CC BY
8
т
1
статировали при 90 °С в течение 1 ч с промежуточным анализом пробы через 30 мин; длительность хроматографнческого анализа не превышала 5 мин. Время удерживания ОЭ в указанных условиях 1 мин 50 с. Предельно обнаружимая концентрация окиси этилена 0,25 мкг/г.
Математико-статистическая обработка экспериментальных данных [31 показала, что при содержании ОЭ в исследуемом образце около 1,5 мкг/г стандартное отклонение не превышает 0,045 мкг/г, а довертительный интервал среднего значения при десяти параллельных .определениях и 95%
доверительной вероятности равен 0,0314 мкг/г» что соответствует коэффициенту вариации 2,14
Литература ф
1. Виттенберг А. Г., Иоффе Б. В. Газовая экстракция в. хроматографнческом анализе. Л., 1982.
2. лахенберг X., Шмидт А. Газохроматографическнй анализ равновесной паровой фазы. М., 1979.
3. Chrilchfield F. £., Johnson J. В. — Analyt. Chem., 1957. v. 29, p. 797—801; 1951, v. 23, p. 1835—1836.
4. Romano S. !.. Renner J. A.. Leitner P. M. — Ibid., 1973, v. 45, p. 2327—2329.
5. Sielichen R. J.— Ibid., 1976, v. 48, p. 1398—1402.
Поступила 02.08.84,
УДК 6M.31:615.918:582.282|-07+в12.017.1.014.46:1615.918:582.282
В. А. Тутельян, А. Б. Левицкая, В. А. Ляшенко, С. А. Сходова
сравнительное изучение влияния т-2 и нт-2 микотоксинов на клеточный и гуморальный
иммунитет
Институт питания АМН СССР; Институт иммунологии Минздрава СССР, Москва
Основным вопросом проблемы обеспечения безопасности пищевых продуктов является разработка научных подходов-к гигиеническому регламентированию содержания в них чужеродных веществ, в частности микотоксинов — вторичных метаболитов микроскопических плесневых грибов. В настоящее время в большинстве стран, в том числе СССР, введены ПДК афлактоксинов в пищевых продуктах и кормах fil и патулина во фруктовых и овощных соках и пюре [21. В то же время токсические свойства других микотоксинов, например трихотеценовых метаболитов — повсеместно распространенных грибов рода Fu: sarium, изучены недостаточно.
Т-2 и НТ-2 токсины являются основными представителями этой группы, в основе токсического действия которых лежит поражение кроветворных и иммунокомпетентных органов f5, 61. Поскольку отдельные токенгенные штаммы IL sporptrichiella могут продуцировать в природных условиях Т-2 и НТ-2 токсины одновременно, а также то, что в организме Т-2 подвергается метаболическому превращению в НТ-2, в настоящей работе проведено сравнительное изучение влияния обоих токсинов на клеточный и гуморальный иммунитет с целью выбора чувствительных иммунологических тестов, позволяющих выявить наиболее ранние неблагоприятные воздействия токсинов на организм.
Опыты проводили на мышах-самцах СВАХ XC57BL/6 и линии СВА с исходной массой 18— 20 г. Животные получали обычный виварный рацион и воду без ограничений. Т-2 и НТ-2 токсины были выделены в лаборатории энзимологии из отечественного штамма № 53315 культуры. F. sporotichiella [3]. Для определения LD5o токсинов мышам CBAXC57BL/6 однократно внутри-желудочно вводили растворы кристаллических
Т-2 и НТ-2 токсинов в возрастающих дозах — 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 10, 12, 14, 16, 18, 20 мг/кг соответственно, а мышам линии СВА — в дозах 3, 6, 9, 12, 15 и 11, 14, 16, 20 мг/кг. Среднесмертельную дозу токсинов рассчитывали по методу G. КагЬетР [91. Для оценки влияния токсинов на гуморальный иммунитет мышам-гибридам CBAXC57BL/6 ' в течение 14 дней внутрижелудочно вводили растворы Т-2 и НТ-2 токсинов в количествах, равных Vio и '/so LD50. Контрольные животные получали эквивалентное количество растворителя — 1 °/о водного раствора этанола из расчета 0,4 мл на 25 г массы тела. На 11-й день введения токсинов мышей внутрнбрюшинно иммунизировали эритроцитами барана в дозе 2-Ю8. Иммунный ответ оценивали через 96 ч после иммунизации путем определения числа антителообразующих клеток (АОК) в селезенке методом локального гемолиза в агарозе [81 и титра антител с применением реакции гемагглютинации. Влияние токсинов на клеточный иммунитет устанавливали с помощью реакции трансплантат против хозяина в двух вариантах. В первом случае мышам-реципиента^ CBAXC57BL/6 внутрижелудочно вводили раство^ ры Т-2 и НТ-2 токсинов в дозах, равных Vio и '/so LD50 в течение 14 дней, контрольным — соответствующее количество растворителя — 1 % водного раствора этанола. На 7-й день введения токсинов животных иммунизировали в стопу задней правой конечности спленоцитами от интактных мышеи линии СВА, а в левую — от гибридов СВАХ XC57BL/6 в дозе 3-10е клеток. Иммунный ответ оценивали через 7 сут по увеличению массы подколенного лимфатического узла правой конечности относительно массы лимфатического узла левой с вычислением индекса увеличения лимфатических узлов (ИУЛ). Во втором варианте мышам— донорам спленоцитов CBAXC57BL/6 и
СВА — вводили Т-2 и НТ-2 токсины в дозах, равных '/ю и '/so LDm в течение 14 дней, контрольным мышам-донорам соответствующих линий — эквивалентные количества растворителя. Интакт-ных мышей CBAXC57BL/6 иммунизировали в стопу задней правой конечности спленоцитами от подопытных мышей линии СВА, а в правую — от мышей CBAXC57BL/6 в дозе 3-10® клеток, и через 7 сут определяли ИУЛ.
