CC BY
88
УДК 636.32/.38.082.453.53
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ТЕХНОЛОГИЙ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ В ГРАНУЛАХ И В ПАЙЕТАХ
А.-М.М. Айбазов, доктор с.-х. наук., П.В. Аксенова, доктор биол. наук (Государственное научное учреждение Ставропольский научно-исследовательский институт животноводства и кормопроизводства Россельхозакадемии)
За последние десятилетия значительно продвинулись теоретические достижения в области криобиологии. Благодаря этому методу открылись широкие перспективы для углубленной селекционно-племенной работы, сохранения и рационального использования генофонда выдающихся баранов-производителей [1, 2].
Метод криоконсервации позволяет значительно повысить нагрузку на ценных производителей, эффективно проводить их проверку по качеству потомства, реализовывать ценный генофонд как внутри страны, так и за ее пределами. Теоретическую значимость создания банка генофонда и его практическую ценность для развития селекционно-племенной работы трудно переоценить, поэтому ежегодно проводится пополнение банка замороженной спермой высокоценных производителей [3,4].
Ведение современного животноводства, и, прежде всего, его базы -племенного дела, невозможно без использования технологий консервирования семени производителей. Многолетний опыт, в том числе и нашей страны, в этой области показал, что наиболее приемлемым, как с технологической, так и с практической точки зрения, методом сохранения генофонда является замораживание спермы производителей. В нашей стране был разработан и получил наибольшее распространение метод замораживания спермы сельскохозяйственных животных в гранулах [5,6]. В других странах предпочтение отдается замораживанию в полимерных соломинках (пайетах). По мнению многих исследователей, эта технология замораживания семени производителей имеет ряд преимуществ, главные из которых: достижение оптимального режима замораживания,
обеспечивающего максимальное сохранение живых спермиев; высокое качество маркировки каждой дозы спермы и более высокая результативность осеменения при экономном расходовании ценного генетического материала. В связи с этими преимуществами уже со второй половины прошлого столетия более чем в 120 странах мира используют криоконсервацию семени только в полимерных соломинках. Наряду с этим в стране нет данных по сравнительному испытанию технологий замораживания спермы баранов (в гранулах и пайетах).
В задачу собственных исследований входило изучение биологической полноценности спермы, замороженной при разных технологиях (в гранулах и в пайетах). При этом планировалось провести сравнительную оценку технологий замораживания спермы в гранулах и в пайетах, изучить качество и оплодотворяющую способность
глубокозамороженной спермы баранов в зависимости от технологии криоконсервации (пайеты и гранулы).
Место исследований. Экспериментальные исследования проведены в лаборатории воспроизводства, на опытной станции ГНУ СНИИЖК.
Материал и методика исследований.Объектом исследований являлись бараны - производители и их спермопродукция.
Сперму от животных получали в искусственную вагину. Половую активность (ПА) самцов оценивали по затрате времени на выделение одного эякулята. Качественные показатели спермы исследовались по «Инструкции по технологии работы организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных» [7]. Для определения оплодотворяющей способности спермы использовали метод учета фактической оплодотворяемости самок. Проведением производственных опытов (осеменение) определена оплодотворяющая способность спермы после замораживания при -196оС при разных технологиях: в виде необлицованных гранул (традиционный метод) и в пайетах (соломинках). На этой основе сделан вывод о биологической полноценности сохраняемой спермы и экономической эффективности разных технологий криоконсервации как важнейшего метода сохранения генофонда.
Результаты исследований. Для выяснения этого проведено замораживание спермы баранов традиционным способом (в необлицованных гранулах на фторопластовой пластине) и в соломинках (пайетах) с использованием французской линии по криоконсервации спермы. Сперму от баранов получали с помощью искусственной вагины. Каждый эякулят оценивали по подвижности, объему, концентрации и другим показателям в соответствии с Инструкцией по технологии работы организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных (М., 2000). К разбавлению допускались эякуляты с объемом не менее 0,8 мл, подвижностью спермиев после получения не ниже 8 баллов и концентрацией спермиев не менее 2,5 млрд/мл. При этом для соблюдения высокой методичности сперму, полученную от одного барана (СК, № 7171), разделяли на две равные части (принцип разделенного эякулята) и замораживали при разных технологиях. Сперма после замораживания, как в гранулах, так и в пайетах, переносилась в пластиковые контейнеры и помещалась в сосуд Дьюара с жидким азотом.
Для определения выживаемости спермиев пробирки с оттаянной спермой помещали в водяную баню ультратермостата, обеспечивающего поддерживание температуры +37±0,50С, производя оценку по подвижности сразу после оттаивания и через 3, 5 и 8 часов. В случае, если в исследуемой сперме через 8 часов инкубации в термостате сохранялось более 10% спермиев с прямолинейным поступательным движением, дальнейшую оценку полной гибели половых клеток проводили через каждый час.
