CC BY
8
дом, за годы наблюдения не зарегистрировано. Учиты-^ вая, что в смеси нитрогазов содержится значительное (80— г'94%) количество окиси азота, следует считать, что указанные уровни существенно не влияли на развитие профессиональной патологии. Данные клинического обследования подтверждают результаты эксперимента по обоснованию уровней вредного действия окиси азота.
Выводы. 1. Различия токсичности отдельных окислов азота и повышение гигиенической значимости окиси свидетельствуют о необходимости раздельного определения окиси и двуокиси.
2. На основании результатов исследований в качестве ПДК окиси азота в воздухе рабочей зоны можно рекомендовать 10 мг/м3.
Литература
1. Борисенкова Р. В. Гигиена труда при добыче полезных ископаемых открытым способом. М., 1982.
2. Варшавский И. J1. — В кн.: Токсичность двигателей внутреннего сгорания и пути ее снижения. М., 1966, с. 19.
3. Грохольская Н. В. — В кн.: Ленинградская конф. по вопросам промышленной токсикологии. 5-я. Тезисы докладов. Л., 1957, с. 19—20.
4. Парибок В. П., Иванова А. Ф. — Гиг. труда, 1965, № 7, с. 22—26.
5. Перегуд Е. А. Химический анализ воздуха. Л., 1976, с. 266—268.
6. Смайлис В. И. Изыскание путей снижении токсичности выхлопных газов. Дис. канд. Л., !965.
7. AUshuller А. P., Me Pherson S. P. — J. Air. Pollut. Contr. Ass. 1963, v. 13, p. 109—111.
8. Linnet R. H., Scoll W. E. — Ibid., 1962, v. 12, p. 510—515.
9. Pflesser G. — Arch exp. Path. Pharmakol., 1936, Bd 181, S. 145—146.
Поступила 04.09.84
УДК 579.8.04:615.2811-07
Т. Б. Крученок
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ К МОНОХЛОРАМИНУ Б
ВНИИ дезинфекции и стерилизации Минздрава СССР, Москва
I В предыдущих работах рассмотрена предложенная группа параметров, характеризующих антимикробную активность дезинфицирующих веществ, дан метод их расчета, приведены найденные числовые значения критериев, в зависимости от которых рекомендована классификация дезинфицирующих веществ [1, 21.
Этот же метод может быть использован для количественной характеристики сравнительной чувствительности микроорганизмов по отношению к определенному дезинфицирующему веществу или композиции.
Подавляющее большинство дезинфицирующих веществ применяют в виде растворов, функциональные и термодинамические свойства которых определяет концентрация (С) присутствующих в них действующих веществ. Поэтому концентрация растворов дезинфицирующих препаратов, вызывающих определенный микробоцидный эффект (как нами принято — 100% гибель микроорганизмов) в фиксированное время (г), может служить характеристикой чувствительности микроорганизмов к препаратам.
Мерой абсолютной чувствительности (5) микроорганизмов может служить величина, обратная С, обеспечивающей данный микробоцидный эффект:
—в-
Математическая обработка экспериментальных данных зависимости х 100% гибели микроорганизмов от С растворов активно действующих веществ, как это нами отмечалось ранее, показала, что она представляет степенную функцию:
С"-х = В, (1)
где п и В — постоянные.
С использованием уравнения (I) на основании экспериментальных результатов рассчитаны величины С при заданной экспозиции (5, 30 и 60 мин).
В качестве дезинфицирующего вещества, по отношению к которому оценивали чувствительность микроорганизмов, взято одно из наиболее распространенных соединений — монохлорамин Б, концентрацию которого в растворах оценивали по содержанию активного хлора. Микроорганизмы имели следующие характеристики. Кишеч-и пая палочка (штамм № 1257): устойчивость к раствору "^хлорамина Б, содержащему 0,026% активного хлора, —
10 мин, к раствору фенола 1 : 90 — 15 мнн. Золотистый стафилококк (штамм №906): устойчивость к раствору хлорамина Б, содержащему 0,052% активного хлора, — 10 мнн, к раствору фенола 1 : 70 — 20 мин.
Микроорганизмы выращивали на скошенном казеиновом или мясопептонном агаре при 37 °С в течение 18—24ч. Вирус гриппа типа А (штамм РИв): инфекционный титр 6,5—7 1д и040/о.1 мл- Вирус парагриппа типа А (Сендай, штамм ЬМ-1): инфекционный титр 6—6,5 1б ЬОм/0Л мл. Вирусы пассировали и титровали на белых мышах массой 7—9 г. Животных заражали интраназально 0,1 мл 10% вируссолержащей суспензии мышиных легких. Вирус осповакцины (штамм Л-ИВП Листер): инфекционный титр 5,5—6,5 ТЦДм/о.г мл- Вирусы размножали и титровали на культуре ткани НеЬа, каждую пробирку заражали 0,2 мл вируссодержащей жидкости.
