CC BY
112
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ДИАГНОСТИКЕ АДЕНОМИОЗА
А.В. Сорокина, Г.Ф. Тотчиев, Л.Р. Токтар
Кафедра акушерства и гинекологии с курсом перинатологии Российский университет дружбы народов ул. Миклухо-Маклая, 8, Медицинский факультет, 117198, Москва, Россия
Изучение генетических и иммунологических механизмов патогенеза аденомиоза с позиций доказательной медицины позволит проводить прогнозирование, раннюю диагностику и оценивать эффективность проводимого лечения. В то же время использование высокопроизводительных и чувствительных методов анализа экспрессии белков в сыворотке крови могут обнаружить изменения молекулярных реакций еще до появления клинической картины заболевания, что также может облегчать раннюю диагностику.
Ключевые слова: аденомиоз.
Проблема аденомиоза становится все более актуальной в связи с ростом заболеваемости и «омоложения» контингента пациенток с этим заболеванием. Несмотря на существующие достижения и объем проведенных исследований, аденомиоз является состоянием, причины возникновения которого, способы диагностики, лечения и профилактики остаются мало изученными.
В настоящее время аденомиоз считается отличным от эндометриоза заболеванием, хотя у этих двух нозологических форм существует много определенных общих черт. В течение последних десяти лет все большее число исследований касается определения молекулярных механизмов проникновения клеток эндометрия в толщу миометрия и их выживания в этом "чуждом" для них микроокружении. Считается, что основную роль в этом процессе могут играть вещества, относящиеся к широкому классу молекул, обеспечивающих межклеточные взаимодействия, хотя и не отрицается общее влияние гормонов на развитие этого заболевания.
Развитие теоретической медицины позволяет расширить представления о причинах и механизмах возникновения заболеваний и искать новые подходы к их диагностике, лечению и профилактике. В отношении аденомиоза это стало возможно после открытия ряда биологически активных субстанций, осуществляющих межклеточные коммуникации, и попыток рассмотреть эту патологию с точки зрения сбоя программы нормального межклеточного взаимодействия.
В настоящее время появляется все больше данных о влиянии генетических факторов на развитие эндометриоза, на что указывает повышенная
распространенность эндометриоза у родственников первой степени и монозиготных близнецов.
Большое количество исследований подтверждает гипотезу о нарушении экспрессии продуктов определенных генов в нормально расположенном эндометрии у женщин с аденомиозом, что может быть связано как с развитием самого заболевания, так и со связанным с аденомиозом бесплодием. Многие авторы указывают на повышение ангиогенной активности и нарушения регуляции апоптоза в нормально расположенном эндометрии, что может приводить к развитию аденомиоза [8].
Роль апоптоза в развитии аденомиоза.
Апоптоз - это процесс программируемой гибели клетки, который регулирует жизнедеятельность клеток различных тканей, включая эндометрий.
Индукция апоптоза встречается в очагах аденомиоза чаще, чем в нормально расположенном эндометрии, что позволяет предположить, что эндометрий в очаге аденомиотического поражения может отличаться по своим свойствам от нормально расположенного эндометрия [16].
Bcl-2 - один из регуляторов процесса апоптоза. Повышение уровня Bcl-2 может привести к возникновению устойчивости клеток к гибели. Считается, что Bcl-2 ингибирует апоптоз в клетках человеческого эндометрия во время фазы пролиферации. В исследовании было продемонстрировано увеличение экспрессии белка Bcl-2 в пролиферирующем эктопически расположенном эндометрии, полученном от женщин с эндометриозом, по сравнению со здоровыми женщинами из контрольной группы [17]. Однако в ходе других исследований экспрессия Bcl-2 в стромальных клетках эндометрия не различалась у женщин с аденомиозом и без него [16]. Эти результаты позволяют предположить, что снижение апоптоза стромальных клеток эндометрия при аденомиозе регулируется другими медиаторами.
Маркер Ki-67 экспрессируется только в ядрах пролиферирующих клеток, но не экспрессируется в клетках, находящихся в покое. Экспрессия Ki-67 в функциональном слое эндометрия сравнительно выше, чем в базальном слое, а иммунореактивность Ki-67 в стромальных клетках эндометрия является низкой в фазе пролиферации и увеличивается в секреторной фазе. Средний процент клеток, меченых по Ki-67, составляет 7,7% при аденомиозе, в то время как фракция Ki-67 положительных клеток в контрольной группе обычно ниже 2%. Хотя на сегодняшний день остается неизвестным, изменяется ли экспрессия Ki-67 до и после развития аденомиоза, повышение экспрессии Ki-67 может быть потенциальным индикатором аденомиоза; поэтому необходимо проведение дальнейших исследований для определения места этого показателя в прогнозировании развития и диагностике аденомиоза.
