CC BY
50
УДК 615.256.4: 611-018.74
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭНДОТЕЛИО- И КАРДИОПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ
ПРЕПАРАТА ИМПАЗА НА МОДЕЛЯХ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОЙ И ГИПЕРГОМОЦИСТЕИН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ
Моделирование L-NAME-индуцированного (внутрибрю-шинным введением L-NAME в дозе 25 мг/кг) и гипергомоци-стеин-индуцированного дефицита оксида азота с помощью внутрижелудочного введения метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней у крыс приводило к развитию эндотелиальной дисфункции. В условиях этих моделей были выявлены выраженные эндотелиопротективные и кардиопротективные свойства препарата импаза.
Ключевые слова: импаза, эндотелий, оксид азота, метио-нин, Ь^аше.
Введение. Одним из ведущих патогенетических механизмов развития сердечно-сосудистого континуума является эндотелиальная дисфункция (ЭД) [2, 4]. В настоящее время приобретает особый интерес изучение потенцированных (приготовленных по гомеопатической технологии) антител к эндотелиальной NO-синтазе ^NOS), содержащихся в препарате «Импаза», для коррекции эндотелиальной дисфункции. Фирма ООО НПФ «Материа Медика Холдинг» позиционирует препарат «Импаза» как средство коррекции эректильной дисфункции. В то же время, мы предполагаем, что гомеопатически потенцированные антитела к eNOS могу быть эффективны при всех патологических состояниях сердечно-сосудистой системы, сопровождающихся эндоте-лиальной дисфункцией.
Целью настоящего исследования явилось изучение эндотелио- и кардиопротек-тивных эффектов препарата импаза на моделях L-NAME-индуцированного и гиперго-моцистеин-индуцированного дефицита оксида азота.
Методика исследования. Моделирование L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции осуществляли внутрибрюшинным введением N-нитро-Ь-аргининметилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг белым крысам-самцам линии Wistar, массой 250-300 г, в течение 7 дней [1].
Для моделирования гипергомоцистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции готовили раствор для внутрижелудочного введения метионина ex tempore с помощью солюбилизатора ТВИН-80 и 1% крахмального раствора, раствор с метиони-ном (ООО «Полисинтез», г. Белгород) вводили ежедневно, 1 раз в сутки, внутрижелу-дочно, в дозе 3 г/кг, в течение 7 дней. В качестве сравнения была выделена дополнительная группа с введением 10% раствора ТВИН-80 в дозе 1 мл/кг ежедневно, 1 раз в сутки, в течение 7 дней, внутрижелудочно.
Фармакологическую коррекцию дефицита оксида азота осуществляли добавлением животным в поилки сверхмалых доз афинно очищенных антител к эндотелиаль-ной NO-синтазе (импаза Материа-Медика, Россия) - из расчёта 1 таблетка на 100 мл воды со свободным доступом к питью, с учётом выпитой жидкости (20±3 мл в среднем на одно животное) [1].
В эксперименте были выделены следующие группы животных: 1) интактные самцы (вводили дистиллированную воду), 2) контрольная группа №1 (моделирование дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением L-NAME в дозе 25 мг/кг в течение 7 дней), з) L-NAME + импаза (коррекция L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции препаратом импаза), 4) внутрижелудочное введение 10% раствора
A.С. Белоус1, А.А. Арустамова2 М.В. Покровский1
С.А. Цепелева1, В.И. Якушев1
B.А. Руженков2, М.В. Корокин1
1 Курский государственный медицинский университет
2 белгородский государственный национальный исследовательский университет
e-mail: [email protected]
ТВИН-80 в дозе 1 мл/кг, 5) контрольная группа №2 (внутрижелудочное введение ме-тионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней), 6) метионин + импаза (коррекция гипергомо-цистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции препаратом импаза в течение 7 дней). Каждая группа состояла из 10 животных.
На 8-й день эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) на первом этапе исследования вводили катетер в левую сонную артерию и регистрировали систолическое и диастолическое артериальное давление (АД), частоту сердечных сокращений. На втором этапе исследования вводили иглу в полость левого желудочка через верхушку сердца для регистрации максимальной скорости сокращения (+dp/dt) и расслабления (-dp/dt). Измерения производились и обрабатывались посредством TSD104A и аппаратно-программного комплекса MP100 производства Biopac System, Inc., США.
