Стероидный гестаген как хемосенсибилизатор противоопухолевых препаратов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

63

Д. И. Ржевский1-3, И.Н. Кравченко1, Е.С. Садовникова1,

Е.А. Рассказова1, Н.И. Новикова1, Г.А. Слащева1,

В.И. Владимиров1, С.Г. Семушина1, Э.Р. Шайхутдинова1,

И.А. Пахомова1, Е.А. Калабина1, П.А. Руденко1,

Д.В. Зинченко1, А.П. Богачук2, В.М. Липкин2, А.Н. Мурашев1, 3

доклинические исследования безопасности лекарственного средства с противоопухолевым, антиметастатическим и протекторным действием на основе фрагмента фактора дифференцировки лейкоцитов

Филиал ФГБУНИБХРАН, Пущино, Московская область, Россия; ФГБУН ИБХ РАН, Москва, Россия; 3Пущинский научный центр РАН, Пущино, Московская область, Россия

введение. Рост числа онкологических заболеваний является стимулом к поиску новых противоопухолевых препаратов. Одним из направлений в этой области являются исследования пептидных препаратов, поскольку они обладают высокой селективностью действия, минимальными побочными эффектами, растворимостью в водных средах, низкой токсичностью, отсутствием иммуногенности, малой молекулярной массой. Одним из таких перспективных соединений является выделенный из культуральной среды клеток линии HL-60, обработанных ретиноевой кислотой, фактор дифференцировки HLDF (Human Leukemia Differentiation Factor).

Цель исследования. Проведение доклинических испытаний безопасности лекарственного средства пептидной природы, обладающего противоопухолевым, антиметастатическим и протекторным действием, предназначенного для лечения онкологических заболеваний.

материалы и методы. Эксперименты были проведены на самцах и самках аутбредных крыс Wistar, мышах ICR и C57B1/6. Животные SPF-статуса были получены из питомника лабораторных животных «Пущино» ФИБХ РАН. Все процедуры с животными в исследовании были рассмотрены и утверждены институтской комиссией по уходу и использованию животных на предмет соответствия этическим требованиям. Введение исследуемого препарата осуществлялось подкожно в предполагаемой терапевтической дозе для человека и 10-кратной терапевтической дозе, с учетом межвидового коэффициента пересчета.

результаты. Проведены исследования острой, субхронической, репродуктивной токсичности, мутагенных, им-мунотоксических и аллергизирующих свойств препарата. В результате исследований было показано отсутствие у тестируемого препарата в диапазоне терапевтических доз общетоксического действия при однократном, а также многократном подкожном введении в течение 28 дней; отрицательного действия в отношении репродуктивной системы на стадии прогенеза (формирования мужских и женских гамет), нарушений полового поведения и транспорта продуктов зачатия; аллергизирующего действия, выявляемого по способности индуцировать реакцию гиперчувствительности замедленного типа и вероятности развития псевдоаллергической реакции в ответ на введение Кон А; токсичности для иммунной системы, определяемой

по влиянию препарата на клеточный и гуморальный иммунный ответ, оценке фагоцитарной и бактерицидной активности фагоцитирующих клеток; мутагенных свойств в микроядерном тесте на эритроцитах костного мозга.

Заключение. Проведенные исследования продемонстрировали отсутствие у тестируемого препарата токсического действия в терапевтических дозах при данном способе введения.

Работа поддержана Министерством образования и науки Российской Федерации, государственный контракт

№ 14. N08.11.0111.

В.М. Ржезников1, Л.Е. Голубовская1, З.С. Смирнова2, В.Н. Толкачев2, Т.А. Федотчева3, Н.Л. Шимановский3

стероидный гестаген как хемосенсибилизатор противоопухолевых препаратов

1ФГБУ «НМИЦэндокринологии» Минздрава России, Москва, Россия;

2ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; 3ФГБОУВО «РНИМУим. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия

введение. Множественная лекарственная устойчивость является важнейшей причиной снижения эффективности применяемой в онкологии химиотерапии. Использование веществ-хемосенсибилизаторов позволяет повысить реактивность опухолевых клеток к тому или иному противоопухолевому препарату.

