Научная статья на тему 'Сравнительный анализ различных вариантов приготовления жидкостных препаратов'

Сравнительный анализ различных вариантов приготовления жидкостных препаратов Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

CC BY
220
46
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ЖИДКОСТНАЯ ЦИТОЛОГИЯ / CYTOSPIN3 / Е-РГЕР-PROCESSOR / BD TRIPATH / ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Аннотация научной статьи по биотехнологиям в медицине, автор научной работы — Волченко Н.Н., Славнова Е.Н., Тугулукова А.А.

Сравнительное исследование традиционных мазков и трех различных жидкостных технологий (ЖЦ) приготовления цитологических препаратов (Cytospin3, E-PrepProcessor, BD TriPath) проведено на материале, полученном у 112 больных с патологическими процессами различной локализации выпотные жидкости (31 случай), опухоли костей и мягких тканей (22), лимфатических узлов (18), молочных желез (20), слюнных желез (7), опухоли легких (9), щитовидной железы (5 случаев). Установлено, что при параллельном применении ЖЦ и традиционной цитологии эффективность цитологического исследования повышается на 3.3-5% (в зависимости от локализации). Использование жидкостных технологий расширяет возможности применения иммуноцитохимии и молекулярной генетики в цитологическом материале.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

COMPARATIVE ANALYSIS OF VARIOUS OPTIONS OF LIQUID PREPARATIONS

The authors carried out a comparative study of convention-alsmears and three different liquid formulations of cytological preparations (CytoSpin3, E-Prep Processor, BD TriPath) on data obtained from 112 patients with pathological processes in different locations-effusion fluid (31), bone tumors and soft tissue (22), lymph nodes (18), breast (20), salivary gland (7), lung tumors(9), thyroid cancer (5). Found that when combined liquid and convention alcytology, efficiency increases by 3.3%-5% (depending on the location). The use of liquid technology greatly enhances the use of immunocytochemistry and molecular genetics at the cytological material.

Текст научной работы на тему «Сравнительный анализ различных вариантов приготовления жидкостных препаратов»

КЛИНИЧЕСКАЯ ЦИТОЛОГИЯ ф

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

сравнительный анализ различных вариантов приготовления жидкостных препаратов

Н.Н. ВОЛЧЕНКО, Е.Н. СЛАВНОВА, А.А. ТУГУЛУКОВА

МНИОИим. П.А..Герцена Минздрава РФ

Сравнительное исследование традиционных мазков и трех различных жидкостных технологий (ЖЦ) приготовления цитологических препаратов (Су1:о$рт3, Е-РгерРгосвБ-бог, Бй ТпРа1:И) проведено на материале, полученном у 112 больных с патологическими процессами различной локализации — выпотные жидкости (31 случай), опухоли костей и мягких тканей (22), лимфатических узлов (18), молочных желез (20), слюнных желез (7), опухоли легких (9), щитовидной железы (5 случаев). Установлено, что при параллельном применении ЖЦ и традиционной цитологии эффективность цитологического исследования повышается на 3.3-5 % (в зависимости от локализации). Использование жидкостных технологий расширяет возможности применения иммуно-цитохимии и молекулярной генетики в цитологическом материале.

Ключевые слова: жидкостная цитология, Cytospin3, E-Prep-Processor, BD TriPath, иммуноцитохимическое исследование.

ЖЦ — это технология приготовления цитологических препаратов, которая была впервые утверждена для использования в США (FoodandDrugAdministra-tion-FDA) в 1996 г. для системы ThinPrep2000™; Holog-ic Co., USA, а в 1999 г. для системы SurePath™; TriPath (Becton Dickinson, USA). ЖЦ введена с целью преодолеть недостатки традиционной методики и, тем самым, повысить эффективность цитологической диагностики. Метод ЖЦ хорошо себя зарекомендовал в гинекологическом скрининге, однако в диагностической цитологии приходится сталкиваться с определенными трудностями, связанными как с ограничениями самой ЖЦ, так и с недостаточным знанием морфологии жидкостных цитологических препаратов. При использовании различных методов ЖЦ и различных способов обработки материала возникают трудности, связанные с правильной трактовкой цитологической картины, т.к. она существенно отличается от традиционной. По мнению одних авторов, жидкостные цитологические препараты можно анализировать самостоятельно, по мнению других — только совместно с традиционным мазком, т.к. в жидкостных препаратах отсутствует часть диагностически важных признаков [4, 8, 12, 13, 14, 15, 17].

