CC BY
29
▲1
5щ
УДК: 615.322 Код специальности ВАК: 14.04.02; 14.03.06
СРАВНИТЕЛЬНОЕ АНАТОМО-ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОРНЕВИШ И КОРНЕЙ МАРЕНЫ КРАСИЛЬНОЙ И МАРЕНЫ СЕРДЦЕЛИСТНОЙ
М. В. Рыбалко1, В. А. Куркин2, А. А. Шмыгарева3, А. Н. Саньков3,
1ГАПОУ «Оренбургский областной медицинский колледж»,
2ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет»,
3ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет»
Рыбалко Майя Викторовна - e-mail: [email protected]
Целью исследования является анатомо-гистологический анализ корневищ и корней марены красильной (Rubia tinctorum L.) и марены сердцелистной (Rubia cordifolia L.), а также проведение гистохимических реакций на наличие групп антраценпроизводных и дубильных веществ. Материалы и методы. Методологической основой анатомо-гистологических исследования являлась стандартная методика, описанная в Государственной фармакопее Российской Федерации XIlI издания (ОФС.1.5.3.003.15) для приготовления микропрепаратов корневищ и корней марены красильной и марены сердцелистной. Результаты и обсуждение. В результате анатомо-гистологических исследований сырья марены красильной и марены сердцелистной подтверждено классическое вторичное строение корня, определены дополнительные диагностические признаки, заключающиеся в наличии фелло-дермы. Проведена гистохимическая реакция на антраценпроизводные с 10% раствором щелочи, результатом которой стало вишнево-красное окрашивание всех структур фрагмента марены красильной, что же касается марены сердцелистной, то окрасилась только пробка, корковая паренхима и камбий. В ходе проведения реакции на дубильные вещества с же-лезоаммонийными квасцами черно-зеленое окрашивание приобрел центральный осевой цилиндр марены красильной. Выводы. На основе результатов анатомо-гистологических исследований корневищ и корней марены красильной и марены сердцелистной отмечаются сходства строения данных близкородственных видов растений, отличия выявляются при проведении гистохимических реакций, что дает возможность идентифицировать лекарственное сырье данных растений.
Ключевые слова: марена красильная, Rubia tinctorum L., марена сердцелистная Rubia cordifolia L., корневища и корни, анатомо-гистологические признаки.
Purpose of the study is an anatomical and histological analysis of the rhizomes and roots of Rubia tinctorum L. and Rubia cordifolia L., and also reduction of histochemical reactions to the presence of groups of anthracenederivatives and tannins. Materials and methods. The methodological basis of anatomical and histological the studies was the standard method described in the State Pharmacopoeia of Russian Federation XIII edition (0FS.1.5.3.003.15) for the preparation of micro-preparations of rhizomes and roots of Rubia tinctorum L. and Rubia cordifolia L. Results and discussion. As a result, anatomical and histological studies of Rubia tinctorum L. and Rubia cordifolia L. raw materials confirmed the classical secondary structure of the root, determined the additional diagnostic characters, consisting in the presence of phelloderm. Histochemical reaction to anthracenederivatives with 10% alkali solution was carried out, which resulted in cherry-red staining of all the structures of the fragment of Rubia tinctorum L., as for Rubia cordifolia L., only the cork, cortical parenchyma and cambium were stained. In the course of reaction to tannins with iron ammonium alum black-and-green staining acquired the central axial cylinder of Rubia tinctorum L. Conclusions. Based on the results of anatomical and histological studies of the rhizomes and roots of Rubia tinctorum L. and Rubia cordifolia L. observed the similarity of the structure of closely related species of plants, differences are revealed during histochemical reactions, which makes it possible to identify the medicinal raw material of these plants.
Key words: Rubia tinctorum L., Rubia cordifolia L., rhizomes and roots, anatomical and histological characteristics.
Введение
Марена красильная (Rubia tinctorum L., сем. Мареновые -Rubiaceae) - это многолетнее травянистое растение, произрастающее на Кавказе, юге Европейской части России, в Крыму и в Средней Азии [3, 6]. Лекарственные препараты корневищ и корней марены красильной (экстракт марены красильной сухой в виде таблеток, комбинированные препараты «Марелин» и «Цистенал») широко используются в медицинской практике, так как обладают диуретическими свойствами, усиливают перистальтику мускулатуры почеч-
Дата поступления 26.04.2018
ных лоханок и мочеточников, способствуя продвижению камней. Корневища и корни марены красильной обладают способностью разрыхлять и разрушать камни почек и мочевого пузыря, поэтому средства на основе сырья марены применяют при мочекаменной болезни [3, 4]. В качестве действующих веществ корневища и корни марены содержат антраценпроизводные соединения группы ализарина (5-6%), среди которых основным гликозидом является руберитриновая кислота (примверозид ализарина).
