CC BY
17
УДК: 578.086 В.И.Кириченко, В.А.Доровских, Е.Ф.Кириченко СПОСОБ ОКРАСКИ АМИНАЗИНА НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ
РЕЗЮМЕ
Предложен новый, не имеющий аналогов в мировой практике, метод гистологической идентификации аминазина на клеточном уровне, основанный на использовании феррицианида калия в качестве ловушки электронов с последующим осаждением образовавшихся ферроцианид-ионов катионами Cu 2+' Способ может быть использован в судебно-медицинской экспертизе для диагностики отравлений аминазином.
SUMMARY V.I. Kirichenko, V.A. Dorovskih, E.F. Kirichenko
AMINOSINE DYING TECHNIQUE ON MICROSCOPIC SECTIONS
Unique aminosine identification method at cellular level based on potassium ferrocyanide application to trap electrons resulting in newly formed ferrocyanide ion precipitation by Cu2+cations. The technique can be used in forensic medicine to diagnose aminosine poisoning.
Изобретение относится к медицине и предназначено для исследования внутриклеточной локализации аминазина [1]. Известны способы биохимического определения аминазина [2, 3]. Однако они не позволяют идентифицировать аминазин на клеточном уровне.
Целью изобретения является визуализация внутриклеточной локализации аминазина в различных органах и тканях. Эта цель достигается обработкой срезов, фиксированных в 10%-ом формалине органов животных, предварительно получавших аминазин, в среде с феррицианидом калия, в качестве акцептора электронов и катионами меди как осаждающего агента. При этом ацетат и цитрат натрия используют для стабилизации раствора. Образовавшийся ферроцианид-ион осаждается катионами меди в виде кирпично-красного ферроцианида меди. При последовательной дальнейшей проводке срезов через 0,3-1%-ый раствор сернистого натрия и 0,05-1%-ный раствор азотнокислого серебра образуется малорастворимый сульфид серебра черного цвета. Возможна докраска препаратов любыми гистологическими красителями.
Пример. Подопытным крысам внутрибрюшинно вводят аминазин из расчета 25-75 мг на 1 кг веса. Контрольным животным инъецируют физиологиче-
ский раствор. Через 0,5-1,5 часа животных забивают декапитацией, извлекают органы и помещают для фиксации на 24 часа в 10%-ный формалин.
На замораживающем микротоме готовят срезы толщиной 20-30 мкм, и помещают на 1-1,5 часа в охлажденный до 4°С раствор с pH 7,3 -7,5, содержащий ацетат натрия, цитрат натрия, сульфат меди и феррицианид калия при следующих соотношениях компонентов, мас. %: ацетат натрия - 1,1-1,6; цитрат натрия- 0,17-0,18; сульфат меди- 0,07-0,10; феррицианид калия - 0,01-0,02; вода - остальное.
После инкубации следует промывка срезов в 4-х сменах дистиллированной воды в течение 20-30 минут.
Для усиления контраста осадка ферроцианида меди срезы обрабатывают 0,5-1 минуту в 0,3-1%-ном растворе сульфида натрия, промывают в дистиллированной воде и помещают в 0,1-0,2%-ный раствор азотнокислого серебра. Срезы докрашивают гематоксилином-эозином и исследуют под микроскопом.
Гранулярный осадок сульфида серебра черного цвета маркирует места внутриклеточной локализации аминазина в органах, например, в нейронах ретикулярной формации (рис. 1) и в клетках коры надпочечника (рис. 2).
Срезы органов контрольных животных, обработанные способом, указанным выше, остаются неокрашенными.
Предлагаемый способ позволяет визуально исследовать в тканях организма накопление и метаболизм аминазина на клеточном уровне, а также может быть использован в судебно-медицинской экспертизе для идентификации аминазина, при отравлении последним.
Формула изобретения
Способ окраски аминазина на гистологическом препарате путем импрегнации в растворе, содержащем сульфат меди, феррицианид калия, преобразование осадка сульфидом натрия и азотнокислым серебром, отличающийся тем, что с целью внутриклеточного выявления аминазина, а также повышения точности и контрастности его локализации, импрегнацию проводят при 4°С в течение 1-1,5 ч и pH 7,37,5 раствором, дополнительно содержащим ацетат и
Рис. 1. Локализация продукта гистохимической реакции на аминазин в форме гранул в соме и аксоне муль-типолярной нервной клетки ретикулярной формации продолговатого мозга крысы. Феррицианид-ный метод. Об. 90 нмм., ок. 10. Микрофото.
Рис. 2. Внутриклеточное распределение гранулярного осадка сульфида серебра, маркирующего аминазин, в корковом веществе надпочечника крысы. Феррицианидный метод. Об. 90 нмм., ок.10. Микрофото.
цитрат натрия при следующих соотношениях компонентов, мас. %:
ацетат натрия 1,1-1,6; цитрат натрия 0,17-0,18; сульфат меди 0,07-0,10; феррицианид калия 0,01-0,02; вода остальное.
При этом преобразование осадка ферроцианида меди производят 0,3-1%-ным раствором сульфида натрия и 0,1-0,2%-ным раствором азотнокислого серебра.
ЛИТЕРАТУРА
1. Пат.2093813, РФ, Способ окраски аминазина на гистологическом препарате /В.И.Кириченко, В .А. Доровских, Е. Ф.Кириченко//Бюл.-1997.-№29.
2. Швайкова М.Д. Судебная химия.- М.: 1965.290 с.
3. Об определении аминазина при химикотоксикологическом исследовании биологического материала: Методическое письмо. - М., 1971.
□ □ □
