Сроки выведения фенбендазола из организма лошадей после лечения празифенoм Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

Фармакология, токсикология

УДК 619:615.9

СРОКИ ВЫВЕДЕНИЯ ФЕНБЕНДАЗОЛА ИЗ ОРГАНИЗМА ЛОШАДЕЙ ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ ПРАЗИФЕНОМ

И.Е. ШУМАКОВИЧ кандидат фармацевтических наук М.Б. МУСАЕВ доктор ветеринарных наук И.Р. САЛГИРИЕВ соискатель И.А. АРХИПОВ доктор ветеринарных наук Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 127218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28, e-mail: vigis. ncport@mail. ru

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии установлены сроки выведения фенбендазола из организма лошадей после их дегельминтизации празифеном. Через 10 сут после лечения фенбендазол и его метаболит оксфендазол в организме лошадей не обнаруживают.

Ключевые слова: лошадь, празифен, органы, ткани, остаточные количества.

Разработанная в ВИГИСе новая паста для дегельминтизации лошадей обладает приятным вкусом и удобна в применении. Празифен эффективен против нематод и цестод [1, 2].

Целью исследований было изучение фармакокинетики празифена и определение сроков полного выведения фенбендазола из организма лошадей.

Материалы и методы

Празифен представляет собой пасту, упакованную в дозированные шприцы вместимостью 20 мл. Пасту наносят на край языка из расчёта 3 мл на 100 кг массы животного.

Исследования проводили на 12 лошадях, из которых сформировали три группы (по три животных на группу) и три лошади служили контролем. Животных каждой подопытной группы убивали через одни сутки, трое, семь и десять суток после дачи препарата. Контрольных животных убивали за сутки до начала опыта. После убоя от каждой лошади брали сыворотку крови и пробы органов и тканей (печени, почек, мышечной и жировой ткани, мышц сердца, селезёнки, лёгких). Пробы сыворотки крови помещали в пробирки, а остальные пробы в пластиковые пакеты и хранили в морозильной камере.

После измельчения проб тканей на гомогенизаторе из них экстрагировали фенбендазол, очищали полученные экстракты от посторонних примесей и определяли количественное содержание фенбендазола и его метаболита (оксфендазола) с помощью ВЭЖХ с использованием обращённофазной колонки LUNA C 18 (250 х 4,6 мм).

Методика определения фенбендазола в сыворотке крови и в тканях внутренних органов заключается в следующем:

К 1 мл сыворотки крови или к 1 г гомогената внутренних органов добавляли 10 мл физиологического раствора и титровали до рН 7—8 при помощи 25%-ного раствора аммиака (1—2 капли), контролируя рН по индикаторной бумажке; добавляли 10 мл этилового эфира уксусной кислоты и экстрагировали при встряхивании на аппарате в течение 10 мин. Для разделения слоёв пробу центрифугировали 5 мин при 5 тыс. об./мин., переносили в делительную воронку. Слой этилового эфира уксусной кислоты помещали в кругло-донную колбу, экстракцию водной фазы повторяли ещё два раза. Обезвоженный при помощи безводного сульфата натрия экстракт помещали в кругло-донную колбу и выпаривали на роторном испарителе. Остаток растворяли в 10 мл ацетонитрила. Полученный раствор очищали от посторонних примесей, экстрагируя гексаном три раза по 10 мл. Слой гексана отбрасывали, слой раствора в ацетонитриле выпаривали на роторном испарителе при 40 оС. Полученный остаток растворяли в 1 мл элюэнта на УЗ бане в течение двух минут. Далее количественное определение проводили с помощью ВЭЖХ. В качестве элюэнта использовали смесь растворителей: ацетонитрил 0,05 М, раствор углекислого аммония в соотношении 35 : 65 со скоростью протекания 1 см/мин.

Содержание фенбендазола и его метаболита оксфендазола по калибровочной кривой, построенной из растворов стандартов.

Результаты и обсуждение Полученные результаты приведены в таблицах 1-3.

1. Содержание фенбендазола и оксфендазола в сыворотке крови

Сроки отбора проб, сутки

Фенбендазол

площадь

пика стандартного раствора 1 мкг/мл

площадь пика экстракта, мкг/мл

содержание, нг/мл

Оксфендазол

площадь

пика стандартного раствора 1 мкг/мл

площадь пика экстракта, мкг/мл

содержание, нг/мл

302232

200597 232477 267371

663 769 885

265258

167675 260100 248679

593 920 880

195957

28384 90893 51918

150 482 275

171981

27147 36593 20800

189 255 145

362999

66710 34253

183

94

363041

44778 24562

12168

362999

Нет Нет Нет

Н.о. Н.о. Н.о.

363041

Нет Нет Нет

Н.о. Н.о. Н.о.

1

3

5

7

2. Содержание фенбендазола в органах и тканях лошадей, нг/мл

Ткань, № Показатель Время отбора проб, сутки

орган п/п 1 3 7 10

Печень 1 Площадь пика 616146 1219448 16298 Но.

Содержание 2117 419 56 Но.

2 Площадь пика 510205 169098 39582 Но.

Содержание 1753 581 136 Но.

3 Площадь пика 681050 243315 27650 Но.

Содержание 2340 836 95 Но.

Мышцы 1 Площадь пика Содержание 170845 587 576237 198 19500 67 Но.

2 Площадь пика Содержание 266599 916 43480 135 8374 26 Но.

3 Площадь пика Содержание 547168 1880 24478 76 11916 37 Но.