Вирус инфекционного гепатита собак — ИГС (штамм РетСс): инфекционный титр 7,5—8 1~Ои/0.0з мл. Вирусы пассировали и титровали на белых мышах массой 14^=Т6тг Заражение животных проводили интрацеребралыю 0,03 мл 10% вируссодержащей мозговой суспензии. Вирус полиомиелита типа I (вакцинный штамм): инфекционный титр 6—6,5 ТЦДи/о,2 мл- Вирусы размножали и титровали на культуре ткани НеЬа, каждую пробирку заражали 0,2 мл вируссодержащей жидкости. Аденовирус типа 7": инфекционный титр 6,5—7,5 ТЦДГ10/0,, мл. Вирусы размножали и титровали на культуре ткани НеЬа, каждую пробирку заражали 0,1 мл вируссодержа-щей жидкости.
Во всех опытах использован метод тест-объектов. Батистовые тесты размером 0,5Х 1 см2 обсеменяли суспензией кишечной палочки или золотистого стафилококка, содержащей 2 млрд. микробных клеток в 1 мл, из расчета 0.5 мл на тест. Тесты погружали в раствор хлорамина Б. Через определенные интервалы времени их переносили в раствор нейтрализатора (гипосульфита натрия), затем промывали в стерильной водопроводной воде и помещали в жидкий питательный бульон. Результаты учитывали через 7 сут по наличию роста количества микроорганизмов (помутнению бульона).
При работе с вирусами такие же батистовые тесты инфицировали вируссодержащей суспензией из расчета 0,1 мл на тест. Инфицированные тесты погружали на определенное время в раствор хлорамина Б, после чего — в тот же нейтрализатор, затем промывали в воде и далее
Таблица 1
Параметры чувствительности микроорганизмов к монохлорамину Б
т НИН
Микроорганизмы s 30 60
С. г/л S. л/г К, С. г/л S. л/г «ч С. г/л S, л/г
Кишечная палочка 0,262 3,82 0,0188 53,2 1 0,00678 147 1
Золотистый стафилококк 2,26 0.442 0,116 0,176 5,68 0,107 0,0654 15,3 0,104
Аденовирус* 2,55 0,392 32 0,425 2,35 3,01 0,212 4.72 1,20
Вирус:
парагриппа 16,3 0,0613 5 0,628 1,59 2,04 0,178 5,62 1,43
осповакцины** 41,7 0,0240 1,95 1.14 0,877 1.12 0,284 3,52 0,898 1
гриппа 81,5 0,0123 1 1,28 0,781 1 0,255 3,92
ИГС 505 0,00198 0,161 5,48 0,182 0,234 0,951 1,05 0,268
полиомиелита* ** 505 0,00198 0,161 5,48 0,182 0,234 0,951 1,05 0,268
Примечание. Одна, две и три звездочки — рассчитано по данным А. Л. Беляева, В. А. Шаховой и Л. Г. Пантелеевой соответственно.
заражали экспериментальных животных либо инфицировали клетки культуры ткани HeLa. Показателем активности служило время, обеспечивающее отсутствие поражения легких (грипп), мозга (инфекционный гепатит собак) у экспериментальных животных, либо отсутствие цитопатического эффекта в клетках культуры ткани HeLa (полиомиелит, осповакцина, аденовирус).
ТЦДьо и LDM определяли по методу Reed и Muench.
В табл. 1 приведены концентрации водных растворов монохлорамина Б, вызывающего 100% гибель микроорганизмов при заданных т, абсолютной чувствительности S микроорганизмов и относительной (сравнительной) чувствительности (/(ч) к дезинфицирующему веществу (коэффициент относительной чувствительности кишечной палочки и вируса гриппа принят за 1).
Коэффициент относительной чувствительности некоторых (¿-х) микроорганизмов представляет собой частное от деления Сэ дезинфицирующего вещества, вызывающего 100% гибель микроорганизмов, принятых за эталон, на Сг того же вещества, обеспечивающего тот же микробо-цидный эффект за то же время у сравниваемых микроорганизмов':
/Сч, = Щ. (2)
Если K4i >1, то данные микроорганизмы более чувствительны к дезинфицирующему веществу, чем принятые за эталон.
