CC BY
15
https://clinical-journal.ru E-ISSN 2686-6838
УДК 615.1
RESEARCH ARTICLE 3. Medical sciences
Corresponding Author: Lavrov Konstantin Sergeevich - Resident of the Department of Pharmaceutical Technology at the A.P. Nelyubin Institute of Pharmacy, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Moscow,
Russian Federation
E-mail: konst. lavrov20@gmail. com
© Bakhrushina E.O., Moiseev E.D., Moiseeva A.A. - 2023
*** I Accepted: 30.03.2023
http://dx.doi.org/Z10.26787/nydha-2686-6838-2023-25-3-48-53
СОЗДАНИЕ ИНТРАТУМОРАЛЬНОГО IN SITU ИМПЛАНТАТА С БЕРБЕРИНОМ БИСУЛЬФАТОМ
Бахрушина Е.О., Моисеев Е.Д., Моисеева А.А.
ФГАОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), г. Москва, Российская Федерация
Аннотация. Берберин (ББ) - алкалоид изохинолинового ряда, который получают из Барбариса, чаще Барбариса обыкновенного, семейства Барбарисовых. Интерес научного сообщества к данной молекуле вызвало его обширное количество фармакологических эффектов: противоопухолевый, гиполипидемический, противовоспалительный, антиаритмический, антидиабетический и др.
Противоопухолевый эффект ББ, который заключается в ингибировании клеточного цикла в фазе G1, индуцировании апоптоза в опухолевых клетках, влиянии на митоген-активированные киназы, подавление метастазирования. Основной причиной нечастого использования данной молекулы являются его плохая растворимость и низкая биодоступность. Таким образом, наилучшим решением преодоления данных проблем является внутриопухолевая имплантация.
При анализе научных публикаций было установлено, что в процессе разработки интратуморальных имплантатов, чаще всего предпочтение отдают использованию полоксамеров при создании матриц с различными действующими веществами, поскольку температурный стимул является наиболее характерным и надежным в терапии.
Таким образом, целью исследования является разработка состава и технологии внутриопухолевого термочувствительного имплантата бисульфата берберина (БББ).
В исследовании использовали 101,6% субстанцию БББ, ("Вифитех", Россия), в качестве солюбилизаторов использовались Kolliphor® P188, Kolliphor® P338, Kollisolv® P124 и Soluplus®, полисорбат-80, ПЭГ-1500 (BASF, Германия). В качестве кандидата в среды растворения рассматривали также N-метилпирролидон. Солюбилизация БББ проводилась путем добавления поверхностно-активных веществ и их комбинаций, методом твердых дисперсий, жидкость-жидкостной экстракции. БББ демонстрировал очень низкую растворимость в N-метилпирролидоне. Финальный состав содержал в себе Kolliphor® Р 407 (15,0%), Kolliphor® Р 188 (2,0%), Kollisolv® Р124 (2,0%), БББ (1,3%) со скоростью фазового перехода в 2 минуты и температурой фазового перехода 37-38°С.
Для полученного оптимального состава проводился тест «Растворение» с использованием диализного мешка, в среде фосфатного буферного раствора рН 6,8, при постоянной температуре 37°С. Отбор проб проводился через 1 час, 2 часа, 3 часа, 5 часов, 24 часа и 96 часов. Концентрация вещества определялась с помощью спектрофотометрии.
В результате проведенных исследований был создан наиболее оптимальных состав для внутриопухолевого имплантата, проведены необходимые тесты. Также можно сделать вывод об эффективности использования полоксамеров для улучшения растворения БББ. Требуется проведение дальнейших исследований.
Ключевые слова: берберина бисульфат, интратуморальная имплантация, полоксамер, солюбилизация, in situ системы
THE DEVELOPMENT OF INTRATUMORAL IN SITU IMPLANT WITH BERBERINE BISULPHATE
Bakhrushina E.O., Moiseev E.D., Moiseeva A.A.
