CC BY
40
УДК 61:[542.943-92'78[661.719.3:547.222]]-06:612.6.051:[546.21:542.943]:57.084.1-07-08(045)
СРАВНИТЕЛЬНАЯ АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ СЕЛЕНООРГАНИЧЕСКОГО СОЕДИНЕНИЯ ДАФС-25 И ЕГО ХЛОРПРОИЗВОДНОГО В ОРГАНАХ МЫШЕЙ С РАЗЛИЧНОЙ ОКСИДОРЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ
© 2013 г. Н.Ю. Русецкая, В.Б. Бородулин, И.А. Горошинская, В.А. Мартьянова, Я.В. Бородулин, А.П. Димидов
Русецкая Наталья Юрьевна - кандидат биологических наук, ассистент, кафедра биологической химии, Саратовский государственный медицинский университет, ул. Б. Казачья, 112, г. Саратов, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Rusetskaya Natalia Yurievna - Candidate of Biological Science, Assistant, Biochemistry Department, Saratov State Medical University, B. Kazachia St., 112, Saratov, 410012, e-mail: me-duniv@sgmu. ru.
Бородулин Владимир Борисович - доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой биохимии, Саратовский государственный медицинский университет, ул. Б. Казачья, 112, г. Саратов, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Горошинская Ирина Александровна - доктор биологических наук, профессор, руководитель биохимической лаборатории, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14 линия, 63, г. Ростов н/Д, 344037, e-mail: rnioi@list.ru.
Мартьянова Виктория Александровна - аспирант, кафедра биохимии, Саратовский государственный медицинский университет, ул. Б. Казачья, 112, г. Саратов, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Бородулин Ярослав Владимирович - студент, лечебный факультет, кафедра биохимии, Саратовский государственный медицинский университет, ул. Б. Казачья, 112, г. Саратов, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Димидов Дмитрий Павлович - аспирант, кафедра биохимии, Саратовский государственный медицинский университет, ул. Б. Казачья, 112, г. Саратов, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Borodulin Vladimir Borisovich - Doctor of Biological Science, Professor, Head of Biochemistry Department, Saratov State Medical University, B. Kazachia St., 112, Saratov, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Goroshinskaya Irina Aleksandrovna - Doctor of Biological Science, Professor, Head of Biochemical Laboratory, Rostov Research Oncological Institute, 14-line, 63, Rostov-on-Don, 344037, e-mail: rnioi@list.ru.
Martianova Viktoria Aleksandrovna - Post-Graduate Student, Biochemistry Department, Saratov State Medical University, B. Kazachia St., 112, Saratov, 410012, e-mail: medu-niv@sgmu.ru.
Borodulin Yaroslav Vladimirovich - Student, Medical Faculty, Saratov State Medical University, B. Kazachia St., 112, Saratov, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Dimidov Dmitriy Pavlovich - Post-Graduate Student, Biochemistry Department, Saratov State Medical University, B. Kazachia St., 112, Saratov, 410012, e-mail: meduniv@sgmu.ru.
Исследовалась антиоксидантная активность селеноорганического соединения ДАФС-25 (соединение 1) и его хлорпроизводного (соединение 2) в органах и тканях мышей (плазма, эритроциты, печень, легкие, почки и мозг). Соединения 1 и 2 оказывали значительное антиоксидантное действие, которое выражалось в снижении содержания малонового диальдегида и увеличении активности антиоксидантных ферментов каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в большинстве исследованных го-могенатах органов и крови. Соединение 2 обладало меньшей активностью по сравнению с соединением 1. У мышей обеих экспериментальных групп отмечалось достоверное снижение концентрации диеновых конъюгатов лишь в гомогенатах легких.
Ключевые слова: селеноорганические соединения, антиоксидантная активность, оксидорезистентность.
Antioxidant activity of selenoorganic compound DAPS-25 (compound 1) and it chloroderivative (compound 2) in organs and tissues of mice (blood plasma, erythrocytes, liver, lungs, kidneys and brain) was investigated. Compounds 1 and 2 had considerable antioxidant action which was expressed in maintenance decrease of malonic dialdehyde and increase of antioxidant enzymes activity (catalase, superoxide dis-mutase and glutathione peroxidase) in the most investigated homogenates of organs and blood. Compound 2 possessed smaller activity in comparison with compound 1. At mice of both experimental groups authentic decrease in concentration of diene conjugates only in homogenates of lungs was marked.
Keywords: selenoorganic compounds, antioxidant activity, oxidoresistance.