При аденомиозе также наблюдается снижение уровня экспрессии гена протеинкиназы С-е (PRKCE), который участвует в индукции апоптоза. Возникающие вследствие описанных выше процессов нарушения апоптоза, вероятно, вносят вклад в выживание клеток эндометрия в пределах миометрия, а также в возникновение гиперплазии миометрия при аденомиозе.
Обнаружено изменение экспрессии генов семейства факторов RAS и RASSF. В литературе широко описана роль онкогенных белков RAS в развитии
нарушений клеточного цикла и неконтролируемой клеточной пролиферации. Однако в настоящее время известно, что онкогенные белки RAS также могут оказывать влияние на процесс апоптоза и активность апоптотических молекул, включая BAD и BCL2 [6]. Следовательно, белки RAS также могут вносить вклад в патогенез аденомиоза, нарушая баланс факторов, регулирующих клеточный цикл, пролиферацию клеток и запрограммированную гибель клеток.
Каспаза-3 - ключевая протеаза, активируемая на ранней стадии апоптоза. В ходе исследования не было обнаружено различий по степени экспрессии каспазы-3 в эндометрии у женщин с аденомиозом и без него [12]. Эти результаты совпадают с ранее полученными данными о том, что в программируемой гибели клеток участвуют также не связанные с каспазами пути апоптоза.
Значение интегринов при эндометриозе.
В настоящее время исследователи значительное внимание уделяют изменениям экспрессии интегринов при эндометриозе, как в клетках эктопически расположенного эндометрия, так и в нормально расположенном эндометрии. С интегринами связывают возможный патогенез заболевания, а также причины снижения вероятности имплантации оплодотворенной яйцеклетки. Исследований изменения уровня экспрессии интегринов, как в очагах аденомиоза, так и в нормально расположенном эндометрии у женщин с аденомиозом не проводилось.
Интегрины, как известно, являются поверхностными рецепторами клетки. Большинство таких рецепторов функционально соединяют ее с внеклеточным матриксом (посредством соединения с коллагеном, фибронектином, ламинином, а также с фибриногеном и др.) и с другими клетками. К настоящему времени известно, что интегрины участвуют во многих клеточных процессах, включая имплантацию и эмбриональное развитие, рост и метастазирование опухолевых клеток, апоптоз, свертывание крови и перемещение клеток в зоны воспаления. Кроме этого, интегрины могут кооперировать с другими рецепторами своей клеточной поверхности (например, с PDGF) и тем самым влиять на пути передачи сигналов.
Клетки, полученные из очагов эндометриоза, отличаются от клеток здорового миометрия нарушением экспрессии интегринов и увеличением адгезионной способности и способности к пролиферации. Эти процессы проходят при участии определенных компонентов внеклеточного матрикса, таких как ламинин, коллаген 4 типа и гиалуронан, что предполагает участие определенных интегринов.
Ламинин-5 (Ln-5) - это молекула внеклеточного матрикса, которая обеспечивает статическую адгезию. Однако после расщепления под воздействием матриксных металлопротеаз, ламинин-5 ускоряет миграцию и инвазию. Экспрессия ламинина-5 обнаруживается при различных злокачественных опухолях, таких как опухоли толстой кишки, печени, шейки матки и др.
Ламинин-5, а также ее основной лиганд, интегриновый рецептор б3в1, участвуют в инвазивной активности клеток при эндометриозе. Это утверждение
основано на том, что при эндометриозе наблюдается изменение экспрессии Ln-5 в базальной мембране эндометриоидных кист и в железистом эндометрии; обе субъединицы интегрина б3в1 поляризуются измененным образом в железистом эпителии при эндометриозе. При этом исследователи не обнаружили изменений других компонентов внеклеточного матрикса, таких как ламинин-1 и коллаген 4 типа, а также соответствующих рецепторов-интегринов [6].