Таблица 2
Коэффициенты чувствительности микроорганизмов к моно-хлорамину Б
Т. мим
Микроорганизм
в 30 60
Кишечная палочка 1927 291 140
Золотистый стафилококк 223 31,1 14,5
Аденовирус 198 12,9 4,49
Вирус:
парагриппа 31 8,73 5,34
осповакцины 12,1 4,81 3,35
гриппа 6.2 4,28 3,73
ИГС 1 J 1
полиомиелита 1 1 1
Из уравнения (2) следует, что сравнительная чувствительность микроорганизмов и характеризующий ее коэффициент чувствительности зависят от характеристики как сравниваемых микроорганизмов, так и микроорганизма, принятого за эталон. Эталон выбирается пронзвольно.4м При переходе к другому эталону изменяется коэффициент^ чувствительности, однако последовательность расположения микроорганизмов по величине данного параметра и сравнительная характеристика их чувствительности остаются те же.
С увеличением экспозиции повышается абсолютная чувствительность микроорганизмов. При этом у разных микроорганизмов и по отношению к различным дезинфицирующим веществам темп этих изменений неодинаков. Поэтому и сравнительная чувствительность по отношению к данному дезинфицирующему веществу с течением времени будет изменяться не только в зависимости от вида оцениваемых микроорганизмов, но и оттого, какой микроорганизм принят в данном случае за эталон и как изменяется его абсолютная чувствительность в зависимости от экспозиции.
Приведенные в табл. 1 данные показывают, что по отношению к монохлорамину Б золотистый стафилококк примерно в 10 раз менее чувствителен, чем кишечная палочка. При этом относительная чувствительность с увеличением экспозиции немного уменьшается. Среди изученных вирусов наименьшей чувствительностью обладают вирусы . ИГС и полиомиелита, наибольшей — аденовирус. ^
Нами сделана попытка сравнить чувствительность микроорганизмов различных видов — двух неспорообра-зующих бактерий и некоторых вирусов (табл. 2). В этом случае следовало выбрать один эталон. Для того чтобы получить Кг более единицы, в качестве эталона взят наименее чувствительный микроорганизм — вирус полиомиелита.
Таблица 3
Классификация микроорганизмов по параметрам чувстви тельности к монохлорамину Б
Группа
Параметр 1-я 2-я 3-я 4-я
S, л/г кч 10 и более Более 200 9—0,3 200—100 Менее 0,3 9—3 Менее 3 ,-«
Как видно из табл. 2, изученные бактерии имеют боль-и шую чувствительность по сравнению с вирусами.
Для удобства анализа степени чувствительности микроорганизмов их целесообразно классифицировать по условным группам, аналогично предложенной нами классификации дезинфицирующих веществ [2]. По абсолютной чувствительности микроорганизмы разделены на три группы, а по относительной — на четыре (табл. 3).
Выводы. 1. На основании экспериментальных данных о времени 100% гибели ряда микроорганизмов в зависимости от концентрации растворов монохлорамина Б рассчитаны эти концентрации и абсолютная чувствительность микроорганизмов по отношению к монохлорамину Б для определенной экспозиции (5, 30 и 60 мин).
2. С целью сравнительной критериальной оценки чувствительности микроорганизмов предложено использовать коэффициент чувствительности, который вычислен для изученных микроорганизмов при трех экспозициях.
3. Наибольшей абсолютной и относительной чувствительностью к монохлорамину Б обладает кишечная палочка, наименьшей — вирусы ИГС и полиомиелита.
5. Относительная чувствительность микроорганизмов снижается с увеличением требующегося для их гибели времени воздействия дезинфицирующего вещества, при этом различия их относительной чувствительности нивелируются.
Литература
1. Крученок Т. Б., Лярский П. П., Глейберман С. Е. и др. — Гиг. и сан., 1983, № 11, с. 29—33.
2. Кручепок Т. Б., Лярский П. П., Федорова Л. С. и др. — Там же, 1984, №3. с. 61—65.
Поступила UJ.U8.s4.
УДК 614.777:647.4+574.64:547.564.4
А. Г. Иличкина
ТОКСИКОЛОГО-ГИГИЕНИЧECKАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОРТО-И ПАРААНИЗИДИНОВ
Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт
I Орто- и параанизидины (ОА и ПА) применяются в
uL^ анилинокрасочной и химико-фармацевтической промыш-ленности соответственно. ОА — бесцветная жидкость с запахом горького миндаля, растворимость в воде от 1,46— 2,43%, ПА — белый порошок, растворимость в воде колеблется в зависимости от температуры в пределах 2,3—8,8%.
