CC BY
41
А СТРАХАНСКИЙ ВЕСТНИК ЭКОЛОГИЧЕСКОГО ОБРАЗОВАНИЯ
№ 1 (39) 2017. с. 42-55. Биологические науки СТРЕССОВЫЕ РЕАКЦИИ ШТАММОВ SYNECHOCYSTIS (CYNOBACTERIA/CYANOPROKARIOTA) НА ТОКСИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ
ИОНОВ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ
Людмила Николаевна Волошко l.voloshko@inbox.ru Ботанический институт им. В.Л. Комарова РАН Ольга Владимировна Гаврилова Санкт-Петербургский государственный университет
Цианобактерии, Synechocystis, штаммы, тяжелые металлы, стресс, ультраструктура,
Было изучено воздействие ионов тяжелых металлов (Cu , Zn2+, Ni2+ Со2+) на рост и
ультраструктуру штаммов Synechocystis aquatilis CALU 428 and Synechocystis sp. CALU 891. Результаты исследований могут быть использованы при биоиндикации загрязнений в водных и почвенных местообитаниях
STRESS RESPONSES OF SYNECHOCYSTIS STRAINS (CYANOBACTERIA / CYANOPROKARYOTA) ON THE TOXIC EFFECTS OF HEAVY METALS
Ludmila N. Voloshko l.voloshko@inbox.ru Komarov Botanical Institute RAS Olga V. Gavrilova St. Petersburg State University
Cyanobacteria, Synechocystis, strains, heavy metal ions, stress, ultrastructure The effects of heavy metal ions (Cu ,
Cd2 , Zn2+, Ni2+, Со2+) оп growth and ultrastructure of Synechocystis aquatilis strain CALU 428 and Synechocystis sp. strain CALU 891 have Ьееп studied. Testing the tolerance to heavy metals should b е taken into consideration, regarding using of the strains in bioindication of pollutants in aquatic and soil habitats.
Микроорганизмы обладают пластичностью, способностью приспосабливаться к резким изменениям в окружающей их среде. Большинство этих эффектов вызывают разнообразные ответные реакции на клеточном и популяционном уровне в природных экосистемах, по которым можно оценивать состояние окружающей среды в целом [2, 3, , 21, 22, 23, 24]. Очень важное значение в токсикологии имеют исследования механизмов защиты организмов от индуцированных стрессом повреждений. Фундаментальную роль в акклимационных процессах играют специфические мембранные липиды и стрессовые протеины [11]. Тяжелые металлы относятся к числу наиболее широко распространенных поллютантов гидросферы, которые вызывают различные ответные реакции, включающие внутриклеточную реорганизацию [13, 18].
Цель настоящей работы: изучение реакции двух штаммов Synechocystis н а токсичное воздействие тяжелых металлов (Zn2+, Cd2+, Cu2+, Ni2+, Со2). Исследование проводилось в соответствии с общей концепцией ультраструктурных реакций на стресс.
Материал и методы
Организм и условия культивирования. Одноклеточная культура Synechocystis aquatilis Sauv. CALU 428 была получена из коллекции водорослей и цианобактерий Санкт-Петербургского государственного университета CALU [5, 17]. Культуры
содержались в стерильных условиях при освещении 2-10 Lux и температуре 25 °С в жидкой минеральной среде №6 (мг л-1 дистиллированной воды); KN03 — 100; К2НРО4 — 20; MgS04 — 20; СаС12 — 15; NaHC03 — 20; раствор микроэлементов — O.l мл. В составе микроэлементов (г л-1): ZnS04 Н20 — 0.022; MnSo4 — l.81; CuS04 5Н20 — 0.079; NaBo3 4Н20 — 2.63; (NH4) 6Moy024 4Н20 — 1.0; FeS04 7Н20 — 9.3; СаС12 — 1.2; Co(N03)2 Н20 — 0.02; Na-EDTA — 10.0.
В тестах на токсичность металлы использовались в виде сульфатов следующих солей: CuS04-5K20; CdS04-8K20; г^04-7Н20; NiS04•7Н20; CoS04 -7Н20. Летальные концентрации ионов для штаммов предварительно определялись в пробирках с растворами используемых металлов. Концентрации ионов металлов, используемые в тестах соответствовали 10, 50, 90% от летальных. В экспериментах клетки из активно растущих культур инокулировались в 50 мл колбы с 20 мл среды без (контроль) или с тяжелым металлом и подращивались в течение 7-8 сут. при круглосуточном освещении. Рост культур вычислялся путем подсчета числа клеток в 1 мл в камере Горяева в различные временные интервалы (Табл. 1—2).
