CC BY
32
СО
Сравнительный анализ использования полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и автоматизированной системы GeneXpert Dx System для оценки экспрессии гена BCR-ABL у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом, находящихся в большом и полном молекулярном ответе
С.А. Смирнихина1, Г.А. Цаур2, 6, Е.Ю. Челышева3, Ю.А. Яковлева2, 6, А.В. Лавров1, А.О. Абдуллаев3, Н.В. Бедерак4, О.А. Шухов3, А.Г. Солодовников5, 6, А.М. Попов2, 6, Э.П. Адильгереева1, Л.Г. Фечина2, 6,
А.Г. Туркина3, С.И. Куцев1, 7
ФГБУ«Медико-генетический научный центр» РАМН, Москва; 2ГБУЗ СО «Областная детская клиническая больница № 1», Екатеринбург; ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва; 4МБУ«Центральная городская больница № 7», Екатеринбург; 5ГБОУВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, Екатеринбург; 6ГБУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий», Екатеринбург; 7ГБОУВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва
Контакты: Сергей Иванович Куцев kutsev@mail.ru
В данной работе проанализирована возможность использования новой автоматизированной системы GeneXpert Dx System (Cepheid, США) в сравнении со стандартизованной полимеразной цепной реакцией в реальном времени (ПЦР-РВ) для определения величины экспрессии BCR-ABL/ABL у пациентов с хроническим миелолейкозом, достигших большого (БМО) или полного молекулярного ответа (ПМО). Сравнительный анализ, проведенный на 46 образцах пациентов, показал, что общая качественная сопоставимость двух методов составила 73,9 %. При сравнительном анализе по Бланду—Альтману выявлена высокая конкордантность количественных результатов, полученных двумя методами: 95,6 % образцов находились внутри 95 % границы согласия. Полученные нами данные свидетельствуют о более высокой чувствительности анализируемого метода по сравнению с ПЦР-РВ.
Ключевые слова: хронический миелоидный лейкоз, экспрессия гена BCR-ABL, автоматизированный метод GeneXpert
The comparative analysis of BCR-ABL/ABL detection by real-time quantitative PCR and automated GeneXpert Dx System in chronic myeloid leukemia patients with major and complete molecular response
S.A. Smirnikhina1, G.A. Tsaur2,6, E.Yu. Chelysheva3, Yu.A. Yakovleva2,6, A.V. Lavrov1, А.О. Аbdullaev3, N.V. Bederak4, O.A. Shukhov3, A.G. Solodovnikov5,6, A.M. Popov2,6, E.P. Adilgereeva1, L.G. Fechina2,6, A.G. Turkina3, S.I. Kutsev1, 7
1Research Center for Medical Genetics of the Russian Academy of Medical Sciences, Moscow;
2Regional Children's Hospital One, Yekaterinburg;
3Hematology Research Center, Ministry of Health of Russia, Moscow;
4Municipal City Hospital Seven, Yekaterinburg;
5Ural State Medical University, Ministry of Health of Russia, Yekaterinburg;
6Research Institute of Medical Cell Technologies, Yekaterinburg;
7Pirogov Russian National Research Medical University, Ministry of Health of Russia, Moscow
The standardized RQ-PCR is recommended for the detection of values of BCR-ABL transcripts and the evaluation of patients response for TKI treatment. We have investigated BCR-ABL/ABL value comparability in CML patients with MMR and CMR by new automated GeneXpert Dx System in comparison with manual standardized RQ-PCR. The analysis performed on 46 patients's samples showed that the total qualitative comparability of the two methods reached 73.9 %. The Bland-Altman analysis showed a high concordance of the quantitative results, obtained by two methods: 95.6 % samples were within the 95 % limits of agreement. The analysis of BCR-ABL/ABL expression has revealed the high sensitivity of GeneXpert Dx System in comparison with RQ-PCR.
