CC BY
53
УДК 616.613-002.3-036.12-053.3/.5:612.017.1 Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009
Н. В. КОЛЕСНИКОВА, В. Л. КТЯНЦ
СОСТОЯНИЕ ВРОЖДЕННОГО И АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ОБОСТРЕНИИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА У ДЕТЕЙ
Кафедра клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики Кубанского государственного медицинского университета,
350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4. E-mail: troickaya@rambler.ru
Проведена оценка параметров врожденного и адаптивного иммунитета у детей с хроническим пиелонефритом в стадии обострения относительно данных практически здоровых детей. Выявлены достоверная недостаточность Т-лимфоцитов (преимущественно за счет CD3+CD4+ лимфоцитов), В-лимфоцитов (CD19+), увеличение содержания натуральных киллеров (CD16+CD56+). Достоверное снижение концентрации сывороточных IgA и IgM, сопровождалось возрастанием содержания IgG, ЦИК, IL1ß, а количественное увеличение активно-фагоцитирующих лейкоцитов - нарушением завершенности фагоцитарного акта за счет депрессии оксидазной биоцидности нейтрофилов. В целом получены данные о наличии вторичной иммунной недостаточности у детей с обострением хронического пиелонефрита, что обуславливает целесообразность сочетанной иммунотропной терапии данного заболевания.
Ключевые слова: хронический пиелонефрит, обострение, врожденный и адаптивный иммунитет, иммунодиагностика.
N. V. KOLESNIKOVA, V. L. KTYANTS
THE CONDITION OF CONGENITAL AND ADAPTIVE IMMUNITY AT THE AGGRAVATION OF THE CHRONIC PYELONEPHRITIS AT CHILDREN
Department of Faculty clinical immunology, allergology, and laboratory diagnostics, Kuban state medical university,
Krasnodar, 4 Sedina str. E-mail: troickaya@rambler.ru
In work are analyzed the results of parameters’ estimation of congenital and adaptive immunity at children with a chronic pyelonephritis in a stage of an aggravation in comparison with practically healthy children. Reliable quantitative insufficiency of T-lymphocytes (mainly due to CD3+CD4+lymphocytes), B-lymphocytes (CD19+), simultaneously with increase in the maintenance of natural killers (CD16+CD56+) is revealed. Authentic decrease in concentration of serous IgA and IgM, was accompanied by increase of maintenance IgG, CIC, ILip, and the quantitative increase of active-phagocytic leukocytes was accompanied by infringement of completeness phagocytic’s act due to oxydase biocidics’ depression of neutrophiles. As a whole obtained data about presence of secondary immune insufficiency at children with an aggravation of a chronic pyelonephritis also cause expediency of combined immunotherapy.
Key words: chronic pyelonephritis in a stage, congenital and adaptive immunity, immunodiagnostics.
Введение
Инфекции мочевой системы среди детей и подростков занимают второе место по распространенности после патологии органов дыхания, и в последние десятилетия эта задача усложнилась ввиду значительного патомор-фоза этих заболеваний: в 2-2,5 раза увеличилось число латентных и малосимптомных форм, реже наступают полная ремиссия и излечение пиелонефрита. У детей на долю первичного пиелонефрита, по разным данным, приходится от 15 до 30% всех случаев заболевания [10, 8]. Несмотря на многочисленность исследований по изучению иммунного статуса при пиелонефрите у детей [2, 3], до настоящего времени остаются нерешенными многие вопросы, а некоторые данные имеют весьма противоречивый характер [7, 2, 6, 9]. По-прежнему актуален вопрос о характере изменений иммунологических показателей в различные клинические фазы хронического пиелонефрита, что ставит разработку системы иммунологического мониторинга и выявление иммунологических критериев эффективности лечения хронического пиелонефрита в ряд актуальных проблем.
Целью исследования явилась углубленная оценка параметров врожденного и адаптивного звеньев иммунной системы у детей в активную фазу хронического пиелонефрита.
