Сравнительный анализ методов лабораторной диагностики криптоспоридиоза Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»



49

r-Ь

следований, оценки безопасности объектов по паразитологическим показателям, что должно способствовать снижению эколого-паразитологического риска заражения населения паразитозами.

4. С учетом вышеизложенного и показателей заболеваемости населения паразитозами на каждой конкретной территории субъектов Российской Федерации рационально планировать необходимые исследования в соотвествии со структурой эпидзначимости объектов окружающей среды.

ЛИТЕРАТУРА

1. Лукманов М.И. и др. Подходы к оценке повышенного риска развития паразитарных заболеваний / М.И. Лукманов, М.М. Туйгунов //Здоровье населения и среда обитания. 2014. № 1. С. 30—31.

2. Май И.В. и др. Установление и доказательство вреда здоровью гражданина, наносимого негативным воздействием факторов среды обитания / И.В. Май, Н.В. Зайцева, С.В. Клейн, Э.В. Седусова //Здоровье населения и среда обитания. 2014. № 11. С. 4—7.

3. Онищенко Г.Г. Заболеваемость паразитарными болезнями в Российской Федерации и основные

направления деятельности по ее стабилизации //Гигиена и санитария. 2002. № 4. С. 3—10.

4. Онищенко Г.Г. О санитарно-эпидемиологическом состоянии окружающей среды //Гигиена и санитария. 2013. № 2. С. 4—10.

6. Письмо ФС Роспотребнадзора от 21.05.2015 № 01/5530-15-27 «О деятельности паразитоло-гических лабораторий в 2014 году».

7. Попова А.Ю. Стратегические приоритеты Российской Федерации в области экологии с позиции сохранения здоровья нации //Здоровье населения и среда обитания. 2012. № 2. С. 4—7.

8. Сергиев В.П. и др. Физиология паразитизма и проблема биологической безопасности / В.П. Сергиев, М.А. Пальцев. М.: Медицина., 2008. 143 с.

9. Степанова Т.Ф. и др. Подходы к совершенствованию системы надзора и управления эпидемическим процессом паразитарных заболеваний / Т.Ф. Степанова, А.С. Корначев. Тюмень.: 2012. 147 с.

Контактная информация:

Хроменкова Елена Павловна, тел.: 8 (928) 194-57-85, e-mail: rostovniimp@mail.ru

Contact information:

Khromenkova Elena, phone: 8 (928) 194-57-85, e-mail: rostovniimp@mail.ru

-♦♦♦-

УДК 614.91

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КРИПТОСПОРИДИОЗА

М.М. Асланова ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора, г. Москва, Россия Апробирован и рекомендован в работу клинико-паразитологических лабораторий набор реагентов Crypt-a-Glo A400 BIOTдля качественной диагностики криптоспоридиоза в клиническом материале.

Ключевые слова: ооцисты криптоспоридий, протозойная инвазия, иммунофлюорес-центное мечение, взаимодействие антител, меченные флюорохромами.

M.M. Aslanova □ COMPARATIVE ANALYSIS OF METHODS OF LABORATORY DIAGNOSIS OF CRYPTOSPORIDIOSIS □ FBHE «Federal Center of Hygiene and Epidemiology» of the Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, Moscow, Russia.

Tested and recommended for the work of clinical and parasitological laboratories reagent kit Crypt-a-Glo A400 BIOT for qualitative diagnosis of cryptosporidiosis in clinical material. Key words: ootsysty cryptosporidium, protozoal invasion, immunofluorescent labeling, interaction of antibodies labeled with fluorochromes.

Впервые криптоспоридии были обнаружены в 1907 г. Э. Тизер в слизистой оболочке желудка у лабораторной мыши без признаков патологии желудочно-кишечного тракта. Данный микроорганизм считался «безвредным» комменсалом более 50 лет. В 1955 г. был зарегистрирован первый случай заболевания криптоспоридиозом у животных, крипто-

споридии были выделены при фатальном гастроэнтерите у домашних птиц. Начиная с 1970 г. криптоспоридии были обнаружены в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) и дыхательных путях большинства млекопитающих, птиц, рыб и рептилий [1, 2, 3].