I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Moscow, Russian Federation
Abstract. Berberine (BB) is an isoquinoline alkaloid, which is obtainedfrom Berberis (Barberry), more often Berberis vulgaris, of the Berberidaceae family. The interest of the scientific community in this molecule was caused by its vast number of pharmacological effects: antitumor, hypolipidemic, anti-inflammatory, antiarrhythmic, antidiabetic, etc.
E-ISSN 2686-6838
The antitumor effect of BB consists in the inhibition of the cell cycle in the G1 phase, the induction of apoptosis in tumor cells, the effect on mitogen-activated kinases, and the suppression of metastasis. The main reason for the infrequent use of this molecule is its poor solubility and low bioavailability. Thus, the best solution to overcome these problems is intratumoral implantation.
During the analysis of scientific publications, it was found that in the process of developing intratumoral implants when creating matrices with various active substances, it is most often preferred to use poloxamers, since the temperature stimulus is the most characteristic and reliable in therapy.
Thus, the aim of the study is to develop the composition and technology of an intratumoral thermosensitive implant of berberine bisulfate (BBB).
The study used 101.6% BBB substance (Vifitech, Russia). Kolliphor® P188, Kolliphor® P338, Kollisolv® P124 and Soluplus®, polysorbate-80, PEG-1500 (BASF, Germany) were used as solubilizers. N-methylpyrrolidone was also considered as a candidate for dissolution media.
Solubilization of BBB was carried out by adding surfactants and their combinations, by the method of solid dispersions, liquid-liquid extraction. BBB showed very low solubility in N-methylpyrrolidone. The final composition contained Kolliphor® P 407 (15.0%), Kolliphor® P 188 (2.0%), Kollisolv® P124 (2.0%), BBB (1.3%) with a phase transition rate of 2 minutes and phase transition temperature 37-38°C.
For the obtained optimal composition, the "Dissolution" test was carried out using a dialysis bag, in a phosphate buffer solution pH 6.8, at a constant temperature of 37°C. Sampling was carried out after 1 hour, 2 hours, 3 hours, 5 hours, 24 hours and 96 hours. The concentration of the substance was determined using spectrophotometry. As a result of the studies carried out, the most suitable composition for an intratumoral implant was created, and the necessary tests were carried out. It can also be concluded that the use of poloxamers is effective in improving the dissolution of BBB. Further research is required.
Keywords: berberine bisulfate, intratumoral implantation, poloxamer, solubilization, in situ systems
Введение. Одним из многих перспективных для развития фармакологии растительных соединений является алкалоид берберин (ББ), представляющий собой по химическому строению производное изохинолина. Основным способом его получения является спиртовая экстракция в водной или слабокислой среде с последующим удалением балластных веществ и осаждением берберина в форме его солей: хлоридов, сульфатов или йодидов [1].
ББ обладает широким спектром фармакологической активности. Получены данные исследований, сообщающих о противовоспалительном, противоопухолевом, анальгетическом, анти-атеросклеротическом, вазодилатирующем, инотропном,
противомикробном, желчегонном,
гипогликемическом действии соединения.
Для оценки актуальности разработки лекарственных форм с берберина бисульфатом (БББ) проводился патентный поиск в информационно-поисковых системах
Федерального института промышленной собственности по запросу «берберин». По данным на октябрь 2021 года в базе содержались сведения о 269 патентах, на конец 2022 года - 274, что говорит о достаточно активно идущих процессах патентования. 41 патент приходится на лекарственные формы с ББ, что составляет 15% от общего количества результатов запроса, 10 из них относятся к онкологии (24%).
Исследование противоопухолевого
эффекта ББ является особенно актуальным,
поскольку по данным Всемирной организации здравоохранения за 2019 год онкологические заболевания (рак легких, бронхов, трахеи) занимают шестое место в мире по причинам смертности населения Земли.
