CC BY
16УДК 619:616-085:617.001.5
сравнительная количественная оценка репаративного процесса в костной и параоссальных тканях при имплантации спиц с покрытием нитридами титана и гафния в эксперименте
А.Э.Изосимова - аспирант.
ФГБОУ ВО«Казанская государственная академия ветеринарной медицины», г. Казань (420029, Казань, Сибирский тракт, 35, тел. +(843)2739617, e-mail:izosimova86@inbox.ru).
В современной травматологии для фиксации костных отломков при переломах используются различные погружные изделия - имплантаты. Однако, в результате воздействия ионов металлов, входящих в состав имплантата, в окружающих их тканях могут развиваться различные негативные реакции, изменяющие процесс репаративной регенерации и увеличивающие срок заживления раны. С целью снижения токсического влияния имплантатов на организм в настоящее время используются различные покрытия. Цель исследования - сравнительная оценка течения репаративных процессов в костной ткани и тканях области операционной раны в условиях чрескостного остеосинтеза у экспериментальных животных при использовании имплантатов с покрытием нитридами титана и гафния. Материалы и методы. В эксперименте участвовало 40 кроликов, из которых были сформированы 2 группы: опытная (n=20) и группа сравнения (n=20). Всем экспериментальным кроликам была проведена открытая остеоклазия большеберцовой кости с последующим ретроградным введением в костномозговой канал животным группы сравнения стальных спиц без покрытия и аналогичных спиц с покрытием нитридами титана и гафния - животным опытной группы. Продолжительность эксперимента составила 180 дней. Результаты исследований. В ходе морфологического исследования была проведена сравнительная оценка процентного соотношения площадей различных тканевых структур в гистологических препаратах, изготовленных из костной и параоссальной тканей на 10, 30, 60 и 180-е сут после оперативного вмешательства, которая также позволила выявить прямую коррелятивную взаимосвязь между процессами репаративной регенерации, происходящими в костной и в мягких тканях в области раны. Было установлено, что процентное соотношение лейкоцитарно-некротических масс, характеризующих воспалительный процесс, в двух группах достоверно отличалось на 10 сут и составляло 3,5±0,2% (p=0,001) в опытной группе и 6,0±0,4% в группе сравнения. Степень эпителизации раневой поверхности и связанная с этим скорость заживления подлежащих тканей между группами также были различны. Достоверно больший объем покрывающего рубец эпителия был представлен в опытной группе по отношению к группе сравне-ния(9,3±0,5% против 5,0±0,3%, (р<0,001) уже на 10 сутки. Данная тенденция сохранялась и на последующих сроках. Основное отличие между группами заключалось в более длительном сохранении рубцовой ткани без признаков реорганизации в группе сравнения. Так, на 30-е сут площадь рубцовой ткани составляла 29,2±0,8 % в группе сравнения, 20,6±0,4% в опытной группе (р<0,001), на 60-е - 20,4±0,1% и 10,8±0,6%, (р<0,001)) соответственно. Со стороны костной ткани - в большинстве случаев имело место неосложненное заживление перелома с началом формирования пластинчатых костных структур на 30-е сут эксперимента, площадь которых была достоверно меньше в группе сравнения и составляла 5,2±0,3% и 2,4±0,2% соответственно, р<0,001. При этом в группе сравнения имело место неполноценное закрытие дефекта с наличием большего объема хрящевой ткани по отношению к опытной группе 12,4±1,9% и 5,0±0,3% - на 10 сут,10,7±0,8% и 4,0±0,4% (р<0,001) - на 30-е сут соответственно. Участки рассасывания хрящевой ткани сохранялись в группе сравнения и на 60 сут (2,4±0,3%). Заключение. В результате эксперимента была выявлена прямая коррелятивная взаимосвязь между процессами репаративной регенерации, происходящими в костной и в мягких тканях в области раны, и установлено, что применение имплантатов с покрытием нитридами титана и гафния способствует уменьшению воспалительной реакции в тканях, ускоряет процесс остеорегенерации с началом формирования пластинчатой кости на 30-е сутки и характеризуется более ранней эпителизацией раны. Кроме того, снижается число случаев образования зрелой кости через хрящевую ткань, что уменьшает вероятность развития осложнений в виде неполного закрытия дефекта.
