CC BY
18
в крови эстрогена, обладающего про-эпилептическим эффектом.
4. Полученные данные необходимо учитывать при ведении пациенток с катаме-ниальной эпилепсией и при необходимости после углубленного изучения гормонального статуса больных в фолликулярную и лютеи-новую фазу цикла проводить соответствующую коррекцию уровня гормонов крови.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Гнездицкий В.В. и др. // Функциональная диагностика. - 2004. - №3. - С.67-67.
2. Гнездицкий В.В. и др. Мат-лы V Восточно-европейской конференции: эпилепсия и клиническая нейрофизиология. - Гурзуф, 2003. - С.17—19.
3. Егорова И.С. Электроэнцефалография. — М., 1973. — 294 с.
4. Жирмунская Е.А., Лосев В.С. // Физиология человека. — 1980. — Т.6, №6. — С.1039—1047.
5. Зенков Л.Р. Клиническая эпилептология: 2-е изд., испр. и доп. — М., 2010. — С.123—129.
6. Зенков Л.Р. Непароксизмальные эпилептические расстройства. — М., 2007. — 278 с.
7. Карлов В.А., Овтанатов Б.С., Власов П.Н. // Невр. и псих. — 1993. — Т.93, №1. — С.8—12.
8. Мухин К.Ю., Петрухин А.С., [пухова Л.Ю. Эпилепсия: Атлас электроклинической диагностики.—М., 2004.—440 с.
9. El-Khayat H.A., Soliman N.A., Tomoum HY, Omran M.A., El-Wakad A.S., Shatla R.H. // Epilepsia. — 2008. — Vol.49. — P.1619—1626.
10. Gilad R., Sadeh M., Rapoport A., Dabby R., Lampl Y // Seizure. - 2008. - Vol.17. - P.531-534.
11. Herzog A.G. // Neurology. - 2006. - Vol.66, N6 (Suppl.3). - P.23-28.
12. Holmes G.I. // Semin. In Neurol. - 1988. - Vol.8. -P.234-239.
13. Reddy D.S. // Epilepsy Res. - 2009. - Vol.85. -P.1-30.
14. Reddy D.D., Jian K. // J. Pharmacol. Exp. Ther. -2010. - Vol.334. - P.1031-1041.
15. Tuverl A., PaolettI A.M., Orru M., et al. // Epilepsia. - 2008. - Vol.49. - P.1221-1229.
16. Younus I., Reddy D.S. // Epilepsy Res. - 2016. -Vol.121. - P.29-32.
Поступила 28.01.2020 г. Статья размещена на сайте www.mednovosti.by (Архив МН) и может быть скопирована в формате Word.
Сравнительная характеристика серологических методов исследования при Helicobacter pylori-
w w ^
ассоциированной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки
Гасымова М.Ч., Гурбанов А.И.
Азербайджанский медицинский университет, Баку
Gasimova M.C., Gurbanov A.I.
Azerbaijan Medical University, Baku
Comparative evaluation of serological investigation methods in H. pylori--associated gastric and duodenal ulcer diseases
Резюме. Проведена сравнительная оценка неинвазивных методов диагностики язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Было обследовано 25 пациентов, обратившихся с гастроинтестинальными жалобами в отделение эндоскопии. Титр антител IgM и IgG к H. pylori определялся при помощи стандартного иммуноферментного анализа (ИФА), наличие же данных антител - при помощи экспресс-методов. Для экспресс-теста использовался GM-test (GM R-HPYAb-1C) канадского производства. Данный тест предоставляет возможность в течение короткого времени определить наличие антител к H. pylori в плазме крови. Антигены H. pylori в образцах испражнений определялись при помощи экспресс-теста GM-test (GM R-HPY Ag-1C) канадского производства, позволяющего в короткий промежуток времени определить наличие антигенов в образцах.
Исследование выявило, что у большинства больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки в сыворотке крови выявляются антитела к H. pylori, основную долю которых составляют иммуноглобулины класса IgG. У больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки экспресс-тест на определение антител к H. pylori в сыворотке крови в большинстве случаев подтверждает результаты ИФА. Экспресс-тест на определение антигенов H. pylori в испражнениях обладает высокой чувствительностью.
Ключевые слова: Helicobacter pylori, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, иммуноферментный анализ, экспресс-тест на анти-H. pylori антитела, экспресс-тест для выявления антигенов H. pylori.
Медицинские новости. — 2020. — №5. — С. 82—84. Summary. The aim of the study was a comparative evaluation of non-invasive methods in the diagnosis of gastric and duodenal ulcer diseases. We examined 25 patients applied to the endoscopy department with gastrointestinal complaint. IgM and IgG titers against were measured by standard enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The presence of these antibodies were detected by express test - GM-test (GM R-HPY Ab-1C, Canada) enabling detection of antibodies in plasma in short period of time. H. pylori antigens in stool samples were detected by GM-test (GM R-HPYAg-1C, Canada).