Клиническая картина отравления при однократном введении Т-2 и НТ-2 токсинов была одинаковой для мышей различных линий и характер ризовалась следующими симптомами: взъерошен-ностью шерсти, адинамией, одышкой, диареей, воспалением слизистых оболочек носа с выделением геморрагического экссудата, причем время возникновения и выраженность клинических симптомов зависели от дозы токсина. Следует отметить, что если при введении Т-2 токсина в высоких дозах первые клинические симптомы появлялись уже через 3 ч, достигая максимума к концу 1-х суток, то начальные признаки НТ-2 токсикоза отмечались лишь через 10 ч. Обращает на себя внимание, что рассчитанные среднесмер-тельные дозы Т-2, составившие для мышей-гибридов CBAXC57BL/6 и мышей линии СВА 6,75 и 6,5 мг/кг соответственно, не так резко отличались фт рассчитанных среднесмертельных доз НТ-2 токсина, которые составили для мышей соответствующих линий 12, 75 и 9 мг/кг.
Таким образом, НТ-2 токсин, несмотря на де-ацетилирование в положении С4, является высокотоксичным соединением. Однако при подост-ром отравлении, вызванном многократным введением токсинов (14 доз) ряд клинических симптомов, таких как адинамия, взъерошенность шерсти, некоторое снижение массы тела, а также достоверное снижение абсолютной и относительной массы тимуса, которая составила 67 % от контроля, наблюдались лишь при введении Т-2 токсина в дозе, равной Vio LD50.
На рис. 1 представлены результаты изучения влияния Т-2 (I) и НТ-2 (II) токсинов на динамику числа АОК в селезенке (а) и титр антител (б) в сыворотке крови. Введение обоих токсинов в дозе, равной '/ю LD50, приводит к достоверному снижению количества АОК в селезенке, которое составило соответственное 46 и 70 % от контрольного уровня (а, 1,1 и А, II, /). Однако следует отметить различный характер влияния Т-2 и НТ-2 токсинов на титр антител в сыворотке крови. Так, если при введении Vio LD50 Т-2 токсина он значительно снижался (б, /, /), то при введении НТ-2 в этой же дозе практически не отличался от контроля (б, II, 1). Обращает на себя внимание также, что даже при использовании низких доз (V50 LD50) Т-2 токсина имелась тенденция к уменьшению количества АОК в селезенке (а, I, 2).
Изменение ИУЛ при введении Т-2 (I) и НТ-2 (II) токсинов в дозах, соответствующих '/ю LD50 (I) и '/so LD50 (2), реципиентам (б) и донорам
ЮО
во 60 40 2D
а
I Ж
б
1 Ж
lb
К
i г i г
1 2
1 2
Рис. 1. Количество АОК селезенки (а) и титры антител в сыворотке крови (б) (в % от контроля) мышей, получавших различные дозы Т-2 (I) н НТ-2 (II) токсинов. Здесь II Ra рис. 2 1 — 1/10 LDM: 1 — 1/50 LD»; К — контроль. Доверительные границы при Р—0.05.
(а) силеноцитов представлены на рис. 2. Как следует из приведенных данных, при введении токсинов в различных дозах реципиентам спленоцитов ИУЛ у них не отличался от контрольного. Однако введение Т-2 и НТ-2 токсинов в дозе, равной Vio LD5o донорам спленоцитов приводило к уменьшению ИУЛ подопытных животных по сравнению с контрольными на 27 и 8 % соответственно (а, I, 1 к А. II, 1). При введении Vso LD50 токсинов донорам спленоцитов ИУЛ подопытных животных не отличался от контрольного.
Морфологическими исследованиями убедительно доказано, что трихотеценовые микотоксины оказывают повреждающее действие на пролифе-ративные клетки кроветворных и иммунокомпе-тентных органов — красного костного мозга, тимуса, селезенки и лимфатических узлов [5, 6], что указывает на наличие иммунодепрессивногс эффекта у этих токсинов. В исследованиях in vivo [4, 5, 7, 101 и in vitro [71 показано, что трихотеценовые микотоксины, в частности, Т-2, в высоких дозах угнетают как Т-систему, так и В-систе-му иммунитета, однако сведения по этому вопросу, касающиеся Т-2, в литературе отсутствуют. В настоящей работе установлено, что введение Т-2 и НТ-2 токсинов в дозе Vio LD50 приводит к подавлению как клеточного, так и гуморального иммунитета, хотя НТ-2 влияет на иммунную систему в значительно меньшей степени. В то же
ЮО
во 60 40 20
Ж
fl ifl+l
К
11 12
12 12
Рис. 2. Изменение ИУЛ (в % от контроля) при введении различных доз Т-2 (I) и НТ-2 (II) токсинов донорам (а) и реципиентам (б) спленоиитов.
