Способность опухолевых клеток к специфической дифференцировке как основа для иммуногистохимической диагностики опухолей человека

Райхлин Н. Т.; Петров С. В.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ EXPERIMENTAL ИССЛЕДОВАНИЯ INVESTIGATIONS

Н. Т. Райхлин, С. В. Петров

СПОСОБНОСТЬ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК К СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКЕ КАК ОСНОВА ДЛЯ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕЙ ЧЕЛОВЕКА

НИИ клинической отологии; кафедра патологической анатомии Казанского медицинского университета

Наиболее распространенным является представление, что опухолевые клетки на всех уровнях организации обладают атипией (морфологической, биохимической, иммунологической и др.), что они теряют способность к специфической дифференцировке и функции, подвергаются дедифференцировке, сохраняя только повышенную способность к пролиферации. Однако ряд крупнейших онкологов и патологоанатомов (М. Ф. Глазунов, Л. М. Шабад, И. В. Давыдовский, Н. А. Краевский) критически оценивали подобную точку зрения. В последние годы с помощью современных методов исследования, в первую очередь электронной микроскопии и иммуногистохимии, было установлено, что в опухолевых клетках в достаточно высокой степени сохраняются органо-, ткане- и цитоспецифические особенности исходного для данного новообразования источника развития [7—12, 15, 18, 19, 22]. Это проявляется в сходстве фенотипа опухолевых клеток и их нормальных аналогов: эпителиальные, мышечные, сосудистые и другие опухоли имеют соответствующие наборы ультраструктур-ных и иммуногистохимических признаков. По мнению Г. И. Абелева [1], сохранение тканевой дифференци-ровки в опухолях имеет место вопреки действию опухолевой прогрессии, лишающей опухоль всех признаков, не нужных ей для поддержания автономного существования. Опухолевая трансформация и (или) поддержание злокачественного фенотипа ткани используют механизмы, создающие тканевую дифференцировку [1].

Значительное число белков, выявляемых в опухолях с помощью иммуногистохимии (ИГХ), кодируется отдельными функциональными генами, экспрессия которых подчиняется определенным правилам. Например, экспрессия генов, кодирующих белки промежуточных филаментов (ПФ), имеет достаточно строгую ткане-специфичность (промоторы цитокератиновых генов активны в эпителиях, промотор гена виментина — в тканях,

N. T. Raichlin, S. V. Petrov

THE TUMOR CELL ABILITY OF SPECIFIC DIFFERENTIATION AS THE BASIS FOR IMMUNOHISTO CHEMICAL DIAGNOSIS OF HUMAN TUMORS

Research Institute of Clinical Oncology; Chair of Pathology Anatomy, Kazan Medical University

It is commonly recognized that tumor cells are atypical (morphologically, biochemically, immunologically etc.) at any stage of development, lose their ability of special differentiation and functioning, experience dedifferentiation and preserve increased proliferation potential. However, several leading oncologists and patho-anatomists (M. F. Glazunov, L. M. Shabad, I. V. Davydovsky, N. A. Krayevsky) doubted this concept of tumor cells. Over the last years it was discovered by modern methods of investigation such as electron microscopy and immunohistochemical assay that tumor cells preserve to a rather high extent their organ-, tissue- and cyto-specificity [7-12, 15, 18, 19, 22]. This property manifests itself by phenotypic similarity of tumor cells and their normal analogs: epithelial, muscular, vascular and other tumors do have relevant sets of ultrastructural and immunohistochemical characteristics. G. I. Abelev [1] believes that tumors preserve their tissue specificity in spite of tumor progression involving deprivation of all features not needed to maintain autonomous existence. The tumor transformation and/or maintenance of malignant tissue phenotype use mechanisms of tissue differentiation [1].

A considerable number of proteins discovered in tumors by immunohistochemical (IHC) methodology are encoded by individual functional genes whose expression obeys certain rules. For instance, expression of genes encoding intermediate filament (IF) proteins is tissue specific (cytokeratin gene promoters are active in epithelium, vimentin gene promoter is active in tissues of mesenchymal origin, desmin gene promoter is active in muscles etc.) [3, 16, 21].

These tumor cell phenotypic peculiarities made up the theoretical basis for practical application of electron microscopy and IF IHC in differential diagnosis of neoplasms of different origin [2-6, 9-12,17]. There are presently

происходящих из мезенхимы, промотор десминового гена — в мышцах и т. д.) [3, 16, 21].

Именно эти особенности фенотипа опухолевых клеток явились теоретическим обоснованием для практического использования электронной микроскопии и ИГХ ПФ в дифференциальной диагностике новообразований различного гистогенеза [2—6, 9—12, 17]. В настоящее время имеются многие десятки и даже сотни различных моно- и поликлональных антител, выявляющих экспрессию тех или иных белков, связанных с определенными органами, тканями, типами клеток, специфической функцией, пролиферативной активностью, внеклеточным матриксом и т. д.