The study revealed that, antibodies against H. pylori are detected in majority of patients with gastric and duodenal ulcer diseases. These antibodies mainly consist of IgG class. Express-test used for detection of antibodies against H. pylori in majority of cases confirms results of ELISA. Express antigen test used for detection of H. pylori antigens in stool has high sensitivity.
Keywords: Helicobacter pylori, gastroduodenal ulcer, enzyme-linked immunosorbent assay, express anti-H. pylori serum test, stool antigen test. Meditsinskie novosti. - 2020. - N5. - P. 82-84.
риблизительно 50% населения ка и аденокарциномы. Так, в 50-60%
случаев гастрита, в 90% случаев язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, в 50-80% случаев язвенной болезни желудка и 60-70% случаев рака желудка этиологическим фактором является H. pylori [3]. 80% случаев пептической язвы обусловлены H. pylori, при этом риск
Пмира инфицировано Helicobacter pylori, а в развивающихся странах распространенность инфекции составляет 70-80% [1, 2]. Данный микроорганизм, являясь основной причиной гастрита, в то же время считается фактором риска возникновения язвенной болезни желуд-
смерти у данных пациентов составляет примерно 15% [4].
Helicobacter pylori является основным этиологическим агентом язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Данный микроорганизм, размножаясь в слизистой оболочке желудка, вызывает развитие эрозий и язв. Дис-
МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ
№5 • 2020
82
трофические изменения в слизистой оболочке способствуют хроническому течению болезни [5, 6]. Язва, проникающая в слизистую и мышечную оболочки гастроинтестинального тракта, вызывает деструкцию слизистой оболочки и увеличение кислотности желудочного содержимого. Деструктивные изменения обусловлены цитотоксином, кодируемым A-геном (cagA) H. pylori [7].
Цель исследования - провести сравнительную оценку неинвазивных методов диагностики язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (диагностические методы для определения антител к H. pylori в плазме крови и антигенов H. pylori в испражнениях).
Материалы и методы
Было обследовано 25 пациентов, обратившихся с гастроинтестинальными жалобами в отделение эндоскопии учебно-терапевтической клиники Азербайджанского медицинского университета. У пациентов с выявленными во время эндоскопии язвами в различных отделах желудка и двенадцатиперстной кишки проверялись наличие анти-H. pylori антител в плазме крови и антигенов H. pylori в образцах испражнений.
Титр антител IgM и IgG к H. pylori определялся при помощи стандартного иммуноферментного анализа (ИФА), наличие же данных антител - при помощи экспресс-методов. ИФА проводился при помощи набора реактивов (BC-1051) фирмы BioCheck (Канада). Все реактивы перед использованием оставлялись при комнатной температуре (18-25 °C) на 30 минут. Далее проводилось 20-кратное разбавление Wash буфера (рабочий промывающий раствор) (1 часть Wash Buffer+ 19 частей дистиллированной воды). На первом этапе бралось 5 ml каждого из обследуемых образцов и контролей (позитивный и негативный контроли, Cut Off калибратор), которые разбавлялись в 200 ml Sample Diluent (разбавитель плазмы). Из полученных растворов бралось по 100 ml и добавлялось в лунки, которые инкубировались при комнатной температуре (18-25 °C) в течение 30 минут. После инкубации содержимое ячеек выливалось и 4 раза промывалось ранее приготовленным рабочим промывающим раствором (350400 ml). На втором этапе во все ячейки добавлялось 100 ml энзим конъюгата, которые далее инкубировались 30 ми-
нут при комнатной температуре, после чего промывались аналогично первому этапу. На третьем этапе во все ячейки добавлялось 100 ml TMB-субстрата (тетраметилбензидин) с дальнейшей инкубацией в течение 20 минут. После инкубации в каждую ячейку добавлялось 100 ml Stop-раствора (HCl, H2SO4) с дальнейшим встряхиванием. В конце проводилось определение оптической плотности растворов ИФА анализатором при 450 нм и расчет титра антител на основе полученных результатов.
Полученное число сравнивалось с эталонным стандартом. Величина ниже эталона интерпретировалась как отрицательный результат, выше - как положительный результат, близкая к эталону - как сомнительный результат.