ключЕВЫЕ СлоВА: морфология, кость, имплантаты, покрытия, нитрид титана и гафния, кролики.
Создание оптимальных условий для полноценной репаративной регенерации способствует наилучшему восстановлению биомеханики костной ткани. При этом немаловажным фактором, влияющим на скорость и продуктивность консолидации костных переломов при оперативном лечении, является выбор имплантата, который должен не только обеспечивать прочностные характеристики, но и быть биологически совместимым с тканями организма. В качестве одного из перспективных способов улучшения физико-химических характеристик имплантата и снижения их токсического влияния на ткани живого организма в настоящее время используются защитные покрытия, наносимые на поверхность имплантатов [8].
Целью данного исследования явилась сравнительная оценка течения репаративных процессов в костной ткани и тканях области операционной раны в условиях чрескостного остеосинтеза у экспериментальных животных при использовании имплантатов с покрытием нитридами титана и гафния.
Материалы и методы. Исследования проводились на кафедре ветеринарной хирургии Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана.
Эксперименты были одобрены Локальным Этическим Комитетом при ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» МЗ РФ (протокол №9 от 25 ноября 2014 г).
Экспериментальной моделью были 40 кроликов в возрасте 6-10 мес, разделенные на 2 группы по 20 животных в каждой. Кролики содержались в одинаковых условиях, на одинаковом рационе, согласно рекомендациям по кормлению и содержанию лабораторных животных, а также Приказа Минздрава СССР от 12.08.1977 № 755. Всем экспериментальным животным под общей анестезией (Роте1аг 2% 0,15-0,2 мл/кг, золетил 100 10-15 мг/кг) проводили открытую остеоклазию большеберцовой кости в области средней трети диафиза с медиальной поверхности голени с последующим ретроградным введением имплантата в костномозговой канал [3]. В качестве имплантатов при остеосинтезе в группе сравнения использовались спицы dx2 мм, изготовленные из стали 12Х18Н9Т, в опытной группе спицы из стали 12Х18Н9Т с покрытием нитридами титана и гафния.
Для гистологического исследования производили изъятие фрагментов костной ткани и параоссаль-ных тканей в зоне перелома области шва (рубца) на 10, 30, 60 и 180 сутки. Изготовление гистологических препаратов кости и мягких тканей проводилось по стандартным методикам [2,4]. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивались гематокси-
лином и эозином, по методу Ван Гизона. Последующее изучение объектов проводилось с использованием микроскопа «Дх1овсор»[1, 6]. При помощи морфометрической сетки проводили измерение площадей, занимаемых структурами костной и мягких тканей в зоне перелома [5]. При исследовании тканей в области операционного шва (рубца) учитывали площадь лейкоцитарно-некротических масс, грануляционной, соединительной (рубцовой) тканей. В костной ткани - лейкоцитарно-некротических масс, грануляционной, соединительной, хрящевой тканей. Полученные результаты подвергали статистической обработке с помощью пакета прикладных программ SPSSv.13.0.
Результаты исследований. В раннем послеоперационном периоде процесс экссудации был более выражен у животных группы сравнения, где объем раневого отделяемого составлял приблизительно 1,5-2,5 мл. У животных опытной группы его объем не превышал 1-1,5 мл. К 3-м сут наблюдений пищевая возбудимость и двигательная активность кроликов восстанавливалась. Операционные раны заживали по первичному натяжению к 10-м сут эксперимента.
10-ые сут послеоперационного наблюдения характеризовались умеренной воспалительной реакцией в области шва над зоной перелома, которая в большей степени проявлялась в группе сравнения. Так, в опытной группе лейкоцитарно-некротические массы занимали 3,5±0,2% площади среза, что достоверно было ниже (р=0,001), чем в группе сравнения, где это значение достигало 6,0±0,4%. В некоторых случаях в группе сравнения сохранялся отек субэпителиальной области. Присутствовала плотная волокнистая соединительная (рубцовая) ткань. Площадь рубцовой ткани в опытной группе, объем которой составлял 39,6±0,5%, была также меньше по сравнению с группой сравнения, где она равнялась 44,7±1,1% (р=0,004). В ряде наблюдений в опытной группе происходила ее реорганизация. Рубцовая ткань, особенно под эпидермисом, разрыхлялась, а коллагеновые волокна истончались.
