Сравнительное изучение противогрибковой активности лекарственных средств Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

1 2

А.А. Яремчук , Н.П. Половко ,

О.П. Стрилец

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОГРИБКОВОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

1Витебский государственный медицинский университет Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

Проведено изучение противогрибковой активности лекарственных средств (ЛС), содержащих производные азола -клотримазол, кетоконазол, бифоназол, миконазол и алиламин - тербинафин. Экспериментально установлено, что исследуемые лекарственные средства не уступают, а по большинству позиций существенно превышают активность препаратов сравнения в отношении грибов рода Candida и Aspergillus. Повышение противогрибковой активности лекарственных средств кетоконазола, клотримазола и бифоназола достигнуто благодаря разработке новой оригинальной основы, обеспечивающей растворение и высвобождение лекарственных веществ. Микробиологическими исследованиями показана перспективность использования в терапии грибковых поражений кожи лекарственных средств в форме гелей.

Ключевые слова: противогрибковые лекарственные средства, микозы.

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время возрос интерес к противогрибковым лекарственным средствам. Это связано с увеличением числа заболеваний, сопровождающихся различными иммуннодефицитными состояниями, следствием чего является рост грибковых поражений. По данным ВОЗ, пятая часть населения Земли страдает или хотя бы один раз перенесла различные формы микоза. На долю микозов приходится около 40% от всех болезней кожи и ногтей. Микозы стоп по частоте приближаются к простудным заболева-

ниям [1-4]. Сложившаяся ситуация стимулирует изучение свойств грибов, макробиоло-гических реакций на грибковую инвазию, создание новых методов диагностики микозов, а также поиск новых и усовершенствование существующих антимикотических лекарственных средств [5, 6].

В терапии микозов используются соединения нескольких основных групп химических соединений:

• антибиотики: гризаны (гризеофульвин) и полиены (амфотерицин В, леворин, нистатин, натамицин);

• азолы: имидазолы (миконазол, кетоконазол, бифоназол, клотримазол, изоконазол, оксиконазол, эконазол и др.); триазолы (ит-раконазол, флуконазол, вориконазол, терко-назол);

• аллиламины (тербинафин, нафтифин);

• морфолины (аморолфин);

• химические соединения других групп: пиримидины (флуцитозин, циклопироксало-мин); тиокарбаматы (толнафтат, толциклат) и некоторые другие препараты [6-8].

Анализируя рынок противогрибковых средств, нами отмечено, что лидирующие позиции по объемам продаж занимают тербинафин, кетоконазол и клотримазол. Они аккумулируют около 65% общего объема продаж сегмента рынка противогрибковых ЛС [7, 8]. Наиболее распространенной формой антимикотических средств являются кремы (около 60% ассортимента). Антими-котические ЛС выпускаются в форме мазей, гелей, растворов для наружного применения, спреев. Кроме того, необходимо отметить такую специфическую среди лекарственных средств номенклатуру, как лаки и шампуни, которые эффективно используются при лечении онихомикозов, себореи и себорейного дерматита.

Для исследования нами выбраны лекарственные средства на основе производных имидазола: клотримазол, кетоконазол, бифоназол, миконазол, а также тербинафин, относящийся к группе аллиламинов. Клотримазол, бифоназол - местные антимикоти-ки, кетоконазол, миконазол и тербинафин используются в терапии как местных, так и системных микозов.

Действие большинства противогрибковых средств основано на влиянии на клеточную мембрану гриба, и в первую очередь на ферменты, участвующие в процессе биосинтеза стеринов. Аллиламины (тербинафин) влияют на фермент скваленепоксидазу, которая катализирует синтез эргостерола клетки гриба. Производные азола влияют на ферменты цитохрома Р-450, С-оксидазу и 14-а-диметил азу, что приводит к торможению синтеза эргостерола и жирных кислот и в конечном итоге к прекращению роста гриба.

Тербинафин - противогрибковое лекарственное средство из группы аллилами-нов. Используется как в системной, так и местной терапии микозов. Лекарственные средства тербинафина гидрохлорида для наружного применения эффективно используются в лечении ряда грибковых инфекций кожи - дерматофитии, кандидоза кожи, разноцветного лишая и др.

Миконазол - противогрибковое лекарственное средство из группы азолов, синтетическое производное имидазола. Как и другие азолы, миконазол нарушает синтез эргостерина. Спектр действия миконазола нитрата широкий и включает Candida spp., Malassezia spp., дерматофиты, а также некоторые грамположительные бактерии. Миконазол применяется в лечении кандидоза кожи, дерматофитии, в том числе осложненных вторичной бактериальной инфекцией, разноцветного лишая, эритразмы, а также кандидоза слизистых оболочек: полости рта, влагалища.