Грамотная иммуногистохимическая диагностика требует большого комплекса специальных знаний в методическом и, особенно, в фактическом плане [7, 15, 18, 19, 21, 22].

Задачами настоящей работы были отбор и усовершенствование на основании собственного опыта и данных литературы наиболее рациональных схем иммуно-гистохимического анализа с целью дифференциальной гистогенетической диагностики опухолей человека.

Мы провели иммуногистохимическое исследование широкого ряда низкодифференцированных опухолей человека (рак, саркома, лимфома, меланома) с помощью панели из 40 поли- и моноклональных антител (ПКАТ, МКАТ) к различным ткане- и цитоспецифическим антигенам, опухолевым маркерам, белковым продуктам экспрессии клеточных онкогенов и антионкогенов, внеклеточному матриксу.

Из большого числа существующих в литературе вариантов иммуногистохимического исследования мы выбрали для I этапа модифицированные [13] схемы Taylor и соавт. [22] и 4 антитела, с помощью которых удается разделить новообразования по их тканевому происхождению, для чего использовались МКАТ к виментину (ВИМ), полицитокератинам (ЦКР), белку S100, общему лейкоцитарному антигену (OJIA). Использование этих 4 антител позволяет установить тканевое происхождение новообразований, когда на основании только гистологического исследования это сделать не удается. На последующих этапах, если необходимо, осуществляется дальнейшая детализация иммунофенотипа опухоли.

При положительной реакции только на цитокератины, как видно на схеме 1, представляется возможным разделить цитокератинпозитивные опухоли на переходноклеточный, плоскоклеточный рак и аденокарциному.

Если положительная реакция на цитокератины, характерные для плоского эпителия (ЦКРшюск), сочеталась с положительной реакцией на цитокератины, присущие однослойным (простым) эпителиям (ЦКР„рцс1), то могут быть переходноклеточный рак либо (изредка) некоторые протоковые аденокарциномы.

Если иммунофенотип опухоли был ЦКР+]|ЖХЖ, а ЦКРпрмл, то это плоскоклеточный рак либо кожи, либо ротоглотки, пищевода, гортани.

Если положительная реакция на широкий спектр цитокератинов сочетается с окрашиванием на ВИМ, то это могут быть мезотелиома либо синовиальная или эпителиоидная саркома, либо некоторые виды рака

several tens or hundreds of mono- and polyclonal antibodies detecting proteins associated with certain organs, tissues, cell types, specific functions, proliferative activity, extracellular matrix etc.

Correct histochemical diagnosis requires a large amount of specific methodological and factual knowledge [7, 15, 18, 19, 21, 22].

The purpose of this study was to select and modify on the basis of our own experience and published data the most rational immunohistochemical techniques to make differential histogenetic diagnosis of human tumors.

We performed immunohistochemical study of a large variety of poorly differentiated human tumors (carcinomas, sarcomas, lymphomas, melanomas) using a panel of 40 poly- and monoclonal antibodies (PAb, MAb) to different tissue- and cytospeciflc antigens, tumor markers, protein products of cell oncogene and antioncogene expression, extracellular matrix.

Of the large number of immunohistochemical methods described in the literature we selected modified [13] schemes of Taylor et al. [22] and 4 antibodies to differentiate neoplasms with respect to their tissue origin at the first stage, i. e. MAb to vimentin (VIM), poly-cytokeratins (CKR), protein SI00, common leukocyte antigen (CLA). These 4 antibodies allow neoplasm tissue origin to be established in failure of histological study alone. Further we carried out if necessary more detailed tumor immunophenotyping.

As seen in scheme I cytokeratin-positive tumors may be further divided into transitional-cell, squamous-cell carcinomas and adenocarcinomas.

Positive reaction to cytokeratins characteristic of squamous epithelium (CKRsquam) in combination with positive reaction to CKR typical for monolayer (simple) epithelium (CKRsimp|C) was indicative of squamous-cell carcinoma or (in rare cases) of some ductal adenocarcinomas.

The tumor phenotype CKR+squam and CKR sinipk. was evidence of either cutaneous or oropharyngeal, esophageal, laryngeal squamous-cell carcinoma.

Positivity for a broad spectrum of CKRs in combination with VIM staining is indicative of mesothelioma or synovial, epithelial sarcoma, or some renal, thyroid and other rare cancer types.

Simultaneous expression of CKRsimplc and CLA may be found in anaplastic large-cell lymphoma; the diagnosis is verified using antibody to CD30.

CKRsimp,c-positivity in combination with CKRsquam-negativity is characteristic of adenocarcinoma which is further tested using carcinoembryonic antigen (CEA).

Strong CEA-positivity suggests colonic, pancreatic, gastric, bile ductal cancer.

