CC BY
1УДК 543.544.5.068.7
СОВМЕСТНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХЛОРОГЕНОВОЙ КИСЛОТЫ И ТАНИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(ВЭЖХ)
В.В. Заякин, Д.К. Лякишев
ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского»
Разработана методика совместного определения танина и хлорогеновой кислоты с помощью обратно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Разделение достигалось за счет ступенчатого градиента ацетонитрила и 0,1% раствора фосфорной кислоты в воде. В изократическом режиме разделение не происходило.
Ключевые слова: хлорогеновая кислота, танин, ВЭЖХ, градиентное элюирование.
Фенольные соединения (ФС) растений представлены широким спектром сотен веществ, объединяемых в несколько связанных по строению и происхождению групп. Они могут содержаться в растительном сырье в значительных количествах и выполняют различные физиологические функции. Они в значительной степени влияют на потребительские и технологические качества растительного сырья. В связи с этим существует необходимость проведения качественного и количественного анализа этих веществ.
В данной работе рассматривается проблема совместного определения танина и хлорогеновой кислоты. Хлорогеновая кислота в растительном сырье определяется методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [1,2]. Танин является сложной смесью веществ и обычно для его определения используют фотометрический метод [3,4].
Поэтому целью нашего исследования был подбор условий для совместного определения танина и хлорогеновой кислоты методом ВЭЖХ.
Определение танина и хлорогеновой кислоты проводилось на хроматографе Dionex Ultimate 3000 со спектрофотометрическим детектором на длине волны 285 нм. Разделение смеси танина и хлорогеновой кислоты происходило на обратно-фазовой колонке модели Thermos scientific 2,1x150 mm C18 3 цт. Acclaimtm 120 при скорости потока 0,3 мл/мин, температуре термостата колонок равной 30°С, с различным соотношением ацетонитрила, воды или 0,1% водного раствора фосфорной кислоты в подвижной фазе. Использовали стандартные растворы обоих веществ с концентрацией 1 мг/мл, полученные из коммерческих препаратов. Объем вводимой пробы составил 20 мкл.
Рис. 1. Хроматографическое разделение танина в изократическом режиме при 20% содержании ацетонитрила (A) и 40% ацетонитриле (B)
Определяли влияние концентрации ацетонитрила в изократическом и градиентном режимах на параметры хроматографического разделения танина и хлорогеновой кислоты (рис.1 и 2).
Рис. 2. Хроматографическое разделение хлорогеновой кислоты в изократическом режиме при 20% содержании ацетонитрила (А) и 40% ацетонитриле (В)
Из приведенных результатов можно сделать вывод, что хлорогеновая кислота и танин не будут разделяться при обоих концентраций ацетонитрила. Подкисление среды до рН=2 не позволило изменить время выхода компонентов и обеспечить их разделение в достаточной степени.
Наилучших результатов удалось достигнуть градиентным элюировании в следующем режиме: скорость потока - 0,3 мл/мин, длина волны - 285 нм. Подвижная фаза: 0 мин. - 0% ацетонитрила и 100% р-ра 0,1% фосфорной к-ты, 2 мин - 10% ацетонитрила и 90% р-ра 0,1% фосфорной к-ты, 7-25 мин. - 40% ацетонитрила и 60% р-ра 0,1% фосфорной к-ты (рис.3).
На данных хроматограммах видно, что разделение веществ значительно улучшилось и время выхода основных компонентов различается. Это делает возможным определение танина и хлорогеновой кислоты в смеси. Пример такого разделения показан на рисунке 4.