Механизмы действия ББ на опухоль разнообразны: одним из механизмов противоопухолевого действия ББ является способность индуцировать апоптоз атипичных клеток. Также соединения показало способность регулировать клеточный цикл, пролиферацию клеток и аутофагию, препятствовать инвазии в органы и метастазированию, действуя на экспрессию сигнальных путей и белков опухоли, регулировать концентрацию цитокинов, выделяемых опухолью [2], потенцировать действие цисплатина или тамоксифена [1].
Несмотря на широкое разнообразие терапевтических эффектов, которые способен проявлять ББ, его применение ограничено вследствие чрезвычайно низкой биодоступности (менее 1%). Причиной этого является его разрушение при прохождении через желудочно-кишечный тракт, метаболизм ферментами цитохрома печени абсорбированной части и низкая растворимость в воде [3]. Один из возможных вариантов решения проблемы низкой биодоступности при пероральном приеме -создание лекарственной формы, вводимой пациенту парентерально.
Говоря о проблемах современной онкологии, стоит отметить, что применяемые методы лечения (прием химиотерапевтических
E-ISSN 2686-6838
препаратов, лучевая терапия) оказывают отрицательное действие и на здоровые клетки. Доказано влияние цитостатиков на изменение состава крови, приводящее к тяжелым нежелательным лекарственным реакциям [4]. Многие противоопухолевые лекарственные препараты вводятся в виде регулярных инфузий, болезненность которых доставляет определенный дискомфорт пациентам. Кроме того, некоторые препараты (например, цисплатин) предполагают длительное введение инфузионного раствора (68-24 часа), что тоже не является удобным для пациента.
Разработка биодеградируемого in situ имплантата, вводимого непосредственно в ткани опухоли, могла бы позволить решить проблему необходимости длительного курсового применения противоопухолевых препаратов, являющихся токсичными для всего организма и доставляющих неудобства пациентам при их применении.
В настоящее время разработка вышеупомянутой системы доставки
лекарственных средств идет достаточно активно. В медицинских научных базах данных встречаются статьи об исследованиях in situ имплантатов, содержащих PLGA, N-метилпирролидон, Pluronic P85, 96% этанол и применяющихся в различных областях медицины, одной из которых является онкология
[5].
В данный момент в лечение онкологических заболеваний используются небольшое количество препаратов в виде имплантатов. Первым оригинальным
имплантатом, одобренным FDA, был Zoladex® (действующее вещество - гозерелин), для лечения рака простаты и молочной железы курсом длительностью в 14 дней. Один из немногих зарегистрированных препаратов с технологией формирования in situ, Eligard®, представляет собой подкожный имплантат. Этот формирующийся in situ имплантат, содержащий активное вещество лейпрорелин, используется для паллиативного лечения рака предстательной железы путем снижения выработки организмом тестостерона. GLIADEL® Wafer - это биоразлагаемый имплантируемый препарат, который был одобрен к применению в 1996 году для лечения глиобластомы, глиомы и других злокачественных опухолей головного мозга после хирургического вмешательства.
При разработке инновационных систем для интратуморального введения исследователи чаще всего обращаются к термически-стимулированным in situ композиция [6-8].
Причем таргетность термочувствительной системы может быть обеспечена как гипертермией в области образования опухолевой ткани, так и искусственно - при нагревании опухоли из вне, при проведении имплантации.
Цель данной работы была разработка нового интратуморального имплантата БББ на основе термочувствительной in situ матрицы.
Материалы и методы. Объектом исследования являлась субстанция БББ (101,6%). В качестве солюбилизирующих агентов рассматривали возможность применения полоксамеры с различными соотношениями блоков
полиэтиленоксида (а) и полипропиленоксида (b): Kolliphor® P188 (а-80; b-27), Kolliphor® P338 (a-141; b-144), Kollisolv® P124 (a-12; b-20); а также солюбилизаторы Soluplus®, полисорбат-80, ПЭГ-1500 (BASF, Германия). В качестве кандидата в среды растворения рассматривали также N-метилпирролидон, масла, водно-спиртовые смеси, пропиленгликоль и глицерин.
