CC BY
148
УДК 582.272: 582.739
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ЭТАНОЛЬНЫХ ЭКСТРАКТОВ БУРЫХ ВОДОРОСЛЕЙ И ИХ ВЛИЯНИЯ НА РОСТ ПРОРОСТКОВ И УРОЖАЙНОСТЬ СОИ GLYCINE MAX (L.) MERR.
© Т.И. Имбс1, Е.Л. Чайкина1, Л.А. Дега:2, А.П. Ващенко2, М.М. Анисимов1
'Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, пр. 1GG лет Владивостоку, 159, Владивосток, 69GG22 (Россия).
E-mail: anisimov@piboc.dvo.ru
2Приморский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии, ул. Воложенина, 3G, Приморский край, Уссурийский р-н, п. Тимирязевский, 962539 (Россия). E-mail: fe.smc_rf@mail.ru
Проведен сравнительный анализ химического состава этанольных экстрактов бурых водорослей. Определено, что экстракт из L. achorioides характеризуется высоким содержанием маннита, глутаминовой кислоты и йода. В экстрактах C. costata отмечено высокое содержание минеральных веществ и свободных аминокислот. Экстракт из F. evanescens наиболее богат веществами белковой природы, фенольными соединениями. Экстракт L. japonica выделялся высоким содержанием йода и свободных аминокислот, среди которых преобладала глутаминовая кислота. Все исследуемые экстракты стимулировали рост проростков сои и повышали ее урожайность. Наиболее сильное стимулирующее действие на рост проростков проявил экстракт L. japonica в концентрации 100 мкг/мл, при этом рост корня увеличился на 20%, а стебля на 26% по сравнению с контролем. Обработка семян экстрактом L. japonica в концентрации 2 мг/мл приводила к повышению урожайности на 15,6%. Экстракты бурых водорослей могут быть рекомендованы для использования в сельском хозяйстве в качестве стимулятора роста при подготовке семян к посеву.
Ключевые слова: бурые водоросли, свободные аминокислоты, минеральные вещества, полифенольные соединения, росторегулирующая активность, урожайность сои.
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта Дальневосточного отделения Российской академии наук № 06-II-CX-05-002.
Введение
Мировой океан богат морскими водорослями, и запасы их огромны. Экстракты из морских водорослей проявляют широкий спектр медико-биологического действия. Они обладают противомикробной [1-3], противоопухолевой [4], цитотоксической [5] и противовирусной активностью [6]. изучение химического состава бурых водорослей подтвердило наличие в них биологически активных веществ, эффективных при лечении и профилактике различных заболеваний. При исследовании биологического действия бурых водорослей была выявлена их антиопухолевая активность, которую одни авторы относят к влиянию сульфатированных полисахаридов - фукоиданов [7], другие связывают с присутствием каротиноидов [8], йодсодержащих соединений [9], глицерогликолипидов [9].
Кроме того, бурые водоросли используются как пищевой продукт. Экстракты бурых водорослей после сгущения или обезвоживания используют в качестве приправы к блюдам, а также водорослевого чая [10]. На основе экстрактов из бурых водорослей разработаны биологически активные добавки, рекомендуемые в качестве иммуномодуляторов [11], регуляторов деятельности щитовидной железы [12], онкопрофилактиче-ских добавок [13, 14].
Экстракты из бурых водорослей, как и сами водоросли, нашли применение и в сельском хозяйстве. Они увеличивают урожай широкого диапазона сельскохозяйственных культур, включая картофель, травы, цитру-
* Автор, с которым следует вести переписку.
совые, помидоры, свеклу и бобы. Экстракты содержат большое количество минеральных веществ, аминокислот, витаминов, а также таких растительных гормонов (фитогормонов), как ауксин, цитокинины и гиббе-реллин [15, 16]. Использование этих экстрактов также увеличивало сопротивляемость растений к морозу, грибам и нападению насекомых, в том числе тли и красного паука, и уменьшало заражение растений нематодой [17, 18]. Влияние экстрактов из бурых водорослей на рост и продуктивность сои ранее не изучалось.