Мышца сердца 1 Площадь пика Содержание 99844 310 118203 367 19181 280 Но.

2 Площадь пика Содержание 114660 356 95979 298 50891 158 Но.

3 Площадь пика Содержание 199366 619 129153 401 33818 105 Но.

Лёгкое 1 Площадь пика Содержание 40260 125 282784 878 23834 74 Но.

2 Площадь пика Содержание 52498 163 140103 435 8696 27 Но.

3 Площадь пика Содержание 101132 314 188093 584 5475 17 Но.

Жир 1 Площадь пика Содержание 37683 117 112917 37 10628 33 Но.

2 Площадь пика Содержание 27376 85 46701 145 НО. Но.

3 Площадь пика Содержание 21579 67 15137 47 5475 17 Но.

Селезёнка 1 Площадь пика Содержание 326909 1015 38649 120 24476 76 Но.

2 Площадь пика Содержание 253153 786 15687 486 5475 17 Но.

3 Площадь пика Содержание 316603 983 45701 145 17070 53 Но.

Примечание. Используемые при пересчёте площади пика стандартного раствора фенбендазола 1 мкг/мл: 291047 или 322078 шУб.

3. Содержание оксфендазола после введения празис в органах и тканях лошадей (нг/г) )ена в терапевтической дозе

Ткань, № Показатель Время отбора проб, сутки

орган п/п 1 3 7 10

Почки 1 Площадь пика Содержание 46649 162 131780 458 НО. НО. Но. Но.

2 Площадь пика Содержание 94470 328 157963 549 8344 29 Но.

3 Площадь пика Содержание 242241 841 280536 975 4315 15 Но. Но.

Мышцы Площадь пика Содержание Но. Но. 330898 115 НО. НО. Но. Но.

Площадь пика Содержание Но. Но. 70781 246 11796 41 Но. Но.

Площадь пика Содержание 10070 35 61574 214 3452 12 Но. Но.

Печень 1 Площадь пика 1632580 326861 25032 Но.

Содержание 5674 1136 87 Но.

2 Площадь пика 1432895 281400 6905 Но.

Содержание 4980 978 24 Но.

3 Площадь пика 1460229 188175 33089 Но.

Содержание 5075 654 115 Но.

Мышца 1 Площадь пика 694325 91475 4683 Но.

сердца Содержание 2520 332 17 Но.

2 Площадь пика 938166 79902 9367 Но.

Содержание 3405 290 34 Но.

3 Площадь пика 569512 28910 7990 Но.

Содержание 2067 105 28 Но.

Лёгкое 1 Площадь пика 73565 190112 11297 Но.

Содержание 267 690 41 Но.

2 Площадь пика 41328 144100 9643 Но.

Содержание 150 523 35 Но.

3 Площадь пика 94230 252107 4132 Но.

Содержание 342 915 15 Но.

Жир 1 Площадь пика 4891 6330

Содержание 17 22 Но. Но.

2 Площадь пика 9207 9782

Содержание 32 Но. Но. Но.

3 Площадь пика 3740 22730

Содержание 13 34 Но. Но.

Селезёнка 1 Площадь пика 92361 22730 3740

Содержание 321 79 13 Но.

2 Площадь пика 70493 16400 7193

Содержание 245 57 25 Но.

3 Площадь пика 125738 23882 Но. Но.

Содержание 437 83 Но. Но.

Примечание. Используемые при пересчёте площади пика растворов стандартного образца оксфендазола 1 мкг/мл: 275526 или 287730 шУб.

Содержание препарата (нг/мл) рассчитывали по формуле:

52 х С С =------,

где С - содержание препарата, нг/мл; 81 - площадь пика раствора стандартного образца, шУб; 82 - площадь пика анализируемого экстракта; С1 - 1000 нг/мл.

Чувствительность определения фенбендазола и оксфендазола - 5 нг/мл при введении 50 мкл пробы; экстрагируемость препаратов - около 75-90 % в зависимости от органа.

Из приведенных в таблице результатов следует, что фенбендазол и его метаболит полностью не обнаруживают в организме лошадей через десять суток после введения празифена. Следовательно, убой животных можно проводить через десять суток после обработки животных прази-феном в терапевтической дозе.

Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее активный в антипаразитарном отношении метаболит фенбендазола - фенбендазол суль-фоксид (оксфендазол) создает достаточно высокие концентрации в тканях печени и почек после обработки. Фенбендазол присутствует в органах и тканях, в основном, в начальные сроки (1-5-е сутки после обработки) в меньших по сравнению с метаболитом количествах.

Период полного выведения остаточных количеств фенбендазола, фен-бендазола сульфоксида, а также празиквантела из органов и тканей лошадей составляет 10 сут после окончания обработки.

Литература

1. МусаевМ.Б., Шумакович И.Е., Архипов И.А. Испытание празифена при основных гельминтозах лошадей // Рос. паразитол. журнал. - 2009. - № 2. -С. 105-108.

2. Мусаев М.Б., Шумакович И.Е., Архипов И.А. Эффективность празифена при основных гельминтозах лошадей // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2010. - Вып. 11. - С. 299-302.

The terms of elimination of fenbendazole from horses body after prazifen treatment

I.E. Shumacovich, M.B. Musayev, I.R. Salgiriev, I.A. Arkhipov

The terms of elimination of fenbendazole from horses body after prazifen treatment were established by the method of highly effective liauid chromatography. In 10 days after treatment fenbendazole and its metabolite oxfendazole were not found in horses' organism.

Keywords: horse, prazifen, organs, tissues, residual quantities.