время Т-2 токсин даже в низких дозах О/воЬОбо) может оказывать иммунодепрессивное действие. Следует, по-видимому, подчеркнуть, что иммунодепрессивное действие трихотеценовых микоток-синов, в частности их влияние на гуморальный иммунитет, связано с наличием ацетильной группировки в положении С4. Выявленный иммуно-депрессивный эффект может быть частично объяснен ингибирующим действием трихотеценовых микотоксинов на синтез белка [7, 11].
Полученные результаты позволяют рекомендовать определение количества ЛОК в селезенке как один из чувствительных показателей, который может быть использован для обоснования предельно допустимых количеств трихотеценовых микотоксинов в пищевых продуктах.
Литература
1. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания афлатоксинов в пищевых продуктах. М., 1981.
УДК 371.71:3771:612.763.014.49
Предстоящая перестройка системы среднего образования в нашей стране, отраженная в «Основных направлениях реформы общеобразовательной и профессиональной школы» (1984) обязывает научных и практических работников здравоохранения поднять на новый качественный уровень медицинское обеспечение политехнической подготовки учащихся 9—10 классов к труду, их ориентирование на массовые рабочие профессии.
Удачной формой приобщения подростков к нуждам народного хозяйства страны являются межшкольные учебно-производственные комбинаты (УПК) трудового обучения и профориентации. Однако качественные и количественные оценки степени адаптации подростка к труду (уровень сенсомоторной координации, физиологическая активность наиболее нагружаемых в процессе труда анализаторов, напряженность, условия и нормирование трудового процесса и др.) в условиях УПК до последнего времени не проводилось. Считать нормальным такое положение нельзя, ибо именно на уровне УПК старшеклассник формирует свое отношение к труду, профессионально значимые функции организма, что впоследствии обеспечит успешность освоения избранной специальности.
Именно на этом этапе очень важно получить достаточный ответ на вопрос о том, чего подро-
2. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания патулииа в фруктовых и овощных соках и пюре. М., 1982.
3. Соболев В. С., Эллер К. И., Болтянская Э. М. и др. — Изв. АН СССР. Серия биол., 1984, № 1, с. 137—
4. Friend S. С. £.. Babiuk L. A.. Schiefer Н. В. — Toxicol. appl. Pharmacol., 1983, v. 69, p. 234—244.
5. Friend S. C. £., Hancock D. S.. Schiefer H. B. et al. — Canad. J. сотр. Med., 1983, v. 47, p. 291—297.
6. Hayes M. A., Schiefer H. B. — Ibid., 1980, v. 44, p. 203— 218.
7. Ito H„ Walanable K.. Koyama J.—J. Pharmaco-Bio-Dyn., 1982, v. 5, p. 403—409.
8. Jerne K. N.. Nor din A. A.— Science, 1963, v. 140. p. 405.
9. Karber G. — Arch. exp. Path. Pharmakol., 1931, Bd 162, S. 480—482.
10. Rosensiein Y.. Kretschmer R. R„ Lafarge-Frayssi-net C. — Immunology, 1981, v. 44, p. 555—560.
11. Rosenstein Y.. Lafarge-Frayssinet C.— Toxicol, appl. Pharmacol., 1983, v. 70, p. 283—288.
Поступила 04.10.b4
*
сток хочет, что он может и чего от него потребует избранная профессия. Основная трудность в том, что ни один однократный тест не способен дать такой ответ, нужны время, динамика, которая может элиминировать гетерохронность развития и созревания подростка (естественно, в пределах возможного). С физиологической точки зрения, при обучении в любом кабинете УПК важно одно: за 2 года подросток должен достичь максимального развития профессионально значимых функций. Именно это в первую очередь способствует его дальнейшему соответствию требованиям реального производства.
Кроме того, важно знать поэтапный прогно^ формирования контингента подростков, которые не смогут в силу объективных причин достичь соответствия профессионально значимых функций требованиям профессии. Для таких подростков необходимо вовремя изменить программу обучения или рекомендовать им другой профиль обучения сообразно возможностям.
Большую помощь в этом способен оказать математический аппарат, именуемый цепями Маркова. Известный русский математик А. А. Марков на рубеже XIX—XX столетий обосновал с позиции теории вероятностей влияние состояния динамической системы на ее последующие состояния. Эти закономерности, получившие назва-
К. С. Жижин, И. С. Дронов
прогнозирование рабочего динамического стереотипа подростков в период обучения в межшкольном учебно-производственном комбинате
Ростовский медицинский институт