Для создания термочувствительной матрицы использовали полоксамер Kolliphor® P407 (BASF, Германия) в концентрации 15%.
Микронизацию субстанции БББ проводили на ротационной ножевой мельнице Retsch ZM 200 (Германия) в течение 5 минут. Солюбилизацию БББ с использованием поверхностно-активных веществ проводили путем перемешивания на магнитной мешалке с подогревом IKA® C-MAG HS 7 digital (Германия) при нагревании до 80 °С в течение 60 минут. Затем состав переносили в герметичные конические пробирки на 5 мл и подвергали ультразвуковому озвучанию на УЗ-ванне ОДА-Сервис MS-13 (Россия) при нагревании до 50 °С в течение 30 минут. Хранение составов осуществлялось при температуре 5-8 °С в фармацевтическом холодильнике Pozis (Россия). Оценка седиментационной устойчивости составов проводилась визуально на приборе СветоЧек®-ФМ (Россия), а для устойчивого при хранении в течение 7 суток образца - путем провоцирования седиментации при
центрифугировании на приборе Biosan LMC-12 (Латвия) в течение 5 минут, 3000 об/мин.
Определение времени и температуры гелеобразования проводили с использованием режима нагревания и термодатчика магнитной мешалки IKA® C-MAG HS 7 digital (Германия). Температуру гелеобразования определяли при постепенном нагревании образца до 50 °, с помощью помешивания раствора термодатчиком - по визуальному увеличению вязкости.
https://clinical-journal.ru E-ISSN 2686-6838
Тест «Растворение» для разработанного термочувствительной системы для
интратуморального имплантирования проводили в герметично запаянном диализном мешке OrDialD 14b с размером пор 12 - 14 кДа (OrangeScientific, Бельгия) в среде фосфатного буферного раствора (рН 6,8), термостатируемого при температуре 37±0,5 °С. Объем среды составлял 400 мл, объем in situ системы, помещенной в диализный мешок - 3 мл. Тест проводился в течение 24 часов, сопровождаясь отбором аликвот (5 мл) на 1, 2, 3, 5, 24 и 96 часу испытания. Пробы подвергались фильтрованию и количественному определению путем прямой спектрофотометриии.
Результаты и обсуждение. На первом этапе исследования определялась растворимость субстанции БББ в различных доступных и разрешенных для парентеральной имплантации растворителях. Было показано, что БББ очень плохо растворим в водно-спиртовых растворах с различной концентрацией, пропиленгликоле, глицерине, практически не растворим в маслах, N-метилпирролидоне, а наилучшей
растворимостью для БББ характеризуется вода очищенная. Ряд экспериментов по получению твердых дисперсий БББ также не были успешными.
Таким образом, было принято решение о проведении солюбилизации с использованием различных ПАВ и их комбинаций, а также микронизацией субстанции, УЗ-озвучанием.
В ходе ряда экспериментов по солюбилизации последовательно варьировались
составы и технология матриц. Солюбилизация с использованием полисорбата-80, Soluplus® при нагревании до 80 °С в течение 8 часов не дала значимых результатов. При использовании блок-сополимеров полиэтиленоксида и
полипропиленосида марок КоШр^г® и Ко1^о1у® было разработано 15 экспериментальных составов, содержащих комбинации ПАВ в различных концентрациях, при постоянном содержании КоШр^г®Р407 -15,0% (таблица 1). Было выявлено, что предварительная микронизация БББ, нагревание до температуры 80 °С, а также последующая УЗ-обработка в течение 30 минут при нагревании до 50 ° ведут к получению более стабильных гетерогенных систем.