Weak CEA-positivity is found in breast, lung (squamous-cell, large-cell type), cervical, bladder carcinomas. CEA-negativity is encountered in prostatic adenocarcinoma, germinal embryonic neoplasms, yellow sac tumors, chorionepithelioma, thyroid, ovarian, renal, hepatic cancer, as well as in endocrine-cell cancers including small-cell lung carcinoma with endocrine cellular dif-

Схема 1 Scheme 1

Иммуногистохимический анализ цитокератинпозитивных опухолей (по Taylor и соавт. [22] с изменениями [13]) Immunohistochemical study of cytokeratin-positive tumors (after Taylor et al. [22] with modifications [13])

ЦКРМ

CKRM

ВИММ VI MM

(+)

ЦКРМ

CKRM

ВИМН VIMH

S100H

S100<->

ОЛАН

CLAH

I— (+)

Мезотелиома, синовиальная и эпителиоидная саркомы

Mesothelioma, synovial and epithelioid sarcoma

Опухоли почки, щитовидной железы Renal, thyroid tumors

ЦКРМплоск

CKRM

CKRM,

simple

CKRM

CKRH

simple

ЦКРНППоск CKRH m

CKRW.

simple

ОЛАМ

CLAM

ЦКРМ

CKRM

Переходноклеточный рак Transitional-cell carcinoma Ряд протоковых раков Some ductal cancers

Плоскоклеточный рак кожи, пищевода, ротоглотки -Cutaneous, esophageal, oropharyngeal squamouscell carcinoma

Аденокарциномы

Adenocarcinomas

РЭА

CEA

(+)

“I

(+) ---------

.(+++).

H

(-)

(-) ---------

Некоторые анапласти-ческие крупнокпеточ-ные лимфомы — Some anaplastic large-cell lymphomas

СД30М 'CD30M

Рак молочной железы Breast cancer

Рак легкого, шейки матки, мочевого пузыря / Cancer of the lung, cervix, bladder

Рак толстой кишки, поджелудочной железы, желудка, желчных протоков Colonic cancer, pancreatic, gastric, bile ductal cancer

Рак простаты / Prostatic cancer-

Герминогенные опухоли Germ-cell tumors

Эмбриональные опухоли Embryonal tumors

Опухоль желточного мешка Yellow-sac tumor

Хорионэпителиома Chorionepithelioma

Рак щитовидной железы Thyroid carcinoma

—І Лактальбумин I Lactalbumin

яичника / ovarian carcinoma-почки / renal carcinoma------

печени / hepatic carcinoma-

Мелкоклеточный рак легкого Small-cell lung carcinoma

Эндокринноклеточный рак Endocrine-cell carcinoma

Опухоли островков поджелудочной железы, медуллярный рак щитовидной железы, опухоли гипофиза и паращитовидной железы Pancreatic island tumors, medullar thyroid carcinoma, pituitary and parathyroid tumors

Кишечно-яичниковый опухолевый антиген (СОТА) Colon-ovary tumor antigen (СОТА)

Простатическая кислая фосфатаза (PAP), антиген, специфический для простаты (PSA)

Prostatic acid phosphatase (PAP), prostate-specific antigen (PSA)

Плацентарная щелочная фосфатазам Placental alkaline phosphatase^

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Антиген 2G4 (тиреоглобулин) Antigen 2G4 (thyroid globulin)

OC125

URO 9—10

а-Фетопротеин

а-Fetoprotein

'л

а-Фетопротеин

а-Fetoprotein

Хорионический гонадотропин Chorionic gonadotropin

Нейронспецифическая энолаза, хромогранин, синаптофизин, специфические гормоны Neuron-specific enolase, chromogranin, synaptophysin, specific hormones

Experimental Investigations

почки, щитовидной железы и другие редкие виды раковых опухолей.

Одновременная коэкспрессия ЦКРпро(Л и OJIA иногда имеется при анапластической крупноклеточной лимфо-ме; диагноз последней уточняется с помощью антител к CD30.

Если положительная реакция на ЦКР1ф0(Л. сочетается с негативной окраской на ЦКРплоск, то эта опухоль является аденокарциномой, которая в дальнейшем тестируется с помощью раково-эмбрионального антигена (РЭА).

В случаях ярко положительной реакции на РЭА необходимо думать о раке толстой кишки, поджелудочной железы, желудка, желчных протоков.

Слабая реакция на РЭА встречается при раке молочной железы, легкого (плоскоклеточном, крупноклеточном варианте), шейки матки, мочевого пузыря. Отрицательная реакция на РЭА наблюдается в клетках аденокарциномы простаты, герминогенных эмбриональных новообразованиях, в хорионэпителиоме, опухолях желточного мешка, щитовидной железы, яичника, почки, печени, а также в эндокринноклеточных раковых опухолях, в том числе в мелкоклеточном раке легкого с эндокринноклеточной дифференцировкой, в апудомах различной локализации (поджелудочная, щитовидная железы и др.).