В последние годы отмечено, что структура рациона современных людей претерпела изменения, получил широкое распространение дефицит многих витаминов, эссенциальных микроэлементов, в том числе и селена. Недостаток селена в рационе питания может привести к нарушению синтеза ряда селензависимых белков и ферментов, в том числе и глутатионпероксидазы (ГПО), к снижению общей антиоксидантной защиты организма, следствием чего может явиться развитие таких тяжелых патологий, как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, онкологические заболевания, бесплодие и многие другие [1].
Учитывая широкое распространение селенодефи-цитных состояний как в России, так и за рубежом, встает вопрос о профилактике селенодефицита. В этой связи проводятся синтез и изучение биологической активности селеноорганических соединений. В настоящее время предпочтение отдается органическим соединениям селена, поскольку они менее токсичны и лучше усваиваются в желудочно-кишечном тракте сельскохозяйственных животных и человека. Одним из перспективных соединений является диаце-тофенонилселенид (ДАФС-25), который применяется в птицеводстве и животноводстве для выживаемости молодняка, увеличения яйценоскости у кур и пр. [2].
В связи с этим целью нашей работы явилось исследование антиоксидантной активности селеноорга-нического соединения ДАФС-25: 1,5-дифенил-3-селе-напентандион-1,5 (соединение 1) и его хлорсодержа-щего аналога: 1,5-ди-(п-хлорфенил)-3-селенапентан-дион-1,5 (соединение 2) в органах и тканях мышей с различной оксидорезистентностью.
Материалы и методы
В работе использовали селеноорганические соединения ДАФС-25 - 1,5-дифенил-3-селенапентандион-1,5 (соединение 1) и 1,5-ди-(п-хлорфенил)-3-селенапен-тандион-1,5 (соединение 2), которые растворяли в растительном масле (рисунок).
Соединение 1 Соединение 2
Соединение 1 - 1,5-дифенил-3-селенапентандион-1,5 (ДАФС-25); соединение 2 - 1,5-ди-(п-хлорфенил)-3-селенапентандион-1,5
Эксперимент проводили на самцах белых беспородных мышей (возраст - 2 мес.) массой 20 г. Каждая группа включала 7 животных. Животным 1-й группы (контроль) ежедневно вводили per os растительное масло в количестве 10 мкл, 2-й и 3-й групп - per os препараты 1 и 2 соответственно в количестве 10 мкл с дозой 800 мкг/кг. Эксперимент продолжали в течение 14 дней. Все работы с лабораторными мышами проводили согласно принципам гуманного отношения к животным в соответствии с Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных, Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных и Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003).
Кровь мышей собирали в пробирку с гепарином. Активность фермента ГПО в цельной крови определяли на полуавтоматическом анализаторе Hospitex Screen Master Plus с использованием наборов реактивов фирмы Randox (UK). После центрифугирования крови и получения плазмы эритроциты отмывали трижды в фосфатном буферном растворе. Гемолизат эритроцитов получали, разбавляя эритроциты дистиллированной водой 1:200. Плазму для анализа разводили 1:200 фосфатным буфером. Гомогенаты органов печени, почек, мозга и легких готовили путем гомогенизации с использованием фосфатного буфера. В плазме, гемоли-зате эритроцитов и гомогенатах органов определяли активность ферментов супероксиддисмутазы (СОД) [3] и каталазы [4], а также содержание продуктов перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) - диеновых конъюгатов (ДК) [5] и малонового диальдегида (МДА) [6]. Определение проводили на фотоэлектроколориметре КФК-3, пересчет - на 1 г ткани для гомогенатов или на 1 мл для плазмы и эритроцитов. Статистическую обработку полученных данных осуществляли на персональном компьютере при помощи программы Microsoft Office Excel. Большинство данных не удовлетворяет закону нормального распределения случайной величины, поэтому для сравнения значений использовали 7-критерий Манна-Уитни, на основании которого оценивали уровень доверительной вероятности 1-а (комплементарная ей величина а называется уровнем значимости). Критический уровень доверительной вероятности при проверке статистических гипотез принимали равным 1-а = 0,95 (критический уровень значимости а=0,05) [7].
Результаты и их обсуждение
Основным параметром оценки ПОЛ является накопление первичных и вторичных продуктов свобод-норадикального окисления. В силу стабильности продукты перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), ДК и МДА являются наиболее информативными показателями наличия окислительного стресса.