Материалы и методы
Обследованы дети основной клинической группы (105 человек) с диагнозом «хронический пиелонефрит в стадии обострения» в возрасте от 9 до 18 лет, а также практически здоровые дети того же возраста (контрольная группа). Материалом для исследования была периферическая кровь, взятая из локтевой вены, с гепарином (25 Ед/мл). Моно-нуклеарные клетки выделяли из периферической крови стандартным методом центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина. Определение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов оценивали методом проточной цитофлюорометрии («FacsCan», «Becton Dickinson») с использованием панели моноклональных антител производства «Becton Dickinson» (США). Определяли относительное (в процентах) и абсолютное (в 1 мкл крови) содержание субпопуляций лимфоцитов: Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD3+CD4+) и цитотоксических Т-клеток (CD3+CD8+), естественных киллерных клеток NK (CD16+CD56+), В-лимфоцитов (CD19+), а также отношение Т-хелперов к цитотокси-ческим Т-лимфоцитам (иммунорегуляторный индекс -ИРИ).Определение концентрации сывороточных IgG, IgM, IgA проводили методом радиальной имму-
Параметры клеточного иммунитета у детей в активную фазу хронического пиелонефрита (М±м,р)
Показатели Группа
Обострение ХП Контроль (здоровые дети)
Лейкоциты 5,93±0,17* 6,60±0,24
Лимфоциты, % 40,35±1,21* 42,00±0,96
Лимфоциты, абс. 2,32±0,15* 2,77±0,08
CD3+ % 55,25±1,47* 57,30±1,13
CD3+ абс. 1,29±0,08* 1,59±0,03
CD3+ CD4+ % 37,50±2,10* 45,50±2,04
CD3+CD4+ абс. 0,87±0,02* 1,26±0,03
CD3+CD8+ % 18,50±0,76* 21,2±0,39
CD3+CD8+ абс. 0,44±0,06 0,59±0,04
CD3+ CD4+/ ОТ3+ОТ8+ИРИ у. е. 2,05±0,04 2,13±0,05
CD19+ % 10,25±0,44* 12,5±0,29
CD19+ абс. 0,25±0,02* 0,35±0,03
CD16+CD56+ % 37,00±1,12* 15,5±0,09
CD16+CD56+ абс. 1,19±0,02* 0,43±0,03
Примечание: * - достоверность отличий от контроля, р <0,01.
нодиффузии по Манчини (1965), содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови - методом жидкостной преципитации 4%-ным ПЭГ-6000, концентрацию в сыворотке крови про-воспалительного (IL1в) и противовоспалительного (IL4) цитокинов - методом ИФА по диагностическим тест-системам ООО «ЦИТОКИН» (г. Санкт-Петербург). Для расчета цитокинового баланса использовали цитокиновый коэффициент (КЦ) как отношение IL1P/IL4. Оценка функциональной активности системы нейтрофильных гранулоцитов проводилась в соответствии с методическими рекомендациями [4]: определяли фагоцитарную активность и переваривающую способность по отношению к антигену (суточная культура St. aureus, штамм № 209) с оценкой общего числа активно-фагоцитирующих клеток (%ФАН), поглотительной (ФЧ, ФИ) и переваривающей способности (%П, ИП). Микробицидную кислородзави-симую систему НГ оценивали с помощью спонтанного и стимулированного NBT-теста с расчетом следующих показателей: относительного содержания формазан-позитивных клеток (%ФПК), среднего цитохимического индекса (СЦИ) и коэффициента мобилизации как отношения %ФПК в стимулированном NBT-тесте к таковому в спонтанном. Для расчета статистических показателей использовались программы «Microsoft Excel» и пакет прикладных программ «STATISTICA 6.0».
Результаты исследования
Исследование состояния клеточного иммунитета у детей с хроническим пиелонефритом в стадии обострения показало снижение не только общего числа лейкоцитов периферической крови (в 1,1 раза), но и общей доли лимфоцитов среди них (на 15%) по сравнению с таковыми у практически здоровых детей (табл. 1). Снижение общего числа лимфоцитов происходит за счет снижения Т- (CD3+) и В- (CD19+) лимфоцитов, в то время как относительное и абсо-
лютное содержание натуральных киллеров (CD16- и CD56-позитивных N^1^^™^, опосредующих клеточную защиту врожденного иммунитета, было достоверно выше таковых в контрольной группе (в 2,5 раза). Имело место количественное уменьшение регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов: содержание Т-хелперов/индукторов (CD3+CD4+) было ниже таковых в контроле в среднем 1,4 раза, а Т-супрес-соров/цитотоксических (CD3+CD8+) - в 1,2 раза, что свидетельствовало о более выраженном снижении CD3+CD4+-лимфоцитов. Несмотря на отсутствие достоверных отличий ИРИ в сравниваемых группах, при обострении хронического пиелонефрита намечалась отчетливая тенденция к его снижению, более выраженная при использовании для расчета абсолютных значений показателей.
При оценке концентрации сывороточных 1дА, 1дМ, 1дС было показано достоверное снижение содержания в периферической крови 1дА и 1дМ (в среднем в 1,1 раза), тогда как содержание 1дС достоверно превышало контрольный уровень - на 15% (табл. 2). При этом также было отмечено достоверное возрастание ЦИК (р<0,01).