Для изучения реактивности сосудистого русла при моделировании дефицита оксида азота регистрировали артериальное давление при эндотелийнезависимой и эн-дотелийзависимой вазодилатации. Эндотелийнезависимая вазодилатация осуществлялась посредством болюсного введения нитропруссида (НП) натрия (30 мкг/кг) в правую бедренную артерию [2], эндотелийзависимая - введением ацетилхолина (АХ) (40 мкг/кг) [8]. Далее высчитывали коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) по формуле: КЭД = SАД НП^АД АХ, где SАД НП - площадь треугольника над кривой восстановления АД, причём точками меньшего катета являются точка максимального падения АД и точка выхода уровня АД на плато при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида, SАД АХ - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении пробы с ацетилхолином, причём за меньший из катетов принимают разность между точкой окончания брадикардитического кардиального компонента и точкой восстановления АД. Этот показатель отражает изменение реактивности сосудистого русла при моделировании дефицита оксида азота и позволяет оценить степень коррекции эндотелиальной дисфункции [6, 7]. Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы: проба на адренореактивность (внутривенное введение адреналина гидрохлорида 1х105 моль/л, в дозе 0,1 мл/100 г) [4], нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 с).
Достоверность изменений абсолютных параметров определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней арифметической (±m) и вероятности возможной ошибки (р) по таблицам Стью-дента. Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Статистические расчёты проводились с использованием программы Microsoft Excel 7.0.
Результаты исследования. В группе с моделированием L-NAME-индуци-рованной эндотелиальной дисфункции выявлено развитие артериальной гипертензии. Ежедневное введение метионина по обозначенной схеме не вызывало достоверных изменений артериального давления. В группах животных, получавших импазу, не выявлено снижения показателей исходных значений АД (табл. 1).
Обработка полученных экспериментальных данных при проведении функциональных проб позволила установить, что внутрижелудочное введение 10% раствора ТВИН-80 в дозе 1 мл/кг не вызывает повышения КЭД.
В контрольных группах происходило увеличение соотношения эндотелийнеза-висимой к эндотелийзависимой вазодилатации, при этом КЭД составлял 5,4±0,6 при введении L-NAME 25 мг/кг (контроль№1), 3,3±0,3 в группе с гипергомоцистеин-индуцированным состоянием (контроль 2). В то время как у интактных крыс-самцов он составил - 1,1±0,1. В группах животных, получавших импазу, КЭД приближался к значениям групп интактных животных и составил - 2,1±0,2 (L-NAME + импаза) и 1,4±0,1 (метионин + импаза) соответственно (табл. 1).
Полученные результаты свидетельствуют о коррекции эндотелиальной дисфункции препаратом импаза на двух моделях дефицита оксида азота при отсутствии существенного влияния на развитие артериальной гипертензии.
Таблица 1
Показатели артериального давления и коэффициента эндотелиальной дисфункции при моделировании и коррекции L-NAME-и гипергомоцистеин-индуцированного дефицита оксида азота
Группы животных САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. КЭД, у-е-
Интактные 137,7 ±3,7 101,9 ± 4,3 1,1 ± 0,1
Получавшие L-NAME (25 мг/кг) 7 дней. (контроль №l) 190,3 ± 6,7и 145,0 ± 3,9и 5,4 ± 0,6и
Получавшие L-NAME + импаза 184,3 ± 7,0и 136,7 ± 6,5и 2,1 ± 0,2к
10 % ТВИН 80 1мл/кг 129,2 ±4,3 82,4 ± 5,9и 0,9±0,2к
Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней (контроль - 2) 118,9±10,1и 76,6±7,2и 3,3±0,3*
Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней+импаза 1б0,8±5,1ик 111,5±4,5ик 1,4±0,1к
Примечание: САД - систолическое артериальное давление, ДАД - диастолическое артериальное давление, ЧСС - частота сердечных сокращений, и - достоверное различие с группой интактных животных (р<0,05); к - достоверное различие с контрольной группой (р<0,05).
В контрольных группах животных при проведении пробы на адренореактивность левожелудочковое давление (ЛЖД) оказалось значительно выше 247,3±4,8 мм рт.ст. -контроль №1, 238,1±8,2 мм рт. ст. - контроль №2, чем в группе интактных животных 199,2±8,3 мм рт.ст.
Внутрижелудочное введение 10% раствора ТВИН-80 в дозе 1 мл/кг не вызывало повышения ЛЖД при проведении пробы на адренореактивность (189,7±9,1 мм рт. ст.).
Препарат импаза при проведении данной пробы снижал систолическое лево-желудочковое давление до 211,1±10,2 и 208,3±12,4 мм рт. ст. в группах №3 и №6 соответственно (табл. 2).