Нет сомнения в ряде преимуществ ЖЦ (табл. 1). При сравнении жидкостных цитологических препаратов с традиционными мазками для негинеколо-

гических локализаций в отдельных работах показано улучшение качества цитологической диагностики за счет снижения числа случаев неинформативного материала, более чистого фона и лучшей визуализации клеточного материала [1, 2, 4, 8, 12, 13, 15, 17]. Использование ЖЦ позволяет длительно хранить, транспортировать материал из отдаленных лабораторий в централизованные, создавать архив и получать тонкослойные цитологические препараты со стандартной областью исследования. Стабилизирующий раствор позволяет сохранить клеточную суспензию для дальнейших контрольных и повторных исследований, в т.ч. для иммуноцитохимии и моле-кулярно-генетических методов [1, 3, 9, 10]. Жидкостные стандартизованные цитологические препараты улучшают и ускоряют работу цитолога [2, 3]. Тонкослойные цитологические препараты успешно применяют для проведения уточняющих методов диагностики, повышающих эффективность цитологического исследования [1, 9, 10, 14].

Метод ЖЦ дает возможность экономить сыворотки для иммуноцитохимических исследований (ИЦХ), готовить достаточное число качественных цитологических препаратов, облегчает анализ ИЦХ реакций и способствует хорошей корреляции с результатами послеоперационного иммуногистохимического исследования (ИГХ) [1, 9, 14]. Расширяется возможность применения молекулярно-генетических методов в цитологических образцах: определение генетических мутаций при раке легкого (БСРИ и КИЛЯ — мутации и др.), исследование мочи и смывов из мочевого пузыря для диагностики уротелиального рака (игоУузюп), определение амплификации гена ИБК-2пеш при раке молочной железы. В жидкостных цитологических препаратах клетки хорошо визуализируются, не наслаиваются друг на друга, расположены разрозненно на чистом фоне, что делает оценку результатов ИБИ-реакций более легкой и адекватной [10].

Цель исследования

Цель исследования — сравнить качество цитологической диагностики, морфологические особенности, достоинства и недостатки ЖЦ — СуШзртЗ, Б-ргерРгоее88ог, ББ ТпРаШ с традиционным методом.

Материал и методы исследования

Исследован материал 112 больных с патологическими процессами различных локализаций: выпотные жидкости (31 случай), опухоли костей и мягких тканей (22), метастазы в лимфатические узлы (18), опухоли молочных желез (20), слюнных желез (7), легких (9), щитовидной железы (5 случаев). Препараты готовили параллельно традиционным способом и методом жидкостной цитологии. Часть материала помещали в раствор «среду накопления» для приготовления с помощью цитоцентрифуги Cytospin3, Thermo Scientific Shandon, а часть помещали в предохраняющий раствор для аппарата Е-Prep и в систему BD CytoRich™. Традиционные и жидкостные микропрепараты окрашивали по Романовскому и Папани-колау. ИЦХ исследование проводили с использованием системы визуализации Ultra Vision LP (Thermo Scientific, Великобритания) и антител к BerEp4, CK7, CK19, CK20, ER,PR, HER2, vimentin, calcitonin, CA125, WT1, HBME1, Carcinoembrionic Antigen, p63, TG, ТПО (Dako, Дания) и Novocastra (Великобритания). Флуоресцентное ИЦХ исследование проводили с антителами BerEp4 (Dako, Дания).

