CC BY
22
УДК: 611-018.8 В.И.Кириченко
СПОСОБ ОКРАСКИ НЕРВНЫХ СТРУКТУР НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ
РЕЗЮМЕ
Разработан высокоселективный метод выявления нервных структур в органах дыхательной системы,основанный на использовании комплексной соли ионов Mn 2+' Способ позволяет получить четкую картину распределения нервных волокон и сенсорных приборов во всех тканевых компонентах легких'
SUMMARY V.I' Kirichenko
NERVE STRUCTURE DYING TECHNIQUE ON MICROSCOPIC SECTIONS
Highly selective method for showing nerve structures in respiratory system organs, based on complex Mn2+ ion application was developed. The method allows to show nerve fiber and sensor apparatus distribution in all lung tissue elements
Изобретение относится к медицине, а именно к нейрогистологии [1]. Целью изобретения является увеличение количества выявляемых нервных структур в органах, улучшение их контраста и повышение точности локализации. Способ осуществляют следующим образом. В кровоток органа, например легких, перфузируют раствор, содержащий 5% глюкозу, до полного освобождения сосудов от крови. Далее в те же сосуды перфузируют раствор, содержащий сернокислый марганец и цистеин. Температура раствора 10-15 °С и pH 5,5-5,7.
Орган извлекают и помещают в емкость с той же жидкостью на 15-20 минут. Затем в артерии органа вводят 0,5-1,0%-ный раствор ферроцианида калия. Дополнительно орган помещают в тот же состав на 15-20 минут, после чего его фиксируют в 10%-ном растворе формалина.
Срезы толщиной 20-40 мкм готовят на замораживающем микротоме, последовательно проводят через
0,1-0,2% раствор азотнокислого серебра и 0,3-0,6% раствор сульфида натрия. Возможна докраска препаратов любыми гистологическими красителями.
Пример. Легкое через сосуды перфузирует 5% раствором глюкозы. Сосуды промывают до выхода светлого раствора. Далее вводят раствор, содержащий сернокислый марганец и цистеин при следующих соотношениях компонентов, мас. %: сернокислый марганец - 6,0-6,3; цистеин - 1,1-1,6; вода - остальное. pH этого раствора составляет 5,5-5,7, а температура 10-15 °С
Затем перевязывают трахею, извлекают легкие из грудной клетки и помещают в раствор того же состава на 15-20 мин. Далее в сосуды вводят 0,51,0% раствор ферроцианида калия и легкие дополнительно выдерживают 15-20 минут в этой же жидкости. Наконец, орган фиксируют в 10% формалине путем введения фиксатора в сосуды и дальнейшего погружения легких в фиксирующую жидкость. Срезы толщиной 20-40 мкм приготавливают на замораживающем микротоме и после тщательной промывки в дистиллированной воде последовательно проводят через 0,1-0,2% раствор азотнокислого серебра, дистиллированную воду, 0,3-0,6% раствор сульфита натрия.
Срезы докрашивают гематоксилином-эозином и исследуют под микроскопом. На срезах хорошо видна структура нервных волокон и их окончаний, а при докраске хорошо контурируют клеточные структуры (рис.).
Способ позволяет увеличить контраст нервных структур, получить более полную картину иннервации, что ценно, поскольку в органах, как правило, трудно полностью выявить все отделы периферической нервной системы. При импрегнации предложенным способом хорошо выражена плотность нервных проводников на единицу площади, а также повышена точность их локализации, что весьма существенно при оценке и анализе нервных структур в органе. Метод предназначен для разработки проблем нейроморфологии, а также для выяснения нейрогенных механизмов патогенеза заболеваний человека.
Формула изобретения
Способ окраски нервных структур на гистологическом препарате путем импрегнации в растворе,
б5
Рис. Афферентная формация с большим рецептивным полем в висцеральной плевре крысы. МФ-метод, Об. 90 нмм., ок. 7. Микрофото.
содержащем сернокислый марганец, осаждение марганца ферроцианидом калия и преобразования осадка азотнокислым серебром и сульфидом натрия, отличающийся тем, что с целью улучшения контраста нервных волокон в органах импрегнацию проводят при 10-15 °С и pH 5,5-5,7 раствором, дополнительно содержащим цистеин при следующих соотношениях компонентов, мас. %:
сернокислый марганец - 6,0-6,3; цистеин - 1,1-1,6; вода - остальное.
При этом осаждение производят 0,5-1,0% раствором ферроцианида калия, а преобразование осадка 0,1-0,2% раствором азотнокислого серебра и 0,3-0,6% раствором сульфида натрия.
ЛИТЕРАТУРА
1.А.с. 1675726, РФ, Способ окраски нервных структур на гистологическом препарате/В.И. Кири-ченко//Бюл .-1998.-№4.
□ □ □
