CC BY
9
the gastrointestinal tract. The introduction of the tested composition into the dyspepsia treatment scheme adopted in the household accelerated the recovery of animals for two days, increased the safety and stimulated the average daily gain in live weight of calves.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-239-3-104-109 УДК 619:636.7:616-006.44
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ ПРИ ЛИМФАДЕНОПАТИЯХ У СОБАК
Григорьева А.В. - аспирант, Савинков А.В. - д.в.н.
ФГБОУ ВО «Самарский государственный аграрный университет»
Ключевые слова: собаки, цитология, лимфаденопатия, лимфоциты, лимфома Keywords: dog, cytology, lymphadenopathy, lymphocytes, lymphoma
Лимфомы - это группа онкологических заболеваний лимфатической ткани, первоначально внекостномозгового происхождения, развивающихся преимущественно в лимфатических узлах и в лимфо-идных тканях паренхиматозных органов (селезенка, печень, легкие), кишечнике, коже. Лимфомы являются одной из наиболее распространённых неопластических патологий у собак. Встречаемость лимфом у собак составляет примерно 80% от всех заболеваний кроветворной системы. В большинстве случаев болезнь поражает животных среднего возраста (6-7 лет), хотя может возникать и у более молодых особей. Предрасположенность к данному заболеванию была отмечена у таких пород как боксер, шотландский терьер, бассет-хаунд, эрдельтерьер, чау-чау, немецкая овчарка, пудель, сенбернар, бульдог, бигль, ротвейлер и золотистый ретривер. Гендер-ные особенности лимфомы у собак не указываются [3,6,12].
Следует отметить, что нередко увеличение лимфоузлов животного длительное время остаётся незамеченным владельцами или принимается ими за воспалительную реакцию, вследствие чего собака попадает на приём уже при сильной выраженности клинической картины, или после долгого безрезультатного лечения. Причина этого в том, что лимфаденопатия (любое изменение лимфатических узлов по размеру, и/или консистенции, и/или количеству) является одним из наиболее распространённых симптомов в клинической
практике, как признак самых различных нозологий [4, 5, 8, 11]. Диагностика лим-фом базируется на данных клинического осмотра, инструментальных методов исследования и лабораторных анализов крови, общеклинического и биохимичес-кого, а также данных биопсии пораженного лимфатического узла. Основным анализом, позволяющим подтвердить диагноз «лимфома», является морфологическое исследование материала из лимфатического узла. В медицинской практике для исследования берётся часть пораженного лимфоузла или весь лимфатический узел целиком. В ветеринарии зачастую используется цитологическое исследование мазков-отпечатков или материала, взятого с помощью тонкоигольной аспирационной биопсии. Простота, относительно небольшая стоимость, достаточно быстрое получение результатов, высокая достоверность при типичных клинических симптомах объясняют широкое распространение этого метода [1, 4, 5, 7].
Работы зарубежных исследователей содержат достаточно много информации (в том числе наглядной) о критериях сравнительной цитологической оценки различных патологий лимфоидной ткани, в то время как данные отечественной литературы по этому вопросу весьма скудны. Что вынуждает при исследовании цитологического мазка обращаться к медицинским источникам, или работать напрямую с иностранной литературой.
Недостаток материалов по данному вопросу и послужил основанием для настоящего исследования. Цель исследования: определить ценность цитологического метода исследования при дифференциальной диагностике патологий лимфоидной системы.Задачи исследования: провести цитологическое исследование различных состояний лимфатических узлов у собак и дать характеристику каждому исследуемому процессу; оценить информативность метода и возможность его применения в клинической практике.
Материал и методы исследований. В исследовании использовались материалы, взятые от собак с различными состояниями лимфоузлов. Для приготовления цитологических мазков использовались методы тонкоигольной аспирацион-ной биопсии и мазков-отпечатков. Готовые мазки после высушивания на воздухе окрашивались по Паппенгейму и исследовались под иммерсионным объективом (100 Х) для оценки морфологии клеток и под 40Х объективом - для оценки митотиче-ской активности. В качестве микрометра для определения размера лимфоидных клеток использовался эритроцит: ядро малого, среднего и большого лимфоцитов собаки составляет от 1 до 1,5, от 2 до 2,5, и 3 диаметра красных кровяных клеток (эритроцитов) соответственно. Наиболее характерные участки были сфотографированы для наглядного подтверждения полученных данных. Для лучшей сравнительной оценки были взяты материалы от 14-ти животных: с нормальным лимфоузлом (5 животных), реактивным лимфоузлом (4 животных) и с лимфомами (5 животных). В исследовании участвовали животные разных пород (лабрадор ретривер, метис, немецкая овчарка, тибетский спаниель, такса стандартная, такса жесткошерстная, чихуа-хуа, ротвейлер), различного пола, возрастом от 5 до 12 лет.