Цель исследования. В развитие исследования потенциала противоопухолевого действия нового гестагена бутеро-ла (Бут), показавшего высокую активность на модели рака шейки матки (патент РФ 2292209), проведено изучение его способности к хемосенсибилизации опухолевых клеток к различным типам препаратов: алкалоиду винкристину, антибиотику доксорубицину и ингибитору топоизомеразы этопозиду.

материалы и методы. Бут — 3-бутират 17а-ацетокси-6-метилпрегна-4,6-диен-3р-ол-20-она — был синтезирован региоселективным восстановлением ацетата мегестрола боргидридом натрия с последующей этерификацией. Для оценки его ХС действия in vivo использовали мышей линии DBA2 с привитым лимфолейкозом P388, активность определяли по показателю торможения роста опухолей (ТРО). Аналогичное действие Бут in vitro изучено на клетках рака молочной железы MCF-7 сравнением цитостатических эффектов доксорубицина и этопозида с таковыми для комбинаций этих препаратов с Бут.

результаты. В опытах на мышах Бут усиливает эффект винкристина с 37 до 53 % (по ТРО). На клеточной культуре MCF-7 наибольший эффект наблюдался в экспериментах с доксорубицином — усиление цитостатического действия с 47,6 (доксорубицин) до 66,4 % (Бут + доксорубицин). В аналогичных опытах с этопозидом активность цитостати-ка возрастала с 66,9 до 80,2 %. Установлено ингибирующее влияние Бут на экспрессию белков факторов резистентности, при этом оно наиболее выражено для белка BCRP-1 — подавление экспрессии соответствующей мРНК в 65 раз, тогда как для Pgp экспрессия мРНК снижалась в 3,8 раза.