NK
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Близкородственным видом марены красильной является марена сердцелистная (Rubia cordifolia L.), произрастающая в северных и северо-восточных провинциях Китая, Тибета, Монголии и Кореи [4]. Корневища и корни марены сердцелистной описаны в Фармакопее КНР. В народной медицине у марены сердцелистной используются как подземные, так и надземные части растения, стебли, листья растения, которые принимаются при дис-менорее, плеврите в качестве ранозаживляющего средства. Кроме того, надземная часть марены является эффективным антитоксическим средством, показанным при укусах кобры и скорпиона [4].
Несмотря на широкое применение сырья марены красильной, на сегодняшний момент выпускают лишь несколько лекарственных препаратов («Марены красильной экстракт»), в состав которых входят корневища и корни марены красильной, и связано это, видимо, с недостаточной изученностью видов сырья марены. Так, в Государственной фармакопее Российской Федерации XIII издания отсутствует фармакопейная статья на сырье марены красильной, соответственно проблема стандартизации является актуальной. Для подготовки новых фармакопейных статей в Государственной фармакопее РФ XIII издания необходимо использовать новые инструментальные возможности, которые позволят визуализировать отличительные анатомо-гистологические признаки, характерные для определенных видов растений. Новые инструментальные возможности микроскопического анализа создают перспективу совершенствования методов стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарствен-
ных растительных препаратов, содержащих антраценпро-изводные. Применение гистохимических реакций дает возможность получить дополнительные сведения для установления подлинности лекарственного растительного сырья. Кроме того, они позволяют обнаружить вещества непосредственно в тканях и клетках, что имеет важное значение при решении многих практических вопросов использования растительного сырья.
Цель исследования: сравнительное анатомо-гистоло-гическое исследование корневищ и корней марены красильной (Rubia tinctórum L.), марены сердцелистной (Rubia cordifolia L.).
Материалы и методы
Объектами исследования служили корневища и корни марены красильной и марены сердцелистной производства ООО «Славянская здравница» (Россия, г. Саранск, 2017 год); ООО «Ортилия» (Россия, г. Новосибирск, 2017 год).
Для анатомо-гистологического исследования использовали световой микроскоп следующей марки: цифровой микроскоп «Motic DM111» (возможность увеличения прибора: 4х10; 10х10; 40х10; 100х10).
Для приготовления микропрепаратов корневищ и корней марены использовали стандартную методику из ГФ РФ XIII издания (ОФС.1.5.3.003.15) [1]. Готовили поперечные срезы исследуемых видов сырья. Небольшие куски подземных органов обоих видов помещали в холодную воду и выдерживали около суток, затем помещали в смесь этилового спирта 95% и глицерина (1:1) на трое суток. Размоченные объекты выравнивали скальпелем так, чтобы они имели строго поперечное или продольное
РИС. 1.
Поперечный срез корней марены (х100): А - фрагмент марены красильной; Б - фрагмент марены сердцелистной. Обозначения: 1 - пробка; 2 - феллодерма; 3 - корковая паренхима; 4 - камбий; 5 - сосуды.
Л I
РИС. 2.
Поперечный срез корневищ марены (х400): А - фрагмент марены красильной; Б - фрагмент марены сердцелистной. Обозначения: 1 - пробка; 2 - феллодерма; 3 - корковая паренхима.
А I
РИС. 3.
Поперечный срез корней марены (х400): А - фрагмент марены красильной; Б - фрагмент марены сердцелистной. Обозначения: 1 - рафиды оксалата кальция; 2 - камбий; 3 - корковая паренхима; 4 - вторичная ксилема.
Л 4
РИС. 4.
Поперечный срез корневищ марены (х400) - окраска раствором натрия гидроксида: А - фрагмент марены красильной; Б - фрагмент марены сердцелистной.
Обозначения: 1 - пробка; 2 - корковая паренхима; 3 - камбий; 4 - сосуды.