Криптоспоридии являются облигатными паразитами, инфицирующими микроворсин-

06965827

50

ЗНиСО

ки слизистых оболочек ЖКТ и дыхательных путей животных и человека. Первоначально считалось, что различные криптоспоридии строго специфичны определенному виду позвоночных или человеку, в связи с чем их классификация была построена на основании инфицируемых ими животных. Однако в дальнейшем опыты по перекрестному инфицированию показали, что криптоспоридии гораздо менее специфичны, чем предполагалось ранее [4, 7]. В связи с этим в 1984 г. представители существовавшего ранее 21 вида были объединены в 4 вида криптоспо-ридий. В настоящее время род Cryptosporidium официально включает 6 видов: C. nasorum, инфицирующая рыб; C. serpentis, инфицирующая рептилий; C. baileyi и C. meleagrides; инфицирующие птиц; C. muris и C. parvum, инфицирующие млекопитающих. Следует подчеркнуть, что практически все случаи заболевания криптоспоридиозом у людей были вызваны C. parvum [3] .

Первый случай заболевания криптоспоридиозом у человека описан в 1976 г., а в начале 1980-х годов стало ясно, что представители рода Cryptosporidium достаточно часто вызывают инфекции у человека, что связано не только с улучшением диагностики, но и значительным увеличением количества лиц с иммунодефицитными состояниями, в первую очередь с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) [3, 4].

У больных с иммунодефицитными состояниями криптоспоридиоз сочетался с кандидозом, кишечным амебиазом, лям-блиозом и дисбактериозом кишечника. В этих случаях криптоспоридиоз надо расценивать как оппортунистическую инфекцию. А при излечивании основного заболевания или дисбиоза — как осложнение основного заболевания [3].

Криптоспоридиоз — протозойная инвазия, вызываемая кокцидией Cryptosporidium parvum, проявляется водянистой диареей. Паразиты повреждают микроворсинки кишечника и сокращают всасывательную поверхность. Наиболее опасно заболевание для детей младшего возраста. У иммунодифецитных лиц может продолжаться годами и может являться одной из причин смертельных исходов у ВИЧ-инфицированных лиц. Группами риска являются также люди с низкой массой тела, с иммунодефицитами и гемоглобинопатиями, беременные женщины и др. [5, 7].

Цикл развития криптоспоридий является «эксклюзивным», то есть все циклы развития происходят в организме одного и того же хозяина. [2]. Основной механизм инфици-

рования человека — фекально-оральный. Заражение может происходить при контакте с ^ инфицированным человеком или животным, ^ а также с объектами окружающей среды (чаще с водой), контаминироваными криптоспо- ^ ридиями. Водный путь распространения криптоспоридиоза, впервые описанный в с= 1983 г., является основным путем передачи возбудителя. Наибольшая опасность состоит в том, что большинство современных технологий не позволяют добиться очистки воды от криптоспоридий, что связано с уникальной резистентностью ооцист к дезинфектантам, особенно к хлорированию, а также с малыми размерами ооцист, позволяющими им проходить через многие фильтры [6].

Инфекции ЖКТ, вызванные крипто-споридиями, зарегистрированы во всех возрастных группах и на всех континентах, за исключением Антарктиды. Такое широкое распространение криптоспоридиоза связано с большим количеством природных резервуаров инфекции, низкой инфицирующей дозой и высокой резистентностью возбудителя к дезинфектантам и противопаразитарным препаратам. Дети, особенно в возрасте до двух лет, больше подвержены заболеванию, чем взрослые. Кумулятивная заболеваемость криптоспоридиозом составляет около 1—3 % в индустриально развитых странах и 5—10 % — в развивающихся [5].

Этиологическим подтверждением диагноза криптоспоридиоза служит микроскопическое обнаружение ооцист возбудителя в фекалиях. На сегодняшний день используемые для этого лабораторные методы исследования включают метод окрашенных мазков на криптоспоридиоз по Цилю—Нильсену и Романовскому—Гимзе. Так же следует отметить, что гиподиагностика криптоспоридиоза связана с несовершенством диагностических техник и необходимостью специальной окраски образцов кала, что не всегда возможно отличить от дрожжепо-добных грибов. Результаты серологических исследований свидетельствуют, что криптоспоридиоз встречается значительно чаще, чем диагностируется [6, 7]. В последнее время в диагностике все чаще применяют метод иммунофлюоресцентного мечения для обнаружения криптоспоридий в пробах стула.

Цель исследования - сравнительный анализ двух методов диагностического набора реагентов Сгур1-а^1о А400 В10Т (ооцисты Спр^ропШыт) и метод окрашенных мазков на криптоспоридиоз по Цилю—Нильсену и Романовскому—Гимзе.

