CC BY
13
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Сравнительная оценка влияния тимозина-альфа1 на показатели врожденного иммунитета у мышей с бактериальной инфекцией
С.М.Сафаpова, Р.М.Абдуллаев, А.Э.Дадашева, М.К.Мамедов
Республиканская пpотивочумная станция, Республиканский центр по боpьбе со СПИД, Hациональный центр онкологии, г.Баку
Тимозин-альфа1 (Та1), в фоpме ле-каpственного пpепаpата "задаксин", уже на пpотяжении более 10 лет успешно ^именя-ется в теpапии больных виpусными гепатитами В и С, а также в онкологии для лечения некотоpых злокачественных опухолей [4].
Сегодня считается, что теpапевтические эффекты Ta1 ^и указанных заболеваниях, по-видимому, пpеопpеделяются потен-циpованием нескольких компонентов ^ису-щей этому пептиду плейтропной мультиком-понентной биологической активности [10].
В этой связи надо отметить, что еще в 80-90 гг ХХ в было показано, что в экспеpиментах на иммуносупpессиpованных животных, инфи-циpованных некотоpыми бактеpиами и ^ибами Ta1 пpоявил отчетливые антиинвазивные свойства - введение Ta1 таким животных до их заpажения ощутимо снизило их восприимчивость к указанным инфекциям, а введение Ta1 уже инфиц^ованным животным обеспечило вьфаженный теpапевтический эффект [11].
Поставив во^ос о механизмах pеализа-ции упомянутых свойств, мы пеpвоначально теоpетически допустили, что лечебный эффект этого пептида ^и указанных бактеpиаль-ных инфекциях мог быть обусловлен наличием у него пpямых антибактеpиальных свойств.
Учитывая отсутствие в литеpатуpе данных о специальном изучении этого волоса, для его исследования мы пpедпpиняли целенапpавлен-ное бактеpиологическое исследование и довели экспеpиментальное наблюдение.
В доведенном нами бактеpиологичес-ком исследовании было установлено, что пpисутствие Та1 в питательного сpедах с посевами кулк^ золотистого стафилококка и
синегнойной палочки не оказывало обнаруживаемого тормозящего действия на рост этих бактерий. Это позволило полагать, что Tal не обладает прямой антибактериальной активностью, реализуемой in vitro [1].
В то же время, в проведенном на мышах экспериментальном наблюдении введение Tal уже инфицированным этими же бактериями животным обеспечило эффекты, указывающие на способность Tal тормозить развитие бактериальных инфекций in vivo [2].
Последний факт прямо указывал на то, что поскольку и профилактическое, и "лечебное" действие Tal при бактериальных инфекциях реализуется только in vivo, его следует связывать только с иммунотропным действием этого вещества. А учитывая, что эти эффекты Tal проявлялись немедленно (без латентного периода) после введения, можно полагать, что стимулирующее влияние Tal на иммунную систему направлено, прежде всего, на ее антиген-независимое звено, обеспечивающее функции врожденного иммунитета, отличающегося немедленным характером реагирования [3].
Это, в свою очередь, позволило полагать, что при бактериальных инфекциях Tal может применяться лишь в качестве средства патогенетической терапии, оказывающего стимулирующее влияние, в основном, на те звенья врожденного иммунитета (ВИМ), которые отвечают за обеспечение противоин-фекционной резистентности.
Известно, что в таком же качестве могут использоваться и некоторые другие лекарственные препараты - цитокины и стимуляторы гемопоеза [6]. Однако все эти препараты отличаются выраженными побочными эффек-
тами, что ограничивает их широкое применение. Отсутствие же таких эффектов у Tal выгодно отличает его от остальных препаратов, также способных повышать противоинфекци-онную резистентность организма и делает его весьма привлекательным средством для продолжительной стимуляции факторов ВИМ.
Это дает основание считать, что углубленное изучение возможностей применения Ta1 для лечения бактериальных инфекций и, в том числе, на экспериментальных моделях (поскольку действие Tal не отличается видовой специфичностью), предсталяет собой достаточно актуальную задачу.
Учитывая эти соображения, мы поставили перед собой цель сравнить в контролируемом эксперименте на мышах интенсивность влияния на показатели ВИМ трех препаратов: Tal, полидана (стимулятора лей-коцитопоеза) и альфа-интерферона мыши (ИФН), любезно предоставленным нам д.б.н. С.В.Ожерелковым (НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалея РАМН).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Исследования были проведены на белых мышах (порода SHK) с массой тела до 20 г, которых по ранее описанной методике внутрибрюшинно инфицировали низкопатогенным штаммом золотистого стафилококка [2].