Клотримазол, производное имидазола, обладает очень широким спектром действия, включая не только многие грибы: дерматофиты, Candida spp., Malassezia spp., но и возбудителя эритразмы, грамположительные кокки, трихомонады, что позволяет применять это лекарственное средство при многих инфекциях кожи и слизистых. Клотримазол используется в лечении дерматофитии, кандидоза кожи, в том числе осложненных вторичной бактериальной инфекцией, разноцветного лишая и эритразмы, в терапии кандидного вульвовагинита, трихомониаза или смешанной кандидно-трихомонадной инфекции.

Кетоконазол - противогрибковое средство из группы азолов, спектр действия которого включает многие дерматофиты, Candida spp., Malassezia spp. Местные фор-

мы кетоконазола применяются в терапии дерматофитии, кандидоза кожи, разноцветного лишая, для лечения и профилактики себорейного дерматита, а также при вагинальном кандидозе и онихомикозах.

Бифоназол - производное имидазола, влияет на разные виды дерматофитов, Candida spp., Malassezia spp., некоторые грамположительные бактерии. Бифоназол применяется в терапии дерматофитии, кандидоза кожи. Кроме того, бифоназол используется для лечения онихомикозов, вызванных дерматофитами, или Candida spp.

Целью исследования было сравнительное изучение противогрибковой активности лекарственных средств.

МАТЕРИАЛЫИМЕТОДЫ

Для определения противогрибковой активности в качестве тест-культур использовали эталонные штаммы типовой американской коллекции культур микроорганизмов - дрожжеподобный гриб рода кандида -Candida albicans АТСС 885-653 и гриб группы аскомицетов Aspergillus niger ATCC 16404. Противогрибковую активность исследуемых образцов изучали общепринятым в микробиологической практике методом in vitro - методом диффузии в агар, который основан на способности активнодействующих веществ диффундировать в агар, засеянный предварительно культурами микроорганизмов [9, 10]. Культуры микроорганизмов выращивали при температуре 25-27 °С на агаре Сабуро. При проведении опытов использовали двухсуточную суспензию дрожжеподобного гриба С. albicans в физиологическом растворе, микробная нагрузка составляла 1107 КОЕ/мл, а также 5-7-суточную культуру гриба рода Aspergillus с микробной нагрузкой 1107 КОЕ/мл.

В чашки Петри, установленные на горизонтальной плоскости, вносили 10 мл незараженного агара Сабуро. После застывания агара на его поверхность помещали стальные цилиндры (высота 10, наружный диаметр 8 мм) и заливали вторым слоем агара с культурами микроорганизмов в количестве 15 мл. После застывания агара цилиндры вынимали стерильным пинцетом и в образовавшиеся лунки вносили исследуемые образцы до полного их заполнения. При исследовании образцов, приготовленных на

жировой основе, проводили эмульгирование в фосфатном буферном растворе pH 7,0 с добавлением эмульгатора твин-80 (2,5%). Посевы помещали в термостат при 25-270С на 48-72 часа. Учет результатов проводили путем измерения диаметра зоны подавления роста микроорганизмов, который характеризует фунгицидную активность исследуемых образцов.

Исследованиям подвергали лекарственные средства, которые содержат: клотримазол - «Клотримазол» - 1% гель и крем; кетоконазол - «Незо-Фарм» - 2% гель, миконазол - «Миконазол» - 2% гель; бифоназол -«Микоцид» - 1% гель; тербинафин - «Клами-зин» - 1% гель и крем «Тербинафин», производства «Фармтехнология» (Беларусь). В качестве препаратов сравнения использовали кремы с 2% кетоконазола - «Низорал» (Janssen Pharm., Бельгия); «Кетоконазол-Фитофарм» (Фитофарм, Украина), «Кето-дин», (СП Сперко, Украина); 1% бифоназола

- «Микоспор» (Bayer, Германия); лекарственные средства, содержащие 1 % клотрима-зола - «Клотримазол», мазь (GlaxoSmitKline Pharmaceuticals S. A, Польша), «Кандид», крем (Glenmark Фармасьютикалз ЛТД, Ин-

дия); мазь «Клотримазол-Фитофарм» («Фитофарм», Украина) и «Клотримазол» (НПЦ «Борщаговский ХФЗ», Украина), крем «Кан-дибене» («КайорИагт», Германия); 1% тер-бинафина - крем «Экзифин» (Д-р Редди'с Лаборатория Лтд», Индия), «Ламизил-

Дермгель», гель, (Новартис Консьюмер Хелс С.А., Швейцария); 2% миконазола - «Мико-назол-Дарница» («Дарница», Украина).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты определения противогрибкового действия, приведенные в таблицах 1-5, свидетельствуют, что у избранных тест-штаммов наблюдается высокая чувствительность к исследуемым лекарственным средствам. Диаметр зоны задержки роста микроорганизмов составляет от 30 до 55 мм в зависимости от исследуемой субстанции.