Key words: chronic myeloid leukemia, BCR-ABL expression, automated GeneXpert method
В августе 2013 г. в журнале "Blood" опубликована новая версия рекомендаций European LeukemiaNet (ELN) по диагностике, лечению и мониторингу терапии хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) [1]. В этой статье эксперты ELN дают рекомендации по
1-й и 2-й линии терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК), обсуждают наиболее информативные контрольные точки терапии, наилучшие подходы к мониторингу ответа на терапию ИТК, использование и интерпретацию результатов молекулярного и цитогене-
тического исследовании, рассматривают клиническое значение анализа мутаций гена BCR-ABL, важность мониторинга побочных эффектов и роль трансплантации костного мозга в лечении ХМЛ.
В соответствии с новыми рекомендациями ELN возрастает значение молекулярных исследований и, в частности, анализа величины экспрессии химерного гена BCR-ABL в периферической крови методом количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Так, по мнению экспертов, экспрессия гена BCR-ABL выше 10 % после 3 мес терапии ИТК свидетельствует о неблагоприятном прогнозе и после повторного молекулярного исследования предполагает переключение на 2-ю линию препаратов ИТК.
В разделе, касающемся мониторинга эффективности терапии, эксперты указывают на возможность оценки результатов терапии молекулярным и/или цито-генетическим методом. Таким образом, впервые в рекомендациях ELN недвусмысленно предлагается заменять классический цитогенетический мониторинг молекулярным с возможностью принятия по результатам последнего определенного терапевтического решения. Однако, эксперты ELN делают важное уточнение — определение большого молекулярного ответа (БМО) возможно только в стандартизованных лабораториях, применяющих конверсионный фактор и приводящих полученные результаты экспрессии BCR-ABL к международной шкале. Также очень важным замечанием экспертов ELN, на наш взгляд, является то, что результаты исследования методом ПЦР-РВ нередко характеризуются флуктуацией, обусловленной технологическими особенностями данного метода.
Не все авторы данной статьи разделяют постепенный, но настойчивый отказ экспертов ELN от еще недавно «золотого стандарта» диагностики и мониторинга эффективности терапии ХМЛ — цитогенетичес-кого исследования клеток костного мозга [2]. Этому есть причины, которые мы надеемся обсудить в последующих публикациях. Тем не менее, никто из авторов этой статьи не отрицает того, что стандартизованная ПЦР-РВ крайне важна для определения БМО и полного молекулярного ответа (ПМО).
Действительно, стандартизация ПЦР-РВ была важным этапом в развитии молекулярных исследований при ХМЛ. Приведение результатов всех исследований
к международной шкале (IS), основанной на определении экспрессии гена BCR-ABL у 30 впервые выявленных больных ХМЛ в исследовании IRIS, позволило сравнивать данные, полученные во множестве лабораторий по всему миру [3, 4]. На сегодняшний день международная шкала внедрена и в нашей стране [5, 6].
В зависимости от отношения величины экспрессии химерного транскрипта BCR-ABL к транскрипту нормального гена ABL выделяют БМО [7] и ПМО, которые на сегодняшний день рекомендовано разделять на молекулярный ответ (МО) МО4 0, МО4-5, МО5 0 [8]. Именно эти типы ответов при ХМЛ признаны клинически значимыми. Доказано, что достижение БМО является важным фактором для прогнозирования безрецидивной выживаемости при ХМЛ. ПМО (МО40, МО45, МО50) в настоящее время приобретает все большее значение в связи с разработкой протоколов ведения больных ХМЛ без терапии после достижения глубокого МО и, вероятно, молекулярный мониторинг с помощью методов с высокой чувствительностью станет ключевым для определения возможности прекращения пожизненной терапии ИТК в обозримом будущем.
Характеристика типов молекулярных ответов приведена в табл. 1.
