CC BY
306
УДК 616.98 ББК 53/57
СОВРЕМЕННЫЕ ДОСТИЖЕНИЯ В ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Л.Л. НИКУЛЬШИНА, ФГБОУВО ЮУГМУМинздрава России
e-mail: nika-ly@mail.ru Д.Д. ФОМЕНКОВА, ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России e-mail: dariffka95@mail.ru
Аннотация
В этой статье приведена информация о современных достижениях в диагностике ВИЧ-инфекции, дано подробное описание методов диагностики, их плюсы и минусы.
Ключевые слова: ВИЧ, СПИД, диагностика.
Актуальность. Первое прицельное знакомство студентов ЮУГМУ с ВИЧ-инфекцией начинается на втором году обучения (для учащихся по специальности "Лечебное дело"), либо на третьем (для обучающихся по специальности
"Педиатрия") на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и КЛД в рамках дисциплины "Иммунология". Изучается данная тема учащимися лечебного и педиатрического факультетов, как на практических занятиях, так и на лекционных [8]. Продолжительность практических занятий у студентов лечебного факультета -4 академических часа, педиатрического - 2. Длительность лекционного занятия в обоих случаях составляет 2 академических часа. К сожалению, вследствие нехватки времени, студенты, обучающиеся по специальности "Педиатрия" изучают данный вопрос в рамках темы "Иммунодефицитные состояния" совместно с первичными иммунодефицитами. Таким образом, уже на 2-3 курсе студенты-медики узнают подробную информацию о современных достижениях в диагностике ВИЧ-инфекции, применяемых методах диагностики, их плюсы и минусы [2, 5].
Тестирование на ВИЧ-инфекцию проводят для определения безопасности гемотрансфузий и трансплантаций, изучения динамики ВИЧ-инфекции и выявления больных с последующей поддерживающей терапией.
Диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя определение циркулирующих в крови антител, антигенов и иммунных комплексов,
а также культивирование вируса, выявление его генома и оценку функции клеточного звена иммунной системы, т.к. вирус поражает СБ4-клетки, ответственные за клеточный иммунитет. Основная роль принадлежит методам серологической диагностики, направленным на определение антител, а также антигенов возбудителя в крови или других биологических жидкостях организма.
Скрининг - предназначен для выполнения первичных исследований крови на наличие антител к белкам ВИЧ. Его проводят для обследования популяции на носительство вируса. Минус данного метода в том, что он легко может давать как
ложноположительные результаты, что не слишком приятно для нервной системы потенциального больного, так и ложноотрицательные, "пропуская"
зараженных людей. Зато данный этап хорошо подходит для обследования больших групп населения: на него нужны низкие затраты трудовых и бюджетных ресурсов.
Подтверждение полученного скринингово результата позволяет с помощью специальных методических приемов уточнить первичный положительный результат, полученный на предыдущем этапе. Но методы, применяемые на этом и следующем этапе затратные, поэтому их применяют только для обследования положительных результатов скринигово метода. Окончательная проверка наличия и специфичности маркеров ВИЧ-инфекции, выявленных на предыдущих этапах лабораторной диагностики.
Тесты, используемые в практике для выявления ВИЧ-инфицированных:
иммуноферментный анализ (ИФА), агглютинационные реакции - используются в скрининговом этапе, иммунный блоттинг (ИБ), полимеразная цепная реакция (ПЦР) для подтверждения или отклонения первоначального результата и определения количества антител (АТ) к бекам вируса [7].
Иммуноферментный анализ является основным и наиболее широко применяемым методом определения антител к ВИЧ. Берут планшет с лунками, куда вносят очищенный антиген (АГ) вируса иммунодефицита человека, добавляют сыворотку
исследуемого. Все это промывают и вносят "антитела к антителам" - иммуноглобулины животных-продуцентов против человеческих АТ, которые имеют прикрепленный к ним фермент - пероксидазу. Затем все снова промывают и добавляют цветовой индикатор на кислую среду, вырабатываемую пероксидазой. Если у исследуемого были АТ к ВИЧ, они связываются с АГ вируса и не смываются. Потом с этими иммунными комплексами связываются АТ к АТ и также не смываются. При добавлении индикатора, реагирующего на кислую среду, созданную пероксидазой, смесь окрашивается. По интенсивности окраски, которую проверяют в фотоколориметре, судят о количестве АТ
[3, 6].
ИФА часто дает ложноположительные результаты. Это связано с недостаточной очисткой иммуносорбента от балластных белков; спонтанным связыванием антител сыворотки с пластиком, если его участки, не занятые иммуносорбентом, недостаточно блокированы или не блокированы совсем специальным нейтральным белком; перекрестным взаимодействием с ВИЧ-белками иммуносорбента различных протеинов, присутствующих в крови лиц с определенными, чаще аутоиммунными патологическими процессами типа рассеянного склероза, системной красной волчанки, туберкулеза; с частым донорством, инфекционными и
онкозаболеваниями, ожогами,
беременностью, повторными
гемотрансфузиями, пересадкой органов, тканей, а также лиц, находящихся на гемодиализе; с присутствием в крови ревматоидного фактора, часто
провоцирующего ВИЧ-
ложноположительные реакции [3].
Окончательный диагноз инфицирования ВИЧ может устанавливаться только после получения положительного результата ИБ. Для его проведения применяется нитроцеллюлозная полоска, на которую нанесены вирусные белки. Забор крови для ИБ выполняется из вены. Затем она подвергается специальной обработке и содержащиеся в ее сыворотке белки (АТ к ВИЧ) разделяют в специальном геле по их заряду и молекулярной массе (манипуляция проводится на специальной аппаратуре под воздействием электрического поля). На гель из сыворотки крови накладывают нитроцеллюлозную полоску и проводят блоттинг ("промакивание") в специальной камере. Полоска обрабатывается и если в используемых материалах есть антитела к ВИЧ, то они связываются с антигенными полосами на ИБ и проявляются в виде линий. При отсутствии линий - ИБ является отрицательным [1].
