CC BY
12
СОЗДАНИЕ ОПЫТНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК КАК СПОСОБ УЛУЧШЕНИЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВГС Нурузова З.А.1, Ганиева Р.Р.2 Email: Nuruzova6101@scientifictext.ru
1Нурузова Зухра Абдукадировна - доктор медицинских наук, профессор;
2Ганиева Рената Ринатовна - магистрант, кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии, Ташкентская медицинская академия, г. Ташкент, Республика Узбекистан
Аннотация: при диагностике гепатитов ведущими направлениями лабораторной службы являются: разработка и выбор наиболее информативных методов выявления маркеров инфицирования, определение критериев объективной оценки полученных результатов, разработка оптимальных алгоритмов проведения лабораторных исследований, внедрение системы повышения качества выявления маркеров инфицирования [6]. Одним из средств контроля является использование диагностических панелей в качестве входного контроля тест-систем, что позволит исключить ложно позитивные результаты, а также исключить перекрестные реакции и многие другие факторы. Цель данной научной работы состояла в создании опытной диагностической панели сывороток для улучшения контроля качества лабораторной диагностики ВГС. Основными методами для этого стали серологический метод (иммуноферментный анализ), молекулярно-биологический (ПЦР - полимеразно-цепная реакция), статистический метод. Необходимость проведения исследований в данном направлении подтверждается полученными результатами и веяниями времени.
Ключевые слова: вирусные гепатиты, диагностика ВГС, контроль качества, плазма доноров.
CREATING AN EXPERIMENTAL DIAGNOSTIC PANEL OF SERA AS A WAY TO IMPROVE QUALITY CONTROL OF LABORATORY DIAGNOSTICS OF HCV Nuruzova Z.A.1, Ganieva R.R.2
1Nuruzova Zukhra Abdukadirovna - Doctor of Medicine, Professor;
2Ganieva Renata Rinatovna - Undergraduate, MICROBIOLOGY, VIROLOGY, IMMUNOLOGY DEPARTURE, TASHKENT MEDICAL ACADEMY, TASHKENT, REPUBLIC OF UZBEKISTAN
Abstract: when diagnosing hepatitis, the leading directions of the laboratory service are: once the most informative methods for detecting infection markers, determining the criteria for objective evaluation of the results obtained, developing optimal algorithms for conducting laboratory studies, introducing a system for improving the quality of detection of infection mars [6]. One means of control is the use of diagnostic panels as input control test systems, which will exclude falsely positive results, as well as exclude cross-reactions and many other factors. The purpose of this scientific work was to create an experimental diagnostic panel of serums to improve quality control of laboratory diagnostics of HCV. The main methods for this were the serological method (enzyme immunoassay), molecular biological (PCR - polymerase chain reaction), and the statistical method. The need for research in this direction is confirmed by the results obtained and the trends in time. Keywords: viral hepatitis, HCV diagnosis, quality control, donor plasma.
УДК: 616.36-002.14:578.891]-078.33
Высокая эпидемиологическая значимость ВГС по сравнению с другими вирусными гепатитами в России и за рубежом требует наряду со средствами специфического лечения эффективных способов мониторинга этой инфекции и своевременной диагностики по основным маркерам заболевания - антителам к отдельным антигенам вируса. Отличительными чертами инфекции ВГС служат низкая концентрация вируса в крови, отсутствие явных признаков инфекции и высокая степень коинфекции ВГС и ВИЧ. Первые наборы для диагностики гепатита C были лицензированы FDA в 1990 г. С тех пор появилось большое количество диагностических средств как для скрининга больных с подозрением на гепатит C, так и для мониторинга здоровых лиц [1, . 33].
В группе вирусных гепатитов человека особое место занимает гепатит С (HCV), что прежде всего вяза но с его широкой распространенностью и высоким хрониогенным потенциалом. Вместе с тем, обследование больных нередко ограничивается определением лишь суммарных антител к вирусу гепатита С.
Вирусные гепатиты с парентеральным механизмом передачи, несмотря на передовые методы лечения, диагностики и профилактики, продолжают оставаться одной из главных задач здравоохранения во всех странах мира. Одной из причин является необходимость совершенствования своевременной и качественной лабораторной диагностики для скрининга населения на наличие серологических и молекулярных маркеров вирусной инфекции.
В настоящее время в мировой практике повсеместно внедрена система мер, которая обеспечивает контроль качества выполнения лабораторного исследования на всех этапах его осуществления - от момента забора биологического материала до выдачи полученных результатов.
Следовательно, целью научной работы выступило создание опытной диагностической панели сывороток для улучшения контроля качества лабораторной диагностики ВГС.
Для этого нами был поставлен ряд задач:
1. Исследовать плазму доноров станции переливания крови (отбракованные РЦПК).