Изучение продукции различных факторов роста и определение роли цитокинов при аденомиозе способствует улучшению понимания причин возникновения и прогрессирования этого заболевания, а также позволяет наметить пути для совершенствования его диагностики и лечения. По результатам имеющихся на сегодняшний день исследований можно предположить, что в недалеком будущем некоторые гены могут стать не только маркерами, облегчающими диагностику заболевания, но и мишенями для лекарственной терапии аденомиоза, а также средствами его профилактики.
Факторы роста в патогенезе аденомиоза.
По данным литературы, в эндометрии человека обнаруживается экспрессия эпидермального фактора роста (EGF), фактора роста фибробластов-2 (FGF-2) и тромбоцитарного фактора роста-А (PDGF -А). Как EGF, так и PDGF оказывают на стромальные клетки эндометрия митогенный эффект, возможно, путем аутокринного и паракринного влияния на рост и дифференцировку клеток. В ходе исследования, проведенного Lee S. (2007), было обнаружено, что уровень экспрессии PDGF-A в течение секреторной фазы у пациенток с аденомиозом значительно ниже, чем в контрольной группе [11].
Фактор роста фибробластов. FGF-2 постоянно экспрессируется в человеческом эндометрии и, учитывая его митогенное и ангиогенное действие, скорее всего, участвует в изменениях эндометрия в течение менструального цикла.
В ходе исследования, проведенного Propst A.M. (2001), было показано значительное повышение экспрессии рецептора bFGF в железистых и стромальных элементах аденомиоза в сравнении с нормальным эндометрием здоровых женщин [15].
Эпидермальный фактор роста. EFG играет важную роль в синтезе ДНК, пролиферации клеток и митотическом делении эпидермальных тканей. EFG и его рецептор обнаруживаются в эктопически расположенных эндометриоидных тканях, а у пациенток с тяжелыми формами эндометриоза выявлено повышенное содержание EFG в перитонеальной жидкости. Недавно Hsieh Y.Y. (2005) сообщили о полиморфизме EFG (+2073 A/T) у пациенток с аденомиозом, причем у гомозигот Т наблюдался более высокий риск развития заболевания. Авторы предположили, что этот вид полиморфизма может влиять на развитие аденомиоза [9].
Фактор роста эндотелия сосудов. Установлено, что фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) представляет собой белок, который регулирует ангиогенез в эндометрии на локальном уровне.
Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о повышении уровня мРНК VEGF и соответствующего белка у женщин с аденомиозом, что
подтверждает предположение о ключевой роли этого фактора роста в патологическом ангиогенезе при аденомиозе [1].
Кроме того, у больных с аденомиозом обнаружено неадекватное увеличение содержания сосудисто-эндотелиального фактора роста по отношению к его ингибитору. Выявленный дисбаланс между увеличением активности проангиогенного и антиангиогенного факторов роста способствует усилению пролиферативной активности сосудов и росту эктопического эндометрия.
Трансформирующий фактор роста. Известно, что TGF-в - это многофункциональный цитокин, ингибирующий развитие популяций Th1, а также провоспалительный ответ. В ходе исследования, проведенного Hsieh Y.Y. (2005) было обнаружено, что аденомиоз связан с полиморфизмом TGF-в 1 (-509 Т/С). Так, наличие аллеля Т или гомозиготность по аллелю Т была связана с большей вероятностью развития аденомиоза. Однако реальная роль и механизм действия TGF-в 1 при аденомиозе остаются неясными [9].
Фактор роста гепатоцитов. Данные литературы свидетельствуют о том, что роль системы гепатоцитарного фактора роста (HGF) и его рецептора (c-met) заключается в участии в нормальной регенерации и дифференцировке эпителия, а также в подвижности и распространении клеток. Чем выше концентрация гепатоцитарного фактора роста и его рецептора, тем выше активность репарации, пролиферации и миграции эпителиальных и эндотелиальных клеток. В исследовании Соломахиной М.А. (2008) концентрация HGF в эндометрии женщин с аденомиозом была почти в два раза выше, чем в контрольной группе [2]. Возможно, высокая активность HGF/c-met отражает усиление пролиферации эндометрия в ответ на повреждение, например, при внутриматочных вмешательствах, что может явиться одним из звеньев патогенеза аденомиоза.
Цитокины в патогенезе аденомиоза.