IC50 (50 % ингибирование роста популяции от контроля) вычислялся прямой линейной графической интерполяцией [7]). Морфометрический анализ клеток Synechocystis sp. проводился в световом микроскопе с TV анализатором (МТ-9). Все эксперименты выполнялись в 4-х кратной повторности, средние величины и стандартные отклонения вычислялись. Электронно-микроскопические исследования проводились методом, описанным Б.В. Громовым [5].
Результаты
Synechocystis aquatilis Sauv. CALU 428
Морфология клетки на уровне световой и электронной микроскопии. (контроль). Клетки шаровидные, 3-6 мкм в диаметре, одиночные или в парах, бледно синезеленые. Тилакоиды, уплощенные органеллы (мембраны), содержащие фотосинтетические пигменты, располагаются в п а р ал л ел ь н ы х р я д а х в д о л ь о с и к л етк и . М н о го чи с л ен н ы е ф и к о б и л и с о м ы , д и с к о в и д н ы е о б р аз о в а н и я , с о д ер жащ и е
светособирающие пигменты (фикобилипротеины) и прилегающие снаружи к тилакоидам. Рибосомы штамма разбросаны по всей цитоплазме. Рибосомы — цитоплазматические мембраны, состоящие из рибосомной РНК и протеина, которые участвуют в биосинтезе белка из аминокислот. Клеточная стенка содержит все слои типичной граммотрицательной бактерии (Рис. 19). Synechocystis aquatilis широко распространен в планктоне п р ес н ы х в о д о ем о в .
2+ 1
Воздействие ионов металлов на рост. Низкие концентрации Cu (до 0.18 мг л- ), 11 Ni (до 8.18 мг л- ) и Со (до 12.17 мг л- ) стимулировали рост популяции. Более
высокие концентрации ингибировали рост, этот эффект усиливался с увеличением
концентрации ионов. Все использованные концентрации Zn2+ and Cd2+ не выявили
стимулярущего эффекта на рост, в течение всего периода исследований было зафиксировано
только ингибиторное воздействие. Полное ингибирование роста происходило при
воздействии концентраций, приведенных в Табл. 1. IC50, рассчитанные на 4 сут
экспозиции, были близки к предельно допустимым концентрациям, установленным в Росси
для аквакультуры [ 1 ]. Последовательность степени ингибирования роста на 4 сут
экспозиции была следующей: Zn > Cd > Cu > Ni > Со После 7 сут экспозиции
2+
токсичность тяжелых металлов падала (за исключением варианта с Со2+), и величины ТС50 соответственно снижались.
Воздействие ионов тяжелых металлов на морфологию клетки. Параллельно с ингибированием роста в присутствии ионов металлов отмечены изменения размеров клеток и их морфологии. В этих условиях формировались крупные, карликовые и абберантные клетки. Наблюдалось формирование микроагрегатов, состоящих из клеток, соединенных муреиновыми мостиками. Концентрации ионов и количество отклонений в морфологии выявили прямую зависимость. После 4 сут. экспозиции в присутствии 2п2+ количество морфологических деформаций увеличивалось с 8% (при 1.14 мг л- ) до 32 % (при 2.28 мг л- ) и 65 % (при 3.42 мг л- ). В результате адсорбции 2и2+ на поверхности клетки формировалась электронно-плотная капсула, приводящая к тотальной минерализации наружного чехла (Рис. 5). Сходные эффекты отмечены в случае с Cd :протеиновый и полисахаридные слои исчезали, и формировалась аморфная электронно-плотная капсула (Рис. 6). При этом происходила деструкция фотосинтетических мембран, и нарушалось деление клеток. Муреиновый слой разбухал (Рис. 8), разделения клеток не происходило, и в результате формировались сарциноидные группы (Рис. 7). В присутствии Си2 + отмечены ультраструктурные изменения фотосинтетического аппарата, включающие сокращение числа тилакоидов и полное разрушение их мембран (Рис. 3— 4). Структурные изменения чехла были менее выражены. Однако при этом муреиновый слой расширялся, электронная плотность его снижалась, клеточная стенка отделялась от мембраны цитоплазмы и полисахарид содержащая капсула конденсировалась. В присутствии N1 2+ (Рис. 9—10) и Со2+ (Рис. 11) отмечались вариации муреинового слоя. Морфологические нарушения включали сокращения числа тилакоидов и полную деградацию этих мембран, отмечено также накопление полифосфатных гранул.