Тем не менее, очевидно, что стандартизация молекулярных лабораторий была прагматичным компромиссом между желаемым и доступным [8]. Процесс стандартизации имеет ряд хорошо известных недостатков. Во-первых, это длительный и трудоемкий процесс. Во-вторых, для проведения процедуры стандартизации необходимо наличие референс-лаборато-рии и, следовательно, на определенном отрезке времени стандартизация оказывается доступной для ограниченного числа молекулярных лабораторий. В-третьих, для многих лабораторий проблематично собрать необходимое для стандартизации количество образцов крови больных ХМЛ. В-четвертых, до сих пор не ясно как часто надо проводить повторную стандартизацию, так как установлено, что более чем в 50 % уже стандартизованных лабораторий конверсионный фактор оказывается нестабильным без каких-либо очевидных причин [9]. И наконец, остается открытым вопрос — что делать тем 50 % лабораторий, которые не смогли пройти стандартизацию.
С целью решения существующих проблем недавно была разработана платформа GeneXpert® Dx System
со
о
ej
СО
Таблица 1. Типы молекулярного ответа
Глубина МО Уровень BCR-ABL/ABL(IS)
БМО (МО30) < 0,1 % и > 0,01 %
МО4'0 < 0,01 и > 0,0032 % или неопределяемый уровень BCR-ABL при количестве ABL > 1,0 х 104
МО45 < 0,0032 % и > 0,001 % или неопределяемый уровень BCR-ABL при количестве ABL > 3,2 х 104
МО50 < 0,001 % или неопределяемый уровень BCR-ABL при количестве ABL > 1,0 х 105
со
о
ej
СО
("Cepheid", США), которая представляет собой полностью автоматизированную закрытую систему [10], совмещающую внутри одного картриджа выделение РНК, обратную транскрипцию и собственно стандартизованную количественную ПЦР-РВ с представлением результатов в процентах по международной шкале. Проведенные ранее сравнительные исследования уровня экспрессии BCR-ABL/ABL транскрипта автоматизированным (GeneXpert) и рутинным (стандартизованная ПЦР-РВ) методами показали хороший уровень сходимости результатов [11, 12]. В то же время в ряде исследований было показано, что у пациентов, достигших БМО, уровень сходимости был заметно ниже, чем в диапазоне 0,1—10 % [13].
Целью данной работы явилась оценка сопоставимости результатов определения величины относительной экспрессии гена BCR-ABL автоматизированным (GeneXpert) и рутинным (ПЦР-РВ) методами у пациентов с ХМЛ, получающих терапию ИТК и достигших БМО и более глубоких типов МО.
Материалы и методы
В исследование включено 53 пациента с подтвержденным диагнозом Ph-позитивного ХМЛ и получающих терапию ИТК 1-го (иматиниб) или 2-го (нилоти-ниб, дазатиниб) поколения. Из них 33 пациента находились под наблюдением в ФГБУ ГНЦ МЗ РФ и 20 пациентов — в ЦГБ № 7 г. Екатеринбурга. По данным предварительного скрининга, проведенного методом ПЦР-РВ за 3—6 мес до начала исследования, у всех пациентов отмечен БМО или более глубокие типы МО. Медиана возраста составила 49,5 года (диапазон — 22—73 года). Информированное согласие на проведение диагностических исследований было получено во всех случаях.
Взятие периферической крови проводили при стандартной венепункции в 2 пробирки с ЭДТА, одна из которых использовалась для стандартизованной ПЦР-РВ, 2-я — для проведения автоматизированного анализа с использованием GeneXpert® Dx System. Транспортировку и хранение материала осуществляли при +4 °C. Образцы анализировали не позднее 48 ч после взятия материала. Стандартизованная ПЦР-РВ выполнялась на наборах «АмплиСенс Лейкоз Квант M-bcr-FRT» (ООО «Интерлабсервис», Россия) согласно инструкции производителя с последующей коррекцией полученной величины BCR-ABL/ABL в % по международной шкале с использованием фактора конверсии. Анализ на приборе GeneXpert Dx System ("Cepheid", США) проводили из 200 мкл цельной крови с использованием наборов GeneXpert BCR-ABL Assay ("Cepheid", США) с автоматическим пересчетом результатов в проценты по международной шкале согласно инструкции производителя. Оба набора позволяют выявлять 2 наиболее частых типа химерных транскриптов BCR-ABL — e13a2 (b2a2) и e14a2 (b3a2) (рис. 1).