Цель настоящей работы состояла в сравнительном изучении химического состава экстрактов бурых водорослей Laminaria cichorioides Miyabe, Costaria costata (Turn.) Saund., Fucus evanescens C. Ag., Laminaria japonica Aresch и их влияние на рост и продуктивность сои Glycine max (L.) Merr.
Экспериментальная часть
В работе использовали свежие водоросли порядка Laminariales из б. Троица, залива Петра Великого Японского моря: C. costata, собранные в мае 2006 г., водоросли 2-го года развития L. japonica и L. cichorioides, собранные в это же время. Кроме того, были использованы свежие водоросли порядка Fucales F. evanescens, собранные на о. Итуруп (Охотское море) в июле 2005 г. Водоросли экстрагировали этанолом дважды в течение 3 и 1,5 ч при температуре 40 °С (водоросли - этанол, 1 : 0.8 w/w), при этом получали суммарный экстракт, в котором содержалось 60 ± 5% этанола. Липофильные вещества извлекали из экстрактов трехкратной промывкой равным объемом хлороформа. Хлороформные экстракты не исследовались. Водно-этанольные экстракты досуха упаривали на роторном испарителе и использовали в работе. Содержание экстрактивных веществ определяли гравиметрически в процентах от сухого веса водоросли. Количество отдельных компонентов - в процентах от сухих веществ экстракта. Содержание нейтральных сахаров в экстракте определяли фенол-сернокислотным методом [19], маннита - модифицированным методом Нэша [20]. Определение массовой доли йода проводили по ранее описанной методике [21]. Содержание тяжелых металлов - на атомно-адсорбционном спектрофотометре «Shimadzu АА-6300» (Япония) [22]. Содержание белка определяли по методу Лоури [23]. Содержание фенольных соединений - по методу Фолина-Чокальте [24]. Качественный и количественный анализ аминокислот проводили на аминокислотном анализаторе «Biochrom-30» (UK) (колонка 200 х 4,6, смола Ultrapac-8 мкм [Li+]), расчет производили путем сравнения площадей пиков исследуемых образцов с площадями пиков стандартной смеси аминокислот «Sigma» (США). Подготовка образцов: навеску сухого обезжиренного экстракта растворяли в загрузочном буфере (рН 2.2), добавляли сульфосалициловую кислоту, выдерживали 30 мин при +4 °С для формирования осадка. Осадок отделяли центрифугированием 20 мин при 8000 об/мин на центрифуге Eppendorf Centrifuge 5804 R, супернатант фильтровали и вводили в прибор.
Для статистической обработки полученных результатов использовали программу Excel и метод однофакторного дисперсионного анализа (1-way ANOVA Tukey HSD test) в пакете прикладных программ STATISTIKA 6.0.
Для изучения ростостимулирующей активности экстрактов бурых водорослей были использованы семена сои Glycine max (L.) Merr. 2006 г. урожая, полученные из Приморского НИИ сельского хозяйства РАСХН, Уссурийск (Россия).
Для оценки биологического действия экстрактов на рост проростков сои применяли технику проращивания семян в рулоне фильтровальной бумаги [25]. Сухие семена раскладывали на полосы фильтровальной бумаги размером 12 х 42 см, предварительно смоченной испытуемым раствором заданной концентрации, свертывали в рулоны, помещали в стаканы с испытуемым раствором (140 мл) и инкубировали в термостате при 26-27 °С в течение 3-х суток. После инкубирования у проростков измеряли длину главного корня и стебля. Контролем служили проростки, полученные из семян, пророщенных в дистиллированной воде. В каждом опыте использовали 25 семян. Для каждой концентрации испытуемого экстракта были выполнены две независимые серии экспериментов с тремя повторами. Достоверность результатов была оценена с использованием t-критерия Стъюдента с вероятностью p < 0.05, а для их статистической обработки использовали компьютерную программу ORIGIN 7.0.
Для оценки биологического действия экстрактов бурых водорослей на урожайность сои Glycine max исследования проводили на полях Приморского НИИ сельского хозяйства РАСХН (Уссурийск). Опыты были заложены по методике Б.А. Доспехова [26]. Для обработки семян использовали экстракты в концентрации 2 мг/мл. К 5 мл исследуемого экстракта добавляли 5 мл 3% раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюло-зы, в качестве пленкообразователя, опрыскивали семена сои в количестве 300 г. Обработанные семена высевались на делянки площадью 10,8 м2. Повторность опытов четырехкратная, расположение делянок рендоми-зированное.