Дальнейшая диагностика с целью определения органной локализации недифференцированных опухолей, имеющих иммунофенотип РЭА+ или РЭА , проводится с помощью органоспецифических маркеров. Например, при раке молочной железы это лактальбумин, толстой кишки — СОТА (кишечно-яичниковый опухолевый антиген). Рак простаты выявляет специфическим антигеном простаты (PSA) и кислой фосфатазой (РАР) [14]. При раке щитовидной железы обнаруживается опухолевый тиреоглобулин (антиген 2G4), раке яичника — ОС125, почки — URO 9—10, в клетках печеночноклеточного рака — а-фетопротеин. Эндокринноклеточный рак легкого, островковой части поджелудочной железы, щитовидной железы (медуллярный рак), передней доли гипофиза, паращиговидной железы экспрессирует нейронспе-цифическую энолазу (NSE), хромогранин, синаптофизин и соответствующие специфические гормоны [4, 17].

Следующую группу недифференцированных новообразований составляют опухоли, дающие положительную окраску на ВИМ и отрицательную на OJIA, ЦКР и S100 (схема 2).

Этими опухолями могут быть: лимфомы (их идентификация приводится ниже), миогенные саркомы (позитивная реакция на гладкомышечный актин, десмин, миоглобин), ангиосаркомы (реагируют с антителами к фактору VIII свертывания крови), злокачественные фиброзные гистиоцитомы (ЗФГ; экспрессируют а-1-анги-трипсин, CD68, лизоцим, иногда белок S100), фибро-саркомы (реагируют только с ВИМ). Сюда же относятся плеоморфная липосаркома, хондросаркома, некоторые шванномы, экспрессирующие, кроме ВИМ, в ряде случаев белок S100. Следует подчеркнуть, что лейо- и раб-домиосаркомы можно выявлять раздельно: антитела к гладкомышечному актину окрашивают клетки лейоми-

ferentiation, in apudomas of different sites (pancreas, thyroid etc.).

Further diagnosis to determine sites of non-differ-entiated tumors with a phenotype CEA<+> or CEA( > is carried out using organ-specific markers such as lac-talbumin for breast cancer, COTA (colon-ovary tumor antigen). Prostatic cancer is identified using prostate specific antigen (PSA) and acid phosphatase (PAP) [14]. Thyroid cancer expresses tumor thyroid globulin (antigen 2G4), ovarian carcinoma expresses OC125, URO 9-10 is specific for renal cancer, and a-fetoprotein is characteristic of hepatocellular carcinoma. Endocrine cellular carcinoma of lungs, pancreatic island, thyroid (medullar carcinoma), pituitary front lobe, parathyroid gland expresses neuron-specific enolase (NSE), chromogranin, synaptophysin and relevant specific hormones [4, 17].

The following group of non-differentiated tumors are VIM- positive and CLA-, CKR- and SI 00-negative neoplasms (scheme 2).

These are lymphomas (their identification is considered below), myogenic sarcomas (positive staining for muscular actin, desmin, myoglobin), angiosarcomas (react to antibody to clotting factor VIII), malignant fibrous histiocytomas (MFH) (express a-1-antitrypsin, CD68, lysocim, sometimes SI00), fibrosarcomas (react only to VIM). The same group includes pleomorphous liposar-coma, chondrosarcoma, some schwannomas that may express SI00 besides VIM. It should be noted that leio-and rhabdomyosarcomas may be differentiated using antibody to smooth muscular actin that stains leiomyosarcoma and antibody to myosin recognizing rhabdomyosarcoma cells. Soft-tissue alveolar sarcoma is VIM-positive and desmin-positive.

VIM and SI00 can also be found in melanoma, its specific marker being antigen HMB-45. The protein S100 is not specific for melanoma and may be encountered in other tumors (liposarcoma, chondrosarcoma, schwannoma, neurofibroma, salivary gland and breast neoplasms, etc.). Antibody to HMB-45 is more specific though less sensitive for melanoma as compared to SI00. Therefore it is practically reasonable to use these markers together. SI00 staining of pigmentless melanoma is more marked as compared to pigment tumors.

Lymphoma diagnosis may be performed by scheme 3. Antigen CD45 (CLA) is a common lymphoma marker. Some lymphomas may be CLA-negative while a number of non-lymphomas may be CLA-positive. Therefore an additional staining for T- and B-markers should be made for CLA-positive tumors. Hodgkin’s lymphoma cells express CD 15, CD30, BLA36 and show negative reactivity with CD45.

