CC BY
27
■■■ lililí
28
Новости клеточных технологий
■ ■ тп
матрицу из расчета 28 млн клеток на матрицу [8*2 мм) и культивировались в течение 72 часов.
В результате при гистологическом исследовании эквивалентов легочной ткани после 72 часов культивирования выявлено, что в различных частях конструкции, в основном -по периферии матрицы, определяются клеточные трубчатые структуры, напоминающие альвеолы. В культуре, выделенной из 19-дневных эмбрионов, клетки положительно окрашивались на цитокератины 18 и 19 - маркёры альвеоло-цитов I и II типов соответственно. В образцах, содержащих культуру клеток от 16-дневных зародышей, большинство клеток подверглось апоптозу, преобладали фибробласто-подобные клетки и единичные кубические клетки. Клетки 19-дневных эмбрионов были способны сокращать подложку на 30%, т.е. взаимодействовать с ней, как с внеклеточным матриксом. Авторы объясняют это свойство также наличием клеток, экспрессирующих актин гладких миоцитов, ок-
ружающих пневмоциты и формирующих для них опору в 3D-CTpyKType.
Таким образом, в результате исследования был выявлен оптимальный срок для получения культуры фетальных альвеолоцитов I и II типов. При их нанесении на пористую прочную матрицу, состоящую из коллагена и хондроитин-сульфата с последующим культивированием как минимум 72 часа, клетки формируют схожие с альвеолами структуры, содержащие как альвеолоциты, так и поддерживающие элементы. Данное исследование демонстрирует пригодность комбинированной матрицы [коллаген + гликозами-ногликаны) для создания гистотипического эквивалента легкого. Основной задачей будущих исследований станет васкуляризация такой тканеинженерной конструкции и возможность газообмена в ней. Результаты работы позволяют перейти к экспериментам in vitro и in vivo с человеческими клетками.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Douglas W.H., Moorman G.W., Teel R.W. The formation of histotypic structures from monodisperse fetal rat lung cells cultured on a three-dimensional substrate. In Vitro 1976; 12: 373-81.
2. Douglas W.H., Teel R.W. An organotypic in vitro model system for studying pulmonary surfactant production by type II alveolar pneumonocytes. Am. Rev.
Respir. Dis. 1976; 113: 17-23.
3. Douglas W.H., McAteer J.A., Dell'orco R.T., Phelps D. Visualization of cellular aggregates cultured on a threedimensional collagen sponge matrix. In Vitro 1980; 16: 306-12.
4. Umino T., Wang H., Zhu Y. et al. Modification of type I collagenous gels by alveolar epithelial cells. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2000; 22: 702-7.
Подготовил A.B. Волков По материалам Tissue Eng 2005; 11: 1436
Создание костно-дентального эквивалента - прорыв в имплантационной стоматологии?
□коло 15-50 % населения земного шара уже в молодом возрасте в результате кариеса, травм и воспалительных заболеваний сталкивается с необходимостью протезирования зубов. В настоящее время в клинической практике для решения этой эстетической и функциональной медицинской проблемы широко применяются методики имплантации зубных протезов в кость челюсти. Подобные протезы, выполняемые из композитов типа металлокерамики, пластика и других материалов, обеспечивают достаточный косметический и функциональный результат на сроках от 5 до 15 лет. Тем не менее, в стоматологической имплантологии имеется большая проблема резорбции костной ткани альвеолы, развивающаяся уже через год после потери зуба. Это обстоятельство усложняет процедуру имплантации, так как требуется заполнение дефекта [создание «+» ткани) в месте установки протеза. Современные технологии позволяют решить эту проблему с помощью матриц-носителей [донорская кость, биополимеры, гидроксиапа-тит), а также созданием полноценных тканеинженерных конструкций [3, 4].
В журнале Tissue Engineering опубликовано исследование ученых из Массачусетского Технологического Университета [США], которое, возможно, позволит одновременно решить сразу несколько проблем с созданием биоискусственного зуба de novo. □снову эксперимента составила технология непрямого дентогенеза, заключающаяся в культивировании элементов закладки зуба [зубная пластинка, эмалевый орган, зубной сосочек), выделенного из эмбриона.
Клеточная масса, состоящая из энамелобластов, одонтоб-ластов и малодифференцированых эпителиальных и стро-мальных мезенхимальных клеток, суспензируется и совместно культивируется [1, 2, 5].
Зачатки коренных зубов получали из свиней 6-месячного возраста. Клетки были выделены и помещены на предварительно обработанные коллагеном [для улучшения адгезии) матрицы из PGA/PLLA. Полученные конструкции были помещены в сальник бестимусных крыс с целью префабри-фикации in vivo. Одновременно создавали эквивалент костной ткани. Для этого на те же синтетические полимеры наносили остеобласты, предварительно обогащённые из культуры мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) костного мозга тех же животных, для соблюдения принципа аутогенности. Эквивалент костной ткани культивировался в роторном биореакторе в течение 10 дней. Через 4 недели эквивалент зуба извлекали из сальника и совмещали с эквивалентом костной ткани. Полученная конструкция была снова помещена в сальник бестимусных крыс на 8 недель.
В результате, эквивалент зуба, помещенного в сальник крыс, при гистологическом исследовании имел строение, характерное для нормального зуба уже через 4 месяца. Композиция костной ткани с эквивалентом зуба при гистологическом исследовании имела структуру губчатой кости, а интегрированный в нее зуб состоял из дентина, эмали и пульпы с сосудами, как полноценный орган. Обнаружение характерных маркеров, таких как остеокальцин, коллаген I и
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия № 1 (3), 200G
■■■ lililí
ш
Новости клеточных технологий
III [для костной ткани) и омелогенин [для ткани зуба) говорит о том, что в результате эксперимента получено уникальное образование кости и интегрированного в нее зуба.
Таким образом, в результате усовершенствования авторами технологии непрямого дентогенеза был получен трансплантат, решающий одновременно две главные задачи - создание самого зуба и воссоздания его костного ложа [альвеолы). Достижение может иметь революцион-
ный характер, поскольку впервые в полученном эквиваленте зуба определялась пульпа и кровеносные сосуды, что указывает на создание почти полноценного органа. Решение другого важного вопроса - иннервации биоискусственного зуба - обеспечит поддержание жизнеспособности и нормальное функционирование трансплантата. Данное исследование приближает нас к получению эквивалента зуба у человека.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Волков А.В. Перспективы создания зуба методами тканевой инженерии. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2005; 1: 44-5.
2. Duailibi M.T., Duailibi S.E., Young C.S. et al. Bioengineered teeth from cultured rat tooth bud cells. J. Dent. Res. 2004; 83(7): 523-8.
3. Nikol'skii Vlu. Morphologic analysis of reparative osteogenesis in cases of immediate dental implantation in experiments on rabbits. Stomatologiya
(Mosk). 2005; 84(3): 8-12.
4. Marei M.K., Nouh S.R., Saad M.M., Ismail N.S. Preservation and regeneration of alveolar bone by tissue-engineered implants. Tissue Eng. 2005; 11(5-6): 751-67.
5. Young C.S., Terada S., Vacanti J.P. et al. Tissue engineering of complex tooth structures on biodegradable polymer scaffolds. J. Dent. Res. 2002; 81(10): 695-700.
Подготовил A.B. Волков По материалам Tissue Eng. 2005; 11 (9-10): 1599-610
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия № 1 (3), 2006
А