Работа аппарата E-Prep основана на принципе двойной мембранной фильтрации, полученный слайд имеет стандартный размер окошка — 20 мм. Производитель Han Bi Medical Co., Ltd (Ю.Корея) выпускает 5 видов консервирующих растворов: для гинекологических образцов, мочи, мокроты, выпотных жидкостей, материала аспирационной пункции тонкой иглой. Для окрашивания по Папаниколау потребовалась фиксация в спиртовом растворе в течение 30 минут. В Becton Dickinson Prep Stain™ Slide Processor для приготовления препаратов использованы методы клеточного обогащения на градиенте плотности и центрифугирование. В системе для негинекологической цитологии BD CytoRich™ происходит фиксация препаратов, т.к. содержится достаточное количество этанола и поэтому возможна только окраска по Папаниколау. Использование BD CytoRich™ Red способствует денатурации белков и лизису эритроцитов. BD CytoRich™ Blue используют, когда эритроциты необходимо сохранить для диагностических целей в мокроте, моче и смывах из мочевого пузыря.

Результаты исследования

Все аппараты для ЖЦ используют разный принцип работы: цитоцентрифугирование, двойная мембранная фильтрация и преципитация, клеточное обогащение на градиенте плотности и центрифугирование, но обладают общими достоинствами — позволяют получить тонкослойное равномерное распределение материала на стекле, рассмотреть детально клетки, значительно ослабить или получить «чистый» фон.

В то же время, каждая из жидкостных методик имеет свои особенности, достоинства и недостатки.

Cytospin — полностью открытая система, позволяющая использовать реагенты различных фирм-производителей с разным составом, в т.ч. возможность применить приготовленную самостоятельно «среду накопления»; использовать разные способы окраски;

ручной, но нетрудоемкий быстрый метод (5 мин — 12 слайдов); выбирать вариабельный размер «окошка», готовить cell-block. Все это обеспечивает индивидуальный подход к образцу. Благодаря быстроте манипуляций Cytospin удобен в срочной интраопераци-онной диагностике. В зависимости от количества и состава клеточной суспензии, можно подобрать требуемый размер «окошка» для ИЦХ исследования, например, маленький — при небольшом количестве материала, большой — при исследовании экссудатов, где немногочисленные опухолевые комплексы расположены среди элементов воспаления и клеток мезо-телия.

Cytospin-препараты в сочетании со «средой накопления» превосходят BD-препараты и препараты E-Prep по сохранности клеток и структур, их морфология максимально приближена к традиционным мазкам, а в части случаев, клетки более сохранны, чем в традиционных препаратах. Проведено сравнение трех ЖЦ и традиционного цитологического метода. Наилучшие результаты сохранности клеток в жидкостных препаратах показывает исследование жидкости серозных полостей. При исследовании экссудата из брюшной полости специфический характер экссудата с наличием комплексов клеток аденогенного рака установлен при использовании всех трех ЖЦ (рис.1; все рис. см. вклейку 1). Наибольшее сходство в строении клеток и клеточных структур отмечено в традиционных и цитоспин-препаратах, а небольшой остаточный фон в виде эритроцитов не влияет на результат анализа. Густой фон препарата затрудняет установление диагноза и не позволяет провести ИЦХ исследование, например, для определения первичного очага при метастазе аденогенного рака в подмышечном лимфатическом узеле. Для уточнения источника метастази-рования необходимо проведение ИЦХ исследования. В Cytospin-препаратах обнаружены единичные клетки опухоли среди многочисленных форменных элементов крови. ИЦХ реакцию по таким препаратам адекватно оценить невозможно. В препаратах, приготовленных с помощью E-Prep, клетки хорошо сконцентрированы, характерен «чистый» фон, что создает условия для проведения ИЦХ исследования. Проведение ИЦХ исследования затрудняет наличие выраженного воспалительно-некротического фона в традиционных и Cytospin препаратах. В препаратах E-Prep отмечен «чистый» фон, позволяющий рассмотреть клетки, однако клетки опухоли слегка лизированы и имеют вытянутую форму. В традиционном препарате клеточные элементы почти полностью разрушены, видны лишь «голые» ядра. Благодаря применению «среды накопления» наибольшая сохранность цитоплазмы и ядер клеток опухоли отмечена в Cytospin-препаратах.