Таблица 2
Влияние препарата импаза на функциональные возможности миокарда при проведении нагрузочных тестов при моделировании и коррекции L-NAME-и гипергомоцистеин-индуцированного дефицита оксида азота (М±т, п=1о)
Группа животных Адренореактивность (мм рт.ст.) Исчерпание миокардиального резерва (%)
Интактные 199,2±8,3 83.6 %
Получавшие L-NAME (25 мг/кг) 7 дней. (контроль №1) 247,3±4,8и 66,0 %и
Получавшие L-NAME + импаза 211,1±10,2к 82,9 %к
10 % ТВИН 80 1мл/кг 189,7±9,1к 85,4%к
Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней. (контроль - 2) 238,1±8,2и 69,8%и
Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней+импаза 208,3±12,4к 85,8%к
Примечание: и - достоверное различие с группой интактных животных (р<0,05); к - достоверное различие с контрольной группой (р<0,05).
В пробе на нагрузку сопротивлением рассчитывался показатель исчерпания миокардиального резерва, равный отношению прироста систолического левожелудоч-кового давления на 5 с пережатия аорты к приросту систолического левожелудочково-го давления на 25 с, выраженный в процентах.
В группе интактных животных этот показатель составил 83,6 %, в контрольных группах (группы №2 и №5) 66,0 % и 69,8%. У животных, получавших препарат импаза (группы №3 и №6), данный показатель достоверно отличался от контрольных групп и был близок к значениям у интактных животных - 82,9 % и 85,8% соответственно.
Таким образом, результаты исследования функционального состояния миокарда при проведении нагрузочных проб выявили отчетливое кардиопротективное действие препарата импаза как при моделировании L-NAME-индуцированной так и при ги-пергомоцистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции, проявляющееся в снижении адренореактивности, предотвращении падения систолического левожелу-дочкового давления при проведении пробы на нагрузку сопротивлением по сравнению с контрольными животными.
Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать данный препарат к широкому клиническому изучению у мужчин.
1. Белоус, А. С. Новый взгляд на коррекцию эндотелиальной дисфункции / А.С. Белоус, М.В. Покровский, В.И. Кочкаров и др. // Russian Journal of Immunology (Officiai Journal of Russian Society of Immunology): материалы Рос. науч.-практ. конф. «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия». - Курск, 2006. - С. 59-63.
2. Галаган, М. Е. Гипотензивное действие оксида азота, продуцируемого из экзо-и эндогенных источников / М.Е. Галаган, А.В.Широколова, А.Ф. Ванин // Вопр. мед. химии. -1991. - Т. 37, № 1. - С. 67-70.
3. Затейщикова, А. А. Эндотелиальная регуляция сосудистого тонуса: методы исследования и клиническое значение / А.А.Затейщикова, Д.А. Затейщиков // Кардиология. -1998. - Т. 38, № 9. - С. 68-80.
4. Зодионченко, В. С. Дисфункция эндотелия и артериальная гипертония: терапевтические возможности / В.С. Зодионченко, Т.В.Адашева, А.П. Сандомирская // Рус. мед. журн. - 2002. - №1. - С. 11-15.
5. Минушкина, Л. О. Генетические аспекты регуляции эндотелиальной функции при гипертонии / Л.О.Минушкина, Д.А.Затейщиков, Б.А. Сидоренко // Кардиология. - 2000. -№ 3. - С. 68-76.
6. Покровский, М. В. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М.В.Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г.Покровская и др. // Кубанский научно-медицинский вестник. - 2006. - №10. - С.72-77.
7. Покровский, М. В. Способ оценки эндотелиальной дисфункции Пат. 2301015 Российская Федерация, МПК7 А61В 5/02. / заявители и патентообладатели Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. - № 2005113243/14; заявл. 04.05.2005; опубл. 20.06.07, Бюл. № 17. - 7 с.: ил.
8. Laursen, J. B., Rajagopalan S., Galis Z. Role of superoxide in angiotensin Il-induced but not catecholamine-induced hypertension/ J. B. Laursen, S. Rajagopalan, Z.Galis // Circulation. -1997. - Vol. 95. - P. 588-593.
THE COMPARATIVE CHARACTERISTIC OF ENDOTHELIO- AND CARDIOPROTECTIVE
EFFECTS OF IMPAZA ON L-NAME - INDUCED AND HYPERHOMOCYSTEINE - INDUCED MODELS OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION
Литература
S.A. Cepeleva1, V.I. Yakushev1 V.A. Ruzhenkov2, M.V. Korokin1
1 Kursk State Medical University
2 Belgorod National Research University e-mail: [email protected]
A.S. Belous 1, A.A. Arustamova 2 M.V. Pokrovsky1
Modeling of L-NAME-induced (intra-abdominal introduction of L-NAME in a dose of 25 mg/kg) and the hyperho-mocysteine -induced deficiency of nitrogen oxide II by means of intragastric introduction of methionine in a dose of 3 g/kg within 7 days on rats led to development of endothelial dysfunction. In the conditions of these models have been revealed expressed endothelio- and cardioprotective properties of a preparation impaza.
Key words: impaza, endothelium, nitrogen oxide II, methionine, L-Name.