При получении положительных результатов исследований на референтном этапе лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции и отрицательном результате исследования методом ИБ проводится обязательная повторная экспертная диагностика через 6 месяцев после первого обследования. Если результаты ИБ через 12 месяцев после исследования первой пробы остаются отрицательными или
неопределенными, то при отсутствии факторов риска, клинических симптомов или других факторов, связанных с ВИЧ-инфицированием, обследуемого снимают с диспансерного наблюдения.
Для определения вирусной нагрузки на плазму для решения вопроса начала медикаментозного лечения больного или смены антиретровирусных лекарственных препаратов используют ПЦР. Сначала для этой реакции подготавливают генетический материал для копирования. Это происходит при температуре 95°С, при нити ДНК разъединяются, и на них могут садиться "затравки", которые нужны для соединения с геномом вируса. Затем происходит объединение генетического материала возбудителя инфекции и "затравки" при температуре 75°С. После объединения идет копирование генетического материала при
72°С. К "затравкам" подходит фермент-"строитель" и синтезирует новую цепочку ДНК. С окончанием синтеза новой цепочки ДНК, заканчивается и цикл ПЦР За один цикл ПЦР, который длится 203 минуты, для образования достаточного количества генетического материала для
идентификации, обычно производится 30-50 циклов ПЦР, что занимает 2-3 часа и позволяет получить миллионы копий специфического участка вируса.
Чувствительность ПЦР - обнаружение вирусных генов в одной из пяти тысяч клеток. Минусы данной реакции в том, что даже самые ультрасовременные методы ее постановки и реактивы позволяют определить вирусную нагрузку не ниже определенного уровня - 50 копий/мл. Также сложность постановки ПЦР и ее дороговизна, большое количество времени
для постановки реакции не допускают использовать этот метод в повседневной лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции
[4].
При диагностике ВИЧ необходимо знать о периоде " темного лабораторного окна", когда количество антител против ВИЧ является недостаточным для
чувствительности тест-систем. Период этот колеблется от одной недели до трех месяцев от момента заражения ВИЧ в зависимости от уровня чувствительности тест-системы. Поэтому в большинстве стран мира введена система использования крови только после ее хранения на протяжении 3-6 месяцев с целью осуществления обязательного повторного обследования на ВИЧ-инфекцию доноров данных доз крови и ее компонентов
[9].
Список литературы
1. ВИЧ-инфекция и СПИД: Национальное руководство / под ред. В.В. Покровского. - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 608 с.
2. Долгушин И.И. ВИЧ-инфекция: этиология, патогенез, лабораторная диагностика: учебно-методическое пособие для студ. /И.И. Долгушин, О.А. Гизингер, Ю.С. Шишкова и др. - Челябинск, 2014. - 77 с.
3. Долгушин И.И. ИФА-диагнвстика в практике врача: учеб. пособие для студ. мед. ВУЗов / И.И. Долгушин, Л. Ф. Телешева, А.В. Зурочка и др. - Челябинчск: Челябинская государственная медицинская академия, 2003. - 68 с.
4. Долгушин И.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ее применение в диагностике инфекционных заболеваний: учеб. пособие для студ. / И.И. Долгушин, О.Л. Колесников, Л.Ф. Телешева. - Челябинск, 1999. - 10 с.
5. Девятьяров Б.Г. Вторичные иммунодефицитные состояния. Иммунология ВИЧ-инфекции. Синдром приобретенного иммунодефицита. - Челябинск, 2003. - 63 с.
6. Дмитриев Г.А. Диагностика инфекций, передаваемых половым путем/ Г.А. Дмитриев, И.И. Глазко. -Москва: Бином, 2007. - 320 с.
7. Либман Г. ВИЧ-инфекция: пер. с англ. /Г. Либман, X. Макадон. - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 560 с.
8. Мезенцева Е.А. Мультимедийные презентации как инновационный педагогический метод работы кафедры / Е.А. Мезенцева, М.В. Пешикова, А.Ю. Савочкина и др. // Оптимизация высшего медицинского и фармацевтического образования: менеджмент качества и инновации: II науч.-практ. конф.: сб. статей. -Челябинск, 2011. - с. 74-76.
9. Рахманова А.Г., Виноградова Е.Н., Воронин Е.Е., Яковлев А.А. ВИЧ-инфекция: клиника и лечение, химиопрофилактика передачи ВИЧ от матери к ребёнку. Диагностика и лечение ВИЧ-инфекции у детей: рекомендации для медицинской и социально-психологической службы: изд. 2, перераб. и доп. - Санкт-Петербург, 2005. - 112 с.
MODERN ADVANCES IN THE DIAGNOSIS OF HIV-INFECTION*
L.L. NIKULSHINA, SUSMU, СИе1уаЫтк, Russio
е-таИ: тка-1у@таИги D.D. FOMENKOVA, SUSMU, Ске1уаЫ^к, Russiu е-таИ: ёап//ка95@таИги
Abstract
This article provides information about the latest achievements in the diagnosis of HIV-infection, a detailed description of diagnostic methods, their advantages and disadvantages.
Keywords: HIV, AIDS, diQgnostics.
* Научный руководитель: к.м.н., ст.преп. Пешикова М.В.