Материалы и методы. В процессе работы исследовано 140 проб фекалий по-

06965887

г-Ь

№ группы

3

Всего обследовано лиц

я к ч х

ы н н а в о

едо

л с б о о л с и

25

30

85

140

лученных от лиц обоих полов в возрасте от 1 до 70 лет из лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) г. Москвы и Московской области, из которых 25 образцов — от лиц, инва-зированных криптоспо-ридиями с клиническими проявлениями и подтвержденным лабораторным исследованием методом Циля—Нильсона диагнозом; 30 — от лиц с различными клиническими проявлениями, без уточненного диагноза, с жалобами на частый жидкий стул, отсутствие

аппетита, анемию; 85 человек были обследованы с профилактической целью. Было использовано 12 комплектов набора реагентов Сгур1>а^1о А400 В10Т.

Метод основан на взаимодействии антител меченных флюорохромами с антигеном. В качестве флюорохрома в диагностическом наборе используют флюоресцеинизотиоцинат (ФИТЦ). Он дает зеленое свечение в ультрафиолетовых лучах. Метод иммунофлюорес-центного мечения прямой одноэтапный: на фиксированный мазок с антигеном наносят диагностический реагент с антителами, мечеными ФИТЦ, инкубируют, отмывают и, при положительном результате, учитывают свечение в люминесцентном микроскопе.

Диагностический набор Сгур1-а-С1о А400 В10Т снабжен контрольным препаратом с ооцистами криптоспоридий, и для доказательства того, что положительные результаты иммунофлюоресцентного мечения были обусловлены наличием ооцист криптоспоридий, проводились параллельные исследования: в одну лунку мы добавляли контрольный препарат, а в другую — образцы от лиц входящих в контрольные группы.

Учет и наблюдение флуоресценции проводили под флуоресцентным микроскопом с соответствующими фильтрами для обнаружения ооцист. При обнаружении светящихся, имунофлуоресцирующих яблочно-зеленым светом объектов, круглых с ярко подсвеченными краями, увеличивали объективы микроскопа на 40 или 100 крат, и искали морфологические признаки, типичные для ооцист криптоспоридий. Процедура мечения позволяет увидеть специфическую флуоресценцию ооцист простейших.

Таблица. Результаты исследования образцов стула (фекалий) с применением набора реагентов «Cгypt-a-Glo A400 BЮT»

Наличие клинических проявлений

крипто-споридиоза

Имеются

Имеются

Отсутствуют

Диагноз

Криптоспоридиоз

Неустановлен

Практически здоров

£ « и

N

о л о п

у

н е с

л

л

Я ьн

аН

Л

о ою л ми Р-Я

вод

™ 8 8 | ч мо иб ко

ораб

о п

Я Ж

25/100

5/16,7

10/11,8

х а ыр

о

3 ю

4 Й Н ел нТ

й ли

I 8 ё

§

¡з

Ко о § о

е&з ес п

ч с

0 Р

5оК0

25/100

9/30

16/18,4

Результаты исследования. Исследования показали, что в опытной группе № 1 (лица с клиническими проявлениями криптоспори-диоза и результатом, полученным методом окрашенных мазков по Цилю—Нильсену) положительный результат был получен в 25 случаях, что свидетельствует о высокой чувствительности набора «Сгур1-а-01о А400 В10Т» (табл.).

При исследовании клинического материала (фекалий) контрольной группы № 2, состоящей из 30 человек с неуточненным диагнозом и жалобами на частый жидкий стул, отсутствие аппетита и анемии, ооци-сты криптоспоридий были обнаружены у пяти человек методом окрашенных мазков по Цилю—Нильсену и у 9 человек методом флуоресцентного мечения.

При исследовании клинического материала (фекалии) контрольной группы № 3, состоящей из 85 человек, обследованных с профилактической целью, криптоспоридии были обнаружены у 10 человек методом окрашенных мазков по Цилю-Нильсену и у 16 человек методом флуоресцентного мечения.

Заключение. Полученные результаты исследования свидетельствуют о достаточной диагностической эффективности набора реагентов Сгур1-а^1о А400 В10Т. При комплексном обследовании лиц с подозрением на криптоспоридиоз определение меченых ооцист в пробах стула с использованием указанного набора реагентов позволяет рекомендовать его применение при клинико-лабораторной диагностике криптоспоридиоза для повышения выяв-ляемости инвазированных и оптимизации тактики специфической терапии.