Thus, the schemes of immunohistochemical analysis together with a minimal set of 4 antibodies (to CKR, VIM, CLA, S100) allow the number of possible histological types to be established or limited with tumor histology and clinical findings being mandatory taken into consideration. This is the first stage of immunohistochemical diagnosis. Further a more detailed differentiation of tissular or cellular tumor origin may be performed if necessary on the basis of stage I findings

Схема 2 Scheme 2

Иммуногистохимический анализ виментинпозитивных опухолей (по Taylor и соавт. [22] с изменениями [13]) Immunohistochemical study of vimentin-positive tumors (after Taylor et al. [22] with modifications [13])

ОЛА<-> / CLA<-> ЦКРН / CKRH

bhm<+)/vim(+)

S100(->/S100(")

BHM<+>/VIM<+> ОЛА<+> / CLA<+>

Десмин<+)

Desmin(+)

Актин<+>

Actin<+>

Фактор VII|(+) Factor Vlll<+)

S100<+>

BHMW/VIMW

Возможно, лимфома Lymphoma possible

Мышечная / Muscular ■

Миоглобин<+)

Myoglobin^

Гладкомышечный актин<+> Smooth muscular actin(+>

Рабдомиосаркома

Rhabdomyosarcoma

Лейомиосаркома “ Leiomyosarcoma

a-1 -Антитрипсин(+) a-1-Antitrypsin<+>

CD68<+) / CD68<+>

Лизоцим^

Lysocim<+)

только ВИМ<+) I VIM alone<+) I

S100(+/-)/S100<+/-) -----

. Ангиосаркома / Angiosarcoma

Злокачественная фиброзная гистиоцитома Malignant fibrous histiocytoma

Фибросаркома, липо-, хондросаркомы, шваннома Fibrosarcoma, lipo-, chondrosarcoma, schwannoma

Возможно, меланома Melanoma possible

осаркомы, а антитела к миозину выявляют клетки раб-домиоеаркомы. Альвеолярная саркома мягких тканей окрашивается на ВИМ и десмин.

ВИМ и Б100 выявляются также в меланомах, специфичным маркером которых является антиген НМВ-45. Белок Б100 для меланомы неспецифичен и может встречаться в ряде других опухолей (липосаркомах, хондросаркомах, шванномах, нейрофибромах, в новообразованиях слюнных, молочных желез и др.). По отношению к клеткам меланомы антитела к НМВ-45 (по сравнению с Б100) являются более специфичными, но менее чувствительными. Поэтому в практической работе рекомендуется использовать сочетание этих маркеров. Окрашивание на 8100 беспигментной меланомы более яркое, чем пигментированных опухолей.

Диагностика лимфом может проводиться по схеме 3. Общим маркером для лимфом является антиген СЭ45 (ОЛА). Некоторые лимфомы могут быть негативны на ОЛА, а ряд опухолей, не относящихся к лимфомам, может давать положительную окраску на этот маркер. Поэтому при положительной реакции на ОЛА необходимо дополнительно окрасить опухоль на Т- и В-маркеры. Опухолевые клетки при лимфогранулематозе характеризуются специфической для этой болезни экспрессией СВ 15, СО30, ВЬАЗб и отрицательной реакцией на СБ45.

Таким образом, приведенные схемы иммуногистохимического анализа дают возможность при минимальном наборе из четырех антител (к ЦКР, ВИМ, ОЛА, белку 8100) и с обязательным учетом гистологического

and using a rather narrow range of antibodies (to desmin, smooth muscular actin, myoglobin, a-1-antitrypsin, CKR8, CKR18, CKR10, CKR14, CD30, CD20, CD3, CD4, CD8, CD68 at stage II; to lactalbumin. COTA, PSA, thyroid globulin, a-fetoprotein, chromogranin, neuron-specific enolase, synaptophysin, CD43, CD74, CD75, BLA36, URO 9-10, OC125 at stage III). One or two, rarely three antibody types are usually enough. The recommended system of gradual immunohistochemical study saves times, labor and reagents. It renders immunological study systematically organized, is rational and scientifically grounded.

We should like to present some general considerations in conclusion. Negative or positive reactivity with all 4 antibodies at stage I should be considered an artifact and the study should be remade. To avoid technical errors one should remember that the product of antibody reactions should have the following locations: cytolemma in reactions with CLA, cytoplasm for CKR and VIM, the nucleus for progesterone and estrogen receptors. There is no standard location for S100, e.g. melanoma cells may demonstrates reactivity in cytoplasm while endocrine-cell carcinoma may be reactive in nuclei.

The IHC allows rather reliable identification of small microinvasion foci and metastases. For instance, broad-range antibodies to CKR easily recognize small groups or single cancer cells in lymph nodes.