E-Prep Processor обладает следующими достоинствами: удобен в работе, можно использовать в срочной интраоперационной диагностике, т.к. в течение 23 сек можно приготовить 2 препарата. Клетки хорошо сконцентрированы, «чистый» фон позволяет рассмотреть детали ядра и цитоплазмы; можно применять разные методы окрашивания — по Романовскому, Папаниколау, ИЦХ исследование. Однако широкое окошко в 20 мм не позволяет использовать

много маркеров для ИЦХ при небольшом количестве исследуемого материала, морфология клеток отличается от традиционной, в части случаев отмечали легкий лизис железистого эпителия, лимфоидные элементы не попадают в препарат. «Чистый» фон в некоторых случаях лишает важной диагностической информации. Структуры более рыхлые, уплощенные, разбиты на более мелкие, много клеток расположено разрозненно. В препарате E-Prep (рис. 1С) отме-чаена фрагментация структур на более мелкие, большая часть клеток расположена разрозненно, клетки слегка лизированы, по сравнению с традиционным цитоспиновым (рис.Ш) и BD-препаратами (рис.1В). Лизис части клеток аденогенного рака в плевральной жидкости можно наблюдать при проведении флуоресцентного ИЦХ исследования с эпителиальным маркером BerEp4, в ряде случаев заметны «голые» ядра разрушенных клеток. В большинстве рутинных цитологических препаратов установление диагноза не представляет трудностей, благодаря максимальной сохранности клеточных элементов и стромаль-ного вещества. В одном наблюдении плеоморфной аденомы в полученном материале преобладало ме-зенхимальное вещество и клеточные элементы определялись с трудом. В препаратах, приготовленных на аппарате E-Prep, отмечен более «чистый» фон за счет уменьшения стромального компонента, клетки располагались разроненно вне стромального вещества, хорошо видны структуры. Вместе с тем, в одном исследовании в жидкостном препарате миксоидный фон почти полностью отсутствовал, что затрудняло установление диагноза плеоморфной аденомы без традиционного мазка.

При исследовании лимфатических узлов в большинстве жидкостных препаратов лимфоциты не попадали в мазок (рис. 2A). По препарату E-Prep можно сделать заключение о наличии клеток железистого рака, но нельзя указать на метастаз в лимфатическом узле, т.к. лимфоидные элементы отсутствовали. Параллельный анализ традиционного и жидкостного препаратов облегчает морфологическую диагностику, благодаря наличию лимфоидных элементов в традиционном препарате и «чистому» фону в жидкостном. Концентрация патологических клеток в жидкостном препарате позволяет удачно провести ИЦХ исследование. В Cytospin-препаратах наличие фона в виде большого числа лимфоидных элементов затрудняло оценку реакции. В традиционной цитологии одним из важных диагностических критериев является оценка клеточности; в жидкостных препаратах E-Prep оценить клеточность сложно. На рис. 2А (E-Prep) и ци-тоспиновом препарате (2В) — папиллярный рак щитовидной железы: в препарате E-Prep клетки опухоли сконцентрированы, отсутствуют лимфоциты.

Прибор фирмы Becton Dickinson Prep Stain™ Slide Processor и предохраняющая среда BD CytoRich™ для негинекологического материала — это закрытая система, что с одной стороны обеспечивает стандартное приготовление препаратов и окрашивание, с другой — не позволяет использовать реактивы других фирм-производителей. В состав транспортной среды входит фиксатор на основе этанола, поэтому окрашивание происходит только по Папаниколау, воз-

можно также проведение ИЦХ реакций, но только после соответствующей предварительной обработки препаратов. Стандартное «окошко» — 13 мм. Прибор первоначально предназначался для гинекологического скрининга, для лабораторий с большим потоком исследований, требует для единичных исследований больших затрат времени и труда персонала. Цитологический материал в результате действия растворов и многократной обработки меняет свою исходную структуру. Морфологические особенности BD-препаратов отличаются от таковых в других жидкостных препаратах и от традиционных мазков. Удалена большая часть фоновых элементов, клетки уменьшены в размере и отличаются по форме, появляются трехмерные структуры, изменено эпителиаль-но-стромальное соотношение. На рис. 1В, в препаратах BD клеточные элементы и структуры находятся в разных плоскостях, в отличие от традиционных мазков, Cytospin-препаратов и E-Prep препаратов; клетки уменьшены в размере, сморщены, но лучше представлены детали ядра и цитоплазмы, хорошо визуализируются ядрышки. При исследовании лимфатических узлов в BD-препаратах и в препаратах E-Prep лимфоидные элементы отсутствовали полностью или большая их часть, что при отсутствии традиционного препарата затрудняло установление диагноза.