Type b3-a2
L
BCR-ABL
11 I 12 I 13 I 14 I 2
ю:
ш
П 145 bp
__FAM 1 OSY7_
b2-a2) 11 I 12 I 13 I 2 I 3 I 4j
П 77 bp
FAM 1 OSY7
ABL
a2
a3
a4
1b
п
TxRd OSY21
70 bp
Рис. 1. Локализация праймеров для количественной ПЦР в картридже Xpert BCR-ABL Monitor. Зелеными стрелками обозначены прайме-ры для первого этапа ПЦР, желтыми — для 2-го. На рисунке указаны 2 типа гена BCR-ABL: b3-a2 и b2-a2. Зонд TaqMan к BCR-ABL (зеленые прямоугольники) имеет флуоресцентный краситель FAM и гаситель QSY7. Зонд TaqMan к ABL (оранжевый прямоугольник) имеет флуоресцентный краситель Texas Red и гаситель QSY21; bp — пары оснований. Цифрами в гене обозначены экзоны [14]
Для статистической обработки данных использовали программное обеспечение «Statistica 8.0», «SPSS 13.0». При сравнении групп пациентов по количественным признакам применяли критерий Манна—Уит-ни, по качественным — х2 с поправкой Йетса. Различия считались достоверными при р < 0,05. Для графического сравнения результатов, полученных разными методами, применяли метод Бланда—Альтма-на [15].
Результаты
Из 53 пациентов в дальнейший анализ были включены 46 больных ХМЛ, так как в результате проведения молекулярно-генетического исследования экспрессии гена BCR-ABL методом ПЦР-РВ было обнаружено, что 7 пациентов не соответствовали основному критерию включения — достижение БМО или более глубокого МО, определяемых рутинным методом стандартизованной ПЦР-РВ. Уровень экспрессии гена BCR-ABL у этих 7 пациентов был выше 0,1 %: диапазон значений BCR-ABL/ABL колебался в пределах 0,126—2,998 % по данным стандартизованной ПЦР-РВ.
В 46 образцах крови методом стандартизованной ПЦР-РВ установлено следующее: у 24 пациентов выявлена экспрессия гена BCR-ABL ниже 0,1 %, в 22 случаях — негативный результат. При исследовании этих же образцов крови автоматизированным методом GeneXpert Dx System экспрессия гена BCR-ABL выявлена в 28 случаях, отрицательный результат — у 18 пациентов с ХМЛ. Из 46 образцов экспрессия BCR-ABL обоими методами выявлена в 20 случаях, только GeneXpert Dx System — в 8 случаях, только стандартизованной ПЦР-РВ — в 4 случаях и еще у 14 пациентов оба метода согласованно не выявили экспрессии химерного транскрипта BCR-ABL.
При разделении пациентов на 3 группы — БМО, МО4 0-5 0 с наличием и отсутствием экспрессии химерного гена BCR-ABL — показано, что оба метода идентич-
Таблица 2. Распределение образцов в зависимости от глубины МО
Глубина МО Количество образцов
Стандартная ПЦР-РВ GeneXpert Dx System результатов (%)
БМО 9 10 6 из 9 (66,7 %)
МО40-5 0 с наличием экспрессии BCR-ABL 15 18 8 из 15 (53,3 %)
МО4 0-5 0 экспрессия BCR-ABL не выявлена 22 18 14 из 22 (63,6 %)
Всего 46 46 28 из 46 (60,9 %)
со
о
ej
СО
но распределили 60,9 % пациентов (табл. 2). При этом не было найдено достоверных различий (p = 0,213).
