СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КАТАЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРОМИЦЕТОВ КИШЕЧНИКА ЧЕЛОВЕКА Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

DOI: 10.24412/1999-6780-2024-1-54-59 УДК: 582.282.23:611.34

Для цитирования: Прокопьев В.В., Щеблякова Л.А., Руденко А.В., Карабасова А.Б. Сравнительная оценка каталазной активности мик-ромицетов кишечника человека. Проблемы медицинской микологии. 2024; 26 (1): 54-59. DOI: 10.24412/1999-6780-2024-1-54-59

For citation: Prokopiev V. V., Shcheblyakova L.A., Rudenko A. V., Karabasova А.B. Comparative assessment of catalase activity of human intestinal micromycetes. Problems in Medical Mycology. 2024; 26 (1): 54-59. (In Russ). DOI: 10.24412/1999-6780-2024-1-54-59

СРАВНИТЕЛЬНАЯ КАТАЛАЗНОЙ МИКРОМИЦЕТОВ ЧЕЛОВЕКА

ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ КИШЕЧНИКА

1,2Прокопьев В.В. (доцент, врач-бактериолог)*, 3Щеблякова Л.А. (врач-бактериолог), 1 Руденко A.B. (зав. учебными лабораториями),1 Карабасова А.Б. (доцент)

'Алтайский государственный медицинский университет (кафедра эпидемиологии, микробиологии и вирусологии); 2000 КДЛ «Здоровье»; 3Краевая клиническая больница, Барнаул, Россия

Доступность физико-химического инструментария (MALDI-TOF) в рутинной микробиологической практике привело к расширению спектра выявляемых патогенов в клинических исследованиях. Данное явление коснулось и идентификации микромицетов. Обнаружение в патологическом материале представителей не встречавшихся ранее или редко встречавшихся таксонов обусловило необходимость изучения их роли в патологии человека. Всесторонняя оценка факторов вирулентности редких грибов и их реализации в условиях человеческого организма позволяет лучше понять тип взаимоотношения этих микроорганизмов с человеком.

В исследовании оценили каталазную активность микромицетов из кишечника человека, используя полуколичественный метод, и определили термостабильность каталазы при 68 °С в течение двух часов инкубации.

Установлено, что наибольшей каталазной активностью обладали Trichosporon asahii, Pichia kudriavzevii и Candida albicans. Также выявлено наличие термостабильной каталазы после 2 часов инкубации при 68 °С у базидиомицетных дрожжей Rhodotorula mucilaginosa и Trichosporon asahii.

Наличие каталазной активности можно рассматривать как один из механизмов устойчивости исследуемых микроорганизмов к факторам врождённого иммунитета организма человека.

Ключевые слова: микробиота кишечника, базидио-мицеты, аскомицеты, каталазная активность, термостабильная каталаза

* Контактное лицо: Прокопьев Василий Валерьевич, e-mail: vasily78@mail.ru

COMPARATIVE ASSESSMENT OF CATALASE ACTIVITY OF HUMAN INTESTINAL MICROMYCETES

1,2Prokopiev V.V. (associate professor, bacteriologist), 3Shcheblyakova L.A. (bacteriologist), Rudenko A.V. (head of teaching laboratory), karabasova A.B. (associate professor)

1 Altai State Medical University (Department of Epidemiology, Microbiology and Virology); 2LLC CDL "Health"; 3Regional Clinical Hospital, Barnaul, Russia

The availability of physico-chemical tools (MALDI-TOF) in routine microbiological practice has led to an expansion of the spectrum of detected pathogens in clinical studies. It is also affected the identification of micromycetes. The finding rarely identified taxa in pathological material raised the question of their role in human pathology. A comprehensive assessment of the virulence factors of rare fungi and their realisation in the human body allows us to understand the type of symbiotic relationship of these microorganisms with humans.

In our study, we semiquantitatively assessed the catalase activity of human intestinal micromycetes, as well as the thermostability of catalase at 68 °C for two hours of incubation.

It was found that Trichosporon asahii, Pichia kudriavzevii and Candida albicans had the highest catalase activity. The presence of thermostable catalase was also detected after 2 hours of incubation at 68 °C in the basidiomycete yeasts Rhodotorula mucilaginosa and Trichosporon asahii.