При исследовании материала из опухоли легкого были трудности в установлении степени дифференци-ровки плоскоклеточного рака; если в традиционном препарате морфологическая картина соответствовала низкодифференцированному плоскоклеточному раку и гистологическому диагнозу, то в препаратах BD, руководствуясь критериями классической цитологии, цитолог выявил умеренную степень дифференциров-ки клеток опухоли. В случае высокодифференциро-ванной аденокарциномы легкого (типа бронхиоло-альвеолярного рака) одним их важных классических критериев является расположение клеток в виде со-сочкоподобных структур, что лучше представлено в жидкостных препаратах BD, по сравнению с традиционными мазками. С другой стороны, клетки, помещенные в жидкость, округляются и структуры, округляясь, могут напоминать сосочки, что при отсутствии клеточного полиморфизма может стать причиной гипердиагностики. В препаратах BD затруднения возникли в дифференциальной диагностике фиброаденомы и высокодифференцированного протокового рака. По традиционному препарату установлен диагноз высокодифференцированного протокового рака молочной железы, что соответствовало гистологическому диагнозу. В жидкостных препаратах разрозненно расположенные клетки рака уменьшены в размере, сморщены и были ошибочно приняты за стромаль-ный компонент при фиброаденоме.

В BD-препаратах при медуллярном раке щитовидной железы клетки имеют более вытянутую форму, несколько сморщены и уменьшены в размере, что заметно при ИЦХ исследовании. Отмечали положительную экспрессию кальцитонина в клетках опухоли (рис.3).

ИЦХ исследование проводили параллельно в препаратах Cytospin и E-Prep в 18 случаях. Более яркую ИЦХ экспрессию отмечали в Cytospin-препаратах, по сравнению с препаратами E-Prep. В 3 случаях из-за на-

Таблица 1.

Сравнение трех жидкостных технологий приготовления припаратов

Су^Брт 3 Е-Ргер — процессор BDPгepStain™ SlideProcessor

Цитоцентрифугирование Использование сжатого воздуха и мембраны Клеточное обогащение на градиенте плотности, центрифугирование

Простота и удобство в работе Простота и удобство в работе Длительный период преподготовки

Равномерное, тонкослойное распределение материала на стекле, «чистый» фон. Равномерное, тонкослойное распределение материала на стекле, «чистый» фон. Равномерное, тонкослойное распределение материала на стекле, «чистый» фон.

Быстрота (5мин — 12 препаратов). Быстрота (23 сек — 2 препарата). 36 тестов в час

Разные методы цитологической окраски (Романовский, Папаниколау) Разные методы цитологической окраски (Романовский, Папаниколау) Окраска только по Папаниколау

Вариабельный размер окошка Размер окошка 20 мм Размер окошка 13 мм

Возможность проведенияиммуно-цитохимических исследований Возможность проведенияиммуноци-тохимических исследований Возможность проведенияиммуно-цитохимических исследований

Таблица 2.

Сравнение морфологических характеристик: жидкостная цитология и традиционные мазки

Критерии Традиционный препарат Cytospin 3 Е-Ргер BD, ТпРаШ

Фон Имеется Имеется «Чистый», большая часть фоновых элементов удалена «Чистый», большая часть фоновых элементов удалена.