Обсуждение результатов
Анализ экстрактов показал, что из водорослей экстрагировались минеральные, азотистые вещества, олигосахариды, маннит и полифенольные соединения (табл. 1). Ранее было показано, что содержание этих веществ в водорослях непостоянно и зависит от сезона, места сбора образцов и возраста водорослей [27]. Нами анализировались экстракты водорослей, собранных преимущественно в мае, в период наибольшей аккумуляции водорослями минеральных солей и небелкового азота [28].
В экстрактах C. сostata содержание минеральных веществ было существенно больше, чем в экстрактах других изученных водорослей (табл. 1). Качественный состав минеральных веществ экстрактов исследуемых водорослей практически не различался (табл. 2), что согласовывалось с ранее проведенными исследованиями [28]. Во всех образцах преобладали ионы одновалентных металлов: в экстрактах водорослей из семейства ламинариевых больше всего содержалось ионов калия, в экстракте F. evanescens - натрия. Содержание ионов кальция и магния в экстрактах водорослей было значительно меньше, чем ионов одновалентных металлов. Можно предположить, что двухвалентные металлы связаны с нерастворимыми в водном этаноле веществами водорослей, поэтому их содержание в экстрактах невелико (табл. 2).
Экстракт F. evanescens отличался высокой концентрацией ионов железа, кобальта, марганца и никеля. Вероятно, это связано с произрастанием фукуса на мелководьях в условиях хорошей освещенности, что увеличивает аккумуляцию железа и других микроэлементов в его тканях [29].
Бурые водоросли - природный источник биогенных элементов, в том числе йода. Йод в них содержится в различных формах: органический йод - в виде дийодаминокислот, минеральный - в виде йодатов и йодидов калия, в связанном состоянии - в комплексе с белками и клетчаткой водоросли [30, 31]. Первые две формы йода экстрагируются из водорослей этиловым спиртом. Высокое содержание йода обнаружено в экстрактах L. cichorioides (9,0 мг/г) и L. japonica (5,4 мг/г).
Таблица 1. Химический состав экстрактов бурых водорослей
Химический состав Fucus evanescens Laminaria cichorioides Laminaria japonica Costaria costata
Сухие вещества 28,0 ± 1,66 39,0 ± 0,97 32,0 ± 1,28 29,0 ± 2,06
(% от сухого веса водоросли) Сухие вещества экстракта (г/100 мл) 1,97 ± 0,13 1,32 ± 0,18 2,68 ± 0,9 1,24 ± 0,17
% от сухих веществ экстракта
Минеральные вещества 35,0 ± 2,55 56,0 ± 1,81 48,0 ± 2,1 60,0 ± 2,31
Маннит 24,0 ± 0,12 27,5 ± 0,31 26,0 ± 0,31 15,1 ± 0,23
Белок 8,1 ± 0,11 3,6 ± 0,83 1,6 ± 0,91 1,7 ± 0,83
Полифенольные соединения 10,1 ± 1,45 1,4 ± 0,23 0,7 ± 0,3 2,0 ± 0,28
Свободные аминокислоты 0,98 1,1 10,6 5,06
Нейтральные сахара (по глюкозе) 4,0 ± 0,34 3,6 ± 0,36 0,56 ± 0,43 0,7 ± 0,51
Йод 0,04 0,9 0,54 0,03
Таблица 2. Состав макро- и микроэлементов экстрактов бурых водорослей.
Элементы Fucus Laminaria Laminaria Costaria
cichorioides* japonica* costata*
evanescens
Содержание макроэлементов (% от сухих веществ экстракта, х 10 3)
К 2,3 8,5 5,5 6,2
Ыа 7,24 2,72 2,80 4,16
Mg 1,52 0,88 1,10 0,96
Са 0,28 0,08 0,11 0,12
Содержание микроэлементов (% от сухих веществ экстракта, Х10-6)
Мп 37,2 1,84 1,36 1,48
7п 6,4 11,6 10,2 10,8
Бе 1,2 1,2 1,2 1,2
Со 2,4 0,8 0,7 0,4
Ее 52,0 14,8 17,6 27,2
N1 12,4 4,0 3,33 3,72
са 0,03 0,03 0,03 0,03
РЬ 0,05 0,05 0,05 0,05
*образцы собраны в мае 2006 г.