По сравнению с практически здоровыми детьми у детей с хроническим пиелонефритом в активную фазу процесса имело место значительное возрастание концентрации провоспалительного 11_1р (в 3,5 раза), в то время как содержание противовоспалительного 11_4 оставалось в пределах возрастной нормы с незначительной тенденцией к возрастанию (табл. 2).
Цитокиновый индекс (11_1р/11_4) достоверно превышал таковой в контроле, свидетельствовал о сдвиге баланса цитокинов в сторону провоспали-тельных и коррелировал с клинической тяжестью пациентов.
Количественная оценка содержания НГ в периферической крови детей в активную фазу хронического пиелонефрита позволила установить достоверное
Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009
Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009
Параметры гуморального иммунитета у детей в активную фазу хронического пиелонефрита (М±м, р)
Показатели Группа
Обострение ХП Контроль (здоровые дети)
IgM, г/л 1,14±0,07* 1,31±0,04
IgG, г/л 14,21±0,94* 12,57±1,01
IgA, г/л 1,44±0,03* 1,53±0,04
ЦИК 29,21±2,02* 19,30±1,12
IL4 (пкг/мл) 53,26±1,12 50,80±4,70
IL1P (пкг/мл) 111,07±3,24* 34,00±2,50
ILip/ IL4, у. е. 2,35±0,31* 0,69±0,09
Примечание: * - достоверность отличий от контроля, р<0,01.
Таблица 3
Параметры функционирования системы нейтрофильных гранулоцитов у детей в активную фазу хронического пиелонефрита (М±м,р)
Показатели Группа
Обострение ХП Контроль (здоровые дети)
Лейкоциты 5,93±0,17* 6,60±0,24
НГ, % 50,97±2,23* 45,37±1,17
НГ, абс. 3,05±0,17* 2,67±0,11
%ФАН, % 58,18±1,95* 46,30±1,18
ФАН, абс. 1,77±0,03* 1,24±0,04
ФЧ, у. е. 5,29±1,10 4,42±0,86
ФИ, у. е. 2,95±0,16 2,78±0,79
%П, % 48,77±2,28* 57,3±2,21
ИП, у. е. 0,56±0,12* 1,96±0,19
%ФПК сп., % 4,71±0,25* 7,00±1,00
%ФПК ст., % 3,99±1,21* 9,98±2,32
СЦИ сп., у. е. 0,56±0,02 * 0,38±0,04
СЦИ ст., у. е. 0,61±0,04* 0,56±0,06
КМ, у. е. 0,85±0,04* 1,44±0,03
Примечание: * - достоверность отличий от контроля, р<0,01.
увеличение как относительного, так и абсолютного их содержания в среднем в 1,12 раза относительно таковых показателей у здоровых детей (табл. 3).
Среди циркулирующих НГ достоверно возросла доля активно-фагоцитирующих клеток (%ФАН), но оценка этапов фагоцитарного акта выявила его незавершенность, оцениваемую по снижению процента (%П) и индекса переваривания (ИП) бактериального антигена в 2,3 раза. При этом поглотительная способность клеток (ФЧ, ФИ) оставалась в пределах возрастной нормы.
Установлено, что в активную фазу хронического пиелонефрита у детей имела место значительная депрессия показателей оксидазной биоцидности НГ, наиболее выраженная при дополнительной антигенной нагрузке in vitro (табл. 3). При этом коэффициент моби-
лизации оксидазной биоцидности фагоцитов снижался с 1,44±0,03 до 0,85±0,04 (р<0,01). Таким образом, оценка различных звеньев иммунного статуса детей с обострением хронического пиелонефрита позволяет говорить о наличии у всех больных детей признаков вторичной иммунной недостаточности, способной приводить к утяжелению заболевания, длительному персистированию микроорганизмов в почках, инфицированию слабопатогенными ауто- и экзобактериями, вызывающими вялотекущий воспалительный процесс.
Обсуждение
Выявленный характер изменений показателей клеточного звена иммунитета соответствует литературным сведениям о том, что в структуре изменений
иммунной системы при хронической почечной недостаточности доминирует клеточный иммунодефицит. Однако если типичной для хронического пиелонефрита является количественная депрессия клеток с фенотипом CD16+CD56+, CD3+CD16+ [2], то маркером активной фазы хронического пиелонефрита у детей следует считать обнаруженное нами увеличение абсолютного и относительного содержания NK-лимфоцитов (CD16+CD56+). Известные данные о повышенной чувствительности В-клеток больных пиелонефритом к Т-супрессивным воздействиям [3], а также полученные нами факты о снижении концентрации 1дА и 1дМ у детей с обострением хронического пиелонефрита не позволяют выявить признаки системной гиперактивации В-звена иммунитета. Обнаруженное снижение 1дМ в клинической группе детей может свидетельствовать о наличии дефицита иммуноглобулинов первичного ответа [1], а снижение концентрации 1дА можно связать с высокой частотой респираторной инфекции (в 35% случаев) у обследуемых детей клинической группы. Повышение уровня ЦИК и концентрации 1дС указывает на возможную персистенцию антигенов в организме и повышенную антигенную стимуляцию и соответствует данным литературы о сохранении высоких уровней ЦИК даже в стадии клинической ремиссии заболевания [5, 12]. Одновременное возрастание 11_1р и ЦИК в периферической крови детей с обострением хронического пиелонефрита может быть обусловлено известной способностью ЦИК индуцировать секрецию провоспа-лительных цитокинов моноцитарно-макрофагальными клетками [11].
