CC BY-ND
32
36
ЗНиСО О»4 №10 (235)
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ КРИПТОСПИРИДОЗА
М.М. Асланова, Т.Г. Сыскова, Е.А. Черникова COMPARATIVE ANALYSIS OF EFFECTIVE METODS FOR DIAGNOSING CRYPTOSPORIDIOSIS
M.M. Aslanova, T.G. Syskova, E.Â. Chernikovа ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора, ГБОУ ВПО Первый Московский медицинский университет им. И.М. Сеченова, институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского
Проведен сравнительный анализ эффективности двух методов диагностики криптоспоридиоза: микроскопии окрашенных мазков по Цилю-Нильсену и Романовскому-Гимзе и методу имму-нофлюоресцентного мечения, который позволяет рекомендовать его применение при клинико-лабораторной диагностики для повышения выявляемости инвазированных и оптимизации тактики специфической терапии при комплексном обследовании лиц с подозрением на крипто-споридиоз.
Ключевые слова: криптоспоридиоз, диагностика, метод окрашенных мазков по Цилю-Нильсену и Романовскому-Гимзе, метод иммунофлюоресцентного мечения.
A comparative analysis of the effectiveness of two methods for diagnosis of cryptosporidiosis is shown: microscopy-stained smears for Ziehl-Neelsen and Romanovsky-Giemsa and immunofluorescence labeling. Immunofluorescence labeling method allows us to recommend its use in clinical laboratory diagnostics to improve the detection of infested and optimization of specific therapy tactics in the complex examination of persons suspected of having cryptosporidiosis.
Keywords: cryptosporidiosis, diagnosis, method of stained smears by Ziehl-Neelsen and Romanovsky-Giemsa, immunofluorescence labeling method.
Криптоспоридиоз — протозойная инвазия, вызываемая кокцидией Cryptosporidium parvum, характеризуется преимущественно поражением пищеварительного тракта, обезвоживанием организма и снижением массы тела. Наиболее опасно это заболевание для детей младшего возраста. В группаму риска входят также люди с низкой массой тела, иммунодефицитами и гемоглобинопа-тиями, а также беременные и др. [1; 2; 3].
Микроскопическое обнаружение ооцист возбудителя криптоспоридиоза в фекалиях методом окрашенных мазков по Цилю-Нильсену и Романовскому-Гимзе служит этиологическим подтверждением диагноза [4]. Иногда при исполь-
зовании этого метода большие трудности возникают при дифференциации криптоспоридий от дрожжеподобных грибов.
Метод иммунофлюоресцентного мечения был предложен для определения криптоспоридий в воде, а нами были разработаны параметры данного метода для определения криптоспори-дий в кале.
Цель данного исследования — сравнительный анализ эффективности двух методов диагностики криптоспоридиоза: микроскопии окрашенных мазков по Цилю-Нильсену и Романовскому-Гимзе и иммунофлюоресцентного мечения с помощью диагностического набора реагентов Сгур1-а^1о
ОШШ №10 (235) ЗНиСО
37
Результаты оценки эффективности иммунофлюоресцентного мечения
Определение криптоспоридий
Группы Число исследований Метод окрашенных мазков по Циль-Нильсону Метод иммунофлюоресцентного мечения
абс. % абс. %
1 25 25 100 25 100
2 30 5 16,6 9 30
3 65 10 15,3 16 24,6
Всего 120 40 33,3 50 41,6
А400 В10Т (ооцисты Сг1р1о$рог1ёшш) компании «Стайлаб».
Материалы и методы. Микроскопия окрашенных мазков кала проводилась по методике Циля-Нильсена и Романовского-Гимзе, а иммунофлюо-ресцентное мечение — по методике, предложенной компанией «Стайлаб», которая основана на взаимодействии антител, меченных флюорохромами, с антигеном [4; 5].