Степень эпителизации раневой поверхности и связанная с этим скорость заживления подлежащих тканей между группами отличались. Достоверно больший объем покрывающего рубец эпителия был представлен в опытной группе по отношению к группе сравнения(9,3±0,5% против 5,0±0,3%, (р<0,001). И, если в группе с имплантатами с покрытиями при этом восстанавливалась функция кератогиалина (рис. 1, 2), то ороговения эпителия в группе сравнения еще не наблюдалось. В то же время, придатки кожи, разрушенные после разреза, полностью утрачивались.
НЕЗАрАЗНЫЕ БолЕЗНи
Рис.1. формирование рубца под эпителиальной выстилкой. Операционная рана. Группа сравнения 10 сутки. Ван Гизон *400.
Площадь рыхлой волокнистой неоформленной соединительной ткани на 10 сут в опыте равнялась 20,8±0,5% и превосходила площадь грануляционной ткани в группе сравнения 14,2±0,2%, (р<0,001). Таким образом, уже на 10 сут существовала определенная тенденция более полного и качественного
Рис. 2. Выраженный роговой слой на поверхности эпителия. Операционная рана. Опытная группа, 10 сутки. Гематоксилином и эозином.х40о.
восстановления тканей в области шва в группе животных с имплантатами с покрытием на основе нитридов титана и гафния.
В костной ткани на 10 сут образовалась предварительная соединительнотканная мозоль в обеих группах (рис. 3,4).
Рис. 3. Грануляционная ткань. Зона перелома.
Группа сравнения, 10 сутки. Гематоксилин и эозин.х 400.
В целом, травматический отек на данном этапе либо отсутствовал, либо был выражен незначительно, но в ряде случаев сохранялись остаточные явления экссудативного воспаления, вызванного повреждением. Лейкоцитарно-некротические массы в опытной группе занимали 2,5±0,3% от площади среза, что было несколько меньше, чем в группе сравнения,2,8±0,3%. Происходило разрастание грануляционной ткани 4,7±0,5% в опытной группе и 11,3±1,3% в группе срав-нения,(р=0,002). Также увеличивался объем соединительной ткани в экспериментальной группе 49,6±0,6% и в группе сравнения 62,0±4,3%(р=0,02) с последующим остеогенезом.
В большинстве случаев соединительнотканная мозоль начинала на отдельных участках трансформи-
Рис. 4. Трансформация грануляционной ткани в соединительную. Зона перелома. Опытная группа, 10 сутки. Ван Гизон. х 200.
роваться в предварительную костную мозоль, состоящую преимущественно из грубоволокнистой кости. Так, на фоне гомогенизации коллагена образовывались остеоидные балки. При этом обнаруживались пролиферирующие остеобласты, как в зоне повреждения, так и в периосте и эндосте. Параллельно с этим присутствовал процесс рассасывания некротически измененных концов старой кости и избытка вновь образованных остеоидных структур. Вновь образованные костные балки всегда были связаны со старой костью (краями отломков). Площадь грубоволокнистой кости на данном этапе составляла 38,2±0,3% в опытной группе, что более чем в 3 раза превышало площадь аналогичной структуры в группе сравнения11,5±1,5%, (р<0,001). В зоне регенерации образования хрящевой
ткани в экспериментальном группе, как правило, не наблюдалось - ее площадь не превышала 5,0±0,3%. В группе сравнения хрящевая ткань была представлена достоверно в большем объеме, 12,4±1,9%, (р=0,005) в
виде островков среди соединительнотканных структур и обширных участков. Данный факт свидетельствует о формировании зрелой кости в опытной группе и более полноценной регенерации костной ткани (рис.5, 6).
■^ТР ьу. ' Г/ » V *
Рис. 5. Обширный участок хрящевой ткани.
Зона перелома. Группа сравнения, 10 сутки.
Гематоксилин и эозин. х 200.
На 30 сут в мягких тканях в области операционной раны имело место полное закрытие дефекта путем разрастания соединительной ткани, покрытой многослойным плоским ороговевающим эпителием, в котором отчетливо определялись базальный, шиповатый, зернистый, блестящий и роговой слои. Отличия между группами заключались в наличии лимфо-гистиоцитарной инфильтрации субэпителиальной области и сохранении рубцовой ткани
Рис. 6. Трансформация соединительной ткани в грубоволокнистую кость балочного строения. Зона перелома. Опытная группа, 10 сутки. Ван Гизон. х400.