Табл. 1
Эффективные концентрации тяжелых металлов (мкг л-1), воздействующие на БупескоеузИз aquatilis штамм
СЛЬИ 428.
Ионы ПДК Летальные концентрации ионов 1С50 (от контроля) для численности клеток после:
2 сут 4 сут 7 сут
гп2+ 10.0 11.4 6.0 6.8 11.0
са2+ 5.0 14.6 7.3 11.8 12.1
Си2+ 1.0 25.4 12.7 20.9 21.1
№2+ 10.0 41.0 17.6 33.8 34.0
Со2+ 10.0 104.8 71.3 69.2 46.1
Табл. 2
Эффективные концентрации тяжелых металлов (мкг л-1), воздействующие на Synechocystis Бр. штамм
САШ 891.
Ионы ПДК Летальные концентрации ионов 1С50 (от контроля) для численности клеток после:
2 сут 4 сут 7 сут
Си2+ 1 .0 509.0 96.7 305.4 338.5
Са2+ 5.0 730.5 584.4 328.7 94.9
Со2+ 10.0 209.6 1 15.3 161.4 194.9
гп 2+ 10.0 1 137.0 841 .4 727.7 704.9
№2+ 10.0 2050.0 615.0 1086.5 1 107.0
Табл. 3
Морфометрические показатели (мкм) Synechocystis Бр. штамм СЛЬИ 891 в контроле и после 5 сут экспозиции клеток в присутствии ионов тяжелых металлов при концентрации, равной 50% от летальной
Контр Си2 Са2 Со2+ №2 гп 2+
оль + +
Диаметр клетки, средний 2.2 2.4 2.2 2.3 2.1 2.2
Стандартное отклонение 0.8 0.4 0.5 0.6 0.4 0.6
Коэффициент вариации 12.1 19.1 20. 24.4 20. 20.8
9 2
Мин. диаметр клетки 1.9 1.9 1.5 1.3 1.3 0.9
Макс. диаметр клетки 2.4 3.3 2.7 3. 1 2.7 3.0
Рис. 1-4. Ультраструктура клеток Бупескосуя^ ациаЫ^ в контроле и после 5 сут экспозиции в среде с Си2+ при концентрации, равной 50% от летальной.
1-2 — контроль, на рис. видны параллельные ряды тилакоидов и многочисленные фикобилисомы в виде точек на поверхности тилакоидов.
3-4 — ультраструктура клетки в среде с Си2+. Стрелкой показано отслоение клеточной стенки и головкой стрелки — конденсация полисахаридного слоя.
Обозначения: Т —тилакоиды; РН —фикобилисомы; N — регион ДНК и рибосом; Р — плазмалемма; М —муреиновый слой; ОМ —внешняя мембрана; Б —протеиновый слой чехла; РО —полисахаридный слой чехла. Масштабная линейка: 0.2 мкм
Рис. 5-8. Ультраструктура клеток Synechocystis aquatilis после 5 сут экспозиции в среде с гп2+ и Са2+при концентрации, равной 50% от летальной.
5 — ультраструктура клетки в среде с гп2+. Стрелка указывает на электронно-плотную капсулу на поверхности клеточной стенки.
6-8 — ультраструктура клетки в среде с Са2+. На рис. заметны: дезинтеграция тилакоидов и фикобилисом, разбухание муреинового слоя (звездочка) и формирование электронно-плотной капсулы на поверхности клеточной стенки (стрелка). Масштабная линейка на Рис. 5, 6, 8 — 0.2 мкм и наРис 7 — 1 мкм
Рис. 9—11. Ультраструктура клеток Synechocystis aquatilis после 5 сут экспозиции в среде с Ni2+ и Со2+ при концентрации, равной 50% от летальной.
9—10 — ультраструктура клетки в среде Ni2+. Разбухание муреинового слоя отмечено звездочкой, стрелкой — агглютинация тилакоидов.