Оценку состояния ВИМ осуществляли путем оценки функционального состояния иммуноцитов, принимающих участие в обеспечении ВИМ: нейтрофи-лов и естественных киллерных клеток (ЕКК). С этой целью определяли: 1) фагоцитарно-метаболическую активность нейтрофилов с помощью спонтанного НСТ-теста и подсчитывали в суспензии спленоцитов процент НСТ-позитивных нейтрофилов (НСТ+Н) [12]; 2) содержание в суспензии естественных киллерных клеток (ЕКК), которые идентифицировали в мазках этих суспензий на предметных стеклах [7]; 3) индекса цитотоксической активности (ИЦА) ЕКК по отношению к аллогенным клеткам [8] и 4) удельную активность аденозиндезаминазы (АДА) в спленоцитах - ин-тегративный иммунобиохимический показатель функциональной активности иммуноцитов [9].
Полученные результаты обрабатывали с помощью формул вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Учитывая, что характер влияния Ta1 и полидана на показатели ВИМ у животных со стафилококковой инфекцией ранее был исследован при его применении для премедикации животных (Ta1 вводился мышам до их инфицирования) [5], мы попытались оценить его влияние при
его введении после инфицирования бактериальным агентом, т.е. в режиме "лечения".
Эксперимент был проведен на 30 мышах, из которых было сформировано 5 групп, по 6 мышей в каждой группе. Мышам из первых 4-х групп внутрибрюшинно ввели по 0,1 мл суспензии, содержащей 100 тыс клеток стафилок-кока, а мышам из 5-й групп - 0,1 мл стерильного физиологического раствора NaCl.
Далее мышам из первых трех групп через сутки после инфицирования, а затем ежедневно и на протяжении 3 суток вводили соответствующие препараты в объеме 0,1 мл: мышам из 1-й группы - Ta1 в суточной дозе 30 мкг/кг; мышам из 2-й группы - мышиный ИФН в дозе 1 тыс титрационных единиц на мышь, а мышам из 3-й группы - полидан в дозе 75 мг/кг. Мышам из 4-й и 5-й групп в таком же режиме внутрибрюшинно вводили по 0,1 мл стерильного физиологического раствора (5-я группа мышей использовалась в качестве контрольной).
Еще через сутки мышей из всех пяти групп забивали с соблюдением принципов эутаназии, а из их селезенок по известной методике приготовили суспензии клеток, которые служили материалом для иммунологического исследования, проведенного с помощью перечисленных выше методов оценки ВИМ. Полученные при этом результаты представлены в таблице.
Сравнив показатели ВИМ у инфицированных мышей из 4-й группы, которым вводили раствор NaCl и у неинфицирован-ных мышей из 5-й группы, мы убедились, что развитие бактериальной инфекции сопровождалось отчетливой депрессией всех показателей ВИМ.
У мышей из 1-й, 2-й и 3-й групп, которым вводили иммунотропные препараты, был отмечен стимулирующий эффект в отношении показателей ВИМ, хотя выраженность этого эффекта в отношении разных показателей в группах мышей, получивших разные препараты, оказалась различной.
Так, у мышей, которым вводили Ta1, все показатели ВИМ оказались выше аналогичных показателей у мышей, из контрольной группы. Мышам, которым вводили полидан, стимулирующий эффект оказался наиболее выраженным в отношении содержания НСТ+Н
Таблица. Показатели вpожденного иммунитета у инфищфованных стафилококком мышей, котоpым вводили pазные иммунотpопные пpепаpаты: тимозин-альфа1,
полидан и мышиный альфа-интеpфеpон
Ыыши, ^TOphM вводили: Доцент HCT+H Пpоцент EKK ИЦА Щ (%) Активность АДА (нкат)
1. тимозин-альфа1 2. полидан 3. интеpфеpон мыши 4. pаствоp NaCl 9,0±1,2 11,б±1,4 б,8±0,9 б,0±0,8 20,8±2,б 22,4±2,8 19,0±2,4 18,2±2,2 27,0±4,б 2б,0±4,0 28,2±5,0 1б,2±3,4 42,0±7,8 42,8±8,2 3б,б±7,0 30,2±б,5
5. инактные мыши 10,8±1,8 24,0±3,2 28,8±4,8% 50,2±12,4
Cокpащения: HCT+H - HCT-позитивные нейтpофилы; ИЦА CП - индекс цитотоксической активности спленоцитов; АДА - аденозиндезаминаза
и активности АДА, а мышам, которым вводили ИФН такой эффект был обнаружен лишь в отношении ИЦА ЕКК и не проявился в отношении функциональной активности нейтрофилов и активности АДА в спленоцитах.