Экспериментально установлено, что зоны задержки роста для исследуемых тест-штаммов грибов под действием 1% геля тер-бинафина существенно выше, чем препаратов сравнения. Исследуемый 1% крем тер-бинафина не уступает, а по некоторым позициям превышает активность референтных препаратов (табл.1).

Таблица 1 - Антимикотическая активность лекарственных средств тербинафина

Тест- микроорганизмы Диаметр зон задержки роста, (мм'

Кламизин-гель (Фармтехнология, Беларусь) Тербинафин- крем (Фармтехнология, Беларусь) Ламизил - Дерм-гель (Новартис Консьюмер Хелс С.А., Швейцария) Экзифин, крем (Д-р Редди’с Лаборатория Лтд, Индия)

С. albicans ATCC 885-653 29,52±0,46 21,55±0,26 21,44±0,15 18,13±0,14

A.niger ATCC 16404 39,06±0,18 32,17±0,29 28,60±0,31 27,37±0,22

Результаты исследования показали, что оба лекарственные средства, содержащие клотримазол, крем и гель, обладают высокой активностью в отношении выбранных микроорганизмов (табл.2). В отношении грибов рода Candida активность изучаемых средств значительно превышает референтные препараты. Следует также отметить, что благодаря оптимально подобранной основе лекарственные средства, обладающие умеренными осмотическими свойствами, обеспечивают противовоспалительное действие, снимая отек [11]. Согласно результатам изучения антимикотической активности геля кетоконазола 2 %, производства «Фармтех-

нология», в опытах in vitro установлено, что лекарственное средство обладает выраженным противогрибковым действием в отношении исследуемых грибов (таблица 3).

Противогрибковая активность 2 % геля значительно превышает активность ЛС сравнения Низорал®, крем («Janssen

Pharm.», Бельгия) и Кетоконазол-Фитофарм, крем (Фитофарм, Украина), чему способствует оптимально подобранный состав гелевой основы карбомера на гидрофильных неводных растворителях, обеспечивающей высвобождение и стабильность лекарственной субстанции.

Таблица 2 - Антимикотическая активность лекарственных средств клотримазола

Лекарственные средства Диаметр зон задержки роста, (мм)

Тест-микроорганизмы

С. albicans ATCC 885-653 A.niger ATCC16404

Клотримазол-гель (Фармтехнология, Беларусь) 45,52±0,36 38,0±0,12

Клотримазол-крем (Фармтехнология, Беларусь) 58,64±0,56 28,30±0,23

Клотримазол - мазь (НИЦ Борщаговский ХФЗ, Украина) 26,43±0,11 30,б0±0,В5

Кандибене-крем (Ratiopharm, Германия) 33,54±0,90 3б,75±0,В

Клотримазол - мазь (GlaxoSmitKline Pharmaceuticals S.A, Польша) 42,18±0,30 29,14±0,б2

Клотримазол-Фитофарм-мазь (Фитофарм, Украина) 33,54±0,90 3б,75±0,В

Кандид - крем (Glenmark Фармасьютикалз ЛТД, Индия) 21,38±0,71 19,37±0,б1

Таблица 3 - Антимикотическая активность лекарственных средств кетоконазола

Тест- микроорганизмы Диаметр зон задержки роста, (мм)

Незо-Фарм,гель (Фармтехнология, Беларусь) Низорал, крем (Janssen Pharm., Бельгия) Кетоконазол-Фитофарм, крем (Фитофарм, Украина) Кетодин, (СП Сперко, Украина)

С. albicans ATCC 885-653 53,75±0,84 21,78+0,28 20,75±0,34 39,б5±0,54

A. niger ATCC 16404 31,б4±0,17 1б,02±0,33 15,52+0,45 14,62+0,52

Результаты определения противогрибковой активности геля «Микоцид», содержащего 1% бифоназола, подтверждают зависимость эффективности от состава основы лекарственного средства (таблица 4). Антимикотическая активность геля достоверно

превышает активность препарата сравнения "Микоспор" крем ("Bayer", Германия).

По противогрибковой активности для изучаемых штаммов микроорганизмов гель, содержащий 2% миконазола нитрата, соответствует препарату сравнения (таблица 5.).