Вместе с тем важнейшим звеном антиоксидантной защиты являются ферменты СОД, каталаза и ГПО. Наиболее активны эти ферменты в печени, надпочечниках и почках, где содержание митохондрий, цито-хрома Р450 и пероксиса особенно велико. СОД превращает супероксидные анионы в пероксид водорода, является как бы первой линией защиты, потому что супероксидный анион образуется обычно первым из активных форм кислорода при утечке электронов из дыхательной цепи. Пероксид водорода, который может инициировать образование самой активной формы - гидроксильного радикала (ОН^), разрушается ферментом каталазой. Селензависимая ГПО - важнейший фермент, обеспечивающий инактивацию ак-
Антиоксидантные показ
тивных форм кислорода, так как он разрушает и пе-роксид водорода, и гидропероксиды липидов [8].
В связи с этим в нашей работе определялись основные антиоксидантные показатели (содержание ДК и МДА, активность ферментов СОД, каталазы и ГПО) в плазме крови, гемолизате эритроцитов, гомогенатах печени, почек, легких и мозга белых беспородных мышей.
Выбранные ткани отличаются по активности ан-тиоксидантной защиты (АОЗ). Ранее было установлено, что наиболее активно свободнорадикальное окисление липидов осуществляется в селезенке, сердце, легких, почках и мозге. Относительно низкая активность процессов пероксидации выявлена в эритроцитах, печени и плазме [9].
Мы выбрали 3 органа с низкой оксидорезистент-ностью (легкие, почки и мозг) и 3 - с высокой (эритроциты, печень и плазма).
Антиоксидантные показатели интактных мышей (контроль), представленные в табл. 1, подтверждают это. Так, наибольшая концентрация продуктов ПОЛ -ДК и МДА - отмечается в гомогенатах мозга и легких и наименьшая - в гемолизате эритроцитов и плазме.
Таблица 1
гли у интактных мышей
Показатель Кровь Гомогенаты
Эритроциты Плазма печени мозга легких почек
ДК, ммоль/л 1,6 (1,6; 1,7) 0,6 (0,6; 0,7) 4,2 (3,9; 4,8) 6,9 (6,7; 7,1) 11,6 (10,7;12,8) 3,4 (3,1; 3,5)
МДА, ммоль/л 0,8 (0,8; 0,9) 0,08 (0,06; 0,09) 3,4 (3,3;3,4) 7,9 (7,8; 8,1) 3,9 (3,7; 4,0) 2,0 (1,8; 2,3)
Каталаза, ммоль/(мин-л) 0,3 (0,3; 0,3) 0,1 (0,1; 0,1) 0,04 (0,04; 0,04) 0,03 (0,02; 0,03) 0,01 (0,01; 0,01) 0,04 (0,04; 0,05)
СОД, усл. ед. 1292 (1219; 1398) 1121 (1000; 1225) 1436 (1377; 1529) 895 (815; 982) 3122 (2986; 3269) 1807 (1735; 1879)
Примечание. Приведены сначала медиана, затем в скобках нижний и верхний квартили.
Однако содержание продуктов ПОЛ в гомогенате печени больше, чем в гомогенате почек. У мышей контрольной группы активность антиоксидантного фермента каталазы максимальна в гемолизате эритроцитов и плазме. Активность каталазы в гомогенатах печени и почек сопоставима. В гомогенатах мозга и легких активность каталазы заметно ниже. Максимальная активность СОД обнаружена в гомогенате легких, поскольку в легких повышена возможность реализации свободнорадикальных реакций. В отличие от других органов респираторная ткань непосредственно подвергается действию кислорода - инициатора окисления [10]. Также высокая активность СОД отмечается в гомогенатах почек. Активность СОД в окси-дорезистентных эритроцитах, плазме и печени сопоставима. Минимальная активность СОД выявлена в гомогенатах мозга интактных животных.
Полученные данные демонстрируют высокую окси-дорезистентность в эритроцитах и плазме, среднюю - в печени и почках и слабую - в легких и мозге.
Значительная интенсивность липопероксидации в клетках мозга вызвана относительно высоким по сравнению с другими тканями и органами содержанием ли-пидов, подвергающихся окислению [8], а в легких - высокой концентрацией кислорода, индуцирующего сво-боднорадикальные реакции [10]. Различная устойчи-
вость эритроцитов, клеток печени и почек к окислительному стрессу связана с наличием внутриклеточных ан-тиоксидантов, в первую очередь ферментов СОД, каталазы и ГПО. Сравнительно высокая АОЗ плазмы крови объясняется содержанием таких антиоксидантов, как церулоплазмин, трансферрин, витамины Е и С, кароти-ноиды, эстрогены и др. [11].