Это позволило заключить, что введение трех названных выше иммунотропных препаратов обеспечило в разной степени выраженную стимуляцию ВИМ. При этом, введение Tal привело к стимуляции функциональной активности как нейтрофилов, так и ЕКК.
Таким образом, на основе представленных выше результатов можно было полагать, что введение Tal оказывает на ВИМ отчетливое стимулирующее воздействие. Это дает основание допустить, что применение этого препарата в комбинации с противобак-териальными лекарственными средствами может обеспечить повышение эффективности противобактериальной терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абдуллаев Р.М., Сафарова С.М., Мамедов М.К. Влияние ти-мозина-альфа1 на размножение бактерий in vitro. // Биомедицина, 2011, N.2, c.33-37.
2. Абдуллаев Р.М., Сафарова С.М., Мамедов М.К. Влияние ти-мозина-альфа1 на развитие бактериальных инфекций. //Азерб. Ж. онкологии, 2011, N.2, c.118-121.
3. Мамедов М.К. Врожденный иммунитет: современная концепция. // Биомедицина, 2010, N.2, с.3-9;
4. Мамедов М.К., Кадырова А.А. Задаксин - новые перспективы применения в лечении инфекционных и онкологических заболеваний. // Биомедицина, 2004, N.2, с.3-10;
5. Мамедов М.К., Кадырова А.А. Влияние тимозина-альфа1 на показатели иммунологически обусловленной резистентности в экспериментах и клинических наблюдениях. // Биомедицина, 2005, N.1, с.38-40.
6. Мамедов М.К., Гулиева А.А., Сафарова С.М. Возможности лекарственной стимуляции врожденного иммунитета. / Мат-лы конференц., посвященной 80-ти летию Э.И.Ибрагимова. Баку, 2010, с.79-80;
7. Мамедов М.К., Кадырова А.А., Ахундова Д.М. Модификация метода подсчета естественных киллерных клеток в периферической крови. // Здоровье, 2004, N.5, с.59-61;
8. Мамедов М.К., Гудратов Н.О., Кадырова А.А. и др. Биохимический метод количественной оценки цитотоксической активности эффекторных иммуноцитов естественной резистентности в клинических и экспериментальных исследованиях. // Азерб. Ж. метаболизма, 2004, N.1, c.51-54;
9. Мамедов М.К., Гудратов Н.О., Кадырова А.А. и др. Активность аденозиндезаминазы в иммуноцитах как биохимический показатель состояния иммунологически обусловленной резистентности. // Азерб. Ж. метаболизма, 2004, N.2, с.51-53;
10. Мамедов М.К., Кадырова А.А., Дадашева А.Э.и др. Плейотропность биологической активности тимозина-альфа1 как основа терапевтической эффективности задаксина при онкологических и инфекционных заболеваниях. // Азерб. Ж. онкологии, 2011. N.1, c.34-37.
11. Сафарова С.М., Мамедов М.К. О перспективах применения тимозина-альфа1 в лечении инфекционных заболеваний вирусной и бактериальной этиологии. // Современные достижения азербайджанской медицины, 2011, N.3, с.7-12.
12. Kadyrova A. The application of simplified neutrophils activity quantitation test for detecting depression of non-specific immuno-mediated resistence. // Azerb. J. Oncology, 2004, N.2, р.214.
SUMMARY
Comparative estimation of thymosin-alpha1 influence to parameters of innate immunity at mice with bacterial infection S.Safarova, R.Abdullayev, A.Dadasheva, M.Mamedov
Republican Anti-plague Station, Republic Center of the struggle against AIDS, National Center of Oncology, Baku
The authors presented results obtained in experiment done for determination ability of thympsin-alpha1, polydan and mice interferon to stimulate innate immunity at mice with infection caused with Staph. aureus.
According these results administration of all tested immunotropic substances provided to express stimulation of innate immunity at mice with infection, moreover Ta1 administration caused stimulation functional activity as neu-trophils as like natural killer cells.
Поступила 10.10.2011