известно, что значительная доля органических веществ в бурых водорослях - это маннит, который практически полностью экстрагируется из водоросли этанолом. Маннит - резервное вещество водорослей, и его содержание достигает максимума в летние месяцы [32]. Среди исследованных водорослей самое высокое содержание маннита обнаружено в экстрактах L. cichorioides (табл. 1). Содержание полисахаридов в полученных экстрактах было невелико, содержание фукоидана и альгинатов составило не более 1 и 0,5% соответственно.
Азотистые вещества водорослей представлены главным образом белками и свободными аминокислотами. При экстрагировании этанолом в экстракт переходят практически все свободные аминокислоты [27]. Нами обнаружено 18 аминокислот (табл. 3). Основная часть свободных аминокислот - моноаминодикарбоновые и алифатические аминокислоты. Моноаминодикарбоновые аминокислоты представлены в основном глутаминовой кислотой, доля от суммы аминокислот которой составила: для C. costata - 14%, для F. evanescens - 26%, для L. cichorioides - 31,8% , для L. japonica - 77%. Среди алифатических аминокислот отмечено самое высокое содержание аланина: для C. costata - 50%, для F. evanescens - 32%, для L. cichorioides - 20% , для L. japonica - 3,9%.
Бурые водоросли синтезируют полифенольные соединения флоротаннины, имеющие в структуре фло-роглюцинольные звенья [33]. Флоротанины проявляют антиоксидантную активность [34]. По содержанию флоротаннинов выделялся экстракт F. evanescens (табл. 1).
Экстракт L. achorioides характеризовался высоким содержанием маннита (275 мг/г) и глутаминовой кислоты (31,8% от суммы свободных аминокислот). Содержание йода в этом экстракте - самое высокое среди изученных видов (9,0 мг/г). Сумма тирозина и фенилаланина составила 2.5% от суммы свободных аминокислот. Среди макроэлементов в экстракте больше всего было калия (0,08 мг/г). Вероятно, йод находится в экстракте преимущественно в виде солей калия. B экстрактах C. costata отмечено высокое содержание свободных аминокислот. B экстракте этой водоросли 50% от суммы свободных аминокислот приходится на метаболически активный аланин, доля глутаминовой кислоты невелика и составляет 14%. B этом экстракте определено высокое содержание минеральных веществ.
Среди изученных видов экстракт из F. evanescens наиболее богат веществами белковой природы, фенольными соединениями. B экстракте определили высокий уровень ионов натрия, железа, марганца, никеля. Содержание йода и свободных аминокислот в экстракте невелико.
Экстракт L. japonica отличался высоким содержанием йода (5,4 мг/г), значительным количеством манни-та (260 мг/г) и самым высоким содержанием свободных аминокислот (106 мг/г), в которых доля глутаминовой кислоты составила 77% от суммы свободных аминокислот.
Для изучения рострегулирующей активности экстрактов были использованы проростки сои Glycine max. На проростки сои экстракты в концентрации 0.01 мкг/мл не оказывали заметного влияния (табл. 4).