Результаты исследований. Образцы из здоровых лимфоузлов были получены в поликлинических условиях с целью определения микрометастазов новообразований, а также для контроля после лечения дерматита. Забор материала про-
водился методом тонкоигольной аспира-ционной биопсии.
Основная масса лимфоцитов (порядка 90%) в исследуемых мазках была представлена малыми, хорошо дифференцированными, лимфоцитами. Их ядра интенсивно окрашены, без видимых ядрышек, шаровидной формы, или с незначительным углублением. Цитоплазма слабо базофильна, представлена небольшим узким ободком. Средние лимфоциты обнаруживаются в значительно меньшем количестве (всего около 5-10%), также заметны единичные большие лимфоциты. Ядра этих клеток крупнее, хроматин менее конденсирован, вследствие чего ядро оптически более светлое, может быть заметно ядрышко. Цитоплазма более обильная и часто базофильная. Зрелые плазматические клетки также обнаруживаются в небольшом количестве. Их ядра имеют плотную хроматиновую субстанцию и эксцентрично располагаются в обильной базофильной цитоплазме. От больших лимфоцитов плазматические клетки отличает бледная перинуклеарная зона. Единичные тучные клетки и нейтрофилы также могут присутствовать (рис.1).
Для оценки морфологии клеток реактивных лимфоузлов в данном исследовании использовался материал от собак с различными новообразованиями: фиброаденома, аденокарционома молочной железы, плоскоклеточный рак кожи. Материал отбирался хирургическим путём при удалении новообразований. Метастатического поражения лимфоузлов не выявлено.
В цитологическом мазке реактивного лимфоузла преобладали малые лимфоциты, однако отмечалось увеличение (от 15% и больше) количества средних и больших типов клеток в общей популяции. Увеличилось также чисто плазматических клеток индивидуально для каждого случая, в том числе со смещением в сторону незрелости. Обнаруживалось и небольшое количество активированных плазматических клеток (клеток Мотта), характеризующихся обилием цитоплазмы, заполненной сферическими бледными вакуолями, тельцами Рассела.
Рисунок 1 - Метис, 5 лет, сука. Нормальный лимфоузел. Малые лимфоциты (1), средние лимфоциты (2), большие лимфоциты (3). Эритроцит (4). Ок. 20, об. 100. Окраска по Паппенгейму
Также в большем объёме, чем в здоровом лимфоузле, однако меньшем, чем при лимфадените присутствовали ней-трофилы (<5%), эозинофилы (<3%), макрофаги и тучные клетки (единичные).
В общем цитологическая картина исследуемых образцов демонстрирует небольшое увеличение числа гранулоцитов, а также незрелых форм лимфоцитов, что характерно для паранеопластической реакции лимфоузла. (рис.2).
Такая онкологическая патология лимфатических узлов как лимфома (муль-тицентричная форма) отмечалась у собак на приме в ветеринарной поликлинике у разнопородных животных старше пяти лет. В большинстве случаев отмечались жалобы владельцев на плохое самочувствие и ухудшение аппетита. При осмотре зафиксировано увеличение некоторых из доступных пальпации лимфатических узлов: подчелюстных, предлопаточных, подколенных, паховых и др. Узлы слабо болезненные, плохо подвижные, гладкие, плотные, форма несколько неровная, температура соответствует окружающим тканям. У ряда животных были сложности с проглатыванием пищевого кома из-за увеличения подчелюстных лимфатических узлов
Рисунок 2 - Немецкая овчарка, 12 лет, сука. Реактивный лимфоузел. Малый лимфоцит (1), средний лимфоцит (2), большой лимфоцит (3). Эритроцит (4). Плазмати-ческая клетка (5): нормальная зрелая клетка (5 а), активированная клетка (5б). Ок. 20, об. 100. Окраска по Паппен-гейму
и давления на область глотки. У подопытных животных была проведена тонкоигольная аспирационная биопсия наиболее изменённых лимфатических узлов, предпочтение отдавалось подколенным и пред-лопаточным.