The presence of catalase activity can be considered as one of the mechanisms of resistance of the studied microorganisms to the innate immune response of the human body.

Key words: intestinal microbiota, basidiomycetes, as-comycetes, catalase activity, thermostable catalase

ВВЕДЕНИЕ

Кишечник человека представляет собой особую биосистему, состоящую из бактерий, микромицетов, вирусов и простейших [1]. В процессе конвергентной эволюции сформировался баланс между кишечной микробиотой и организмом человека [2, 3], причём показано, что некоторые комменсалы кишечника генетически адаптированы к таким отношениям (например, использование ими

гликанов грудного молока) [4]. Ввиду сложности межвидовых отношений микробиоты кишечника и человека, данная система рассматривается в качестве «квазиоргана» [5]. Кишечная микробиота оказывает влияние как на физиологические, так и на патологические процессы, происходящие в организме человека [6, 7].

Отметим, что в настоящее время значительно повысился интерес к изучению микробиоты различных биотопов организма человека и, как следствие, к увеличению числа работ, посвященных данной теме. За последние десять лет в международных базах цитирования количество исследований микробиоты кишечника возросло более чем в десять раз (до нескольких тысяч работ в год). Причинами этого можно считать появление и широкую доступность таких инструментов, как матрично-активированная лазерная десорбционно-ионизационная времяпролетная масс-спектрометрия (MALDI-TOF-MS) и методы ДНК-секвенирования нового поколения (NGS), позволивших с высокой точностью идентифицировать различных представителей микробиоты [8].

Однако, несмотря на возросший интерес к мик-робиоте кишечника, наиболее изучаемым компонентом до сих пор остаются бактерии. Работ, посвященных грибковым симбионтам кишечника, существенно меньше [9].

В течение длительного времени наиболее изученными компонентами микобиоты различных биотопов человека были грибы родов Candida и Asper-gillus. Расширение этиологического спектра выявляемых микромицетов привело к необходимости определения роли «новых» симбионтов во взаимоотношении с организмом человека. Микроскопические грибы, будучи изначально свободноживущими организмами, для инициирования инфекционного заболевания должны отвечать четырём критериям: рост при температуре человеческого тела, способность проникать через поверхностные барьеры, способность лизировать и абсорбировать компоненты тканей человека и быть устойчивыми к факторам защиты иммунной системы [10].

Одним из факторов вирулентности, способствующих проникновению через поверхностные барьеры и возможности противостоять врожденному иммунному ответу организма человека, является антиоксидантная система, в том числе каталазная активность микроорганизмов.

Каталаза (КФ 1.11.1.6) - это фермент класса оксиредуктаз, обнаруженный практически у всех организмов, взаимодействующих с кислородом. Данный фермент катализирует расщепление О—О-связи в перекиси водорода (Н2О2) с образованием

молекулярного кислорода и воды [11]. Каталаза защищает клетку от повреждающего действия активных форм кислорода, обладает очень высокой каталитической активностью, где скорость реакции лимитируется скоростью диффузии к активному центру фермента [12, 13], и работает в широком диапазоне рН (5,0-10,5) [14]. Более того, каталаза была отнесена к группе многофункциональных белковых гомоолигомеров (англ. Moonlighting proteins), которые способны выполнять более одной биохимической или биофизической функции в разных структурах клетки и за её пределами [15]. Описанные свойства каталазы позволяют причислить этот фермент к важным факторам вирулентности микро-мицетов, позволяющим обходить защитные механизмы хозяина в условиях организма человека.

В настоящей работе исследована каталазная активность микроскопических грибов, выделенных из кишечника человека (Rhodotorula mucilaginosa, Trichosporon asahii, Geotrichum candidum, Pichia kudriavzevii и Candida albicans); другим аспектом было изучение термостабильности каталазы у вышеперечисленных микроорганизмов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследовали штаммы базидиомицетов Rhodotorula mucilaginosa (22 штамма), Trichosporon asahii (3) и аскомицетов Candida albicans (12), Geotrichum candidum (20), Pichia kudriavzevii (8).

Штаммы были получены при культуральном исследовании кала пациентов с патологией желудочно-кишечного тракта и из кала практически здоровых людей, проходивших плановый медицинский осмотр. Для сравнения были изучены аналогичные свойства контрольного штамма C. albicans ATCC10201 (Culti-Loops™ Candida albicans ATCC™ 10 231™, Thermo Scientific™).