Результаты исследования представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Сравнительные показатели замороженной-оттаянной
спермы баранов в зависимости от метода криок консервации
Исследуемые параметры п Показатели спермы
гранулы пайеты
Подвижность спермы после эквилибрации 24 6,5 ± 0,03 6,4 ± 0,08
Подвижность после криоконсервации 24 4,5±0,08 4,6±0,01
Выживаемость оттаянной спермы, час 24 7,5±0,01 7,8±0,04
Сохранность акросомы, % 12 32,0 34,0
По результатам эксперимента можно сделать вывод о том, что замораживание в пайетах не ухудшает подвижность спермы после оттаивания.
Лабораторная оценка качества спермы является в определенной степени предварительным шагом к выяснению ее истинной биологической полноценности, которая может быть определена после осеменения животных.
На опытной станции ГНУ СНИИЖК в осенний период 2011 г. на овцах в типе северокавказской мясо-шерстной породы (п=49) проведен научнопроизводственный опыт по выяснению оплодотворяющей способности спермы, замороженной при различных технологиях.
Таблица 2 - Результаты ягнения подопытных овцематок, осемененных
спермой, замороженной в гранула х и соломинках
№ гр. Баран ПД Технолог ия замораж ивания Подвижно сть спермы после оттаивани я, балл Осем енено овец, гол. Объягнило сь Пол я учено гнят
гол. % гол. %
1 7171 гранулы 4,5±0,34 25 14 56,0 18 128,6
2 7171 пайеты 4,3±0,54 24 12 50,0 13 108,3
Итого 49 26 53,1 31 119,2
Выборку маток в охоте проводили при помощи баранов- пробников с подвязанными фартуками. Ежедневно после выборки маток в охоте их разделяли на две равные группы. Условия кормления, ухода и содержания овец обеих групп были одинаковыми и соответствовали зоотехническим нормам, в которых можно было выполнить все элементы методики. Овец осеменяли двукратно, сразу после детекции эструса и спустя 8-10 часов интрацервикальным способом. Результаты осеменения учитывали
предварительно по количеству повторно пришедших в охоту животных и окончательно по результатам ягнения.
Результаты эксперимента представлены в таблице 2.
Таким образом, сперма барана, замороженная как традиционным способом (гранулы), так и в пайетах, обладала достаточно высокой биологической полноценностью, сравнимой с общемировыми показателями.
К достоинствам метода консервации в соломинках можно отнести защищенность спермы от внешних факторов (в частности, контаминации микроорганизмами), высокую технологичность, четкую маркировку, точную идентификацию и высокую культуру производства. К недостаткам можно отнести высокую стоимость линии по замораживанию, что сказывается на себестоимости продукции, ее стационарность и повышенный расход жидкого азота. Существенным недостатком является также необходимость приобретения дорогостоящих зарубежных сосудов Дъюара для хранения спермы в соломинках, т.к. отечественные хранилища не приспособлены для размещения пайет.
Таким образом, можно сделать заключение, что успешно функционирующая французская линия по криоконсервации спермы представляет инновационную установку для производства высококачественного племенного материала.
Литература:
1. Айбазов А.-М.М. К вопросу о сохранении генофонда и биологической полноценности криоконсервированной спермы /А.-М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, К.К.Ашурбегов, Д.В.Коваленко -Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. 2011. т. 1. № 4-1. с. 24-29.
2. Айбазов А.-М.М. Воспроизводительные функции баранов австралийской селекции в адаптационном аспекте /А.-М.М. Айбазов, П.В. Трубникова, Д.В. Коваленко //Зоотехния. 2007. № 5. с. 29-30.
3. Аксенова П.В. Половая активность и спермопродукция козлов-производителей в зависимости от режима эксплуатации //Российский ветеринарный журнал /П.В. Аксенова, А.-М.М. Айбазов //Сельскохозяйственные животные. 2012. № 1. с. 6-7.
4.Желтобрюх Н.А. Повышение эффективности использования ценных баранов в весенне-летние месяцы /Н.А. Желтобрюх, В.К. Ивахненко, А.-М.М. Айбазов //0вцеводство.-1990. № 1. с. 17.
5.Айбазов А.-М.М Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец /А.-М.М. Айбазов //Диссертация на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук //Ставрополь, . 2003
6. Айбазов А.-М.М. Итоги и перспективы разработки и применения биотехнологических методов и приемов интенсификации воспроизводства овец и коз А.-М.М. Айбазов, П.В. Аксенова, К.К. Ашурбегов, Д.В. Коваленко
//Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. 2012. т. 1. № 5. с. 47-53.
7. Инструкция по технологии работы организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных. -М., 2000. 174 с.
8. Аксенова П.В., Айбазов М.М., Коваленко Д.В. Рациональное использование генофонда зааненских производителей. Зоотехния. 2011. № 9. С.6-7.
9. Коваленко Д.В. К вопросу об интенсификации использования высокоценных производителей /Д.В. Коваленко, П.В. Аксенова, А.-М.М. Айбазов. //Сборник научных трудов Ставропольского научноисследовательского института животноводства и кормопроизводства. 2009. Т.1. № 1-1. С. 20-23.
10. Теплова Е.И. Влияние анаплазмоза на воспроизводительную способность баранов-производителей (сообщение первое) /Е.И. Теплова, А.-М.М. Айбазов, Е.В. Мишенина //Вестник ветеринарии. 2003. Т. 25. № 1. С. 37-39.