Плоский эпителий Характерные морфологические признаки Характерные морфологические признаки Характерные морфологические признаки Уменьшение размера клеток

Железистый эпителий Характерные морфологические признаки Клетки имеют более округлую форму. Сохранность цитоплазмы и ядерных признаков. Более вытянутая форма клеток, в отдельных — более округлая. Легкий лизис части клеток. Сглаженный рисунок хроматина в ядре Более вытянутая форма клеток, частью — округлая. Клетки уменьшены в размере. Хорошо представлены детали ядра.

Структурный компонент Характерные морфологические признаки Структуры частично разбиты, больше клеток расположено разрозненно, по сравнению с традиционным препаратом Структуры более рыхлые, уплощенные, разбиты на более мелкие, много клеток расположено разрозненно. Трехмерные структуры, уменьшены в размере. Клетки и структуры расположены в разных плоскостях.

Эпителиально- стромальное соотношение Характерное Клетки равномерно распределены в стро-мальном веществе. Снижено/отсутствует количество и вид стро-мального вещества. Изменено расположение стромального компонента по отношению к эпителиальному. Снижено/отсутствует количество и вид стро-мального вещества. Изменено расположение стромального компонента по отношению к эпителиальному.

Таблица 3.

Сравнение эффективности цитологических исследований жидкостных и традиционных мазков

ЖИДКОСТНОЙ + ТРАДИЦИОННЫЙ ТРАДИЦИОННЫЙ

ЛОКАЛИЗАЦИЯ ПРОЦЕССА Эффективность % Точность % Ошибки % Неудачный материал % Эффективность % Точность % Ошибки % Неудачный материал %

Жидкости 96.8 100 — 3.2 96.8 100 — 3.2

Лимфатические узлы 93.6 96.8 3.2 3.2 90.3 96.8 3.2 6.45

Молочная железа 90 95 5 5 85 95 5 10

Мягкие ткани, кости 71 95 5 24 71 95 5 24

личия воспалительно-некротических масс при раке молочной железы и большого числа эритроцитов, лимфоидных элементов при метастазе в лимфатическом узле папиллярного рака щитовидной железы, исследование удалось провести только в препаратах E-Prep (сравни рис. 2С и 2D).

В табл. 2 приведена сравнительная характеристика морфологических особенностей жидкостных препаратов с традиционной цитологией по следующим параметрам: фон, особенности плоского и железистого эпителия, структурный компонент, этителиально-стромальное соотношение.

В табл. 3 сравнивали эффективность цитологического исследования при одновременном использовании жидкостных и традиционных препаратов и при анализе только традиционных мазков.

Заключение

Применение ЖЦ имеет как преимущества, так и ограничения.

Все жидкостные препараты имели более «чистый» фон, тонкослойное, равномерное распределение материала на предметном стекле, по сравнению с традиционными препаратами, что облегчало анализ материала.

Применение ЖЦ позволило повысить эффективность цитологической диагностики, проводить ИЦХ исследование, транспортировать и архивировать материал.

Вместе с тем, морфология жидкостных препаратов отличается от классической цитоморфологии, т.к. разные способы приготовления тонкослойных препаратов, многочисленные этапы обработки материала и разный состав фиксаторов влияют на интенсивность фона, размер и особенности строения клеток и структур, эпителиально-стромальное соотношение, функциональные признаки клеток. Изменение морфологии клеток затрудняет дифференциальную диагностику доброкачественного и злокачественного поражения, например, высокодифференцированного протокового рака и фиброаденомы. Возникают трудности в оценке степени дифференцировки клеток при низкодифференцированном плоскоклеточном раке.

Высокая или низкая клеточность — косвенный, но важный признак, на который опирается цитолог при оценке природы опухолевого поражения и этот признак отсутствует в жидкостных мазках. Во всех жидкостных препаратах клетки сконцентрированы, что создает ложное впечатление о высокой клеточности. Если признаки атипии хорошо представлены в клетках, то диагноз можно установить как во всех случаях жидкостных, так и по традиционным препаратам, и клеточность не имеет большого значения.