▲1
SSM
сечение. Делали срезы и готовили микропрепараты в растворе хлоралгидрата и рассматривали анатомо-диагно-стические признаки при указанных выше увеличениях. Наличие антраценпроизводных определяли по гистохимической реакции со щелочью. Срез помещали на предметное стекло в небольшую каплю 10%-го раствора едкого натра, прибавляли каплю глицерина, накрывали покровным стеклом и наблюдали под микроскопом красное окрашивание тканей, в которых локализуются антрацен-производные. Для обнаружения дубильных веществ использовали реакцию с железоаммонийными квасцами в виде 1% раствора в воде. Срез помещали в каплю реактива, накрывали покровным стеклом и наблюдали окрашивание препарата под микроскопом. Ткани, содержащие дубильные вещества, окрашиваются от солей окисного железа в черно-синий или черно-зеленый цвет [2, 5].
Результаты и их обсуждение
При проведении анатомо-гистологического исследования было установлено, что корневища и корни марены красильной и марены сердцелистной имеют вторичное (нелучистое) строение (рис. 1А, 1Б) [7-9].
На микропрепарате корней марены красильной можно видеть пробку темно-красного цвета, которая представлена клетками многоугольной изодиаметрической формы с тонкими, волнистыми или зигзагообразными стенками (рис. 2А), клетки пробки марены сердцелистной представлены овальными клетками со слабоизвилистыми, слабоволнистыми стенками (рис. 2Б). Под пробкой располагается слой феллодермы, в которой происходит накопление питательных веществ, клетки феллодермы у марены красильной имеют прямоугольную либо овальную форму, с хорошо выраженными прямыми или слабоизвилистыми стенками (рис. 2А). У марены сердцелистной феллодерма представлена мелкими, овальными, равномерно утолщенными, толстостенными клетками (рис. 2Б).
В коровой паренхиме обоих видов встречаются прямоугольные, овальные, круглые и многоугольные клетки, с четкими ровными, а также слабоизвилистыми равномер-
но утолщенными контурами (рис. 3А, 3Б). В клетках коровой паренхимы марены красильной и сердцелистной встречаются игольчатые кристаллы (стиллоиды), а также рафиды оксалата кальция (рис. 3А, 3Б). В случае марены сердцелистной стиллоиды могут располагаться в сосудах древесины. Камбий ярко выражен, в виде, одно-двухрядного кольца бледно-розового цвета (рис. 3А, 3Б). В центральном цилиндре четко видна вторичная и первичная ксилема, в полостях которой располагаются тиллы. Между сосудами находятся группы одревесневших клеток либри-форма желтоватого цвета, с утолщенными стенками и кристаллоносной обкладкой. Сосуды древесины расположены как группами, так и отдельно (рис. 3А, 3Б).
Для проведения гистохимической реакции на антрацен-производные использована окраска 10% раствором щелочи [5, 6]. В случаи марены красильной все структуры окрашиваются в темно-красно-фиолетовый цвет (рис. 4А), что дает возможность предположить, что во всех тканях накапливаются антраценопроизводные, в случае марены сердцелистной окрасились следующие структуры: пробка, феллодерма, камбий (рис. 4Б).
В качестве гистохимической реакции на дубильные вещества проведена реакция с железоаммонийными квасцами [7], в результате которой наблюдается темно-зеленое окрашивание центрального осевого цилиндра марены красильной, что предполагает наличие конденсированной группы дубильных веществ (рис. 5).
Выводы
1. В результате проведения сравнительного анатомо-гистохимического исследования корневищ и корней марены красильной и марены сердцелистной подтверждено наличие основных классических структур в строении, а также выявлены дополнительные признаки, которые заключаются в наличии феллодермы.
2. В корневищах и корнях марены красильной обнаружено наличие конденсированной группы дубильных веществ.
3. Обнаружено наличие антраценпроизводных во всех структурах марены красильной, тогда как в случае марены сердцелистной накопление данных веществ наблюдалось в следующих структурах: пробка, феллодерма, камбий.
4. На основе результатов морфолого-анатомичес-ких исследований разработаны критерии дифференциальной диагностики корневищ и корней марены красильной и марены сердцелистной, позволяющие достоверно идентифицировать исследуемое лекарственное растительное сырье.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственная фармакопея Российской Федерации: Вып. 1. МЗ РФ. 13-е изд. М.: Медицина, 2015. 1470 с.
Gosudarstvennaya farmakopeya Rossijskoj Federacii: Vyp. 1. MZ RF. 13-e izd. M.: Medicina, 2015. 1470 s.
2. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. М.: Медицина, 1977. 275 с.
Dolgova A.A., Ladygina E.YA. Rukovodstvo k prakticheskim zanyatiyam po farmakognozii. M.: Medicina, 1977.275 s.
3. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. 1239 с.
РИС. 5.
Поперечный срез корневищ марены красильной (х400) - окраска железоаммонийными квасцами:
Обозначения: 1 - вторичная ксилема; 2 - первичная ксилема.