Суспензию кала засевали на среду Сабуро с 2% глюкозы и хлорамфениколом (0,4 г/л) и инкубировали при 35 °С в течение 72 часов. Далее посевы на протяжении недели инкубировали при температуре 25 °С.

Идентификацию дрожжей проводили на основании морфологических, биохимических и культу-ральных свойств (использовали «Atlas of Clinical Fungi», de Hoog G.S., et al., 2020).

Для дополнительной верификации видовой принадлежности микромицетов применяли масс-спектрометр Microflex производителя Bruker Daltonik Gmb H&Co. KG (Германия) с программным обеспечением MALDI Biotyper, содержащим референтскую базу данных (масс-спектры более 2500 видов микроорганизмов и 7800 штаммов).

Для полуколичественной оценки каталазной активности и теста на термостабильность каталазы при 68 °С был использован модифицированный для микромицетов каталазный тест, описанный в работе Kubica G.P. 1959 года [16] и в Приказе Минздрава РФ от 21 марта 2003 г. №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».

Для оценки каталазной активности в пробирки ПБ2-16х150 мм с 5 мл питательной среды Сабуро (бульон) инокулировали 1 стандартизованную петлю (2 мм) культур, выращенных на агаризованной среде Сабуро в течение 72 часов. Сравнительную оценку каталазной активности проводили с применением равных объемов биомассы микромицетов. В стационарной фазе роста после 72 часовой инкубации изучаемые культуры имели различные средние показатели оптической плотности: R. mucilaginosa - 3,24; C. albicans - 9,3; T. asahii - 11,3; G. candidum - 4,3; P. kudriavzevii - 12,6. Для получения равных объемов биомассы исследуемые культуры при помощи физиологического раствора хлорида натрия доводили до оптической плотности равной 3 единицам по МакФарланду на денситометре Densi-La-Meter II (Erba Group, EU).

В пробирку с 5 мл бульонной культуры с оптической плотностью 3 единицы по МакФарланду добавляли 1 мл свежеприготовленной смеси твина-80 и 30% перекиси водорода, плотно закрывали пробирку и оставляли на 5 минут при комнатной температуре. При наличии каталазной активности в пробирке образовывался столбик пены. Высоту столбика пены измеряли от уровня жидкости в пробирке до верхнего края пены. В качестве отрицательного контроля использовали стерильную среду Сабуро (без посева).

Для оценки термостабильности каталазы при 68 °С в микоцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл вносили 0,5 мл 0,067 М фосфатного буферного раствора (рН = 7,0) и по 3 стандартизованные петли (2 мм) биомассы дрожжей, выращенных на агаризо-ванной среде Сабуро в течение 72 часов. Далее на протяжении 2 часов пробирки инкубировали в твердотельном термостате ТТ-2 «Термит» (ДНК-технология, РФ). После остывания пробирок до комнатной температуры в пробирки вносили 0,5 мл смеси твина 80 и 30% перекиси водорода. Появление пузырьков в течение 20 минут показывало наличие термостабильной каталазы.

Анализ и статистическую обработку осуществляли с помощью Н-критерия Краскела-Уоллиса для сравнения нескольких групп. Для расчёта Н-критерия применяли online-калькулятор

https://www.statskingdom.com/kruskal-wallis-calculator.html

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Расчет H-критерия Краскела-Уоллиса показал, что существуют значительные отличия в каталазной активности между исследуемыми микромицетами. Область «отбраковки» для этого теста типа хи-квадрат соответствует R = {%2: %2> 9,488}. х2 (4) = 50,3 со средним ранговым баллом 15,77 для R. mucilaginosa, 47 - для C. albicans, 60 - для T. asahii, 26,28 - для G. candidum, 58,63 - для P. kudriavzevii.

Поскольку х2 (4) = 50,3 > x2c = 9,488 различия достоверны р<0,001 (Рис.1).

Каталазная активность

Rhodotorula mucilaginosa 4±2,1

Geotrichum candidum 7±3,4

Candida albicans 40±18,8

Pichia kudriavzevii 110±18,8

Trichosporon asahii 120

0 20 40 60 80 100 120 140

Рис.1. Каталазная активность микромицетов кишечника человека (в мм столбика пены над жидкостью после добавления смеси твина 80 и 30% перекиси водорода).