без признаков реорганизации в группе сравнения. Так, площадь рубцовой ткани составляла 29,2±0,8% в группе сравнения, 20,6±0,4% в опытной группе (р<0,001). При реорганизации рубца в дерме экспериментальной группы на этом сроке уже выделялись сосочковый и сетчатый слои, что свидетельствует о полноценном восстановлении структуры регенерата в группе животных с имплантатами с покрытием (рис.7, 8).
Рис. 7. Рубцовая ткань без признаков реорганизации. Операционная рана. Группа сравнения, 30 сутки. Ван Гизон.х200.
В костной ткани на 30 сут эксперимента во всех наблюдениях отмечалась полностью сформированная грубоволокнистая кость 88,2± 0,6% - в опытной группе и 78,6±0,4% - в группе сравнения, (р<0,001) с диффузным обызвествлением балок. При этом в большинстве
Рис. 8. Дифференцированный многослойный плоский ороговевающий эпителий с четко различимыми слоями. Операционная рана. Опытная группа, 30 сутки. Гематоксилин и эозин.х400.
случаев имело место неосложненное заживление перелома с началом формирования пластинчатых костных структур, площадь которых была достоверно меньше в группе сравнения и составляла 5,2±0,3% и 2,4±0,2% соответственно, р<0,001 (рис. 9,10).
В опытной группе хрящевая ткань практически отсутствовала (4,0±0,4 %). В то же время окончательной перестройки костной мозоли не происходило. В группе сравнения в отдельных случаях имело место закрытие дефекта с наличием по краям хрящевой ткани без признаков оссификации, а в центре - незрелой грубоволокнистной кости. В целом площадь среза хряща на данном сроке достоверно превышала значение опытной группы почти в 3 раза и составляла 10,7±0,8%, (р<0,001).
На 60 сут эксперимента в области рубца в обеих группах определялась нормальная гистологическая структура кожного покрова без восстановления его производных. При этом отличия в основном заключались в объеме рубцовой ткани. Так, в группе сравнения ее площадь была достоверно больше(20,4±0,1%), по сравнению с опытной группой(10,8±0,6%, (р<0,001)). В большинстве наблюдений, в костной ткани на месте перелома была сформирована пластинчатая кость с развитой системой гаверсовых каналов и восстановленным костным мозгом. Площадь данной в структуры занимала 98,6±0,3% - в опытной группе и 90,5±0,2% в группе сравнения от площади среза, (р<0,001). В то же время, следует отметить сохранение в группе сравнения в отдельных случаях фрагментов грубо-волокнистой кости (7,1±0,2%) и участков рассасывания хрящевой ткани (2,4±0,3%).
На сроке 180 дней существенных изменений в операционной ране по сравнению с предыдущим сроком в обеих группах не наблюдалось. Достоверно большая площадь рубцовой ткани в группе сравнения сохранялась - 25,2±0,3% против 15,4±1,1% - в опытной группе (р<0,001). Так же, как и в области операционной раны, на данном сроке значительных различий между исследуемыми группами не было. Имело место полное заживление перелома с наличием сформированной пластинчатой кости, площадь которой составила 99,7±0,1% в опытной группе и 93,2±0,4% в группе сравнения, (р<0,001) (рис. 11,12).
Рис.11. Полностью сформированная пластинчатая кость. Зона перелома. Опытная группа, 180 сутки. Гематоксилин и эозин х400.
Рис.12. Полностью сформированная пластинчатая кость. Зона перелома. Группа сравнения, 180 сутки. Гематоксилин и эозин.х400.
Заключение. Как показали наши исследования, применение спиц, покрытых нитридами титана и гафния, при лечении переломов более эффективно. Так как области сращения отломков кости уменьшается воспалительная реакция с наличием обширных лей-коцитарно-некротических масс и травматического отека, ускоряется процесс репаративной регенерации с началом формирования пластинчатой кости на 30-е сутки. Снижается число случаев образования кости через хрящевую ткань, что способствует полноценной регенерации костной ткани и уменьшает вероятность развития осложнений в виде неполного закрытия дефекта. Заживление тканей в области операционной раны характеризуется более ранней эпителизацией, ткань реорганизуется к 30 суткам с восстановлением структуры эпидермиса и дермы.