Цитокины осуществляют регуляцию межклеточных и межсистемных взаимодействий, определяют выживаемость клеток, стимуляцию или ингибирование их роста, дифференцировку, функциональную активацию и апоптоз клеток. Оценка состояния цитокинового звена, как важнейшей характеристики иммунной системы, помогает глубже понять механизм патогенеза заболевания. Степень участия цитокинового каскада находится в прямой зависимости от стадии иммунного ответа, степени вовлеченности в него различных субпопуляций иммунокомпетентных клеток в данный отрезок времени, тяжести и распространенности патологического процесса.
Изменение иммунореактивности больных аденомиозом сопровождается значительными локальными изменениями цитокинового звена иммунитета и активацией продукции провоспалительных цитокинов на системном уровне.
По преимущественной направленности действия цитокины делятся на три группы: эффекторы и регуляторы воспалительных процессов, регуляторы антигенспецифического иммунного ответа и регуляторы гемопоэза иммунокомпетентных клеток.
Интерлейкин-1. ИЛ-1 в основном продуцируется моноцитами и макрофагами и является важным медиатором, играющим ключевую роль в иммунном ответе. Показана экспрессия ИЛ-1 эктопически расположенными клетками эндометрия и мезотелиальными клетками. Недавно было обнаружено,
что семейство молекул ИЛ-1 играет важную роль в нарушениях, связанных с эндометрием, в частности, при аденомиозе. ИЛ-1 обладает плейотропным действием и может повышать уровень ИЛ-6 и ФНО-альфа, важных цитокинов, которые являются прогностическими факторами прогрессирования аденомиоза [10]. ИЛ-1 б также является мощным стимулятором ферментов матриксных протеиназ в пролиферативной фазе. In vitro обнаруживается повышение секреции ИЛ-1 как в эктопически, так и нормально расположенных клетках эндометрия у женщин с эндометриозом
Интерлейкин-8. ИЛ-8 действует в эндометрии как аутокринный и паракринный фактор, регулируя многие физиологические процессы, включая менструацию и ремоделирование эндометрия. Кроме того, существует мнение, что ИЛ-8 также участвует в патогенезе эндометриоза, способствуя инициации «порочного цикла»: прикрепление клеток эндометрия, инвазия, уменьшение иммунной защиты и клеточный рост. Было продемонстрировано, что экспрессия ИЛ-8 эпителиальными клетками в очагах аденомиоза выше, чем в соответствующем нормально расположенном эндометрии [4].
Интерлейкин-10 (ИЛ-10) является одним из основных противовоспалительных цитокинов и играет роль в развитии хронических воспалительных заболеваний и рака. Экспрессия ИЛ-10 может вносить вклад в возникновение и поддержание иммуносупрессии и может объяснять нахождение эктопических очагов в брюшной полости или миометрии у женщин с эндометриозом. Кроме того, нормально расположенный миометрий может получить способность избегать иммунного контроля путем повышения экспрессии ИЛ-10, что приводит к инфильтрации в миометрий клеток эндометрия. На основании этой гипотезы можно предположить, что при инфильтрации эндометрия в миометрий ИЛ-10 повышает шансы на выживание эндометриальных клеток, избегая уничтожения их иммунной системой [5].
Интерлейкин-6 (ИЛ-6) провоспалительный цитокин; обладает ангиогенным и митогенным эффектами и выполняет важную роль в обеспечении репродуктивной функции, включая регуляцию продукции стероидных гормонов яичниками, фолликулогенеза и ранних событий, связанных с имплантацией. Изменение экспрессии ИЛ-6 стромальными клетками эндометрия может играть роль в формировании эктопически расположенных островков клеток эндометрия при аденомиозе [11].
Интерферон-гамма (ИФН-г) является продуктом активированных Т-лимфоцитов и НК-клеток; этот цитокин является мощным модулятором клеточного роста и дифференцировки, а также иммунной защиты. Было обнаружено, что стромальные клетки эндометрия, как нормально, так и эктопически расположенные, полученные от женщин с эндометриозом, экспрессируют на своей поверхности рецептор к ИФН-г. Однако добавление последнего к культурам этих клеток вызывало различный эффект. Было обнаружено, что эктопически расположенные клетки слабее реагируют на добавление этого цитокина, он не оказывает видимого влияния на их рост и процессы апоптоза, в то время как рост других клеток он тормозит [4]. Эти особенности эктопически расположенных стромальных клеток эндометрия
могут играть роль в развитии эндометриоза; однако, данных о роли ИФН-г при аденомиозе найдено не было.