Было исследовано 120 проб фекалий, полученных от лиц обоего пола в возрасте от 1 до 70 лет из лечебно-профилактических учреждений Москвы и Московской области, которые были распределены по 3 группам:
I группа — 25 образцов кала от лиц, инвази-рованных криптоспоридиями с клиническими проявлениями и подтвержденным лабораторным исследованием методом Циля-Нильсона;
II группа — 30 образцов кала от пациентов с различными клиническими проявлениями, без уточненного диагноза, жалобами на частый жидкий стул, отсутствие аппетита, анемию;
III группа — 65 образцов от пациентов, проходивших обследование с профилактической целью.
Результаты исследований. При проведении исследования во всех трех группах криптоспоридии определялись как микроскопическим методом, так и методом иммунофлюоресцентного мечения.
Метод иммунофлюоресцентного мечения — одноэтапный прямой: на фиксированный мазок с антигеном наносится диагностический реагент с антителами (1 капля), мечеными ФИТЦ, инкубируют 30 мин, отмывают буферным раствором и, при положительном результате, учитывают свечение в люминесцентном микроскопе.
Было использовано 12 комплектов набора реагентов Сгур1-а-01о А400 ВЮТ. В качестве флюорохрома в диагностическом наборе используется флюоресцеинизотиоцинат (ФИТЦ), дающий зеленое свечение в ультрафиолетовых лучах. Диагностический набор Сгур1-а-01о А400 ВЮТ содержит контрольный препарат с ооцистами криптоспоридий для доказательства того, что положительные результаты иммунофлюорес-центного мечения обусловлены наличием ооцист криптоспоридий. Учет и наблюдение флуоресценции проводились под флуоресцентным микроскопом с соответствующими фильтрами для обнаружения ооцист C. parvum. При обнаружении светящихся имунофлуоресцирующих яблочно-зеленым светом объектов с округлой формой и ярко подсвеченными краями увеличивались объ-
ективы микроскопа на 100 для обнаружения морфологических признаков, типичных для ооцист криптоспоридий. Процедура мечения позволяет увидеть специфическую флуоресценцию ооцист простейших (см. табл.) [5].
При сравнительном анализе двух методов в образцах кала I группы данные лабораторного анализа совпали; во II группе микроспорией выявлены только 5 образцов, где определился Cryptosporidium parvum; метод иммунофлюорес-центного мечения позволил выявить криптоспо-ридий на 4 образца больше; в III группе эта разница достигла 6 образцов.
Для подтверждения результатов были проведены параллельные исследования: в одну лунку добавлялся контрольный препарат, а в другую — образец от лиц II и III группы.
Полученные результаты исследований свидетельствуют о достаточно высокой диагностической эффективности набора реагентов Crypt-a-Glo A400 BIOT.
Таким образом, для повышения выявляе-мости инвазированных и оптимизации тактики специфической терапии при комплексном обследовании лиц с подозрением на криптоспориди-оз, определение меченых ооцист в пробах кала с использованием указанного набора реагентов позволяет рекомендовать его применение при лабораторной диагностике данной болезни.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Бейер ТВ., Сидоренко Н.В., Анацкая О.В. Кишечный криптоспоридиоз в раннем возрасте и его последствия //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2006. № 1.
2. Белошицкая И.Г., Вилешина И.А. О состоянии заболеваемости и выявлении криптоспоридиоза в Житомирской области //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2004. № 2. С. 21—23.
3. Дехнич A.B. Клинические и микробиологические аспекты криптоспоридиоза (комментарий к статье Д. МакЛаклина) //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000. Т. 2. № 3.
4. МУК 4.2.735-99 «Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоо-зов». 2000.
5. МУК 4.2.2314—08 «Методы санитарно-паразитоло-гического анализа воды». 2008. С. 18.
Контактная информация:
Асланова Мария Михайловна, тел.: 8 (495) 954-09-98 Contact Information: Aslanova Marija, phone: 8 (495) 954-09-98