Any methodology has its own advantages and limitations, and the IHC study is no exception. The following problems specific for tumor growth may be encountered:

Схема 3 Scheme 3

Иммуногистохимический анализ лимфом (по Taylor и соавт. [22] с изменениями [13]) Lymphoma immunohistochemical study (after Taylor et al. [22] with modifications [13])

ОЛАО

CLAM

ЦКР<->

CKRH

ВИМ<+> VI MW

S100H

CD30'

(+)

BLA36 •

H

(+)

CD20 ■

(+)

CD43 ■

CD68

Некоторые анапластические крупноклеточные лимфомы —

Some anaplastic large-cell lymphomas

Ряд В- и Т-иммунобластных лимфом Some В- and T-immunoblastic lymphomas

Некоторые гистиоцитарные лимфомы Some histiocytic lymphomaslysocim

Анапластические крупноклеточные лимфомы Anaplastic large-cell lymphomas

Некоторые В- и Т-лимфомы Some В- and T-cell lymphomas

Лимфогранулематоз (большинство вариантов) Hodgkin’s lymphoma (most types)

Лимфогранулематоз (вариант с вытеснением лимфоидной ткани)

Hodgkin’s lymphoma (lymphoid tissue displacement)

Лимфогранулематоз (все формы)

Hodgkin’s lymphoma - all types

Крупноклеточные В-лимфомы Large-cell B-lymphomas

Лимфогранулематоз (вариант с вытеснением лимфоидной ткани)

Hodgkin’s lymphoma (lymphoid tissue displacement)

В-клеточные лимфомы В-cell lymphomas

Т-лимфомы T-cell lymphomas

Гистиоцитарные лимфомы Histiocytic lymphomaslysocim

Злокачественный гистиоцитоз Malignant histiocytosis

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

CD30<+>

CD20M, CD43<+>

Лизоцим<+>

Lysocim<+>

а-1-Антитрипсин(+)

a-1-Antitrypsin<+>

CD74M

CD75M

Лизоцим<+>

Lysocim<+>

а-1-Антитрипсин<+>

a-1-Antitrypsini+>

Экспериментальные исследования

строения опухоли и клинических данных установить или ограничить число вероятных вариантов гистоге-нетической принадлежности данного новообразования. Это I этап иммуногистохимического диагностического исследования. Далее, если требуется, на последующих этапах можно провести детализацию тканевого или чаще уже клеточного происхождения опухоли, используя с учетом данных I этапа достаточно узкий набор антител (на II этапе можно использовать антитела к десмину, гладкомышечному актину, миоглобину, а-1-антитрипсину, ЦКР8, ЦКР18, ЦКР10, ЦКР14, CD30, CD20, CD3, CD4, CD8, CD68; на III этапе применяют антитела к лактальбумину, COTA, PSA, тиреоглобу-лину, а-фетопротеину, хромогранину, нейронспецифи-ческой энолазе, синаптофизину, CD43, CD74, CD75, BLA36, URO 9—10, ОС125). Обычно для этого достаточно 1—2, реже 3 типов антител. Рекомендованная система последовательных этапов иммуногистохимического исследования экономит время, труд, реактивы. Она вносит определенную последовательность в иммуногис-тохимическое исследование, рациональна и научно обоснована.

В заключение следует сделать несколько общих замечаний.

Отрицательную или положительную реакцию на I этапе всех четырех антител следует считать артефактом, и исследование переделать. Во избежание ошибок в связи с техническими погрешностями следует также помнить, что продукт реакции при применении антител к OJIA должен локализоваться на цитолемме, к ЦКР и ВИМ — в цитоплазме, рецепторы эстрогенов и прогестерона — в ядрах. Для белка S100 стандартной локализации нет. Так, клетки меланомы могут давать цитоплазматическую реакцию, а эндокринноклеточного рака — ядерную.

ИГХ позволяет достаточно надежно идентифицировать мелкие очаги микроинвазии и метастазы. Например, антитела к цитокератинам широкого спектра легко выявляют небольшие группы или единичные раковые клетки в лимфоузлах.

Любой метод имеет свои возможности и ограничения, ИГХ в этом плане не исключение. К трудностям, специфическим для опухолевого роста, мы отнесли: 1) ко-экспрессию маркерных белков, что дает «смешанный иммунофенотип опухоли (например, ЦКР+, ВИМ+, ней-рофиламенты+, десмин+ в группе PNET); 2) низкий уровень экспрессии (или его снижение) маркерных белков при прогрессии новообразавания; 3) посттрансляцион-ную модификацию и/или блокирование синтеза маркерных полипептидов на разных этапах роста опухоли; 4) отсутствие для многих мягкотканных опухолей специфических маркеров (фибро-, ли по-, хондросаркомы, гемангиоперицитома и др.); 5) смешанный клеточный состав (В-лимфосаркомы с выраженной инфильтрацией Т-лимфоцитами и/или гистиоцитами; лимфома Леннер-та и др.); 6) изменение спектра выявляемых маркеров при лечебном патоморфозе (например, повреждение цитоскелета раковых клеток после облучения вызывает негативную реакцию на цитокератины при сохранении окраски на ЭМА). Ограничения методического характера включают в себя:

1) coexpression of marker proteins resulting in a “mixed” tumor immunophenotype (e. g. CKR+, VIM+, neuro-filament+, desmin+ in PNET tumors); 2) low (or decreasing) expression of marker proteins in tumor progression; 3) posttranslation modification and/or block of marker polypeptide synthesis at different tumor growth stages; 4) the absence of specific markers for many soft-tissue tumors (fibro-, lipo-, chondrosarcomas, hemangiopericytoma etc.); 5) mixed cellularity (B-lym-phosarcoma with marked infiltration of T-lymphocytes and/or histiocytes; Lennerth lymphoma, etc.); 6) alteration in the marker spectrum due to therapeutic patho-morphosis (e.g. damage of cancer cell skeleton after irradiation leads to negative reactivity to CKR, the positive reactivity to EMA being preserved).

Methodological limitations include:

1) antigen determinant masking due to:

- long-term fixation,

- paraffin embedding,

- long-term storage of archive blocks;

2) cross-reactivity of some MAb with cell types not related to immunogens;

3) reactivity of many MAb with relevant epitopes in cryostat sections only.

We should like to emphasize the necessity of simultaneous application of IHC and electron microscopy [18]. Each methodology may play an independent role, but as they have different strengths and weaknesses, they may supplement each other and thus enlarge the diagnostic potential. Many diagnostic problems may be solved by the use of the two methods in combination.

1) маскировку антигенных детерминант из-за:

— длительной фиксации,

— процедуры заливки в парафин,

— длительного хранения архивных блоков;

2) перекрестное реагирование некоторых МКАТ с клеточными типами, не связанными с иммуногеном;

3) реагирование многих МКАТ с соответствующими эпитопами только на криостатных срезах.

В связи со сказанным особенно подчеркнем целесообразность и перспективность одновременного использования ИГХ и электронной микроскопии [18]. Каждый из этих методов может играть самостоятельную роль, но, имея разные сильные и слабые стороны, они так дополняют друг друга, что значительно расширяют и углубляют диагностические возможности. Многие диагностические проблемы могут быть решены только при использовании обоих методов.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Абелев Г. И. II Съезд онкологов стран СНГ, 1-й. — М., 1996. — Ч. 1, —С. 197.

2. Белоус Т. А., Литвинова JI. В., Франк Г. А. II Арх. пат. — 1994. — № 1, — С. 46—50.

3. Гельштейн В. П., Чипышева Т. А., Ермилова В. Д. и др.//Там же.— 1990.— С. 12—18.

4. Казанцева И. А., Калинин А. П., Полякова Г. А. я др. //Там же. — 1995. — № 3. — С. 31—35.

5. Краевский Н. А., Смояьяппиков А. В., Саркисов Д. С. (ред.) //Па-тологоанатомичсская диагностика опухолей чсвовска. Руководство для врачей. 4-е изд. — М., 1993. —Т. 1.

6. Петров С. В., Райхлин Н. Т., Серре Г., Смедтс Ф. II Арх. пат. —

1995. — № 5.—С. 47—53.

7. Петров С. В., Райхлин Н. Т., Серре Г., Смедтс Ф. II Там же. —

1996. — № 2.— С. 13—21.

8. Райхлин Н. Т., Денисов В. Н. II Вопр. онкол. — 1973. —№ 19. — С. 3—10.

9. Райхлин Н. Т. II Вести. АМН СССР. — 1974. — № 7. — С. 23—27.

10. Райхлин Н. Т., Давид Г., Лапиш К. (ред.)//Ультраструктура опухолей человека. Руководство для диагностики. — М., 1981.

11. Райхлин Н. Т. II Вопр. онкол. — 1984. — №. 30.—С. 114—119.

12. Райхлин Н. Т. II Общая патология человека. Руководство. 2-е изд. /Под ред. А. И. Струкова, В. В. Серова, Д. С. Саркисова. — М., 1990.—Т. 2.— С. 327—335.

13. Райхлин Н. Т., Петров С. В. //Актуальные проблемы онкоморфологии. Сборник научных трудов к 100-лстию со дня рождения проф. М. Ф. Глазунова /Под ред. Н. М. Аничкова, А. Е. Колосова. — Санкт-Петербург; Киров. — 1996.—С. 100—109.

