eKm! go cragi! po3pimeHHa.
References
Baimishev, H.B., Shevchenko, B.P., & Seitov, M.S. (2009). Anatomy of the organs of internal secretion and hemocytopoiesis. Samara: Book. Gavrilin, P.N., & Evert, V.V. (2015). Koncepcija me-hanizmov povrezhdenija organov immunoj sistemy u svinej pri cirkovirusnoj infekcii (sindrom mul'tisistemnogo istowenija). Naukovo-tekhnichnyi biuleten NDTs biobezpeky ta ekolohichnoho kontroliu resursiv APK, 3(2), 12-20 (in Russian). Gavrilina, O.G., & Evert, V.V. (2016). Metodychni osoblyvosti zastosuvannia imunohistokhimichnoi di-ahnostyky tsyrkovirusnoi infektsii svynei. Problems of animal science and veterinary medicine: Veterinary sciences. Collection of scientific works of the Kharkov State Zooveterynary Academy, 32, 294-301 (in Ukrainian).
Goralsky, L.P., Khomich, V.T., & Kononsky, O.I. (2011). Osnovy histolohichnoi tekhniky i morfofunktsionalni metody doslidzhennia u normi ta pry patolohii. Zhitomir: Polissya (in Ukrainian). Krakowka, S., Ellis, J.A., McNeilly, F., Ringler, S., Rings, D.M., & Allan, G. (2001). Activation of the immune system is the pivotal event in the production of wasting disease in pigs infected with porcine circovirus-2 (PCV-2). Veterinary Pathology, 38, 3142. doi: 10.1354/vp.38-1-31. Alarcon, P., Rushton, J., & Wieland, B. (2013). Cost of post-weaning multi-systemic wasting syndrome and porcine circovirus type-2 subclinical infection in England - an economic disease model. Preventive Veterinary Medicine, 110, 88-102. doi: 10.1016/j.prevetmed.2013.02.010. Brunborg, I.M., Moldal, T.S., & Jonassen, C.M. (2004). Quantitation of porcine circovirus type 2 isolated from serum/plasma and tissue samples of healthy pigs and pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome using a TaqMan-based real-time PCR. Journal of Virological Methods, 122 (2), 171-178. doi: 10,1016 / jjviromet.2004.08.014. Nauwynck, H.J., Sanchez, R., Meerts, P. Lefebvre, D.J., Saha, D., Huang, L., & Misinzo, G. (2012). Cell tro-pism and entry of porcine circovirus 2. Virus Research, 164, 43-45. doi: 10.1016/j.virusres.2011.11.003. Mcintosh, K.A., Tumber, A., Harding, J.C., Krakowka, S., Ellis, J.A., & Hill, J.E. (2009). Development and validation of a SYBR green real-time PCR for the quantification of porcine circovirus type 2 in serum, buffy coat, feces, and multiple tissues. Veterinary Microbiology, 133, 23-33. doi: 10.1016/j.vetmic.2008.06.010.
Doster, A., Subramaniam, S., Yhee, J., Kwon, B., Yu, C., Kwon, S., & Osorio, F. (2010). Distribution and characterization of IL-10-secreting cells in lymphoid tissues of PCV2-infected pigs. Journal of Veterinary Science, 11, 177-183. doi: 10.4142/jvs.2010.11.3.177.
Dvorak, C.M., Puvanendiran, S., & Murtaugh, M.P. (2013). Cellular pathogenesis of porcine circovirus type 2 infection. Virus Research, 174, 60-68. doi: 10.1016/j.virusres.2013.03.001.
Lopez-Rodriguez, A., Dewulf, J., Meyns,T., Del-Pozo-Sacristan, R., Andreoni, C., Goubier, A., Chapat, L. et al. (2016). Effect of sow vaccination against porcine circovirus type 2 (PCV2) on virological profiles in herds with or without PCV2 systemic disease. The Canadian Veterinary Journal, 57, 619-628. http://hdl.handle.net/1854/LU-8047986.
Oliver-Ferrando, S., Segales, J., Lopez-Soria, S. Callen, A., Merdy, O., Joisel, F., & Sibila, M. (2016). Evaluation of natural porcine circovirus type 2 (PCV2) sub-clinical infection and seroconversion dynamics in piglets vaccinated at different ages. Veterinary Research, 47, 121-140. doi: 10.1186/s13567-016-0405-2.
Gavrilin, P.N., Gavrilina, E.G., & Evert, V.V. (2017). Histoarchitectonics of the parenchyma of lymph nodes of mammals with different structure of intranodal lymphatic channel. Ukrainian Journal of Ecology, 7(3), 96-107. doi: 10.15421/2017_54.
Chianini, F., Majo, N., Segales, J. Dominguez, J., & Domingo, M. (2003). Immunohistochemical characterisation of PCV2 associate lesions in lymphoid and non-lymphoid tissues of pigs 185 with natural postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). Veterinary Immunology and Immunopathology, 94, 63-75. doi: 10.1016/s0165-2427 (03) 00079-5.
Opriessnig, T., Meng, X.J., & Halbur, P.G. (2007). Porcine circovirus type 2-associted disease: Update on current terminology, clinical manifestations, pathogenesis, diagnosis, and intervention strategies. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 19(6), 591615. doi: 10.1177 / 104063870701900601.
Young, M.G., Cunningham, G.L., & Sanford, S.E. (2011). Circovirus vaccination in pigs with subclinical porcine circovirus type 2 infection complicated by ileitis. Journal of Swine Health and Production, 19, 175-180.