11 — ультраструктура клетки в среде с Co2+. Стрелкой отмечено утолщение муреинового слоя, звездочкой — деструкция тилакоидов и фикобилисом. Масштабная линейка: 0.2 мкм
Synechocystis зр. СЛЬи 891
Морфология клетки на уровне световой и электронной микроскопии (контроль). Клетки СЛЬИ 891 шаровидные, одиночные, меньшего диаметра (2-3 мкм), и ультраструктурно отличные от S. aquatilis. Тилакоиды расположены в широких концентрических рядах в виде подковы. Ультраструктура клеточной стенки близка к таковой S. aquatilis, однако чехол много тоньше и его слои менее выражены (Рис. 12).
Воздействие ионов металлов на рост. Synechocystis Бр. СЛЬИ 891 обнаружил более высокую устойчивость к ионам тяжелых металлов по сравнению с & aquatilis. Эффективные концентрации 1С50 были в 11-116 раз выше предельно допустимых (Таб. 2). Последовательность степени ингибирования роста на 4 сут экспозиции была следующей: Си2+ > Сё2+ > Со2+ > гп2+> №2+. Ингибиторные эффекты Си2+, Со2+, №2+ снижались со временем; Сё2+ и гп 2+ проявили наибольшую токсичность в конце эксперимента (7 сут).
Воздействие ионов тяжелых металлов на морфологию клетки. Результаты морфометрического анализа представлены в Табл. 3. В присутствии ионов металлов размеры клеток проявляли большую вариабильность, чем в контроле. В присутствии Сё2+ и №2+ появлялись группы из 4-10 клеток. Си2+ главным образом воздействовала на фотосинтетический аппарат: происходила дезинтеграция тилакоидов, а также увеличение внутритилакоидных и межтилакоидных пространств (Рис. 13). При воздействии Сё2+ клетки теряли характерную шаровидную форму и часто складывались в сарциноидные группы, фотосинтетические мембраны разрушались (Рис 14-15). ИИны ташък мзалсв вьвьваи агглютинацию фотосинтетических мембран и нарушение клеточного деления. Септы часто начинали формироваться как множественные и непарные (Рис. 16). Из-за нарушения синтеза муреина форма клеток становилась неправильной и стенки клеток отслаивались от протопласта (Рис. 17-18).
Рис. 12-14. Ультраструктура клеток Synechocystis Бр. в контроле и после 5 сут экспозиции в среде с Си2+ и Са2при концентрации, равной 50% от летальной.
12 — контроль, на Рис. отмечены тилакоиды (Т), зона ДНК и рибосом (К) и клеточная стенка (стрелка).
13 — ультраструктура клетки в среде с Си2+. Отмечено утолщение муреинового слоя (звездочка), расширение внутри- и межтилакоидного пространства (стрелки).
14 — ультраструктура клетки в среде с Са2+. Звездочка указывает зону агглютинации тилакоидов, стрелка — отслоение стенки от мембраны клетки.
15 — формирование сарциноидных групп в среде с Са2+. Масштабная линейка: 0.2 мкм
Рис. 16-18. Ультраструктура клеток Synechocystis sp. после 5 сут экспозиции в среде с Ni2+ при концентрации, равной 50% от летальной.
16 — отмечено формирование непарных перегородок (стрелки).
17 — форма клеток становится неправильной вследствие разрушения муреинового слоя.
18 — отслоение стенки от цитоплазматической мембраны (стрелка). Масштабная линейка: 0.2 мкм
Рис. 19. Схема клеточной стенки ^упескосуяйя Бр.
Обозначения: СМ — цитоплазматическая мембрана; Wl-W4 слои клеточной стенки: — электронно-прозрачный слой; — муреиновый (пептидогликановый) слой, гетерополимер, придающий механическую прочность клеточной стенке; —природа слоя неясна; "4 — трехслойная мембрана (наружная) мембрана, важным компонентом которой является липополисахарид; М — слизистый наружный чехол (влагалище). Наружный слой (М8) чехла имеет вид тонких полисахаридных нитей, ориентированных перпендикулярно к поверхности клетки. Внутренний протеиновый слой чехла состоит из глобулярных элементов, прилегающих к наружной мембране.