По полученным результатам полоксамер с наименьшей молекулярной массой и количеством полиэтиленоксидных и полипропиленоксидных звеньев - Ко1^о1у® Р124 - обладает наилучшей солюбилизирующей активностью относительно молекулы БББ, в то время как полимеры с наибольшей молекулярной массой (КоШр^г® Р338 и КоШр^г® Р188) не проявили значимой солюбилизирующей активности как по отдельности, так и в комбинации. Первым значимым результатом было получение стабильного в течение 24 дней состава с содержанием Ко1^оЫ® Р124 и БББ 2,0% (состав №5). Однако, при попытке эквивалентного повышения концентрации обоих агентов, система продолжала быть нестабильной. Стабильного в течение длительного периода (более 3 месяцев) состава удалось добиться при снижении концентрации БББ до 1,3% (состав №15).
Таблица 1.
Экспериментальные составы матриц с БББ с использованием различных полоксамеров и их
стабильность при хранении
^ХСостав % 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 15.1
БББ 1,5 2,0 1,5 2,0 2,0 1,5 2,0 2,0 2,0 3,0 3,0 1,5 1,5 1,4 1,3 1,3
Р124 1,0 - 2,0 - 2,0 - 2,0 2,0 - - - 3,0 4,0 2,0 2,0 2,0
Р188 - 1,0 - 2,0 - - - - - - - - - - - 2,0
Р338 - - - - - 1,5 1,0 1,5 2,0 4,0 3,0 - - - - -
Table 1.
Experimental compositions of matrices with BBB using different poloxamers and their storage stability
^^ Compo ^\§ition % 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 15.1
BBB 1,5 2,0 1,5 2,0 2,0 1,5 2,0 2,0 2,0 3,0 3,0 1,5 1,5 1,4 1,3 1,3
Р124 1,0 - 2,0 - 2,0 - 2,0 2,0 - - - 3,0 4,0 2,0 2,0 2,0
Р188 - 1,0 - 2,0 - - - - - - - - - - - 2,0
Р338 - - - - - 1,5 1,0 1,5 2,0 4,0 3,0 - - - - -
E-ISSN 2686-6838
высвобождения приведен на рисунке 1. За первый час высвобождение БББ достигает 42,6%, однако, в дальнейшем происходит линейно, и к 24 часам составляет 94%.
120
о? tf 100 pa
W 80
<D
1 60 I 40
ю g 20 о
S да
40 20
0
Для стабильного состава №15 была определены температура гелеобразования и время фазового перехода - они были недостаточными для гелеобразования в физиологических диапазонах (30,0±1,0 °С). По этой причине, для корректировки показателей фазового перехода, в состав №15 были предприняты попытки введения дополнительных агентов, повышающих температуру
гелеобразования - Kolliphor® Р188 и ПЭГ-1500. Желаемых параметров стабильности удалось достичь при добавлении Kolliphor® Р188 в количестве 2,0% (состав № 15.1). Температура фазового перехода образца находилась в диапазоне 37-38 °С, что отвечает дизайну эксперимента. Стабильность температуры гелеобразования была определена при хранении в течение 5 месяцев. Отклонения в показателе не превышали 1 °С. Время фазового перехода было определено как 90-120 с.
Для состава №15.1 был проведен тест «Растворение» с использованием диализного мешка - по методике, описанной для интратуморальных систем. Профиль
Выводы. В ходе проведенных исследований, был разработан состав интратуморального термочувствительного in situ имплантата берберина бисульфата, содержащий 1,3% активного ингредиента. Разработанная композиция характеризуется оптимальными температурой и временем гелеобразования. Несмотря на то, что высвобождение в первый час носит «взрывной» характер, высвобождение можно охарактеризовать как пролонгированное, а общая концентрация БББ в интратуморальном имплантате недостаточно высока для того, чтобы высвободившаяся за первый час доза имела высокую токсическую нагрузку для пациента. Для определения параметров токсичности и эффективности разработанной системы необходимо проведение доклинических исследований.