Таблица 3. Состав свободных аминокислот экстрактов бурых водорослей
Амино- Fucus evanescens** Laminaria cichorioides* Costaria costata * Laminaria japonica *
кислоты %, от % от су- % от сум- % от су- % от сум- % от су- % от сум- % от су-
суммы хих ве- мы амино- хих ве- мы амино- хих ве- мы амино- хих ве-
амино- кислот ществ экстракта кислот ществ экстракта кислот ществ экстракта кислот ществ экстракта
Гли 2,2 0,022 2,1 0,023 0,3 0,016 - -
Ала 32,0 0,318 20,0 0,220 50,0 2,52 3,9 0,47
Вал 1,8 0,017 0,9 0,009 1,0 0,066 0,3 0,028
Лей 1,8 0,018 - - - - - -
Иле - - - - 0,5 0,036 - -
Серин 1,2 0,012 1,1 0,013 1,0 0,062 0,3 0,027
Тре 2,2 0,023 1,4 0,015 1,1 0,073 1,0 0,06
Лиз 1,5 0,015 1,2 0,013 0,8 0,039 - -
Асп 4,5 0,044 12,7 0,140 3,0 0,160 10,0 1,04
Асн 1,2 0,012 12,7 0,140 2,0 0,116 2,0 0,16
Глу 26,0 0,260 31,8 0,350 14,0 0,69 77,0 8,15
Глн 4,3 0,042 7,3 0,080 7,4 0,37 2,0 0,18
Арг 2,0 0,019 0,6 0,007 0,8 0,045 - -
Таурин 4,0 0,039 - - - - - -
Тир 2,5 0,024 - - 0,8 0,028 - -
Фен 3,5 0,034 2,5 0,027 1,0 0,063 - -
Гис - - - - 0,3 0,005 - -
Про 5,0 0,050 6,5 0,072 14,0 0,690 4,5 0,5
Всего 100 0,98 100 1,10 100 5,06 100 10,6
В концентрации 100,0 мкг/мл стимулирующее действие экстрактов проявилось наиболее ярко. Результаты анализа показали, что все исследуемые экстракты стимулировали рост как корневой системы проростка, так и стебля. Наиболее сильное ростостимулирующее действие показал экстракт L. japonica, который увеличивал рост корня на 20%, а стебля - на 26%. Достаточно эффективно на рост корня действовал экстракт F. evanescens: наблюдали увеличение его длины на 24% по сравнению с контролем, при этом стебель увеличился на 15%. Умеренное действие показал экстракт L. сichorioides: рост корня и стебля увеличился на 21 и 15% соответственно. Рост корня и стебля проростков сои при обработке экстрактом C. costata был незначительным и составил 12 и 6% соответственно.
Предпосевная обработка семян сои всеми исследуемыми экстрактами в концентрации 2 мг/мл приводила к повышению урожайности сои в эксперименте (табл. 5). Наибольший прирост урожайности наблюдали при обработке семян экстрактами L. japonica и F. evanescens: на 15,6 и 11,7% соответственно.
При обработке семян экстрактами из L. сichorioides и C. Costata урожайности сои увеличилась на 8,9%.
Таблица 4. Влияние экстрактов бурых водорослей на рост корня и стебля проростков сои Glycine max.
№ Водоросль Орган Концентрация экстракта, мкг/мл
0,00 0,01 0,1 1,0 10,0 100,0
длина органа, мм
1 L. cichorioides корень 75 і 2 81 і 2 80 і 3 90 і 3* 89 і 2* 91 і 3*
стебель 27 і 1 28 і 1 28 і 1 31 і 1 29 і 1 31 і 1
2 C. costata корень 76 і 3 72 і 3 78 і 2 82 і 3 84 і 3 85 і 2*
стебель 30 і 1 29 і 0 28 і 1 33 і 0 32 і 2 32 і 1
3 F. evanescens корень 70 і 3 75 і 3 74 і 1 76 і 4 81 і 1* 87 і 3*
стебель 27 і 1 29 і 2 28 і 1 27 і 1 30 і 2* 31 і 1*
4 L. japonica корень 70 і 2 74 і 1 78 і 1 77 і 1 82 і 3* 84 і 3*
стебель 23 і 2 28 і 2* 30 і 2* 29 і 1* 29 і 3* 29 і 2*
* - достоверность результатов была оценена с вероятностью p < 0,05.