Сравнительный анализ количественных результатов, полученных 2 методами, по методу Бланда-Альт-мана показал высокую сопоставимость результатов: величина диапазона 95 % границы согласия составила 0,037, а 44 (95,6 %) из 46 образцов находились внутри этой границы. Также обращает на себя внимание тот факт, что среднее значение разности между величиной экспрессии BCR-ABL/ABL, полученной в ходе стандартизованной ПЦР-РВ и с использованием GeneXpert, составляет всего 0,001 % (рис. 2).
В 12 случаях GeneXpert Dx System показал более высокую чувствительность по сравнению со стандартизованным методом ПЦР-РВ. Применение GeneXpert Dx System позволило выявить 8 случаев МО40-50 при отрицательном результате неавтоматизированного подхода. Медиана BCR-ABL/ABL в этой группе составила 0,004 %IS (диапазон - 0,00088-0,0074 %IS). Кроме того, с помощью GeneXpert Dx System удалось выявить 4 случая БМО, в то время как стандартизованная ПЦР-РВ показала отрицательный результат. Однако полученные обоими методами результаты были близки по значению (0,005-0,009 %IS для стандартной методики и 0,014-0,017 %IS для GeneXpert Dx System).
со Ф
Я о.
S х
QQ <U
2 S
S u
CQ S
>s Cû
0 ^
1 CL
0,05 0,04 -0,03 0,02 0,01 0,00 - 0,01 - 0,02
о <u
^ - 0,03 ^
о с
0,019
о
0,001
-0,018
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
Среднее значение BCR-ABL/ABL между ПЦР-РВ и GeneXpert
Рис. 2. Анализ сопоставимости определения величины BCR-ABL/ABL по методу Бланда—Альтмана. Сплошная синяя линия — среднее. В центре показано среднее, пунктир — 95 % граница согласия
Обсуждение
Первые результаты по сравнению уровней экспрессии гена BCR-ABL, определенных методами стандартизованной ПЦР-РВ и GeneXpert Dx System, были получены в 2007 г. в США. Всего в исследовании принимало участие 46 человек. У 26 из них обоими методами была обнаружена положительная экспрессия BCR-ABL; у 17 — отрицательный результат обоими методами; у 3 пациентов экспрессия BCR-ABL была обнаружена только методом GeneXpert Dx System. Основная причина этому, по мнению авторов, более высокая чувствительность автоматизированного метода [14].
Также в 2007 г. опубликованы результаты еще одного пилотного исследования, посвященного сравнению GeneXpert Dx System со стандартной методикой. Исследование проведено с участием 53 пациентов (39 с диагнозом ХМЛ с ПМО, 1 с Ph-положительным острым лимфобластным лейкозом и 13 здоровых доноров). У всех 13 здоровых доноров отрицательный результат был подтвержден обоими методами (100 % сходимость). Из 40 пациентов отрицательный результат стандартной методикой получен у 6, из них только у 5 больных — с помощью GeneXpert Dx System (специфичность — 95 %). У оставшихся 34 пациентов экспрессия BCR-ABL выявлена стандартной методикой, тогда как методом GeneXpert Dx System только у 31 из них (чувствительность — 91,2 %). В этом же исследовании при сравнении экспрессии в 10-кратных разведениях клеток было показано, что коэффициент корреляции между двумя методами составил 0,96 [16]. Следует отметить, что в обоих исследованиях не использовался фактор конверсии, позволяющий привести результаты исследований, полученных с помощью GeneXpert Dx System, к международной шкале.
В 2012 г. опубликованы результаты сравнительного исследования GeneXpert Dx System и стандартизованной ПЦР для оценки экспрессии гена BCR-ABL в 2 лабораториях в Испании [12]. В данном исследовании уже использовался пересчет результатов, полученных с помощью GeneXpert Dx System, в соответствии с международной шкалой. Экспрессию BCR-ABL определяли как в клетках крови, так и в клетках костного мозга пациентов с ХМЛ. Из 117 образцов 106 оказались положительными, что было выявлено обоими методами. Остальные 11 были отрицательными
со
о
ej
со
при стандартизованной ПЦР-РВ, но положительными при исследовании с помощью GeneXpert Dx System. Корреляция между 2 методами составила 0,881. Исследование показало, что между лабораториями различий в результатах нет. Кроме того, было показано, что источник клеток для анализа (кровь или костный мозг) не влияет на корреляцию между методами.