Существует выраженная корреляция между процессами заживления кости и операционной раны. Так, развитие грануляционной ткани между костными отломками и в дефекте мягких тканей напрямую взаимосвязано - чем быстрее происходитее формирование в ране, тем скорее восстанавливается кость. Выраженность воспалительной клеточной инфильтрации также находится в прямой зависимости - сохранение ее в мягких тканях, как правило, приводит к ее наличию и в области перелома. Большую роль имеет степень эпите-лизации раны - чем быстрее восстанавливается эпителий, тем быстрее заживает костная ткань. Кроме того, скорость формирования рубца в мягких тканях определяет процесс трансформации соединительнотканной костной мозоли в грубоволокнистую кость. В тех случаях, когда костеобразование идет с формированием хряща, в мягких тканях на данном этапе может сохраняться клеточная инфильтрация. Определяется взаимосвязь реорганизации рубцовой ткани со степенью развития грубоволокнистой кости и начальными признаками ее перестройки в пластинчатую кость. В случаях наличия рыхлой волокнистой неоформленной соединительной ткани без клеточной инфильтрации окончательная трансформация кости проходит быстрее.
НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ ЖУРНАЛ
№ 1/2016
26
Литература
1. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г.Автандилов. - М.: Медицина, 1990. - 384 с.
2. Коржевский, Д.Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов / Д.Э.Коржевский. - СПб.: Изд-во Кроф, 2005. - 48 с.
3. Руководство по внутреннему остеосинтезу: методика, рекомендованная группой «Arbeitsgemeinschaft fur Osteosynthesefragen» (АО) / М.Е.Мюллер [и др.]. - М.: Ad Marginem, 1996. - 167 с.
4. Пахт, А.В. Особенности обработки костной ткани / А.В.Пахт, Н.М.Манизер // Библиотека патологоанатома (научно-практич. журнал). - 2008. - № 89. - С. 6-11.
5. Стефанов, С.Б. Морфометрическая сетка случайного шага как средство ускоренного измерения элементов морфогенеза / С.Б.Стефанов // Цитология. - 1974. - № 6. - С. 785-787.
6. Саркисов, Д.С. Микроскопическая техника / Д.С.Саркисов, Ю.Л.Перов. - М.: Медицина, 1996. - 544 с.
7. Romies, В. (Ромейс, Б.) Mikroskopischetecchnic (Микроскопическая техника) / BMRomies (Б.Ромейс). - М.: Иностранная литература, 1954. - 718 с.
8. Nanomechanical properties of hafnium nitride coating / ChenYao [et al.] // Scripta Materialia. - 2008. - № 58. - С. 1121-1124.
COMPARATIVE QUANTIFICATION OF REPARATIVE PROCESSES IN BONE AND PARAOSSEOUS TISSUES AT IMPLANTATION OF SPOKES COATED WITH TITANIUM NITRIDE AND HAFNIUM NITRIDE
Izosimova A.E. - postgraduate.
Bauman N.E. Kazan State Academy of Veterinary Medicine, Kazan (tel.+7(843) 273-96-17, e-mail: izosimova86@inbox.ru).