Для экспресс-теста использовался GM-test (GM R-HPY Ab-1C) канадского производства. Данный тест предоставляет возможность в течение короткого времени получить данные о наличии в плазме крови антител к H. pylori. До начала исследования образцы крови (сыворотка и плазма) и тесты оставлялись на 15-20 минут при комнатной температуре. Тесты, извлеченные из пакетиков, располагались на чистой и гладкой поверхности. В S-лунку (specimen - образец) добавлялась 1 капля (приблизительно 30 ml) исследуемой плазмы или сыворотки, сверху - 1 капля буферного раствора и засекалось время (таймер) (обязательно нужно следить, чтобы в лунке не было воздушных пузырьков). Результат оценивался по прошествии 10 минут. При положительном результате появляются 2 отчетливые красные линии (одна образуется в контрольной (C), другая - в тест-зоне (T)), при негативном результате линия появляется лишь в контрольной (C) зоне. При недостоверном результате линия появляется в тест-зоне (T). Такой результат бывает при истечении срока эксплуатации теста или при наличии технической ошибки при постановке теста.
Антигены H. pylori в образцах испражнений определялись при помощи экспресс-метода (stoolantigen test). Данный метод позволяет в течение краткого времени получить данные о наличии антигенов в образцах. С этой целью использовался GM-test (GM R-HPY Ag-1C) канадского производства. Перед проведением исследования образцы и тесты
оставляются при комнатной температуре. Материал для исследования брался из нескольких частей образца испражнений и смешивался с используемым в тесте буферным раствором. После этого из полученной смеси добавлялось 3 капли (приблизительно 75 ml) в S-лунку. Ожидалось образование цветной линии и проводилась интерпретация результата через 10 минут. При положительном результате появляются 2 отчетливые розовые линии (одна - в контрольной (C), другая - в тест-зоне (T)). В случае негативного результата линия появляется лишь в контрольной (C) зоне. При ошибочном результате линия не образуется ни в одной зоне. Такой результат наблюдается при ошибках в проведении технической процедуры и истечении срока годности реактивов.
Были определены чувствительность и специфичность использованных методов. Чувствительность метода - соотношение числа подлинно-положительных результатов к общему числу положительных результатов, выраженное в процентах. Чувствительность метода = ПП / ИП + ЛО x 100%. Здесь ПП - число подлинно-положительных результатов, ЛО - число ложно-отрицательных результатов. Следовательно, с увеличением числа ложно-отрицательных результатов уменьшается чувствительность теста [8].
Специфичность метода - процентное соотношение подлинно-отрицательных результатов к общему числу отрицательных результатов. Специфичность метода = ПО / ПО + ЛП x 100%. Таким образом, с увеличением ложно-положительных результатов уменьшается специфичность теста [8].
При оценке чувствительности и специфичности методов исследования в качестве референс-метода использовался ИФА. Статистическая обработка результатов основывалась на определении критериев Стьюдента [9].
Результаты и обсуждение
У 22 (88%) из 25 пациентов с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки в сыворотке крови были выявлены антитела к H. pylori методом ИФА, у 3 (12%) - результат ИФА был негативным. В 21 (95,5%) из 22 случаев были выявлены только антитела IgG-класса, только в 1 (4,5%) случае были выявлены антитела одновременно IgG- и IgM-класса.
Из 22 больных с позитивными результатами ИФА экспресс-серологический
№5 • 2020
МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ
тест был положительным у 19 (86,4%), негативным - у 3 (13,6%), а фекальный антиген-тест был положительным у 17 (77,3%) и отрицательным у 5 (22,7%) пациентов (р>0,05).
Таким образом, серологический экспресс-тест подтвердил результаты ИФА в 86,4% случаев. Чувствительность серологического экспресс-теста составила 86,4%, специфичность - 100%. Фекальный антиген-тест подтвердил результаты ИФА в 77,2%, серологический экспресс-тест - в 84,2% случаев. Чувствительность фекального антиген-теста составила 77,2%, специфичность - 60%.
Нужно отметить, что результаты предыдущего исследования [10], проводимого на образцах больных с гастритом, выявили относительно слабую (36,7%) чувствительность теста на антиген H. pylori в испражнениях. Так, у больных с гастритом данный тест часто дает отрицательный результат. Результаты же настоящего исследования показывают, что тест на антиген H. pylori в испражнениях у больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки часто дает положительный результат и обладает высокой (77,2%) чувствительностью. Таким образом, характер патологии гастродуо-денального тракта существенно влияет на результаты теста на антиген H. pylori
в испражнениях. Полученные результаты в некоторой степени разнятся с данными проведенных ранее исследований. Так, чувствительность и специфичность теста на антиген H. pylori в испражнениях при диагностике язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки составили 73,9% и 86,7% соответственно [11], в то время как чувствительность и специфичность серологических методов для определения анти-H. pylori антител - 87,5% и 54,5% соответственно [12].