Как видно из рисунка 1, максимальной активностью каталазы обладали T. asahii, столбик пены которого после добавления смеси твина 80 и 30% перекиси водорода выбивал пробку, что не позволило точно измерить его высоту и, соответственно, стандартное отклонение (в диаграмме представлено 120 мм как расстояние от уровня жидкости до верхнего края пробирки).

В случае P. kudriavzevii (телеморфа Candida krusei) 6 из 8 исследуемых штаммов образовывали столбик пены до верхнего края пробирки, показывая высокий уровень каталазной активности.

Штаммы C. albicans также демонстрировали значительный уровень каталазной активности, причем тест контрольного штамма C. albicans ATCC10201 имел наиболее высокий уровень с высотой пенного столбика 72 мм. Вероятно, активность этого фермента у кишечных изолятов C. albicans более низкая в сравнении с другими штаммами вида.

Наименьшую каталазную активность показали штаммы R. mucilaginosa и G. candidum.

Исследование термоустойчивости каталазы при двухчасовой экспозиции при 68 °С позволило вы-

явить наличие термостабильной каталазы у бази-диомицетов из родов Rhodotorula и Trichosporon. У аскомицетов родов Candida, Pichia и Geotrichum активность каталазы после двухчасовой экспозиции при 68 °С не наблюдалась.

Несмотря на то, что R. mucilaginosa обладала наименьшей каталазной активностью (среди всех изученных нами штаммов), в работе Landolfo S. и соавторов [17] по определению уровней транскрип-тов генов синтеза каротиноидов при секвенирова-нии этого микромицета был анонсирован предположительный белок - каталаза А. В вышеупомянутом исследовании также была обнаружена прямая связь синтеза каратиноидных пигментов с уровнем транскриптов каталазы, что ведёт к более выраженной защите от оксидативного стресса, оказываемого иммунными факторами защиты организма хозяина.

T. asahii - базидиомицет, может быть представителем нормальной микобиоты кожи, но иногда вызывать тяжелые диссеминированные инфекции [18]. Нами не найдено информации о нуклеотидной последовательности гена каталазы T. asahii. В то же время у другого представителя этого рода T. oleaginosus при ДНК-секвенировании был обнаружен белок, содержащий домен каталазы [19]. Столь выраженная активность исследуемого нами фермента должна найти своё отражение в современном понимании патогенеза заболеваний, вызванных T. asahii, и для решения этого вопроса необходимы дополнительные исследования.

Среди аскомицетов наибольшую каталазную активность проявляли штаммы P. kudriavzevii, что согласуется с агрессивным течением микозов, вызванных данным патогеном [20]. Работы по изучению генома P. kudriavzevii немногочисленны, однако мы обнаружили сведения о гене каталазы в исследовании Sugiyama M. и соавторов [21].

C. albicans - оппортунистический патоген человека, роль которого в этиологии кандидозов хорошо изучена. Уровень каталазной активности этого микроорганизма был средним среди исследованных микромицетов. Данный фермент не только защищает Candida spp. от активных форм кислорода, но и повышает устойчивость к некоторым антимикоти-кам [22].

Несмотря на существующие работы, в которых показано этиологическое значение G. candidum в поражении эндокарда, легких, глаз [23, 24], их роль в патологии требует дальнейших исследований. Низкая каталазная активность этих микромицетов также косвенно свидетельствует о относительно невысоком патогенном потенциале этого микроорганизма. Данных о каталазной активности G. can-didum в литературе нами не найдено.