Фактор некроза опухолей альфа (ФНО-б). ФНО-б является важным звеном в поддержании нормального гомеостаза в тканях эндометрия. При добавлении ФНО-б к культуре стромальных клеток эндометрия in vitro обнаруживается повышение продукции ИЛ-8, который действует как мощный аутокринный фактор роста, ускоряющий их пролиферацию [5]. Отмечено повышение содержания ФНО-б у больных аденомиозом, что характеризует цитотоксический потенциал мононуклеарных клеток крови. Таким образом, изучение роли цитокинов и факторов роста в патогенезе развития аденомиоза представляется перспективным и актуальным.
Поиск протеомных маркеров аденомиоза в сыворотке крови.
Привлекательность использования плазмы (сыворотки) крови для диагностики различных заболеваний человека обусловлена, главным образом, тем обстоятельством, что она наиболее полно представляет фенотип человека, его состояние в конкретный момент времени [2]. Еще одно немаловажное достоинство плазмы (сыворотки) крови - ее доступность, поскольку она является наиболее распространенным в медицинской практике первичным клиническим образцом.
Определив специфичные для аденомиоза белки в сыворотке крови, можно создать инновационные методы диагностики, прогнозирования и лечения этого заболевания, лучше понять механизм его развития, обосновать перспективы лечения.
Самый распространенный на сегодняшний день сывороточный маркер эндометриоза, применяемый в клинике - СА-125. Установлено, что концентрация СА-125 у больных эндометриозом в сыворотке крови повышается в лютеиновую фазу и во время менструации, а во время фолликулиновой фазы остается неизменной. У здоровых женщин таких циклических колебаний не наблюдается. Однако увеличение продукции этого высокомолекулярного гликопротеина и повышение его уровня в сыворотке крови может происходить также и при раке яичников, поджелудочной железы, легкого, желудочно-кишечного тракта [6]. Это нашло широкое применение в клинике для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей яичников. Однако низкая специфичность метода вызывает определенный скепсис в его дальнейшем распространении, что в полной мере относится и к аденомиозу.
Для поиска в сыворотке крови новых маркеров аденомиоза могут использоваться постгеномные методы анализа, среди которых ведущие позиции занимают протеомные технологии. Так, двухмерный электрофорез в полиакриламидном геле (2D-PAGE) используется для исследования молекул, вовлеченных в развитие аденомиоза. Исследования Zhang (2006) выявили наличие в сыворотке крови и эндометрии совершенно различную экспрессию одиннадцати белков [18].
В ходе проведенного Liu H (2007) исследования был проведен анализ дифференциальной экспрессии белков в аденомиотических тканях, которые
сравнивались с нормальными тканями матки. Анализ выполнялся с использованием комбинации 2D-PAGE, масс-спектрометрии и биоинформатики. В аденомиотической ткани отмечалась дисрегуляция двенадцати белков, десять из которых были успешно идентифицированы [13].
Существует предположение о том, что активные формы кислорода или свободные радикалы могут повышать скорость роста и адгезию клеток эндометрия. В ходе исследования Lui H и соавт. (2007) обнаружили повышение уровня белка в сыворотке крови (новый фермент пероксидазы человека - novel human peroxidase enzyme) у женщин с аденомиозом [13]. Эти результаты позволяют предположить немаловажную роль окислительного стресса в развитии и прогрессировании аденомиоза.
К сожалению, выявленные при аденомиозе изменения уровня экспрессии всех вышеперечисленных белков не являются высокоспецифичными по отношению к этому заболеванию, что не позволяет использовать их в качестве диагностических маркеров. Таким образом, выявление новых высокоспецифичных и чувствительных биомаркеров аденомиоза по прежнему остается актуальной задачей.
Наиболее перспективным подходом для ее решения на сегодняшний день является пептидно-белковое профилирование плазмы и сыворотки крови с использованием масс-спектрометрии. Существующие в настоящее время технологические ограничения не позволяют анализировать напрямую такие сложные белковые смеси, каковыми являются, например, протеомы плазмы или сыворотки крови, включающие в себя более 100000 белков с различиями в относительном содержании, перекрывающими диапазон в 10-12 порядков величин [3]. Для решения этой проблемы используются различные методы фракционирования, позволяющие выделять из сложной смеси белков и пептидов относительно узкие и воспроизводимые по составу фракции, которые в дальнейшем анализируют, используя методы масс-спектрометрии.