АОЗ исследованных соединений оценивали по уменьшению содержания продуктов ПОЛ и увеличению активности ферментов СОД, каталазы и ГПО в органах и тканях экспериментальных животных.
Согласно полученным результатам, селенооргани-ческое соединение 1 (ДАФС-25) оказывало значительное антиоксидантное действие in vivo, так как у мышей, принимавших это соединение, отмечалось снижение концентрации МДА (табл. 2): в эритроцитах - на 49,7 %, в плазме - на 41,67, в гомогенатах мозга - на 41,5, легких - на 46,9 и почек - на 20,7 % (р<0,05). Лишь незначительное снижение МДА в го-могенате печени на 13 % оказалось недостоверным. Уменьшение концентрации ДК отмечалось только в гомогенатах легких на 47,7 % (1-а > 0,95).
Антиоксидантное действие соединения 1 также подтверждалось увеличением активности антиокси-дантных ферментов. Активность каталазы достоверно увеличивалась в гемолизате эритроцитов на 69,2 %, в
гомогенатах мозга - на 219,2 и легких - на 236,4 % (1-а > 0,95). Незначительное увеличение активности каталазы в гомогенатах печени и почек было недостоверным. Активность каталазы в плазме не изменялась по сравнению с контролем.
Активность СОД значительно возрастала во всех исследованных тканях: в гемолизате эритроцитов - в 2500 раз, в плазме - на 46 %, в гомогенатах печени -на 449,5, мозга - на 267,5, легких - на 54,9, почек -на 91,2 %.
Таблица 2
получавших соединение 1 (ДАФС-25)
Антиоксидантные показатели у мышей,
Показатель Кровь Гомогенаты
Эритроциты Плазма печени мозга легких почек
ДК, ммоль/л Контроль 1,6 (1,6; 1,7) 0,6 (0,6; 0,7) 4,2 (3,9; 4,8) 6,9 (6,7; 7,1) 11,6 (10,7; 12,8) 3,4 (3,1; 3,5)
Соединение 1 1,7 (1,68; 1,74) Т=41,5 1-а < 0,95 0,69 (0,66; 0,74) Т=43 1-а < 0,95 4,69 (4,56; 4,8) Т=40 1-а < 0,95 6,63 (6,14; 6,98) Т=45 1-а < 0,95 6,07 (5,69; 6,34) Т=28 1-а > 0,95 4,29 (3,86; 4,69) Т=46 1-а < 0,95
МДА, ммоль/л Контроль 0,8 (0,8; 0,9) 0,08 (0,06; 0,09) 3,4 (3,3; 3,4) 7,9 (7,8; 8,1) 3,9 (3,7; 4,0) 2,0 (1,8; 2,3)
Соединение 1 0,42 (0,38; 0,44) Т=28 1-а > 0,95 0,049 (0,042; 0,052) Т=32 1-а > 0,95 2,92 (2,63; 3,21) Т=40 1-а < 0,95 4,66 (4,47; 4,86) Т=28 1-а > 0,95 2,06 (1,89; 2,23) Т=28 1-а > 0,95 1,61 (1,52;1,76) Т=30,5 1-а > 0,95
Каталазг ммоль/ (мин-л) Контроль 0,3 (0,3; 0,3) 0,1 (0,1; 0,1) 0,04 (0,04; 0,04) 0,03 (0,02; 0,03) 0,01 (0,01; 0,01) 0,04 (0,04;0,05)
Соединение 1 0,84 (0,81; 0,87) Т=77 1-а > 0,95 0,13 (0,12; 0,14) Т=57 1-а < 0,95 0,059 (0,058; 0,063) Т=56 1-а < 0,95 0,08 (0,08; 0,09) Т=77 1-а > 0,95 0,037 (0,027; 0,043) Т =77 1-а > 0,95 0,045 (0,038; 0,054) Т =48 1-а < 0,95
СОД, усл.ед Контроль 1292 (1219; 1398) 1121 (1000;1225) 1436 (1377; 1529) 895 (815; 982) 3122 (2986; 3269) 1807 (1735; 1879)
Соединение 1 34116,7 (32350; 35000) Т =68 1-а > 0,95 1642,5 (1594; 1666,7) Т =74 1-а > 0,95 7891 (7245; 8214) Т =74 1-а > 0,95 3290,3 (2919; 3476) Т =68 1-а > 0,95 4835,6 (4791,33; 4857,7) Т =70 1-а > 0,95 3455,6 (3257,7; 3554,5) Т =68 1-а > 0,95
Примечания. Приведены сначала медиана, затем в скобках нижний и верхний квартили. Т - статистический критерий Манна-Уитни; 1-а - уровень доверительной вероятности (а - уровень значимости).