Introduction: in modern trauma surgery uses implants to fix bone fragments at fractures. However, implants metal ions can cause various adverse reactions in surrounding tissue affecting the process of bone reparative regeneration and prolonging the healing. Currently to reduce the toxic effects to body caused by implants various coatings are used. The aim of the research was a comparative evaluation of the course of reparative processes in animal bone and surrounding tissues at intramedullary osteosynthesis with implants coated with titanium nitride and hafnium nitride. Materials and method: the experiment involved 40 rabbits divided into two groups: the test group (n=20) and the comparison group (n=20). All the animals were exposed to tibia open osteoclasis followed by retrograde introduction of uncoated steel spokes into the medullary canal of animals from experimental group and the spokes coated with titanium nitride and hafnium nitride to the test animals. The studies lasted for 180 days. Investigation results: at 10,30, 60 and 180 days after surgery the morphological studies were conducted to compare the percentage of different areas of tissue structures in histological preparations from bone and paraosseous tissue. During the experiment a direct correlation between reparative regeneration process in both bone and soft tissues in wounded area was found. The percentage ratio of leukocyte and necrotic masses characterizing an inflammatory process was found in both groups. However at 10 days leukocyte and necrotic masses ratio was significantly different: it was 3.5±0.2% (p=0,001) in the experimental group and 6.0±0.4% in the comparison group. The level of epithelilization of the wound surface and the healing rate in the surrounding tissues differed between the groups. At 10 days the experimental group had a significantly larger volume of the epithelium covering the scar than the control group (9.3±0.5% versus 5.0±0.3%, (p<0.001). This tendency remained up to the end of the experiment. The main difference between groups was in a larger period of scar tissue preservation with no signs of restructuring in the comparison group. So, at 30 days the scar tissue area was 29.2±0.8% in the control group and 20.6±0.4% in the experimental group (p<0.001); at 60 days - 20.4±0.1% and 10.8±0.6%, (p<0.001)), accordingly. As for bone tissue, in most cases fractures healed with the beginning of the formation of lamellar bone structures at 30 days of the experiment, the area was 2.4±0.2% in the comparison group which is significantly less than in the control group, 5.2±0.3% and 2.4±0.2 (p<0.001) accordingly. In the control group had an uneven closure of bone defect with of a larger volume of cartilage than in the test group: at 10 days it was 12.4±1.9% and 5.0±0.3%; at 30 days - 10.7±0.8% and 4.0±0.4% (p<0.001) accordingly. A larger volume of cartilage tissue was preserved in the comparison group at 60 days (2.4±0.3%). Discussion: the experiment showed a direct correlation between the bone and soft tissues
in the process of reparative regeneration within the wounded area. The implants coated with titanium nitride and hafnium nitride were found to reduce inflammation, accelerate osteoregeneration with the beginning of the formation of lamellar bone at 30 days after surgery, promote earlier epithelialization in the wounded area. Also, using the implants coated with titanium nitride and hafnium nitride decreases the number of cases of forming a mature bone through a cartilage tissue, which reduces the possibility of complications like incomplete closure of a bone defect.
KEYWORDS: morphology, bone, implants, coatings, titanium nitride and hafnium, rabbits.
References
1. Avtandilov, G.G. Meditsinskaya morfometriya. [Medical morphometry ] / Avtandilov G.G. - Moscow: Medicine, 1990. - 384 p.
2. Korzhevskiy, D.E. Kratkoe izlozhenie osnov gistologicheskoy tehniki dlya vrachey i laborantov-gistologov [A brief summary of the basic histological techniques for physicians and histology assistants] / Korzhevsky D.E. - St. Petersburg: Krof, 2005. - 48 p.
3. Muller ME, Allhover M, Schneider R, Willinegger H. The manual for internal osteosynthesis: the technique recommended by AO group (Switzerland): translated into Russian by Korolev A.V.. 3d edition, added and revised. -Moscow: - 1996. - 750 p.
4. Paht, A.V. Osobennosti obrabotki kostnoy tkani [Peculiarities of processing bone tissue]. -Biblioteka patologoanatoma. (Scientific and practical journal)] / Paht A.V., Manizer G.M. - St. Petersburg, 2008. - P. 6-11.
5. Stefanov, S.B. Morfometricheskaya setka sluchaynogo shaga kak sredstvo uskorennogo izmereniya elementov morfogeneza [The morphometric mesh of random step as a way of measuring elements of accelerated morphogenesis] / Stefanov S.B. - Tsitologiya. - 1974.-Vol. 6. - P. 785-787.
6. Sarkisov, D.S. Mikroskopicheskaya tehnika. [The microscopic technique] / Sarkisov D.S., Perov YL. - Moscow: Medicine, 1996. - 544 p.
7. Romies, B. Mikroskopishe technik. Translated into Russian by Alexandrov V.Ya, Krukova Z.i. - Moscow: inostrannaya literatura, 1954.- 718 p.
8. Yao Chen, Tapas Laha, Kantesh Balani and Arvind Agarwal Nanomechanical properties of hafnium nitride coating // Scripta Materialia/ Yao Chen, Tapas Laha, Kantesh Balani and Arvind Agarwal. - 2008. - Vol. 58. - P. 1121-1124.