В ходе данной работы мы сравнили метод стандартизованной ПЦР-РВ и автоматизированный метод определения экспрессии BCR-ABL/ABL с использованием GeneXpert Dx System, который имеет ряд достоинств: простота выполнения исследования, низкие трудозатраты [10], низкий риск контаминации [10, 14], хорошая воспроизводимость результатов [11, 12], отсутствие необходимости проведения стандартизации [12]. Выполнение исследования в течение 2 ч от момента забора крови и получение результата ПЦР в тот же день — является дополнительным преимуществом метода. При больших объемах исследований нивелируется также и такой недостаток, как относительно высокая стоимость тест-систем [11].
Полученные нами результаты свидетельствуют о хорошей качественной сопоставимости результатов выявления BCR-ABL/ABL между стандартизованной ПЦР-РВ и GeneXpert Dx System у наиболее значимой для молекулярного мониторинга группы пациентов с ХМЛ, достигших БМО или более глубокого МО. Данные, полученные с использованием метода Блан-да—Альтмана, указывают на высокую степень сходимости полученных нами количественных результатов. Так, диапазон между 95 % границами согласия в нашей работе составил всего 0,037, тогда как только в работе J.-M. Cayella et al. он был менее 1 lg [11], а в остальных — заметно выше [12, 16].
Одним из самых важных преимуществ подхода, использованного в GeneXpert Dx System, является высокая чувствительность. Первые исследования показали, что чувствительность определения экспрессии гена BCR-ABL достигает 0,001 % по международной шкале [14, 16, 17]. Столь высокое значение связано с используемым методом нормализации данных — ACt. При этом рассчитывается разница между пороговым значением флюоресценции BCR-ABL и ABL. Максимальная разница между ними — 20, что обеспечивает
минимальное теоретически возможное измерение равное 0,0001 % BCR-ABL/ABL. При стандартной методике ПЦР-РВ определение экспрессии основано на подсчете количества копий, а наименьшее количество — это 1 плазмида на 20 000 копий транскрипта ABL в тесте, поэтому минимальное теоретическое измерение не может быть ниже 0,005% [11].
Как зарубежные, так и отечественные специалисты отмечают, что ключевым вопросом в терапии больных ХМЛ является эффективная индукционная терапия, обеспечивающая быстрое снижение опухолевой массы [1, 18]. Поэтому чувствительные методы определения минимальной остаточной болезни при ХМЛ важны для более точной оценки динамики редукции опухолевого клона и выбора кандидатов для прекращения терапии ИТК. Выявленная нами с помощью GeneXpert Dx System экспрессия BCR-ABL/ ABL в ПЦР-РВ-негативных образцах, подтверждает более высокую чувствительность GeneXpert Dx System, что делает этот метод необходимым для мониторинга пациентов с МО4 0-5 0.
Таким образом, сравнительный анализ экспрессии гена BCR-ABL методом стандартизованной ПЦР-РВ и автоматизированным методом GeneXpert Dx System показал сопоставимость результатов у пациентов с ХМЛ, достигших БМО и более глубоких МО. Технология, используемая в GeneXpert Dx System, обладает большей чувствительностью и сопоставимой специфичностью, что позволяет использовать ее для определения остаточной экспрессии BCR-ABL. Применение данной технологии позволяет избежать необходимости стандартизации ПЦР-РВ, так как при использовании GeneXpert Dx System полученный результат автоматически приводится к международной шкале. Автоматизация таких процессов, как выделение РНК, обратная транскрипция и собственно стандартизованная количественная ПЦР-РВ, позволяет избежать технических лабораторных ошибок.