Таблица 5. Влияние на урожайность сои Glycine max обработки семян экстрактами бурых водорослей, ц/га
Варианты обработки семян Урожайность Увеличение урожайности
Без обработки (контроль) 17,9 -
Экстрактом Ь. cichorioides 19,5 1,6
Экстрактом С. costata 19,5 1,6
Экстрактом К evanescens 20,0 2,1
Экстрактом Ь. ]'аротса 20,7 2,8
НСР0,5 1,5
Заключение
Результаты исследований показали, что этанольные экстракты, полученные из бурых водорослей L. cichorioides, C. costata, F. evanescens, L. japonica, содержали иод, микроэлементы (медь, цинк, железо, селен и др.), макроэлементы, набор аминокислот, в первую очередь глутаминовую, маннит и полифенольные соединения. Эта природная композиция включает комплекс веществ, необходимых для проявления фиторегулирующей активности [35]. Ценность этих экстрактов определяется тем, что свободные аминокислоты легко усваиваются и в совокупности с микроэлементами усиливают действие йода и маннита, содержащихся в экстракте.
Наиболее сильное ростостимулирующее действие на проростки и урожайность сои в исследуемых концентрациях показали экстракты L. japonica и F. evanescens.
Целесообразно рекомендовать экстракты бурых водорослей для использования в сельском хозяйстве в качестве стимулятора роста при выращивании сои на полях.
Список литературы
1. Vlachos V., Critchley A.T. and von Holy A. Antimicrobial activity of extracts from selected Southern African marine macroalgae // S. Afr. J. Sci. 1997. V. 93. Pp. 328-332.
2. Freile-Pelegrin Y. and Morales J.L. Antibacterial activity in marine algae from the coast of Yucatan, Mexico // Bot. Mar. 2004. V. 47. Pp. 140-146.
3. Engel S., Puglisi M.P., Jensen P.R., Fenical William. Antimicrobial activities of extracts from tropical Atlantic marine plants against marine pathogens and saprophytes // Mar. Biol. 2006. V. 149. Pp. 991-1002.
4. Deslandes E., Pondaven P., Auperin T., Roussakis C., Gu'ezennec J., Stiger V. & Payri C. Preliminary study of the in vitro antiproliferative effect of a hydroethanolic extract from the subtropical seaweed Turbinaria ornate (Turner J.
Agardh) on a human non-small-cell bronchopulmonary carcinoma line (NSCLC-N6) // J. Appl. Phycol. 2000. V. 12. Pp. 257-262.
5. Kamenarska Z., Stefanov K., Dimitrova-Konaklieva S., Najdenski H., Tsvetkova I. and Popov S. Chemical composition and biological activity of the brackishwater green alga Cladophora rivularis (L.) Hoek // Bot. Mar. 2004. V. 47. Pp. 215-221.
6. Hudson J.B., Kim J.H., Lee M.K., DeWreede R.E. & Hong Y.K. Antiviral compounds in extracts of Korean seaweeds: Evidence for multiple activities // J. Appl. Phycol. 1999. V. 10. Pp. 427-434.
7. Alekseyenko T.V., Zhanayeva S.Y., Venediktova A.A., Zvyagintseva T.N., Kuznetsova T.A., Besednova N.N.,
Korolenko T.A. Antitumor and antimetastatic activity of fucoidan, a sulfated polysaccharide isolated from the Okhotsk sea Fucus evanescens brown algae // Bull. Exp. Biol. Med. 2007. V. 143. Pp. 730-732.
8. Kotake-Nara E., Kushiro M., Zhang H., Sugawara T., Miyashita K., Nagao A. Carotenoids affect proliferation of hu-
man prostate cancer cells // J. Nutr. 2001. V. 131. Pp. 3303-3306.
9. Cann S.A., van Netten J.P., van Netten C. Hypothesis: Iodine, selenium and the development of breast cancer // Canc. Causes. Contr. 2000. V. 11. Pp. 121-127.
10. Ичи Таникава. Продукты морского промысла. Пер. с англ. М., 1975. 352 с.
11. Патент РФ № 2315487. Биологически активный продукт из бурой водоросли, биологически активная добавка к пище, безалкогольный напиток, парфюмерно-косметическое средство / Шевченко Н.М., Имбс Т.И., Звягинцева Т.Н., Кусайкин М.И., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова Н.Н., Гафуров Ю.М., Рассказов В.А., Таран В.Н. // БИ. 2008. №3.
12. Вишневская Т.И. Комплексная технология йод- и альгинатсодержащих продуктов из бурых водорослей дальневосточных морей : автореф. дис. ... канд. техн. наук. Владивосток, 2003. 24 с.