I иик1>|иии™мшми[|нш|||шеи лшржмившишмш 1.1
mAU
0.0 1 1 1 1.Ü I 2.0 3.0 4.0 1 1 1 6.0 6.0 7.0 8 0 Э.О 10.0 11.; 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18 0 1S.0
Рис. 4. Хроматографическое разделение хлорогеновой кислоты и танина в градиенте растворителя в подвижной фазе. Тонкой стрелкой показан основной пик хлорогеновой кислоты, а жирной стрелкой показан пик основной фракции танина
Таким образом удалось подобрать условия, которые позволили разделить вещества. Использованная длинна волны 285 нм дает возможность обеспечить достаточно высокую чувствительность обоих компонентов. Она близка к максимуму поглощения танина. Используемая в статьях [2] длинна волны 325 нм не позволяет с достаточной чувствительностью определять танин при их совместном присутствии.
Список литературы
1. Сафонова И.А., Яцюк В.Я. Изучение фенольных соединений листьев сливы колючей (Prunusspinosa L.) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Научные ведомости БелГУ. Серия Медицина. Фармация. - 2011. - № 4 (99). - Выпуск 13. -С. 165-169.
2. Белова Е.А., Тритэк В.С., Шульгау З.Т., Гуляев А.Е., Кривых Е.А., Коваленко Л.В., Дренин А.А., Ботиров Э.Х. Изучение фенольных соединений ягод трех видов растений рода Vaccinium, произрастающих в ханты-мансийском автономном округе // Химия растительного сырья. - 2020. - №1. - С. 107-116.
3. Тринеева О.В., Сливкин А.И. Разработка методики определения танина и галловой кислоты при совместном присутствиив лекарственном растительном сырье // Химико-фармацевтический журнал. - 2019. - Том 53, № 4. - С. 58-64.
4. Орлова А.А., Повыдыш М.Н. Обзор методов качественного и количественного анализа танинов в растительном сырье // Химия растительного сырья. - 2019. - №4. - С. 2945. - DOI: 10.14258/jcprm.2019045459.
Сведения об авторах
Заякин Владимир Васильевич - доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры химии ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского, e-mail: [email protected]
Лякишев Данила Константинович - студент кафедры химии ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского, e-mail: [email protected].
SIMULTANEOUS DETERMINATION OF CHLOROGENIC ACID AND TANNIN BY HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
V.V. Zayakin, D.K. Lyakishev
Bryansk State University named after Academician I.G. Petrovsky
A technique for the joint determination of tannin and chlorogenic acid using reverse-phase high-performance liquid chromatography has been developed. Separation was achieved due to a stepwise gradient of acetonitrile and 0.1% phosphoric acid solution in water. In the isocratic mode, separation did not occur. Keywords: chlorogenic acid, tannin, HPLC, gradient elution.
References
1. Safonova I.A., Yatsyuk V.Ya. Study of phenolic compounds in leaves of prickly plum (Prunusspinosa L.) using high-performance liquid chromatography // Scientific bulletins of BelSU. Medicine series. Pharmacy. - 2011. - No. 4 (99). - Issue 13. - pp. 165-169.
2. Belova E.A., Tritek V.S., Shulgau Z.T., Gulyaev A.E., Krivykh E.A., Kovalenko L.V., Drenin A.A., Botirov E.Kh. Study of phenolic compounds in berries of three species of plants of the genus Vaccinium growing in the Khanty-Mansi Autonomous Okrug // Chemistry of plant raw materials. - 2020. - No. 1. - pp. 107-116.
3. Trineeva O.V., Slivkin A.I. Development of a method for determining tannin and gallic acid in the joint presence of medicinal plant raw materials // Chemical-Pharmaceutical Journal. -2019. - Volume 53, No. 4. - P. 58-64.
4. Orlova A.A., Povydysh M.N. Review of methods for qualitative and quantitative analysis of tannins in plant raw materials // Chemistry of plant raw materials. - 2019. - No. 4. - pp. 29-45. -DOI: 10.14258/jcprm.2019045459.
Аbout authors
Zayakin V.V. - Sc. D. in Biological Sciences, Professor, Professor of the Department of Chemistry of the Bryansk State University named after Academician I.G. Petrovsky, e-mail: [email protected].
Lyakishev D.K. - student of the Department of Chemistry of the Bryansk State University named after Academician I.G. Petrovsky, e-mail: [email protected].