Одним из таких методов является времяпролетная масс-спектрометрия с усиливаемой поверхностью лазерной десорбцией-ионизацией (SELDI-TOF MS, surface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry) [14]. Суть этого метода заключается в использовании в качестве масс-спектрометрической мишени селективных поверхностей избирательно связывающих наборы белков на основе адсорбционных, электростатических или специфических аффинных взаимодействий. Фракционирование сложных смесей биологических молекул происходит прямо на поверхности масс-спектрометрической мишени, которую после процедуры связывания целевых веществ с поверхностью и отмывки от примесей помещают в масс-спектрометр для анализа. Масс-спектры образцов, полученных от группы пациентов с подтвержденным диагнозом исследуемого заболевания и контрольной группы людей, сравнивают между собой при помощи специализированного программного обеспечения с привлечением методов математической статистики. В литературе описаны примеры успешного применения этого метода для выявления различий между сывороткой крови здоровых людей и больных раком желудка, прямой кишки, простаты, гепатоклеточной карциномы, эндометрия или других видов онкологических заболеваний [13].
В последнее время активно используется другой метод выделения из сыворотки крови репрезентативных наборов пептидов при помощи высокопроизводительных, легко поддающихся автоматизации способов фракционирования на основе различных вариантов хроматографии с последующей регистрацией выделенных пептидов времяпролетной МАЛДИ масс-спектрометрией [7]. Эта технология обладает рядом преимуществ по отношению к SELDI. Во-первых, фракционирование на модифицированной поверхности масс-спектрометрической мишени SELDI менее чувствительно, чем фракционирование в объеме. Это свойство обусловлено значительно меньшей площадью поверхности плоской масс-спектрометрической мишени для SELDI, на которой происходит разделение (обогащение) образца. Во-вторых, разрешение и чувствительность масс-спектрометров для SELDI значительно уступают таковым современных MALDI масс-спектрометров, что накладывает дополнительные ограничения на высококачественный и чувствительный масс-спектрометрический анализ. Наконец, специфичность и селективность определения в сыворотке крови маркеров соответствующих заболеваний методом SELDI редко достигают 90% (как правило, эти значения находятся в диапазоне 80-85%), в то время как при фракционировании сыворотки крови на магнитных микрочастицах или микроколонках эти величины приближаются к 95-97% [7].
Теоретическая модель образования биомаркеров и их ассоциации с высокомолекулярными белками-носителями плазмы/сыворотки крови была предложена и экспериментально подтверждена ранее D.H. Geho [8]. В соответствии с этой моделью, пептиды, содержащиеся в плазме крови в исчезающе малых концентрациях (включая и потенциальные биомаркеры заболеваний), способны накапливаться и длительное время сохраняться в кровеносном русле благодаря их сорбции на основных белках крови (таких как альбумин, иммуноглобулины, тиреоглобулин).
В последние 2-3 года рядом исследователей были предложены методы поиска сывороточных биомаркеров различных заболеваний (рака яичников в том числе), основанные на выделении и идентификации связанных с альбумином пептидов [8]. Эти методы позволили выделить и идентифицировать в сыворотке крови значительное количество пептидов, ранее в ней не обнаруживавшихся. Однако созданные на их основе классификационные модели по значениям чувствительности и специфичности принципиально не отличались от разработанных ранее с использованием других методов фракционирования сыворотки крови.
Использование магнитных микрочастиц с возможно более широким спектром поверхностной функциональности при профилировании такого сложного объекта как сыворотка крови значительно увеличивает вероятность нахождения специфических биомаркеров конкретного заболевания. Кроме того, данный протокол фракционирования обеспечивает уменьшение влияния неизбежных в клинической практике вариаций в способах получения и хранения сыворотки крови на ее масс-спектрометрический профиль, что открывает перспективы использования в биомаркерных исследованиях образцов, хранящихся в существующих банках сывороток.
Необходимо отметить, что все работы по поиску новых биомаркеров заболеваний с использованием протеомных подходов пока не вышли за рамки
экспериментальных исследований. Внедрение этих методов в практическую медицину потребует значительных усилий по валидации найденных белков и пептидов на больших массивах клинических образцов, определения их специфичности по отношению к конкретным заболеваниям, а также их идентификации. Масс-спектрометрические методы исследования уже успешно применяются при многих заболеваниях. Можно надеяться, что эти методы найдут отражение и в диагностике аденомиоза.