13. Патент РФ №2034560. Средство для профилактики рака «Кламин» / Некрасова В.Б., Никитина Т.В., Курныгина В.Т., Фрагина А.И., Беспалов В.Г., Вайнштейн В.А., Иванова В.В. // БИ. 1995г. №13.
14. Патент РФ №2031654. Средство «Фитолон» и «Фитолон-М»для профилактики злокачественных новообразований / Барчук А.С.; Гельфонд М.Л.; Некрасова В.Б.; Никитина Т.В.; Курныгина В.Т.; Лебедева Е.С.; Данилов Л.Н.; Фрагина А.И.; Васильев Б.В. // БИ. 1995. №9.
15. Stirk W.A., Van Staden J. Comparison of cytokinin and auxin-like activity in some commercially used seaweed extracts // J. Appl. Phycol. 1997a. V. 8. Pp. 503-508.
16. Stirk W.A., Van Staden J. Isolation and identification of cytokinins in a new commercial seaweed product made from Fucus serratus L. // J. Appl. Phycol. 1997b. V. 9. Pp. 327-330.
17. Mooney P.A., Van Staden J. Algae and cytokinins // J. Plant Physiol. 1986. V. 123. Pp. 1-21.
18. Verkleji F.N. Seaweed extracts in agriculture and horticulture: a review // Biol. Agric. Hortic. 1992. V. 8. Pp. 309-324.
19. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Reiber P.A. and Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances // Analyt. Chem. 1956. V. 28. Рp. 350-356.
20. Vaskovsky V.E., Isay S.V. Quantitative determination of formaldehyde liberated with periodate oxidation // Analyt. Biochem. 1969. V. 30. Pp. 25-31.
21. Кизеветтер И.В., Грюнер В.С., Евтушенко В.А. Переработка морских водорослей и других промысловых водных растений. М., 1967. 416 с.
22. Хавезов И., Цалев Д.. Атомно-абсорбционный анализ. Л., 1983. 144 с.
23. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.I. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. Pp. 265-275.
24. Van Alstyne, K.L. A comparison of three methods for quantifying brown algal poly phenolic compounds // J. Chem. Ecology. 1995. V. 21. Pp. 45-58.
25. Анисимов М.М., Логачев В.В., Демина Е.А, Самошина Н.Ф., Денисенко М.В., Уварова Н.И. Структурнофункциональные свойства тритерпеноидов ряда лупана. 4. Влияние бетулина и его структурных аналогов на рост корня проростков Cucumis sativus L. сорта Каскад // Растительные ресурсы. 2006. Т. 42. Вып. 3. C. 74-81.
26. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М., 1985. 351 с.
27. Кизеветтер И.В. Биохимия сырья водного происхождения. М., 1973. 424 с.
28. Кизеветтер И.В. Суховеева М.В. Шмелькова Л.П. Промысловые морские водоросли и травы дальневосточных морей. М., 1981. 46 с.
29. Саенко Г.Н. Металлы и галогены в морских организмах. М., 1992. 200 с.
30. Барашков Г.К. Сравнительная биохимия водорослей. М., 1972. 355 с.
31. Hou X., Yan X., Chai C. Chemical species of iodine in some seaweeds. II. Iodinebound biological macromolecules // J. Radioanal. Nucl. Chem. 2000. V. 245. N3. Pp. 461-467.
32. Podkorytova A.V. Chemical composition and exploitation of brown algae of the Far East Coast // European Meeting: Marine Phytobenthos Studies and Thear Application. Taranto. 1990. Pp. 85.
33. Ragan M.A., Glombitza K.V. Phlorotannins, brown algal polyphenols // Progress Phycol. Res., Bristol. 1986. V. 4. Pp. 129-241.
34. Nakamura T., Nagayama K., Uchida K., Tanaka R. Antioxidant activity of phlorotannins from the brown alga Eisenia bicyclis // Fisheries science. 1996. V. 62. N6. Pp. 923-926.
35. Crouch I.J., Van Staden J. Evidence for the presence of plant growth regulators in commercial seaweed products // Plant Growth Regul. 1993. V. 13. Pp. 21-29.
Поступило в редакцию 12 февраля 2009 г.