Таблица 4 - Антимикотическая активность лекарственных средств бифоназола

Тест-микроорганизмы Диаметр зон задержки роста, (мм)

Микоцид-гель (Фармтехнология, Беларусь) Микоспор - крем (Bayer, Германия)

С. albicans ATCC 885-653 32,19±0,41 12,34±0,84

A. niger ATCC 16404 31,48±0,2б 17,02±0,23

Таблица 5 - Антимикотическая активность лекарственных средств миконазола

Тест-микроорганизмы Диаметр зон задержки роста, (мм)

Миконазол-гель (Фармтехнология, Беларусь) Миконазол-Дарница- крем (Дарница, Украина)

С. albicans ATCC 885-653 32,4б±0,12 31,75±0,8б

A. niger ATCC16404 31,48±0,24 32,28±0,бб

Усиление противогрибковой активности лекарственных средств, в первую очередь в форме гелей, достигнуто за счет разработки новой оригинальной основы, вклю-

чающей вспомогательные вещества, которые обеспечивают не только растворение труднорастворимых противогрибковых субстан-

ций, но и диффузионную способность лекарственных средств.

ВЫВОДЫ

1. Проведено изучение противогрибковой активности лекарственных средств, содержащих производные азола - клотримазол, кетоконазол, бифоназол, миконазол, а также тербинафина.

2. Экспериментально установлено, что исследуемые лекарственные средства не уступают, а по большинству позиций существенно превышают активность препаратов сравнения в отношении грибов Candida albicans и Aspergillus niger.

3. Результаты микробиологических исследований подтверждают перспективность использования в терапии грибковых поражений кожи лекарственных средств в форме гелей.

SUMMARY

А.А. Yaremchuk, N.P. Polovko, O.P.Strilec COMPARATIVE STUDY OF AN-TIMIKOTICS ACTIVITY OF MEDICATIONS

It is conducted study of antimikotics activity of medicinal preparations, containing the derivatives of azole - klotrimazol, ketokonazol, bifonazol, mikonazol, and alilamin - terbinafin. It is experimentally ascertained that the probed medications do not yield, and on most positions substantially exceeds activity of preparations of comparison in regard to the mushrooms of sort of Candida and Aspergillus. Increase of an-timikotics activity of medications of ketokona-zol, klotrimazol and bifonazol is attained due to development of new original basis, providing dissolution and freeing of medicinal matters. Microbiological researches show perspective of the use in therapy of mycotic defeats of skin of medicinal preparations in the form of gels.

Keywords: antimikotics preparations,

mikozy.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кулага, B.B. Лечение заболеваний кожи /

В.В. Кулага, И.М. Романенко. - К.: Здоров’я.

- 1988. - 300 с.

2. Родионов, А.Н. Грибковые заболевания кожи: руков. для врачей / А.Н Родионов. - 2е изд. - СПб: Питер, 2000. - 288 с.

3. Сергеев, А. Ю. Грибковые инфекции I А. Ю.Сергеев, Ю. В. Сергеев - М., 2003. - С. 186 - 189.

4. Arrese, J. Facing up to the diagnostic in uncertainty and management of mycoses I J. Ar-rese, C. Franchimont, G. Pierard II Int. J. Dermatol. - 1999.- Vol. 2, № 38. - P. 1-6.

5. Dorko, E. Epidemiology and prevalence of dermatomycosis I E. Dorko, J.B. Jautova, H.C Zeienkova II Ann. Derm. Venerol. - 2002. -Vol.129, №3 - P. 661.

6. Короткий, H. Г. Современная наружная терапия дерматозов I Н. Г. Короткий - Тверь, 2001. - 186 с.

7. Компендиум 2008 - Лекарственные препараты: справ. I под ред. В.Н. Коваленко, А.П. Викторова. - К.: Марион, 2008. - 2120 с.

8. Лекарственные препараты в России: справ Видаль. М.:АстраФармСервис, 2006. -1632 с.

9. Волянський, Ю.Л. Вивчення специфічної активності протимікробних лікарських засобів: метод. рекомендації I Ю.Л. Волянський, І.С. Гриценко, В.П. Широбоков. -К., 2004. - 38 с.

10. Калиниченко, Н.Ф. Определение активности антибактериальных средств наружного применения для лечения гнойно-воспалительних инфекций: метод. рекомендації! Н.Ф.Калиниченко, Ю.Л. Волянский,

З.Г. Старобимец - X., 1991. -16 с.

11. Изучение осмотических свойств мазей при их использовании в медицинской практике I ИМ. Перцев [и др.]; II Весник фармации. - 2002. - №2 (30). С.7-10.

Адрес для корреспонденции:

61168, Украина, г. Харьков, ул. Блюхера, 4,

Национальный фармацевтический университет,

кафедра косметологии и аромологии, тел. (0572) 67-87-75; e-mail:cosmetology@ukrfa.ru Половко Н.П.

Кафедра биотехнологии, e-mail:biotechnology@ukrfa.ru Стрилецъ О.П.

Поступила 08.10.2009 г.