06965827

52

ЗНиСО

ЛИТЕРАТУРА статье Д. МакЛаклина //Клиническая микро-

п - гл л „ биология и антимикробная химиотерапия. 2000.

Бейер 1.В. и др. Кишечныи криптоспоридиоз в т 2 № 3 С 51_57

ршшем в°зрасте иего последствия / Т.В. Бейер, 6. АслаНова МЖ и др. Опыт участия паразито-Н.В. Сидоренко, О.В. Анацкая //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2006. № 1. С. 3—7.

логических лабораторий в межлабораторных

сравнительных / М.М. Асланова, Е.А. Черникова,

_ _ . , _ , М.В. Зароченцев //Здоровье населения и среда

2. Беэр С.А. и др. Роль водного фактора в распро- обитания2014 № 7 С 52_53

стрлнен™ паразитарных болезней человека 7. Асланова ММ и 'др. Сравнительный анализ

в /Р°ссии / С.А. р, Н Ро1маненко [идр]. эффективности методов диагностики крипто-

//Материалы Международного Конгресса «Вода:

споридиоза / М.М. Асланова, Е.А. Черникова,

экология и технология». М., 1994. т-т /-> Ло ' '

_ „„ ' ' _ Т.Г. Сыскова //Здоровье населения и среда

3. Белошицкая И.Г. и др. О состоянии заболеваемости обиТаниЯ 2012 № 10 С 36 и выявлении криптоспоридиоза в Житомирской

области / И.Г. Белошицкая, И.А. Вилешина

//Медицинская паразитология и паразитарные Контактная жф°рмация:

болезни. 2004. № 2. С. 21—23. Асланова Мария Михайловна,

4. Большаков А.М. и др. Оценка и управление ри- тел.: 8 (903) 964-11-45, сками влияния окружающей среды на здоровье e-mail aslanova-mariya@mail.ru населения / А.М. Большаков, В.Н. Крутько, Contact information:

Е.В. Пуцилло. М.: Эдиториал УРСС. Aslanova Maria,

5. Дехнич A.B. Клинические и микробиологические phone: 8 (903)964-11-45, аспекты криптоспоридиоза: Комментарий к e-mail: aslanova-mariya@mail.ru

-V-

УДК 614.7:504.4

МИРОВОЙ ОПЫТ РАЗВИТИЯ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВА В ОБЛАСТИ ОБЕСПЕЧЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ И АНАЛИЗ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ И ВОДЫ ВОДОИСТОЧНИКОВ, УЧИТЫВАЕМЫХ ДИРЕКТИВОЙ ЕС «О БЕЗОПАСНОЙ ВОДЕ»

К.Ю. Кузнецова НИИ медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, г. Москва, Россия Проведено исследование принципов формирования аналитических показателей безопасности питьевой воды и воды водоисточников в странах ЕС, в которых выражены требования к восстановлению или модернизации технических систем водоснабжения и водоочистки, а также требования к обеспечению современных средств мониторинга антропогенного и техногенного загрязнения водоисточников. Ключевые слова: питьевая вода, безопасная вода, критерии оценки.

K.Yu. Kuznetsova □ THE WORLD EXPERIENCE OF DEVELOPMENT OF LEGISLATION IN THE FIELD OF ENSURING OF SAFETY OF DRINKING WATER AND ANALYSIS OF THE INDICATORS OF SAFETY OF DRINKING WATER AND WATER SOURCES TAKEN INTO ACCOUNT IN DIRECTIVE

OF THE EU «ON SAFE WATER» □ SI of Medical Parasitology and Tropical Medicine named after E.I. Martsinovsky of SBEI HPE «The First MSMU named after I.M. Sechenov» of the Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, Russia. Analytical criteria used in the legal regulation of drinking water safety and water sources on the territory of the European Union. A study of the principles of analytical indicators of safe drinking water and water sources in the EU, which Express requirements restore or modernization of technical systems of water supply and water treatment, as well as the requirements of the modern means of monitoring anthropogenic and technogenic pollution of water sources. Key words: drinking water, safe water, evaluation criteria.

В странах Европейского союза (ЕС) обеспечения безопасности и безвредности

формируются единые аналитические кри- питьевой воды.

терии, которые лежат в основе построения Поэтапно, выполняя программу Директивы

правовой системы регулирования в сфере 2000/60/EC «О безопасной воде» до 2004

06965887