0 1 2 3 5 24 96 Время, ч
Рис.1 - Профиль высвобождения БББ из состава № 15.1
Fig.1 - BBB release profile from composition № 15.1
REFERENCES
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИМ СПИСОК
[1]. Nechepurenko I.V., Salakhutdinov N.F., Tolstikov G.A. Berberine: chemistry and biological activity // Chemistry for sustainable development. - 2010. - Vol. 18. - P. 1-23 https://www. sibran.ru/journals/issue.php?ID= 119881&ARTI CLE_ID=129991 (access date: 01.02.2023).
[2]. Wang Y, Liu Y, Du X, Ma H, Yao J. The Anti-Cancer Mechanisms of Berberine: A Review. // Cancer Manag Res. -2020 - Vol. 12 - P. 695-702. doi: 10.2147/CMAR.S242329
[3]. Habtemariam S. The Quest to Enhance the Efficacy of Berberine for Type-2 Diabetes and Associated Diseases: Physicochemical Modification Approaches // Biomedicines. -2020. - Vol. 8(4). - P. 90. doi: 10.3390/biomedicines8040090
[4]. Niyozova Sh. Kh., Izrailbekova K. Sh. Correction of hematological toxicity of chemotherapy of non-hodgkin lymphomas hemopoesis inducers // Colloquium-journal. 2020. Vol. 14 (66). DOI: 10.24411/2520-6990-2020-11892
[5]. Krupka, T. M., Weinberg, B. D., Ziats, N. P., Haaga, J. R., & Exner, A. A. Injectable polymer depot combined with radiofrequency ablation for treatment of experimental carcinoma in rat. // Investigative Radiology. - 2006. - Vol. 41(12). - P. 890-897. DOI: 10.1097/01.rli.0000246102.56801.2f
[6]. Amiji MM, Lai PK, Shenoy DB, Rao M. Intratumoral administration of paclitaxel in an in situ gelling poloxamer
[1]. Нечепуренко И.В., Салахутдинов Н.Ф., Толстиков Г.А. Берберин: химия и биологическая активность // Химия в интересах устойчивого развития. - 2010. - №18. - С. 1-23.
https://www.sibran.ru/journals/issue.php?ID= 119881&A RTICLE_ID=129991 (дата обращения: 01.02.2023).
[2]. Wang Y, Liu Y, Du X, Ma H, Yao J. The Anti-Cancer Mechanisms of Berberine: A Review. //Cancer Manag Res. - 2020. - Vol. 12. - P.695-702. doi: 10.2147/CMAR. S242329
[3]. Habtemariam S. The Quest to Enhance the Efficacy of Berberine for Type-2 Diabetes and Associated Diseases: Physicochemical Modification Approaches // Biomedicines. - 2020. - Vol. 8(4). - P. 90. doi: 10.3390/biomedicines8040090
[4]. Ниёзова Ш. Х., Израильбекова К. Ш. Коррекция гематологической токсичности химиотерапии неходжкинских лимфом индукторами гемопоза // Colloquium-journal. -2020. - №14 (66). DOI: 10.24411/2520-6990-2020-11892
[5]. Krupka, T. M., Weinberg, B. D., Ziats, N. P., Haaga, J. R., & Exner, A. A. Injectable polymer depot combined with radiofrequency ablation for treatment of experimental carcinoma in rat. // Investigative Radiology. - 2006. - Vol.
E-ISSN 2686-6838
407 formulation. // Pharm Dev Technol. - 2002. - Vol.7(2). -P. 195-202. doi: 10.1081/pdt-120003487. PMID: 12066574.
[7]. Xu M, Mou Y, Hu M, Dong W, Su X, Wu R, Zhang P. Evaluation of micelles incorporated into thermosensitive hydrogels for intratumoral delivery and controlled release of docetaxel: A dual approach for in situ treatment of tumors. // Asian J Pharm. Sci. - 2018. -Vol. 13(4). - P. 373-382. DOI: 10.1016/j.ajps.2018.05.004.