В мазках присутствовала смешанная популяция клеток, преобладали в основном средние и большие лимфоциты (около 50% от общего количества клеток). Митотическая активность подсчитывалась на среднем увеличении (ок.20, об. 40) в пяти полях зрения. Был установлен мито-тический индекс от низкого до высокого: 0-1 митотический рисунок на 5 полей зрения характеризовали низкий, 2-3 митоти-ческих рисунка средний и 3-4 митотиче-ских рисунка высокий уровень митотиче-ской активности.
В фоне препарата обнаруживались небольших размеров базофильные цито-плазматические фрагменты (лимфогланду-лярные тельца), возникающие в результате разрыва незрелых и хрупких лимфоцитов (могут встречаться и в здоровых лимфатических узлах, однако в лимфоме наблюдается большее их количество). Также отмечено наличие небольшого количества мелких эозинофильных фрагментов разру-
шенных ядер. В ряде мазков в фоне обнаруживалось большое количество эритроцитов. У четырёх животных была диагно-
стирована лимфома.
В-клеточная фолликулярная
Рисунок 3 - Такса жесткошерстная, 8 лет, кобель. В-клеточная лимфома. Малый лимфоцит (1), средний лимфоцит (2), большой лимфоцит (3). Ядрышки (4). Лимфогранулярные тельца (5). Эритроцит (6). Ок. 20, об. 100. Окраска по Паппенгейму
Ядра лейкоцитов округлой формы, с разреженной хроматиновой субстанцией, содержат от одного до пяти хорошо заметных, преимущественно центрально расположенных ядрышек. Цитоплазма базо-фильная и достаточно скудная (рис 3). У пятой собаки (ротвейлер, 6 лет, сука) хозяева обратили внимание на увеличение подчелюстных лимфоузлов, однако в течении шести месяцев животное не проходило
Рисунок 4 - Ротвейлер, 6 лет, сука. Лимфома маргинальной зоны селезенки. Лимфоциты: малый (1), средний (2), большой (3). Эритроцит (4). Лимфогранулярные тельца (5). Цитоплазматические включения (6). Фагоцитоз лимфогландулярных телец (7). Ок. 20, об. 100. Окраска по Паппенгейму
должного обследования. На момент обращения в ветеринарную клинику наблюдалось увеличение всех доступных пальпации лимфоузлов, животное было сильно истощено. В мазках большинство лимфоцитов характеризовались признаками плазматизации: широкой цитоплазмой, пе-ринуклеарным просветлением, а также разрежением хроматиновой субстанции. Ядрышки слабозаметные
Таблица 1 - Сравнительная характеристика лимфаденопатий у собак
Нормальный лимфоузел Реактивный лимфоузел В-клеточная фолликулярная лимфома, Лимфома лимфоплазмо-цитарного типа
Преобладающий тип клеток Малые Малые, с увеличением числа средних и больших Средние и большие Смешанная популяция клеток
Ядрышки Могут быть видны в средних и больших лимфоцитах Могут быть видны в средних и больших лимфоцитах Хорошо заметные, 15 штук, преимущественно центрально расположенные слабозаметные
Хроматино-вая субстанция Преимущественно достаточно плотная Плотная, в отдельных клетках может быть разреженной Разряжение, характерное для юных форм клеток Разреженная
Цитоплазма Достаточно скудная Увеличение объёма цитоплазмы Увеличение объёма цитоплазмы Обильная, с пе- ринуклеарным просветланием (плазмоцитация клеток)
Плазмоциты, гранулоциты Встречаются в единичном количестве Встречаются в большем количестве чем в нормальном лимфоузле, но в меньшем, чем при лимфадените, наличие активированных плаз-моцитов Встречаются в единичном количестве Плазмоцитация лимфоцитов, единичные гра-нулоциты
Фон препарата Сравнительно скудный: некоторое количество эритроцитов и единичные лимфогранулятные тельца Сравнительно скудный: некоторое количество эритроцитов и единичные лимфогранулятные тельца Умеренно выраженный: некоторое количество эритроцитов, значителное количество лимфо-гранулярных телец. Обильный: инфильтрация эритроцитами, большое количество лимфо-гранулярных телец.
Заключение. Таким образом, при исследовании цитологического материала разновозрастных собак разных пород с различными состояниями лимфатических узлов были установлены морфологические признаки, характеризующие каждое из этих состояний.
Проведена сравнительная оценка и определён комплекс параметров, позволяющих дифференцировать лимфомы от здоровых и реактивных лимфатических узлов. Исходя из проделанной работы можно судить о достаточно высокой эффективности цитологического метода диагностики при исследовании лимфатических узлов. Метод не требует больших затрат материалов и оборудования, а так же прост в исполнении и не затратен по времени.