Заключение
Результаты серологических методов исследования при Helicobacter pylori-ассоциированной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки показывают, что у большинства больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки в сыворотке крови выявляются антитела к H. pylori. Основную долю антител к H. pylori в сыворотке крови больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки составляют иммуноглобулины класса IgG. У больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки экспресс-тест на определение антител к H. pylori в сыворотке крови в большинстве случаев подтверждают результаты ИФА. Экспресс-тест на определение антигенов H. pylori в испражнениях имеет высокую чувстви-
тельность у больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. De Martel C., Ferlay J., Franceschi S., et al. // Lancet Oncol. - 2012. - Vol.13. - Р.607-615.
2. Hagymasi K., Tulassay Z. // World J. Gastroenterol. -2014. - Vol.20, N21. - Р.6386-6399.
3. Garayev Z.O., Gurbanov A.I. Medical microbiology and immunology. - Baku, 2010. - 860 p.
4. Fock K.M. // Aliment Pharmacol Ther. - 2014. -Vol.40. - Р.250-260.
5. David Y // World J. Gastroenterol. - 2014. - Vol.20, N18. - Р.5191-5204.
6. Konturek J.W. // J. Physiol. Pharmacol. - 2003. -Vol.54, Suppl.3. - Р.23-41.
7. Kaur Amandeep, Singh Robin, Sharma Ramica, et al. // International research journal of pharmacy. -
2012. - Vol.3, N6. - Р.34-38.
8. Altman D.G., Bland J.M. // BMJ. - 1994. - Vol.308 (6943). - Р.1552.
9. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. - Л., 1973.
10. Гасымова М.Ч., Гурбанов А.И. // Медицинские новости. - 2018. - №3. - С.82-84.
11. Mohammad Khalifehgholi, Fereshteh Shamsipour, Hossein Ajhdarkosh, et al. // Iran J. Microbiol. -
2013. - Vol.5, N4. - Р.396-401.
12. Garcia-Diaz E., Castro-Fernandez M., Romero-Gomez M., Vargas-Romero J. // Rev. Esp. Enferm Dig. - 2002. - Vol.94, N12. - Р.725-736.
Поступила 06.03.2020 г.
Статья размещена на сайте www.mednovosti.by (Архив МН) и может быть скопирована в формате Word.
ВЫХОДНЫЕ ДАННЫЕ Адрес для переписки: Журнал «Медицинские новости»
220004, Минск, включен в электронные базы
«Медицинские новости» № 5 (308) 2020 г. ул. Короля, 51, офис 22 (7 этаж) данных «КиберЛенинка»
Рецензируемый научно-практический Тел.: (+375-17) 350-06-41 (гл. редактор), и РИНЦ eLIBRARY.ru
информационно-аналитический журнал. 373-07-01, факс: 374-07-02 Цитируемость - 8580.
Свидетельство о регистрации № 965 Velcom (+375-29) 695-94-19 Impact factor - 0,237.
выдано Министерством информации Е-mail: [email protected] индекс Хирша - 14.
Республики Беларусь 9 июля 2010 года. (для рекламодателей);
Периодичность - 1 раз в месяц [email protected] Подписка: по каталогам
(для авторов) РУП «Белпочта»
Учредитель www.mednovosti.by и РУП «Белсоюзпечать»
Частное издательское индексы: 74954 (инд.),
унитарное предприятие Ответственность 749542 (вед.);
«ЮпокомИнфоМед». за достоверность Украина (ГП «Пресса»),
Юридический адрес и интерпретацию предоставленной Литва (АО «Летувос паштас»),
220018, г. Минск, ул. Якубовского, 70-5. информации несут авторы. Латвия (ООО
УНП 191350993 Редакция оставляет «Подписное агентство PKS»),
Редакция за собой право Болгария (Фирма INDEX),
по своему усмотрению РФ (ООО «Информнаука»),
Шарабчиев Юрий Талетович размещать полные тексты РФ (ЗАО «МК-Периодика»),
(главный редактор, директор) публикуемых статей Молдова (ГП «Пошта Молдовей»)
Ясевич Татьяна Владимировна на сайте редакции
(редактор, зам. директора) www.mednovosti.by Подписано в печать 27.05.2020 г.
Капля Марина Николаевна и в электронных базах данных Формат 60х84 1/8.
(отв. секретарь, (на сайтах) своих партнеров Гарнитура Helvetica Narrow.
маркетолог) Уч.-изд. 12,4 л.
Жданова Я.П. (редактор) По данным Google Analytics Заказ .
Колоницкая О.М. (дизайн, верстка) (апрель 2020 г.):
посещаемость сайта Типография: Государственное
Цена свободная. www.mednovosti.by - 198600; предприятие «СтройМедиаПроект»
Тираж распространения, включая читаемость журнала ЛП № 02330/71 от 23.01.2014
электронную подписку, 1005 экз. «Медицинские новости» - 13700. ул. В. Хоружей, 13/61, 220123, г. Минск