Таким образом, разработка новых методов диагностики аденомиоза, основанных на современных высокотехнологичных методах (генетических, иммунологических, протеомных), позволит на доклинической стадии и в кратчайшие сроки устанавливать диагноз «аденомиоз», прогнозировать заболевание и проводить адекватное лечение.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Сидорова И.С., Унанян А.Л., Коган Е.А. и др. Неоангиогенез и экспрессия факторов роста в различных по клинической активности формах аденомиоза.//Тезисы Первого Международного конгресса по репродуктивной медицине.- 2006.-C. 86-87.
[2] Соломахина М.А., Горбачева Ю.В., Ромаданова Ю.А. Роль системы HGF/c-met в патогенезе аденомиоза. //ТЕЗИСЫ V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Москва- 2008- C.413-414.
[3] Anderson N. L.,Anderson N. G. Mol Cell Proteomics 2002.-№1.-Р. 845-867
[4] Arici A, Seli E, Senturk LM, Gutierrez LS et al. Interleukin-8 in the human endometrium.// J Clin Endocrinol Metab -1998.-№83-Р.1783-7.
[5] Beutler B. TNF, immunity and inflammatory disease: lessons of the past decade.//J Investig Med -1995-№43-Р.227-35.
[6] Bidart J. M., Thuillier, F, Augereau, et al. Clin Chem -1999.-№45.- Р.1695-1707.
[7] Ebert M. P., Niemeyer, D., Deininger, S. O.et al. J Proteome Res -2006.-№5.-Р. 2152-2158.
[8] Geho D. H., Liotta, L. A., Petricoin, et al. Curr Opin Chem Biol -2006.-№10.-Р. 50-55.
[9] Hsieh YY, Chang CC, Tsai FJ, et al. T homozygote and allele of epidermal growth factor receptor 2073 gene polymorphism are associated with higher susceptibility to endometriosis and leiomyomas.//Fertil Steril- 2005-№83-Р. 796-799.
[10] Koumantakis E, Matalliotakis I, Neonaki М, et al. Soluble serum interleukin-2 receptor, interleukin-6 and interleukin-1a in patients with endometriosis and in controls.//Arch Gynecol Obstet - 1994-№255- Р.107-12.
[11] Lee S., Kim S., Lee Y.,et al. Expression of epidermal growth factor, fibroblast growth factor-2, and platelet-derived growth factor-A in the eutopic endometrium of women with endometriosis //J. Obstet. Gynaecol,- 2007.- № 3-Р.242-247.
[12] Li J., Zhang, Z., Rosenzweig, J., Wang, Y. Y. Clin Chem-2002- №48-Р.25-28
[13] Liu H, Lang J, Zhou Q. Fertil Steril -2006- №87-Р. 988-990
[14] Merchant M., and Weinberger, S. R. Electrophoresis-2000-№21- Р.1164-1177
[15] Propst A.M., Quade B.J., Gargiulo A.R., Adenomyosis demonstrates increased expression of the basic fibroblast growth factor receptor/ligand system compared with autologous endometrium.//Menopause-2001-№ 5-Р. 368-371.
[16] Thomas K, Thomson A, Wood S,et al . Endometrial integrin expression in women undergoing in vitro fertilization and the association with subsequent treatment outcome.//Fertil Steril-2003-№80-Р.502-7.
[17] Woods D., Cherwinski H., Venetsanakos E. et all. Induction of в3 - Integrin Gene Expression by Activation of the Ras Regulated Raf-MEK-Extracellular Signal-Regulated Kinase Signaling Pathway.//Mol Cell Biol.-2001-№21-P.3192-3205.
[18] Zhang H, Niu YD, Feng J.// Fertil Steril-2006-№ 86-Р. 274-282.
MODERN VIEW ON PATHOGENESIS OF ADENOMIOSIS
A.V. Sorokina, G.Ph. Totchiev, L.R. Toktar
Department of Obstetrics and Gynecology with the course of Perinathology of Peoples' Friendship University of Russia
Mikluho-Maklaya st., 8, Medical Faculty, 117198, Moscow, Russia
Study of genetic and immunological mechanisms of the adenomiosis' pathogenesis allows to set ways for the improvement diagnostic and treatment. Using modern methods of peptides expression analysis in serum can detect early molecular changes before manifestation of the disease. Key words: adenomyosis.