Обсуждение
Рост обоих штаммов подавлялся всеми тестируемыми ионами металлов. Степень
2 2+
токсичности для S. aquatilis CALU 428 снижалась от Zn к Со . Этот штамм проявил высокую чувствительность к ионам тяжелых металлов. После 4 сут концентрации металлов, проявляющие 50% ингибиторные эффекты (6.8-69.2 мкг л-1) были близки к ПДК этих металлов, установленным в России для аквакультуры (Табл. 1). Однако степень токсичности металлов для Synechocystis sp. CALU 891 отличалась от предыдущего штамма, снижаясь после 4 сут воздействия от Cu to Ni . Кроме того, штамм CALU 891 показал большую устойчивость к ионам тяжелых металлов. Токсические концентрации (IC50) для этого штамма превышали ПДК в 1—116 раз (96.7-841.4 мкг л-1). Летальные концентрации для CALU 891 также были значительно выше, чем для S. aquatilis (Табл. 1—2). Как правило, этот эффект снижался со временем, что указывает на наличие адаптационного механизма у клеток. Silveberg et al. [20] описали механизм детоксикации в ходе которого Cu накапливалась в ядре Scenedesmus. Механизмы экструзии металлов были описаны для некоторых представителей зеленых водорослей и цианобактерий [9, 14].
Ультраструктурная пластичность — это обратимая перестройка структуры бактерий в
ответ на изменение внешних условий. Клеточная стенка является первой преградой, с
которой сталкиваются тяжелые металлы metals [6]. На первой стадии металлы
адсорбируются на клеточной поверхности и затем поступают внутрь клетки путем
пассивного или активного транспорта (Рис. 5-8). Металлы, достигая клеточной мембраны и
связываясь с различными лигандами и функциональными группами типа -COOH, -SH, -NH2,
-Р304 и др., которые присутствуют в цитоплазматической мембране, приводят к изменению
проницаемости цитоплазматической мембраны и выбросу ионов Na+ и K+. Подобный выброс
ионов Na+ и K+, как показатель изменения проницаемости мембраны, отмечался у клеток
• 2 | 2 | Nostoc muscorum после экспозиции к Ni Cr Pb и Ag [18].
В результате изменения проницаемости цитоплазматической мембраны клетка Synechocystis теряет шаровидную форму и происходит отслоение клеточной стенки от протопласта. Муреиновый слой местами утолщается и становится менее электронно-плотным. Постепенная деградация муреинового слоя и его полный лизис ярко демонстрируют результат токсического действия тяжелых металлов на штаммы Synechocystis (Рис. 1-19). Скопления муреина между неотделившимися клетками затрудняют процесс разделения клеток. Аналогичные изменения муреинового слоя были продемонстрированы у штаммов, испытанных к тяжелым металлам: Anabaena flos-aquae — к Cd , A. variabilis и Synechococcus — к Zn2+, Bacillus stearothermophilus — к
Ca2+
и Sr2+ . Предпосылкой
для функционального клеточного деления у бактерий является правильный баланс между транспептидазной системой, осуществляющей заключительный этап синтеза клеточной стенки (сшивки пептидных цепей), и оксипептидазной системой, катализирующей гидролитическое расщепление полипептидов (лизис пептидных связей) муреинового слоя [24]. Стрессовое нарушение регуляции этой системы приводит к катастрофическому разрушению процесса клеточного деления.
Внутри клетки происходит расхождение тилакоидных мембран с расширением внутритилакоидного пространства и окончательная деструкция фотосинтетических органелл. Разрушение хлорофилла и каротиноидов, как следствие воздействия на клетку тяжелых металлов, хорошо известно у эукариотических зеленых водорослей и цианобактерий [18]. Результатом этих изменений является снижение фотосинтетической активности. Однако деградация тилакоидов может обеспечить и неспецифический механизм детоксиации. Роль белков и липопротеинов в связывании металлов внутри клеток была продемонстрирована N.J. Robinson [19]. В ходе разрушения рибосом цитоплазма теряла характерную зернистость и в ней появлялись обширные светлые участки. Нуклеоид (в норме гомогенный) агрегировал в нерегулярно расположенные плотные тяжи. Некоторые исследователи [12, 18] указывали на накопление полифосфатных гранул у цианобактерий Anabaena flos-aquae, A. variabilis,
53
Nostoc sp. и Plectonema boryanum в ответ на воздействие ионов цинка и кадмия. Можно предположить, что и в нашем случае полифосфатные тела и другие внутриклеточные структуры играют важную роль в связывании ионов металлов и их детоксикации.