Значительное снижение или отсутствие фона, с одной стороны, позволяет лучше исследовать клетки, с другой стороны, лишает важной диагностической информации. Отсутствие лимфоидных элементов в жидкостных препаратах E-Prep и BD в отсутствие традиционного препарата не позволяет предположить, что материал получен из лимфатического узла. Диагноз аутоиммунного тиреоидита невозможен при отсутствии лимфоцитов в пунктате, а реактивные из-

менения фолликулярного эпителия, при отсутствии лимфоцитов, могут быть ошибочно приняты за клетки фолликулярного рака. Значительное снижение или отсутствие миксоидного фона делает трудной диагностику плеоморфной аденомы слюнной железы.

Морфологические особенности препаратов, приготовленных с помощью разных ЖЦ, отличаются между собой. Для трактовки цитологической картины необходимо знать, в какую среду помещен материал и на каком приборе приготовлен. Морфологические особенности препаратов, полученных методом цито-центрифугирования с применением «среды накопления», максимально приближены к картине традиционного мазка, но сохранен фон. В препаратах E-Prep, клетки и структуры уплощены, крупные скопления клеток фрагментированы, много разрозненно расположенных клеток, в некоторых случаях отмечают легкий лизис железистого эпителия. В BD-препаратах клетки слегка сморщены и уменьшены в размере, более вытянутой формы, структуры имеют трехмерное расположение.

В случае выпотных жидкостей, когда клетки изначально находились в жидкой среде, отмечено максимальное сходство морфологии при жидкостной и традиционной цитологии. При исследовании соскобов опухоли и материала АПТИ отличия жидкостных и традиционных препаратов более значительные, в отдельных случаях отсутствовали важные диагностические критерии. Все жидкостные технологии позволили провести ИЦХ исследование.

Благодаря чистому фону и более равномерному распределению клеток в препарате, легче оценить реакции в препаратах E-Prep. Реакции в Cytospin-препаратах проходили ярче, но остаточный фон и элементы крови, в некоторых случаях затрудняли оценку препарата.

Совместное применение ЖЦ и традиционной цитологии позволяет повысить эффективность цитологической диагностики за счет снижения процента неудачно полученного материала. В этом исследовании показатель точности оставался прежним.

Выводы

Все жидкостные технологии (Cytospin, E-Prep, TriPathBD) в сочетании с классическим цитологическим методом можно успешно использовать в диагностике опухолей молочной, щитовидной, слюнных желез, опухолей мягких тканей, выпотных жидкостей, метастазов в лимфатических узлах.

Морфологические критерии в препаратах ЖЦ в литературе приведены недостаточно, поэтому пока не будет накоплен опыт, обязательно параллельно анализировать традиционный препарат. Совместное использование жидкостных цитологических и традиционных препаратов повышает эффективность цитологической диагностики за счет уменьшения числа случаев неинформативного материала. Исследование жидкостных препаратов позволяет применять мор-фометрию, ИЦХ и молекулярно-генетические методы. Успешное применение уточняющих методов диагностики в мазках позволяет расширить возможности использования цитологического метода диагностики в клинической практике.

Литература

1. Волченко Н.Н., Савостикова М.В. Атлас цитологической и иммуноцитохимической диагностики опухолей. М.: Репроцентр. М., 2010.

2. Назарова И.В., Родионова О.М., Волков М.В., Богатырев В.Н. Первый опыт использования аппарата EPREP для жидкостной цитологии в России. Нов. клин. цитол. России. 2012; 16(1-2):3-5.

3. Шабалова И.П., Касоян К.Т., Савостикова М.В. Жидкостная цитология в клинической практике (лекция). Клин. лаб. диагностика. М.,2011; 12:25-35.

4. Al-Khafaji BM, Afify AM. Salivary gland fine needle aspiration using the ThinPrep technique: diagnostic accuracy, cytologic artifacts and pitfalls. Acta Cytol. 2001; 45(4): 567-74.

5. Esquivias Lopes-Cuervo, J., Montalban Beltran, E., Cuadros Lopez, J.L., Alonso Castillo, A., Nieto Sanchez, T. Preliminary Study of a New, Fully Automated System for Liquid-Based Cytology: The NovaPrep® Processor System. Acta Cytol. 2011; 55:281-6.