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

64 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Заключение. Сочетание противоопухолевой активно- С.В. Саакян1, А.Ю. Цыганков1, Н.И. Моисеева2, сти со способностью усиливать эффект известных онко- А.Ф. Карамышева2, М.Г. Жильцова1, С.С. Тадевосян1 препаратов создает перспективу применения Бут для лече- ПЕрвый ОТЕчЕСТвЕННЬШ ОПыТ СОЗдАНия ния гормонозависимых опухолей. кЛЕТОЧНОЙ кУЛЬТУрЫ и ОЦЕНки лекарственной Устойчивости А.А. Рудакова, В.А. Мисюрин, А.В. Пономарев, РЕТиНОБлАСТОМЫ О.С. Бурова, М.А. Барышникова ФГБУ«МНИИГБ им. Гельмгольца» возможность моделирования Минздрава России, Москва, Россия; активности МАРкЕРОв PD-L1 и PD-L2 2ФГБУ «НМИЦонкологии им. H.H. Блохина» НА ПОвЕРХНОСТи клЕТОк мЕлАНОмЫ Минздрава России, Москва, Россия ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России введение. Культивирование клеток ретинобластомы введение. В настоящее время для лечения рака приме- in vitro является значимым методом изучения их свойств, няются следующие подходы: химиотерапия, таргетная те- в том числе за счет возможности получения аналогичной рапия и иммунотерапия. Комбинирование данных подхо- нативной опухолевой массы. дов может давать новые терапевтические эффекты. Однако Цель исследования. Попытка создания первичной кле-перед составлением комбинаций требуются тщательные точной культуры ретинобластомы и оценка ее лекарствен-лабораторные исследования. ной устойчивости к химиопрепаратам. Цель исследования. Оценить влияние лекарственных материалы и методы. В исследование вошли 19 па-форм аранозы — лиофилизата для приготовления раствора циентов в возрасте 6—64 мес (27,9 ± 17,4). У 6 (31,6 %) па-для инъекций и липосомальной, а также цисплатина, па- циентов отмечено билатеральное поражение, у 13 (68,4 %) — клитаксела и дабрафениба в монорежиме или в комби- монолатеральное. У 18 (94,7 %) пациентов выявлена нации на изменение уровня экспрессии мРНК и белков ретинобластома группы E. Во всех случаях выполнена PD-L1 и PD-L2 в клеточных линиях меланомы. энуклеация, при этом в 94,7 % случаев определена низко-материалы и методы. Исследования проводили на кле- дифференцированная ретинобластома. Взяты образцы точных линиях меланомы человека, полученных из опухо- опухолевой ткани для получения клеточной культуры с полевого материала больных, проходивших лечение в ФГБУ следующим исследованием лекарственной устойчивости «НМИЦ онкологии им. H.H. Блохина» Минздрава России. (MTT-тест). Оценивали экспрессию PD-L1 и PD-L2 на клетках без Результаты. В 4 случаях удалось получить пережи-препаратов. Затем клетки инкубировали с аранозой-лио, вающие адгезивные первичные культуры ретинобластомы. липосомальной аранозой, цисплатином, паклитакселом Проведена цитологическая верификация полученных и дабрафенибом в концентрации IC50, которая была рас- культур. При билатеральном поражении первичные куль-считана в MTT-тесте. Препараты добавляли как в моноре- туры были получены чаще (4/6), тогда как при монола-жиме, так и в комбинации. Уровень экспрессии генов PD-L1 теральном поражении клетки не приживались (0/13) и PD-L2 оценивали методом ПЦР-РВ. В реакции иммуно- (р = 0,003). Статистически значимой взаимосвязи с возра-флуоресценции оценивали экспрессию белков PD-L1 стом пациентов (р = 0,33) и наличием кальцинатов в опу-и PD-L2. Данные анализировали методами корреляцион- холи по данным ультразвукового исследования (р = 0,26) ного анализа и медианного теста. не выявлено. Проведенный MTT-тест показал отсутствие Результаты. Уровень экспрессии гена PD-L2 прямо различий в чувствительности клеточных культур к ирино-коррелировал со степенью дифференцировки клеток (ко- текану и ифосфамиду. Выраженные отличия в устойчиво-эффициент Пирсона 0,937, p <0,15). Активность гена PD-L1 сти между культурами получены только для оксалиплатина и белков PD-L1 и PD-L2 не связана со степенью диффе- и аскорбиновой кислоты. ренцировки, а также не зависит от наличия мутаций гена Заключение. В работе описан первый в РФ опыт полу-TP53. PD-L2 экспрессируется на меньшем уровне в кле- чения клеточной культуры ретинобластомы и оценки точных линиях, имеющих мутации BRAF (p = 0,0117). Ин- химиочувствительности к различным препаратам. Прове-тересно, что мутации в TP53 наблюдаются при наличии дение MTT-теста с оценкой лекарственной устойчивости мутаций гена BRAF (коэффициент Пирсона 1, p <0,15). может быть использовано как в клинической практике Араноза-лио привела к увеличению уровня экспрессии для уточнения режима химиотерапии зарегистрированны-гена PD-L1 (p = 0,23), а липосомальная араноза статис- ми препаратами, так и для разработки новых подходов тически значимо увеличивает уровень экспрессии белка к лечению ретинобластомы при оценке резистентности PD-L1 (p = 0,037). Инкубация с цисплатином в комбина- опухолевых клеток in vivo на животных моделях. ции с паклитакселом также увеличивает уровень экспрессии белка PD-L1 (p = 0,037). Дабрафениб, цисплатин и пакли-таксел в монорежиме не оказывают влияния на экспрессию белка PD—L1. Уровень экспрессии гена и белка PD-L2 снижается под действием любого препарата, но статистически незначимо (р = 0,6). Заключение. При лечении больных меланомой может быть эффективно использование ингибиторов PD1 в сочетании с химиопрепаратами.

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