У мышей этой группы активность селензависимо-го фермента крови ГПО увеличивалась на 64,6 % по сравнению с контролем (табл. 3).
Активность СОД увеличивалась в большей степени в гемолизате эритроцитов на 720 %, в гомогенатах почек - на 252,9, печени - на 154,2, легких - на 61,3 %. Активность СОД в гомогенате мозга снижалась недостоверно, а в плазме отмечалось снижение активности СОД на 51,2 % (табл. 3).
Активность ГПО в цельной крови у мышей этой группы возрастала на 51,9 % (табл. 3).
Таблица 3
Активность глутатионпероксидазы в цельной крови у мышей всех групп
Контроль Соединения
1 2
ГПО, 365,31 601,47 555,14
ед/ г Hb (350,96; 376,38) (560,47; 641,65) (543,25; 569,49)
Т =77 Т =77
1-а > 0,95 1-а > 0,95
Примечания. Приведены сначала медиана, затем в скобках нижний и верхний квартили. Т - статистический критерий Манна-Уитни; 1-а - уровень доверительной вероятности (а - уровень значимости).
Следовательно, антиоксидантная активность соединения 2 наиболее выражена в эритроцитах, клетках легких и мозга.
Таким образом, из изученных соединений наибольший антиоксидантный эффект продемонстрировало соединение 1 (ДАФС-25), поскольку при его применении происходило одновременное снижение концентрации продуктов ПОЛ и увеличение активно-
сти ферментов каталазы, СОД и ГПО в органах и крови экспериментальных животных. Соединение 2 (хлорсодержащий аналог ДАФС-25) наибольшую ан-тиоксидантную активность оказывало на эритроциты, легкие и мозг.
Следовательно, соединение 1 обладало значительным антиоксидантным действием, которое выражалось в снижении содержания продуктов ПОЛ в эритроцитах, плазме, мозге и легких, а также увеличении активности антиоксидантных ферментов в эритроцитах, мозге и легких. Наибольший антиоксидантный эффект соединения 1 наблюдался в эритроцитах и легких.
Соединение 2 (хлорсодержащее производное ДАФС-25) также обладало антиоксидантной активностью, хотя и в меньшей степени, чем соединение 1. У мышей, получавших соединение 2, наблюдалось снижение содержания МДА в гемолизате эритроцитов на 77,7 %, в гомогенатах мозга - на 35 и легких - на 63,7 %. Концентрация ДК достоверно снижалась лишь в гомогенате легких на 29 %, а в гомогенате печени содержание ДК, напротив, значительно возрастало (106,9 %) (табл. 4).
Активность каталазы увеличивалась у мышей этой группы в плазме на 107,7 %, в гомогенатах печени - на 108,7, мозга - на 157,7, легких - на 136,4, почек - на 183,7, а также в гемолизате эритроцитов - на 50,6 % (1-а > 0,95).
Предположительный механизм действия изученных селеноорганических соединений имеет 3 аспекта. Во-первых, атом селена может освобождаться из молекулы соединения и использоваться для синтеза се-лензависимых белков и ферментов, в том числе и
ГПО, которые будут подавлять реакции свободнора-дикального окисления и тем самым препятствовать ПОЛ. Освобождение атома селена, в свою очередь, возможно благодаря разрыхлению связи C-Se в молекуле исследованных селеноорганических соединений. Этому способствуют карбонильные группы в составе исследованных соединений, которые обладают отрицательным индуктивным эффектом и способны оттягивать на себя электроны, приводя к разрыхлению связи C-Se и освобождению атома селена из молекулы соединения.
Атомы хлора в составе соединения 2 имеют отрицательный индуктивный эффект и, обладая неподе-ленной парой электронов, оказывают положительный мезомерный эффект, который по величине больше отрицательного индуктивного. Следовательно, атомы хлора в составе соединения 2 не вносят вклада в разрыхление связи C-Se [12]. Кроме того, галогены обладают окислительными свойствами, что обусловливает токсичность их соединений и, как следствие, более слабый антиоксидантный эффект по сравнению с соединением 1.