Бактерии многих видов имеют генетически обусловленную устойчивость к тяжелым металлам. Устойчивость микроорганизмов к различным стрессорам кодируется генами, носителями которых являются специфические R-плазмиды, кодирующие ферменты, участвующие в детоксикации. Механизм устойчивости к отдельным металлам варьирует. Например, мышьяк и кадмий немедленно выводятся, благодаря активности ферментов, которые таким образом предотвращают денатурацию белков. Регуляция устойчивости к меди предполагает взаимодействие между плазмидными и хромосомными генами [8]. К ионам меди механизм устойчивости у Pseudomonas syringae связан с белками периплазмы и наружной мембраны и кодируется 4 генами, локализованными в плазмидном опероне copABCD. Бактерии способны поддерживать баланс между поглощением и выводом ионов меди внутриклеточными структурами. Поступление ионов металлов в клетку часто предотвращается их компартментализацией в периплазме и наружной мембране, что подтверждается образованием электронно-плотного матрикса по периферии клетки (Рис. 5).
Различная устойчивость тестируемых нами штаммов Synechocystis к ионам металлов в первую очередь связана со структурой их клеточной стенки. Штамм CALU 428 обладает клеточной стенкой с достаточно широким чехлом и ясно выраженными слоями, протеиновым и полисахаридным, которые, как известно, участвуют в детоксикации путем связывания ионов металлов. Адсорбция и дальнейшая аккумуляция токсикантов на поверхности клетки изменяют ее проницаемость, тотально минерализируют наружный чехол и в итоге полностью ингибируют рост популяции [10, 18, 24]. Стенка клетки Synechocystis sp. CALU 891 имеет менее выраженный чехол и дифференциацию протеинового и полисахаридного слоев. Тотальной минерализации наружного чехла в присутствии ионов металлов не происходило и штамм CALU 891 выявил большую толерантность по сравнению с CALU 428. Абберантные клетки отмечены у обоих штаммов, их появление вызвано ингибированием синтеза муреина [24]. Изменение размеров клеток и морфологии при воздействии ионов металлов является обычной стрессовой реакцией цианобактерий и микроводорослей [25] . Морфологические дефекты фотосинтетических мембран были сходны у обоих исследованных штаммов Synechocystis. Фотосинтетический аппарат считается очень чувствительной целью для тяжелых металлов, его разрушение является ответной реакцией на стресс, вызванный ионами тяжелых металлов [11].
В заключении, состав и пространственная организация внутриклеточных структур Synechocystis подвергаются резкому воздействию ионов тяжелых металлов, что указывает на решающую роль клеточных мембран в стрессовых реакциях и в процессе адаптации. Если Synechocystis aquatilis CALU 428 проявлял высокую чувствительность к низким концентрациям токсикантов, то Synechocystis sp. CALU 891 показал большую толерантность к достаточно высоким концентрациям металлов и оказался способным выносить значительное загрязнение. Тестированная устойчивость к тяжелым металлам может быть учтена при использования штаммов Synechocystis в ходе проведении экологической экспертизы.
Литература
1. Бekkeр А.А., Aгаев Т.Б. Охрана и контроль загрязнения природной среды. Гидрометеоиздат, Л. — 1989.— 286 с.
2. Волошко Л.Н., Гаврилова О.В. Чувствительность Synechocystis aquatilis Sauv. к ионам цинка // Альгология. — 1992. — Т. 2, № 1. — С. 77-80.
3. Волошко Л.Н., Гаврилова О.В. Реакция Anabaena variabilis Kuetz. на токсическое воздействие цинка // Гидробиол. ж. — 1993. — Т. 29, № 2. — С. 34-37.
4. Громов Б.В. Ультраструктура синезеленых водорослей. Наука, Л. — 1976. — 91 с.
5. Громов Б.В., Гаврилова О.В., Кошвало Е.С. Ультраструктура цианобактериальных клеток рода Cyanothece // Микрсбиокгия—1986 — 55: 821-825.
6. Albertano Р.; Plinto G., Pollio А., Taddei R. The tolerance towards mercury of Chlorella strains determined Ьу algal plating //Arch. Hydrobiol./ Algolog. Studies. — 1989. — V. 57 — P. 461-468.