В нашем исследовании мы также оценили наличие термостабильности (2 часа при 68 °С) ката-лаз изученных штаммов микромицетов. Обнаружено, что оба базидиомицета обладали термостабильной каталазой, тогда как все аскомицеты теряли каталазную активность при экспозиции культур в условиях высокой температуры. В литературе есть описания термостабильной каталазы у аскомицет-ных плесневых Chaetomium thermophilum [25], Pénicillium griseofulvum [26] и дрожжевых грибов Hansenula polymorpha [27], где максимальная температура активности каталазы не превышала 55 °С. Научных работ по выявлению термостабильной ка-талазы у базидиомицетных дрожжей нами не найдено. Количество исследованных таксонов не позволяет сделать даже предварительный вывод о значимости данного теста для отличия двух крупнейших отделов в царстве Fungi, но может быть актуальной темой для дальнейших разработок в этом направлении.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выявление в различных биотопах организма человека микромицетов, ранее не встречавшихся в медицинской практике или редко встречавшихся таксономических групп, ставит перед клиницистами и учёными задачу по исследованию механизмов их взаимодействия с организмом человека. Всесторонняя оценка различных факторов вирулентности микромицетов кишечника в условиях организма человека позволит понять особенности патогенеза заболеваний, вызванных данными микроорганизмами.

В настоящем исследовании была обнаружена выраженная каталазная активность у грибов T. asahii, P. kudriavzevii и C. albicans, что может свидетельствовать о весомой роли данного фермента в физиологии данных микромицетов. Также была выявлена выраженная термостабильность каталазы изученных базидиомицетов, что может быть использовано в качестве дополнительного идентификационного теста.

ЛИТЕРАТУРА

1. Wu X., Xia Y., He F., et al. Intestinal mycobiota in health and diseases: from a disrupted equilibrium to clinical opportunities. Microbiome. 2021; 9 (60). doi.org/10.1186/s40168-021-01024-x

2. Trosvik P., Stenseth N.C., Rudi K. Convergent temporal dynamics of the human infant gut microbiota. ISME J. 2010; 4 (2): 151-8. doi: 10.1038/ismej.2009.96

3. Sang J., Zhuang D., Zhang T., et al. Convergent and divergent age patterning of gut microbiota diversity in humans and nonhuman primates. mSystems. 2022; 7 (4): e0151221. doi: 10.1128/msystems.01512-21

4. Milani C., Duranti S., Bottacini F., et al. The first microbial colonizers of the human gut: composition, activities, and health implications of the infant gut microbiota. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2017; 81 (4): e00036-17. doi: 10.1128/MMBR.00036-17

5. Liu H., Wang H.H. Impact of microbiota transplant on resistome of gut microbiota in gnotobiotic piglets and human subjects. Front. Microbiol. 2020; 11: 932. doi: 10.3389/fmicb.2020.00932

6. Fan Y., Pedersen O. Gut microbiota in human metabolic health and disease. Nat. Rev. Microbiol. 2021; 19 (1): 5571. doi: 10.1038/s41579-020-0433-9

7. Kataoka K. The intestinal microbiota and its role in human health and disease. J. Med. Invest. 2016; 63 (1-2): 2737. doi: 10.2152/jmi.63.27

8. Lagier J.C., Million M., Hugon P., et al. Human gut microbiota: repertoire and variations. Front. Cell Infect. Microbiol. 2012; 2: 136. doi: 10.3389/fcimb.2012.00136

9. Pérez J.C. Fungi of the human gut microbiota: Roles and significance. Int. J. Med. Microbiol. 2021; 311 (3): 151490. doi: 10.1016/j.ijmm.2021.151490

10.Köhler J.R., Hube B., Puccia R., et al. Fungi that Infect Humans. Microbiol. Spectr. 2017; 5 (3). doi: 10.1128/microbiolspec.FUNK-0014-2016

11.Аладьева Т.Л., Зиматкин С.М. Каталаза клетки: строение, биогенез, многообразие, функции. Экспериментальная биология и биотехнология. 2022; 1: 12-22. [Aladyeva T.L., Zimatkin S.M. Cellular catalase: structure, biogenesis, diversity, functions. Experimental Biology and Biotechnology. 2022; 1: 12-22 (In Russ)]. doi:10.33581/2957-5060-2022-1-12-22

12. Chelikani P., Fita I., Loewen P. C. Diversity of structures and properties among catalases. Cell Mol. Life Sci. 2004; 61 (2): 192-208. doi: 10.1007/s00018-003-3206-5

13.Lledías F., Rangel P., Hansberg W. Oxidation of catalase by singlet oxygen. J. Biol. Chem. 1998; 273 (17): 10630-7. doi: 10.1074/jbc.273.17.10630

14.Miroshnichenko O.S. Biogenesis, physiological role, and properties of catalase. Biopolym. Cell. 1992; 8 (6): 3-25. doi.org/10.7124/bc.00033C