[8]. Liang H-KT, Lai X-S, Wei M-F, Lu S-H, Wen WF, Kuo S-H, Chen C-M, Tseng W-YI, Lin F-H. Intratumoral injection of thermogelling and sustained-release carboplatin-loaded hydrogel simplifies the administration and remains the synergistic effect with radiotherapy for mice gliomas. // Biomaterials. - 2018. - Vol. 151 - P. 38-52. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2017.10.015.
41(12). - P. 890-897. DOI:
10.1097/01.rli.0000246102.56801.2f
[6]. Amiji MM, Lai PK, Shenoy DB, Rao M. Intratumoral administration of paclitaxel in an in situ gelling poloxamer 407 formulation. // Pharm Dev Technol. - 2002. -Vol.7(2). - P. 195-202. doi: 10.1081/pdt-120003487. PMID: 12066574.
[7]. Xu M, Mou Y, Hu M, Dong W, Su X, Wu R, Zhang P. Evaluation of micelles incorporated into thermosensitive hydrogels for intratumoral delivery and controlled release of docetaxel: A dual approach for in situ treatment of tumors. // Asian J Pharm. Sci. - 2018. -Vol. 13(4). - P. 373-382. DOI: 10.1016/j.ajps.2018.05.004.
[8]. Liang H-KT, Lai X-S, Wei M-F, Lu S-H, Wen WF, Kuo S-H, Chen C-M, Tseng W-YI, Lin F-H. Intratumoral injection of thermogelling and sustained-release carboplatin-loaded hydrogel simplifies the administration and remains the synergistic effect with radiotherapy for mice gliomas. // Biomaterials. - 2018. - Vol. 151 - P. 3852. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2017.10.015.
Author Contributions. Bakhrushina E. O. - literature review, writing a text, evaluation of relevance and informativeness of the text, development of the design of the experiment, control over the conduct ofresearch; Moiseev E.D. - conducting experiments, writing the text of the manuscript; Moiseeva A.A. - analysis of literary sources, evaluation and interpretation of the results.
Conflict of Interest Statement. The authors declare no conflict of interest. Bakhrushina E.O. - SPIN ID: 6677-0344 ORCID ID: 0000-0001-8695-0346 Moiseev E.D. - ORCID ID: 0000-0002-3497-3797 Moiseeva A.A. - ORCID ID: 0000-0001-7995-8235
For citation: Bakhrushina E.O., Moiseev E.D., Moiseeva A.A. THE DEVELOPMENT OF INTRATUMORAL IN SITU IMPLANT WITH BERBERINE BISULPHATE. // Medical & pharmaceutical journal "Pulse". - 2023;25(3):48-53. http://dx.doi.Org//10.26787/nydha-2686-6838-2023-25-3-5-10.
Вклад авторов. Бахрушина Е.О. - анализ литературных источников и написание текста рукописи, оценка актуальности и информативности написанной рукописи, разработка дизайна эксперимента, контроль за проведением исследований, Моисеев Е.Д. - проведение экспериментов, написание текста рукописи, Моисеева А.А. - анализ литературных источников, оценка и интерпретация результатов
Заявление о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Бахрушина Е.О. - SPIN ID: 6677-0344 ORCID ID: 0000-0001-8695-0346 Моисеев Е.Д. - ORCID ID: 0000-0002-3497-3797 Моисеева А.А. - ORCID ID: 0000-0001-7995-8235
Для цитирования: Бахрушина Е.О., Моисеев Е.Д., Моисеева А.А. СОЗДАНИЕ ИНТРАТУМОРАЛЬНОГО IN SITU ИМПЛАНТАТА С БЕРБЕРИНОМ БИСУЛЬФАТОМ // Медико-фармацевтический журнал "Пульс". 2023;25(3):48-53. http://dx.doi.org//10.26787/nydha-2686-6838-2023-25-3-48-53.