7. Christensen E.R., Ny^ln N. Ecotoxicological assays with algae: Weibull Dose Response Curves // Environ. Sci. Technol. — 1984. — V. 18, No 9. — P. 713-718.
8. Cooksey D.A. Copper uptake and resistance in bacteria // Molecular Microbiol. — 1993. — V. 7. — P.
1-5.
9. Foster P.L. Copper exclusion as а mechanism of heavy metal tolerance in а green alga // Nature. — 1977.— V. 269. — P. 322-323.
10. Foster E.W., Barton L.L., Johnson G.V. Differential cellular response of АпаЬаепа variabllis to iron // J. Plant Nutr. — 1988. — V. 11. — 1193-1203.
11. Glatz А., Vass I., Los D.A., Vigh L. The Synechocystis model of stress: From molecular chaperones to membranes // PI. Physiol. Biochem. — 1999. — V. 37, No 1 — P. 1-12.
12. Jensen T.E., Rachlin J.W., Jane V. Uptake of heavy metals by especially polyphosphate bodies: an x-ray energy dispersive study // Environmental Pollution. — 1982. — V. 27. — P. 119-127.
13. Jurado A.S., Santana A.C., Da Costa M.S., Madeira M.C. Influence of Divalent Cations on the Growth and Morphology of Bacillus stearothermophilus // J. Gen. Microbiol. — 1987. —V. 133. — P. 507-513.
14. Laube V.M., McKenzie C., Kushner D.J. Strategies of response to cooper, cadmium and lead by a blue-green and a green algae // Can. J. Microbiol. — 1980. — V. 26. — P. 1300-1311.
15. Madigan M.T., Martinko J.M., Parker J. Brock biology of microorganisms. Pearson Education, USA. — 2003. — 1077 p.
16. Mirelman D.Y., Yashow-Yan, Nichamowitz Y., Rosenhak S. and Ron E.Z. Murein biosinthesis during a synchronous cell cycle of Escherichia coli // Br. J. Bateriol. — 1978. — V. 134. — P. 458-461.
17. Pinevich A.V., Mamkaeva K.A., Titova N.N., Gavrilova O.V., Ermilova E.V., Kvitko K.V., Pljusch A.V., Voloshko L.N., Averina S.G. St. Petersburg culture collection (CALU): four decades of storage and research with microscopic algae, cyanobacteria, and other germs // Nova Hedwigia 79 (1-2). — 2004. — P. 115-126.
18. Rai L.C., Jensen E., Rachlin W.A. Morphometric and X-ray Energy Dispersive Approach to Monitoring pH-Altered Cadmium Toxicity in Anabaena flos-aguae // Arch. Environ. Contam. Toxicol. — 1990. — V. 19. — P. 479-487.
19. Robinson N.J., Whitewall S.K., Cavet J.S. Microbial Metallothioneins. Advances in microbial physiology. — 2001. — V. 44. — P. 183-211.
20. Silveberg В.А., Stokes Р.М., Ferstenberg L.B. Intranuclear complexes in copper-tolerant alga // J. Cell Biol. — 1976. — V. 69. — P. 210-214.
21. Voloshko L.N., Gavrilova O.V. Influence of heavy metals over growthcurves and ultrastructure of blue-green algae // In: XV Intern. Botan. Congress (Japan, Yokohama. 28 August - 2 September 1993). — 1993. — P. 328.
22. Voloshko L.N., Gavrilova O.V. Growth and ultrastructure of сyanophycean algae in the presence of heavy metals // In: "Algae and Human Affairs in the 21st Century". 8th Intern. Conf. on Applied Algology (Italy. 26 September-1 October 1999). — 1999. — P. 95.
23. Voloshko L.N., Gavrilova O.V. Response of Cyanobacteria strains to stress induced by heavy metal ions // In: "Algae and extreme environments. Ecology and Physiology." Intern. Conf. (11-16 September 2000, Trebon, Czech Republic). — 2000. — P. 77.
24. Voloshko L.N., Gavrilova, O.V., Moustakas M.B. Response of Cyanobacteria strains to stress induced by heavy metal ions // Nova Hedwigia, Beiheft 123. — 2001. — P. 487-497.
25. Walsch G.E., Merrill R.G. Algal bioassays of industrial and energy process effluents / In: Sнuвert E.L. (ed.): Algae as ecological indicators. Acad. Press, London. — 1984. — P. 329-360,