2. Охарактеризовать собранные образцы на наличие маркеров вирусных гепатитов С и В, ВИЧ инфекции, сифилиса.
3. Дать оценку чувствительности и специфичности тест-систем для тестирования вирусного гепатита С.
Тест-системы представляют собой набор реагентов, основой которых являются рекомбинантные антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (соге) и неструктурной (NS) областью генома ВГС, иммобилизированные на поверхности лунок полистироловых планшетов. Основным свойством набора является способность выявлять в сыворотках крови человека антитела к ВГС (IgG b IgM) за счет их взаимодействия с рекомбинантными антигенами, иммобилизированными на поверхности лунок планшета [3, . 80].
Для проведения исследования в качестве объекта была использована плазма доноров Республиканской станции переливания крови, планировалось обследовать 100 образцов плазмы.
Далее необходимо представить результаты, полученные в ходе проведенного исследования.
100 образцов плазмы доноров были исследованы различными методами и охарактеризованы на наличие в них маркеров вирусных гепатитов С и В, ВИЧ инфекции, сифилиса. Данные образцы впоследствии будут составлять основу будущей панели для контроля качества тест-систем, как уже имеющихся в наличие, так и приобретенных в будущем.
Из данных образцов были приготовлены аликвоты меньшим объемом, которые хранятся в морозильнике при температуре - 50С. Объем одной аликвоты составляет 40 мл.
Таблица 1. Результаты обследования образцов плазмы
SIMPLE RESULT DS Nijnii Novgorod, ELISA anti-HCV Murexanti-HCV AbbotCoreantigen PCR HCV Genotype HCV MurexHBsAg PCR HBV Murex HIV Ag/Ab Murex ICE Syphilis
POS SIMPLE 91 60 36 39 39 7 6 0 3
NEG SIMPLE 9 40 64 61 61 93 94 100 97
GRAY ZONE - - 2 - - - - - -
nonreactive/PCR pos - - 1 - - - - - -
POS SIMPLE 91 60 36 39 39 7 6 0 3
Создание референс-панелей должно происходить в строгом соответствии с требованиями валидации тест-систем, предназначенных для клинической лабораторной диагностики. В первую очередь, структура панели должна соответствовать свойствам инфекционного агента (вируса или бактерии) с учетом его генотипического и антигенного многообразия и подобия вирусам, принадлежащим к другим субтипам данного семейства. Количественные характеристики панели должны учитывать фазы развития инфекционного процесса, сопровождаемого изменениями концентрации вирусных маркеров.
Для оценки чувствительности разрабатываемой тест-системы было исследовано аликвоты, что были взяты ранее. Для формирования окончательного диагноза целесообразно, особенно при выявлении только одного из маркёров вирусов, проводить повторное тестирование анти-ВГС.
Чувствительность и специфичность разработанной опытная референс-панель анти-ВГС оказалась достаточно высокой, что говорит о том, что данное внедрение позволит не только улучшить контроля качества лабораторной диагностики вирусного гепатита С, но и может кардинально поменять подход выявления гепатита С у нас в стране.
Практическая значимость исследовательской работы заключается в том, что результаты исследования будут использованы в диагностических лабораториях, проводящих диагностику вирусного гепатита С в качестве входного контроля используемых тест-систем, а также для определения чувствительности и специфичности новых и вновь регистрируемых диагностических тест-систем. Основные выводы, которые были сделаны в рамках проведенной работы стали:
1. Необходимость проведения исследований в данном направлении подтверждается полученными результатами и веяниями времени.
2. Положено начало организации банка положительных и отрицательных образцов ВГС для создания диагностической панели контроля качества.
3. Созданная опытная референс-панель анти-ВГС для улучшения контроля качества лабораторной диагностики вирусного гепатита С может кардинально поменять подход выявления гепатита С у нас в стране.
Список литературы /References
1. Бунимович А.А., Урусова М.С., Соловьева Т.С. Актуальность морфологической диагностики HCV-инфекции / А.А. Бунимович // Известия Российской Военно-медицинской академии, 2020. Т. 2. № S1. С. 33-35.
2. Еремин В. Ф. Лабораторная диагностика ВИЧ, ВГВ, ВГС - трансфузионные риски / В.Ф. Еремин // Вестник гематологии, 2018. Т. 14. № 4. С. 26-27.
3. Канев А.Н. Разработка референс-панели сывороток, содержащих антитела к различным субтитам вируса гепатита С / А.Н. Канев // Биотехнология, 2014. Т. 30. № 1. С. 79-86.
4. Попова Н.В. и др. Зависимость качества результатов диагностики вирусных гепатитов методом ИФА от используемых аналитических систем // Клиническая медицина Казахстана, 2011. № 3, 4(22,23). С. 310-312.