Стабильность ОА и ПА в воде изучали как путем количественного анализа, так и по динамике органолептических показателей и выживаемости гидробионтов — дафний и зеленой водоросли. Последняя оказалась очень чувствительной к токсическому действию веществ и погибала при их содержании в воде 5 мг/л. С помощью разных методов установлены одинаковые сроки распада ОА и Г1А. Процесс их окисления и самоокисления протекают быстрее при инсоляции, сопровождается значительным потреблением растворенного кислорода и продолжается 6—8 сут. Таким образом, ОА и ПА относятся к стабильным соединениям. Они сообщали запах в 1 балл при концентрации 14,4±0,4 и 29,6±0,5 мг/л соответственно, причем усиливает запах хлорирование растворов. Пороговые концентрации ощущения запаха снижались до 5 мг/л. Кроме того, бесцветные исходные растворы после контакта с хлором окрашивались в различные цвета в связи с трансформацией ОА и ПА в красители. Пороговые концентрации по провокации ок-W раски установлены на уровне 0,25 мг/л для ОА и 0,5 мг/л — "w для Г1А III.
Влияние веществ па санитарный режим водоемов определяли по динамике биохимического потребления кислорода (БПК), развитию сапрофитной н нитрифицирующей микрофюры и кислородному режиму. Опыты показали, что первая фаза минерализации при содержании ОА и ПА до 0,25 мг/л протекает так же, как в контроле. Однако в связи с окислением данных соединений уже при концентрации 10 мг/л возникает дефицит кислорода, нарушаются процессы самоочищения и угнетается нитрификация. Порог действия на санитарный режим водоемов установлен для ОА и ПА на уровне 0.25 и 0,005 мг/л соответственно.
До начала санитарно-токсикологического эксперимента изучено специфическое действие веществ. Такой подход к планированию исследований позволил более обоснованно выбрать дозы для хронического опыта. С целью выявления аллергенных свойств веществ проведена экспресс-сенсибилизация морских снинок путем внутрикожных и эпнкутанных аппликаций. Кожно-сенсибилизирующнй эф-фект был выявлен у морских свинок при интеркутанном и эинкутанном воздействии ОА н ПА в дозах 0,5 и 2,5 мг/кг
соотве.ственно, что свидетельствует об их слабых аллергенных свойствах. Возможное мутагенное действие изучали методом метафазного анализа частоты хромосомных аберраций в лимфоцитах человека Учитывая однонаправленность биологического действия веществ, исследования патогенетических свойств в опытах in vitro проводили только с ОА в дозах 5 и 0,02 мг/л. Эффект оценивали по общему числу аберрантных клеток, разрывов, причем хроматидные и изохроматидные принимали за одно, а дицентрики, кольцевые хромосомы и атипичные за два повреждения; пробелы отмечали отдельно. Кроме аберраций, изучали параметры блок-митозов, нарушения спи-рализации и изменение плоидности. Частота возникновения хромосомных аберраций в опыте была выше, чем в контроле, в 5 раз, а митотический и статмокинетический индексы ниже в 5,5 раза.
Наиболее часто встречающиеся аберрации были представлены одиночными фрагментами, разрывами в области центромеры, хроматидиыми обменами. Во многих случаях отмечались нарушения спирализации хромосом. Наблюдавшиеся изменения хромосом на стадиях метафаз свидетельствовали о том, что ОА может представлять генетическую опасность.
Острую токсичность определяли при пероралыюм введении веществ белым мышам и крысам. Полученные сред-несмертельные дозы совпали с ранее установленными |2, 3). Наиболее чувствительным видом животных оказались белые мыши. Клиническая картина характеризовалась развитием глубокого наркоза, сердечной недостаточности и цианоза, связанного с метгемоглобинообразованием и гипоксией. Как правило, все животные, у которых наступало состояние наркоза, погибали в 1-е сутки после воздействия веществами, а те, у которых наркоз не развивался, — через 6 сут и более. При количественном и качественном анализе крови у данных животных выявлены увеличение количества метгемоглобина, анемия, ретикуло-цитоз, базофильная зернистость и аннзоцитоз эритроцитов, тельца Гейнца. При морфологическом исследовании внутренних органов после острого воздействия веществ обнаружены дистрофические изменения в печени, сердце и селезенке, кровоизлияния в почках.
Хронический эксперимент проведен на 64 белых крысах и 60 белых мышах. На крысах испытано действие ОА
1 Исследования выполнены при участии Л. В. Ми рецкой.