Во-вторых, есть версия, что атом селена в составе исследованных препаратов способен нейтрализовать активные формы кислорода (АФК). В изученных соединениях 1 и 2 присутствует селен в степени окисления +2, что определяет восстановительную природу соединения и, следовательно, его активное участие в процессах неферментативного перекисного окисления биологических молекул. Подобный восстановительный центр присутствует в молекуле диалкилсульфи-дов, для которых в настоящее время доказана способность к эффективному разложению гидроперекисей липидов, что предотвращает образование высокореакционных алкоксильных (RO") и перекисных радикалов (R02-):
О
II
R-S-R + ROOH -s- R-S-R + ROH
диалкилсульфид органическая монотиооксид оксипроизводное
гидроперекись органической молекулы
Учитывая общность в строении диалкилсульфидов и селенсодержащих арилалифатических дикетонов, можно предположить сходный характер их химических свойств и, прежде всего, способности разлагать гидроперекиси. Кроме того, селен характеризуется меньшей величиной относительной электроотрицательности по сравнению с серой и, следовательно, более эффективен при восстановлении гидроперекисей [9].
Наконец, третий предположительный механизм действия селеноорганических соединений связан с их фенильными радикалами. Большей антиокси-дантной активностью обладает соединение 1, особенность которого - отсутствие боковых радикалов у фенильных заместителей (рисунок). Можно предположить, что фенильные радикалы в составе соединения 1 подвергались гидроксилированию при участии
Поступила в редакцию_
цитохрома Р450 в эндоплазматическом ретикуллуме (ЭПР) печени с образованием фенонильных групп, обладающих выраженной антиоксидантной активностью наравне с другими гидрофобными антиокси-дантами, такими как токоферол, филлохинон, убихи-нон и др. [13-15].
Литература
1. Гмошинский И.В., Мазо В.К. Селен в питании: краткий обзор // Medicina Altera. 1999. № 4. С. 18 - 22.
2. Древко Б.И., АнтиповВ.А., Жуков О.И., Фоменко Л.А., Маркова Л.И., Древко Р.И., Родионова Т.Н., Ефремов В.И., Харченко В.Г. Средство для лечения и профилактики болезней, вызываемых недостаточностью селена в организме сельскохозяйственных животных и птиц. Пат. № 2051681 РФ // Б.И. 1996. № 1.
3. Дубинина Е.Е., Сальникова Л.А., Ефимова Л.Ф. Активность и изоферментный спектр супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови человека // Лаб. дело. 1983. № 10. С. 30 - 33.
4. Медицинские лабораторные технологии : справочник в 2 т. Т. 2 / под ред. А.И. Карпищенко. СПб., 1999. С. 27 - 28.
5. Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот // Современные методы в биохимии / под ред. В.Н. Ореховича. М., 1977. С. 63 - 64.
6. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Там же. С. 66 - 68.
7. Гланц С. Медико-биологическая статистика / пер. с англ. Ю.А. Данилова; под ред. Н.Е. Бузикашвили, Д.В. Самойлова. М., 1998. 459 с.
8. Северин Е.С. Биохимия: учебник / под ред. Е.С. Северина. 2-е изд., испр. М., 2004. 784 с.
9. Кирова Ю.И. Антиоксидантное и антитоксическое действие новых селеноорганических соединений : дис. ... канд. биол. наук. Ростов н/Д, 2004. 186 с.
10. Бессонова Л.О., Верлан Н.В., Колесниченко Л.С. Роль системы глутатиона в антиоксидантной защите при соче-танной патологии гипоксического генеза // Сиб. мед. журн. 2008. № 6. С. 19 - 21.
11. Теселкин Ю.О. Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов : дис. ... д-ра биол. наук. М., 2003. 272 с.
12. Тюкавкина Н.А., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия : учебник для вузов. М., 2004. 544 с.
13. Burton G.M., Traber M.G. Vitamin E - antioxidant activity, biokinetics, and bioavailability // Rev. Nutr. 1990. Vol. 10. P. 357 - 382.
14. Зайцев В.Г., Островский О.В., Закревский В.И. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия // Эксперим. клин. фармакол. 2003. Т. 66, № 4. С. 66 -70.
15. Olson J.A. Carotenoids and vitamin A - An overview // Lipid-Soluble Antioxidants: Biochemistry and Clinical Applications. Basel, 1992. P. 178 - 192.
15 октября 2012 г.