Н. И. Шеренешева, В. Е. Финько, Ф. Ф. Бланко,

Т. А. Алиева, Е. Н. Бедрина, И. А. Гоголева,

Т. И. Клочкова

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЦИННАБАРИНА НА КАНЦЕРОГЕНЕЗ У КРЫС, ИНДУЦИРОВАННЫЙ 3-(1-а-Ь-АРАБИН0ПИРАН03ИЛ)-1-МЕТИЛ-1-НИТРОЗОМОЧЕВИНОЙ

НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей

Среди высокомолекулярных соединений, ОТНОСЯЩИХСЯ к группе полисахаридов, найдены вещества, обладающие выраженной противоопухолевой активностью в сочетании с иммуномодулирующим действием на Т-лимфоцитарную фракцию крови, например известный противоопухолевый препарат лентитан [1, 2,

4]. В литературе [7, 8], посвященной химиотерапии рака, имеются указания на противоопухолевую активность полисахаридов, выделенных из высших растений, грибов, лишайников, бактерий, дрожжей. Известно, что полисахариды, выделенные из природных источников, часто оказывают антиметастатическое и антиканцерогенное действие [2]. Показана выраженная противоопухолевая активность в сочетании с иммуномодулирующим действием на экспериментальных опухолях мышей полисахарида циннабарина, выделенного из культуры клеток базидального гриба Ркпорогт стпаЬагтш [3]. Все вышеизложенное явилось основанием для изучения особенностей канцерогенного действия 3-(1 -а-Ь-арабинопиранозил)-1 -метил-1 -нитрозомочевины (АМНМ), отечественного противоопухолевого препарата, у крыс в условиях продолжительного введения циннабарина.

Материалы и методы. Химические вещества: циннабарин — полисахарид, выделенный из культуральной смсси, полученной в результате ферментации гриба Р!спорогш стпаЬагтих. АМНМ — отсчсст-

14. Романенко А. М., Воробьева Л. P. II Арх. пат.— 1995.— № 4. —С. 38-42.

15. Смирнов А. В., Соколова И. H. II Там же. — № 5. — С. 14—21.

16. Трояновский С. М., Банников Г. М. II Промежуточные фила-менты в норме и патологии /ИНТ ВИНИТИ. Сер. «Общие проблемы физико-химической биологии». — М., 1989.

17. Франк Г. А., Казесалу Я. С.-В., Пийрсоо А. О. и др.//Арх. пат. — 1992. — № 3. — С. 12—16.

18. Azar И. //Pathology of human neoplasms. An alias of diagnostic electron microscopy. — New York, 1988.

19. De Lellis R. A. II Diagnostic immunohistochemistry. — New York, 1988.

20. Fischer-Wasels В. II Allgemeine Gcschulstlchrc. — Hdb. Norm. Pathol. Physiol., Bethe. — 14/2. — Berlin, 1927.

21. Ramaekers F., Smedis F. Vooijs G. P. II Current Pcrsp. in Molecular and Cellular Oncology /Ed. D. Spandidos. — London, 1992.— P. 285—318.

22. Taylor C. R., Cote R. J. (Eds) II Immunomicroscopy: a diagnostic tool for the surgical pathologist. — 2-nd Ed. — Philadclhia, 1994.

Поступила 09.06.97 / Submitted 09.06.97

N. I. Sherenesheva, V. E. Finko, F. F. Blanko,

T. A. Aliyeva, E. N. Bedrina, I. A. Gogoleva,

T. I. Klochkova

STUDY OF CINNABARIN EFFECT ON 3-(l-a-L-ARABINOPYRANOSYL)-l-METHYL-l NITROSOUREA-INDUCED CARCINOGENESIS IN RATS

Research Inslilute of Experimental Diagnosis and Therapy of Tumors

Many polysaccharides demonstrate marked antitumor and T-lymphocyte immunomodulation activities, e. g. a well-known antitumor agent lentinan [1, 2, 4]. Publications on cancer chemotherapy [7, 8] report of antitumor activity of polysaccharides extracted from plants, fungi, lichens, bacteria, yeast. Natural polysaccharides are known to produce antimetastatic and an-ticarcinogenic effects [2]. Experiments on mice demonstrated antitumor and immunomodulating activities of a polysaccharide cinnabarin extracted from fungus Picnporus cinnabarinus [3]. We studied carcinogenic effects of domestic antitumor drug 3-(l-a-L-arabinopyra-nosyl)-l-methyl-1 nitrosourea (AMNU) as administered against the background of cinnabarin chronic administration to rats.

Materials and Methods. Chemical substances: polysaccharide cinnabarin extracted from culture medium resulting from Picnporus cinnabarinus fermentation. AMNU, a domestic antitumor drug synthesized at the N.N.Blokhin CRC RAMS.

Animals: white mongrel female rats of CRC RAMS breed with a baseline body weight 180-200 g were kept in plastic cages 5 animals each and led by a standard diet. 65 rats were divided into 4 groups. Groups 1 and 2 (20 females caeh) received AMNU once intravenously at 250 mg/kg body weight. Groups 2 (20) and 3(15) received cinnabarin at 50 mg/kg body weight with feed. Group 4 (10) were intact control. Cinnabarin treatment was started at 1 month before AMNU and continued for 2 months. Body weight measurement was performed

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Райхлин Н. Т., Петров С. В.