Благодарности
Работа проведена при частичной финансовой поддержке грантов МОН РФ, Соглашение № 8599 от 14.09.2012 и Соглашение № 8113 от 24.08.2012.
ЛИТЕРАТУРА
1. Baccarani M., Deininger M.W., Rosti G. et al. European LeukemiaNet Recommendations for the Management of Chronic Myeloid Leukemia: 2013. Blood 2013;122(6):872-84.
2. Куцев С.И. Эволюция мониторинга лечения хронического миелоидного лейкоза. Гематол и трансфузиол 2009;54(4):36—44.
3. Hughes T., Deininger M., Hochhaus A. et al. Monitoring CML patients responding to treatment with tyrosine kinase inhibitors — review and recommendations for 'harmonizing' current methodology for detecting BCR-ABL transcripts and kinase domain mutations and for expressing results. Blood 2006;108:28-37.
4. Mueller M., Cross N., Erben P. et al. Harmonization of molecular monitoring of CML therapy in Europe. Leukemia 2009;23:1957-63.
5. Дубина М.В., Куевда Д.А., Хомякова Т.Е. и др. Молекулярный мониторинг эффективности терапии больных хроническим миелолейкозом в России. Совр онкол 2010;12(4):11 —7.
6. Zaritskey A., Bobrynina V., Tsaur G. et al. International Standardization of qualitative studies of BCR-ABL chronic myeloid leukemia patients in Russia. Haematologica 2012;97(Suppl 1):545.
7. Hughes T., Kaeda J., Branford S. et al. Frequency of major molecular responses to imatinib or interferon alfa plus cytarabine in newly diagnosed chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 2003;349:1423-32.
8. Cross N., White H., Mueller M. et al. Standardized definitions of molecular response in chronic myeloid leukemia. Leukemia 2012;26:2172-5.
9. Müller M.C., Munjal U., Erben P. et al. Stability of Conversion Factors for BCR-ABL Monitoring - Implications for the Frequency of Validation Rounds. Blood 2010;116:893.
10. Raja S., Ching J., Xi L. et al. Technology for automated, rapid, and quantitative PCR or
reverse transcription-PCR clinical testing. Clin Chem 2005;51:882-90.
11. Cayuela J.-M., Macintyre E., Darlington M. et al. Cartridge-based automated BCR-ABL1 mRNA quantification: solving the issues of standardization, at what cost? Haematologica 2011;96:664-71.
12. López-Jorge C., Gómez-Casares M., Jiménez-Velasco A. et al. Comparative study of BCR-ABL1 quantification: Xpert assay, a feasible solution to standardization concerns. Ann Hemat 2012;91:1245-50.
13. Sacha T., Zawada M., Leszczyñska A. et al. Comparison of the BCR-ABL gene expression analysis by the GeneXpert System and standardized RQ-PCR method in three Polish Molecular Laboratories in patients with chronic phase chronic myeloid leukemia treated with TKIs. Haematologica 2012;97(Suppl 1):286.
14. Winn-Deen E.S., Helton B., Van Atta R. et al. Development of an integrated assay for detection of BCR-ABL RNA. Clinical chemistry 2007;53(9):1593-1600.
15. Altman D., Bland J. Measurement in Medicine: the Analysis of Method Comparison Studies. The Statistician 1983;32:307-17.
16. Jobbagy Z., van Atta R., Murphy K.M. et al. Evaluation of the Cepheid GeneXpert BCR-ABL assay. J Mol Diag 2007;9(2): 220-7.
17. Dufresne S.D., Belloni D.R., Levy N.B., Tsongalis G.J. Quantitative assessment of the BCR-ABL transcript using the Cepheid Xpert BCR-ABL Monitor assay. Arch Pathol Lab Med 2007;131(6):947-50.
18. Туркина А.Г., Челышева Е.Ю. Стратегия терапии хронического миелолейкоза: возможности и перспективы. Тер архив 2013;7:4-9.
со
о
ej
СО