15.Антипов С.C, Преображенская Е.В. Парадокс многофункциональных гомоолигомеров: способы их локализации и механизмы регуляции функциональной активности. Вестник Евразийского национального университета имени Л.Н. Гумилева. 2023; 142 (1): 103-110. [Antipov S.S., Preobrazhenskaya E.V. The paradox of multifunctional homooligomers: methods of their localization and mechanisms of regulation of functional activity. Bulletin of the L.N. Gumilev Eurasian National University. 2023; 142 (1): 103-110. (In Russ)]. doi: 10.32523/2616-7034-2023142-1-103-110

16.Kubica G.P., Pool G.L. Studies on the catalase activity of acid-fast bacilli. I. An attempt to subgroup these organisms on the basis of their catalase activities at different temperatures and pH. Am. Rev. Respir. Dis. 1960; 81: 38791. doi: 10.1164/arrd.1960.81.3.387

17.Landolfo S., Ianiri G., Camiolo S., et al. CAR gene cluster and transcript levels of carotenogenic genes in Rhodotorula mucilaginosa. Microbiology (Reading). 2018; 164 (1): 78-87. doi: 10.1099/mic.0.000588

18.Zhang E., Sugita T., Tsuboi R., et al. The opportunistic yeast pathogen Trichosporon asahii colonizes the skin of healthy individuals: analysis of 380 healthy individuals by age and gender using a nested polymerase chain reaction assay. Microbiol. Immunol. 2011; 55 (7): 483-8. doi: 10.1111/j.1348-0421.2011.00341.x

19.Kourist R., Bracharz F., Lorenzen J., et al. Genomics and transcriptomics analyses of the oil-accumulating basidio-mycete yeast Trichosporon oleaginosus: insights into substrate utilization and alternative evolutionary trajectories of fungal mating systems. mBio. 2015; 6 (4): e00918. doi: 10.1128/mBio.00918-15

20. Antinori S., Milazzo L., Sollima S., et al. Candidemia and invasive candidiasis in adults: A narrative review. Eur. J. Intern. Med. 2016; 34: 21-28. doi: 10.1016/j.ejim.2016.06.029

21.Sugiyama M., Baek S.Y., Takashima S., et al. Overexpression of PkINO1 improves ethanol resistance of Pichia kudriavzevii N77-4 isolated from the Korean traditional fermentation starter nuruk. J. Biosci. Bioeng. 2018; 126 (6): 682-689. doi: 10.1016/j.jbiosc.2018.06.001

22.Roman E., Prieto D., Martin R., et al. Role of catalase overproduction in drug resistance and virulence in Candida albicans. Future Microbiol. 2016; 11: 1279-1297. doi: 10.2217/fmb-2016-0067

23. Ghosh P., Boler A.K. Geotrichum candidum: A rare primary pathogen in pulmonary geotrichosis. Indian J. Med. Res. 2020; 152 (Suppl 1): S123-S124. doi: 10.4103/ijmr.IJMR_2202_19

24.Myint T., Dykhuizen M.J., McDonald C.H., Ribes J.A. Post operative fungal endopthalmitis due to Geotrichum candidum. Med. Mycol. Case Rep. 2015; 10: 4-6. doi: 10.1016/j.mmcr.2015.11.001

25.Kamlärovä A., Chovanovä K., ZZämocky M. Peculiar genes for thermostable bifunctional catalase-peroxidases in Chaetomium thermophilum and their molecular evolution. Gene. 2018; 666: 83-91. doi: 10.1016/j.gene.2018.05.007

26.Krumova E., Abrashev R., Dishliyska V., et al. Cold-active catalase from the psychrotolerant fungus Penicillium grise-ofulvum. J. Basic Microbiol. 2021; 61 (9): 782-794. doi: 10.1002/jobm.202100209

27. Tian Y.S., Xu H., Xu J., et al. Heterologous extracellular expression and initial characterization of the peroxisomal catalase from the methylotrophic yeast Hansenulapolymorpha in Pichiapastoris. Appl. Biochem. Microbiol. 2013; 49: 507-513. doi.org/10.1134/S0003683813050141

Поступила в редакцию журнала 14.11.23 Принята к печати 12.01.24