Фактически предварительный диагноз можно установить в течение 2-3 часов после отбора материала. Всё это делает цитологическую диагностику удобной для первичной диагностики новообразований, также простота метода позволяет применять его даже в рядовых ветеринарных клиниках при наличии в них лаборатории.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Мазуров, В.И. Классификация лим-фом. морфология, иммунофенотип, молекулярная генетика неходжкинских лимфом / В.И. Мазуров, Ю.А. Криволапов // Практическая онкология. - 2004. - Т.5. - №3. -С. 169-175.
2. Пономарева, О.В. Неходжкинские злокачественные лимфомы из клеток маргинальной зоны: диагностика и лечение / О.В. Пономарева, О.В. Юрченко // Онкология. - 2013. - Т. 15. - № 3. - С. 241-253.
3. Cora, R. The utility of fine needle aspiration cytology in canine lymphadenopaties / R. Cora, A.F. Gal, M. Taulescu, F. Tabaran, R. Vidrighinescu, C. Catoi // Annals of R.S.C.B. - 2015. - Vol. XIX. - Issue 2. - P. 47-54.
4. Karen, M.Y. Cytologic Evaluation of Lymph Nodes in Dogs and Cats / M. Y. Karen // Proceedings of the SCIVAC Congress, Rimini, Italy. - 2007. - P. 494 - 495.
5. Kim, A. Lymph node cytology What Should & Should Not be There / A. Kim // Today's Veterinary Practice. - 2014. - P. 1822.
6. Morris, J. Small animal oncology / J. Morris, J. Dobson // Blackwell Science. -2001. - P. 228.
7. Rose, E. Raskin Canine And Feline Cytology: A Color Atlas And Interpretation Guide, Second Edition / E. Raskin Rose, J. Denny Meyer // Copyright by Saunders, an imprint of Elsevier Inc. - 2010. - P. 77-122.
8. Ruiz de Gopegui, R. Causes of lym-phadenopathy in the dog and cat / R. Ruiz de Gopegui, B. Penalba, Y. Espada // Veterinary Record. - 2004. - July 3. - P. 23-24.
9. Seelig, Davis M. The Comparative Diagnostic Features of Canine and Human Lymphoma / Davis M. Seelig, Anne C. Avery, E. J. Ehrhart and Michael A. Linden // Vet. Sci. - 2016. - P. 11-29.
10. Thangapandiyan, M. Cytological diagnosis of canine lymphadenopathies / M. Thangapandiyan and C. Balachandran // Vet. Arhiv. - 2010. - 80 (4). - P. 499-508.
11. Vail, David M. Lymphoma in Dogs: Diagnosis & Treatment / David M. Vail // NAVC clinician's brief. - 2009. - December. - P. 15-19.
12. Valli, V.E. Classification of Canine Valli, M. San Myint, A. Barthel, D. Bienzle et Malignant Lymphomas According to the al. // Veterinary Pathology. - 2011. - 48(1). -World Health Organization Criteria / V.E. P. 198-211.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ ПРИ ЛИМФАДЕНОПАТИЯХ У СОБАК
Григорьева А.В., Савинков А.В.
Резюме
Данное исследование проведено с целью оценки полезности цитологического метода в дифференциальной диагностике лимфаденопатий у собак. Были отобраны цитологические образцы от 14 собак с различным состоянием лимфатических узлов. Высушенные на воздухе мазки, окрашенные по Паппенгейму, исследовали под микроскопом для цитоморфологиче-ского анализа. Среди рассмотренных 14 случаев цитологически определён диагноз: 5 нормальных лимфатических узлов, 4 реактивных лимфатических узла и 5 лимфом. Проведенные исследования дают основание утверждать, что цитологический метод является полезным диагностическим мероприятием в дифференциальной диагностике лимфаденопатий у собак благодаря его скорости и простоте исполнения.
COMPARATIVE CYTOMORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS CHANGES IN LYMPHADENOPATHY IN DOGS
Grigorievа A.V., Savinkov A.V.
Summary
This study was carried out to evaluate the usefulness of cytological technique in differential diagnosis of canine lymphadenopathies. The cytologic samples collected from 14 dogs with different condition of the lymph nodes. Air dried smears stained with Pappenheim stains observed in a microscopic field to cytomorphological analysis. The cytological diagnosis made from 14 cases were, 5 normal lymph node, 4 reactive lymph node, and 4 lymphomas. Conducted studies give reason to confirm that cytological method of research is a useful diagnostic procedure in differential diagnosis of canine lymphadenopathies because of its simplicity and rapidity.