6. Geers C, Bourgain C. Liquid-based FNAC of the thyroid: a 4-year survey with SurePath. Cancer Cytopathol-ogy. 2011; 119(1):58-67.

7. Jae Soo Koh, M.D. Cytology Evaluation of Cell prep LBC in Cytology specimens. The Korean Journal of Cyto-pathology. 2007; 18(1).

8. Jung C.K., Lee A., Jung E.S., Choi Y.J., Jung S.L., Lee K.Y. Split sample comparison of a liquid-based method and conventional smears in thyroid fine needle aspiration. Acta Cytol. 2008; 52(3):313-19.

8. Konofaos P., Kontzoglou K., Georgoulakis J. et al. The role ThinPrep cytology in the evaluation of estrogen and progesterone receptor content of breast tumors. Surg. Oncol. 2006; 15:257-66.

9. Lukas Burendorf. Multiprobe fluorescence in situ Hybridization (UroVysion) for the detection of urothelial carcinoma — FISHing for the right catch. Acta Cytol. 2011; 55:113-19.

10. Malapelle U, de Rosa N, Rocco D, Bellevicine C, Crispino C, Illiano A et al. EGFR and KRAS mutations detection on lung cancer liquid-based cytology: a pilot study. J. Clin. Pathol. 2011; 65(1):87-91.

11. Michael C.W., McConnel J., Pecott J., Afify A.M., Al-Khafaji B. Comparison of ThinPrep and TriPath PREP liquid-based preparations in nongynecologic spesimens: a pilot study. Diagnostic Cytopathology.2001; 25(3):177-84.

12. Rana S., Hoda M.D. Non-gynecologic cytology on liquid-based preparations: a morphologic review of facts and artifacts. Diagnostic Cytopathology. 2007; 35:621-34.

13. Rieko Nishimura, Kenjiro Aogi, Tamami Yamamoto, DaisukeTakabatake, Seiki Takashima, Norihiro Teramoto et al. Usefulness of liquid-based cytology in hormone receptor analysis of breast cancer spe-simens. Virchows Arch. 2011; 458:153-58.

14. Rossi E.D., Mule A., Russo R.M., Pierconti F., Fadda G. Application of liquid-based preparation to non-gynaecologic exfoliative cytology. Pathologica. 2008; 100(6):461-65.

15. Seung-Myoung Son, Ji Hae Koo, Song-Yi Choi, Ho-Chang Lee, Yong-Moon Lee, Hyung Geun Song et al. Evaluation of urine cytology in urothelial carcinoma patients: a comparison of CellprepPlus® Liquid-Based Cytology and conventional smear. The Korean J.l of Pathol. 2012; 46:68-74.

16. Yi-Bo Fan, Qing-Shan Wang, Lin Ye, Tian-Yu Wang, Guang-Ping Wu. Clinical application of the SurePath liquid-based Pap test in cytological screening of bronchial brushing for the diagnosis of lung cancer. Cyto-technology. 2010; 62:53-9.

COMPARATIVE ANALYSIS OF VARIOUS OPTIONS OF LIQUID PREPARATIONS

Volchenko N.N., Slavnova E.N., Tugulukova A.A.

The authorscarried outa comparative studyof convention-alsmears andthree differentliquidformulations ofcytological preparations(CytoSpin3, E-Prep Processor, BD TriPath)ondata obtainedfrom 112patients withpathologicalprocessesin different locations-effusionfluid (31), bone tumors and soft tissue (22), lymph nodes (18), breast (20), salivary gland (7), lung tumors(9),

thyroid cancer (5). Found thatwhen combinedliquidand con-ventionalcytology, efficiencyincreasesby 3.3 %-5 % (depending on the location). The use ofliquidtechnologygreatly enhances theuse ofimmunocytochemistry andmoleculargenetics atthe cytologicalmaterial.

Авторы:

Волченко Н.Н. — рук. отделения онкоцитологии, доктор мед. наук, профессор; Славнова Е.Н. — старш. научн.сотр. отделения онкоцитологии, кандидат мед. наук; Тугулукова А.А. — младший научн. сотр. отделения онкоцитологии.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.