Наблюдаемое нами увеличение количества активно фагоцитирующих клеток, с одной стороны, и обнаруживаемая их функциональная недостаточность, с другой, можно считать достоверными и диагностически значимыми маркерами обострения хронического пиелонефрита у детей.
Результаты проведенного исследования не только определяют степень иммунных нарушений при обострении хронического пиелонефрита у детей, но и обуславливают целесообразность включения в их комплексную терапию элементов иммунотропной терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Быковский В. А, Зарубина С. А., Ольхова Е. Б. Эхографическая оценка фаз патоморфогенеза острого пиелонефрита // Мат. 1-го конгресса «Современные методы диагностики и лечения нефроурологических заболеваний у детей». - М., 1998. - С. 70.
2. Кляшева М. Н., Ваганова Д. Р. Комплексная оценка иммунного статуса больных хроническим пиелонефритом // Мат. межрегиональной научно-практ. конференции «Здоровье молодежи на рубеже XXI века». - Уфа, 2000. - С. 13-14.
3. Литвинов В., Черепахина Н, Санаев А. и соавт. Хронический пиелонефрит: особенности иммунопатогенеза и принципы клинической иммунодиагностики // Врач. - 2008. - № 1. - С. 12-17.
4. Нестерова И. В., Колесникова Н. В., Чудилова Г. А. Комплексное трехуровневое исследование системы нейтрофильных грануло-цитов с возможной диагностикой иммунодефицитных состояний при различной патологии. Методич. рекомендации, МЗРФ, № 96/11. - М., 1996. - 25 с.
5. Пекарева Н. А, Чупрова А. В., Горьенко О. М. и соавт. Им-мунопатогенетические особенности хронического пиелонефрита в стадии клинической ремиссии у детей // Проблемы клинической медицины. - 2006. - № 3 (7). - С. 110-113.
6. Приходько В. С., Яловчук А. В. Значение исследования активности нейтрофилов в обосновании патогенетической терапии детей, больных пиелонефритом // Тез. 4-го межд.конгресса «Иммунореабилитация в медицине» / 1п1 Joum. оп 1ттипоге11аЬ. - 1998. - № 8. - Р. 71.
7. Прищепова Е. В., Остапенко С. М., Остапенко В. А, Чеге-рова Т. И. Иммуноморфологические аспекты применения энтеросорбции в комплексном лечении пиелонефритов у детей // Эфферентная терапия. - 2000. - Т. 6. № 3. - С. 70-76.
8. Румянцев А. Ш., Гончарова Н. С. Этиология и патогенез пиелонефрита // Нефрология. - 2000. - Т. 4. № 3. - С. 40-52.
9. Смирнова Н. Н. Иммунорегуляторы в терапии хронического пиелонефрита у детей и подростков. - М., 2005. - 65 с.
10. Тиктинский О. Л., Калинина С. Н. Пиелонефриты. - СПб: МАПО Медиа Пресс СПб, 1996. - 256 с.
11. Фрейдлин И. С., Кузнецова С. А. Иммунные комплексы и ци-токины // Медицинская иммунология. - 1999. - Т. 1. № 4. - С. 27-36.
12. Чулкова Е. Л. Циркулирующие иммунные комплексы в крови и моче при пиелонефрите у детей раннего возраста // Рос. пед. журнал. - 2001. - № 6. - С. 14-15.
Поступила 17.04.2009
В. И. КОЧКАРОВ
ЭНДОТЕЛИО- И КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ СОЧЕТАНИЙ РЕЗВЕРАТРОЛА С ОСНОВНЫМИ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ
Кафедра фармацевтической химии и фармакогнозии ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет Федерального агентства образования», Россия, 308015, г. Белгород ул. Победы, 85. E-mail: vla-kochkarov@yandex.ru
У лабораторных животных при моделировании дефицита оксида азота введением ингибитора NO-синтазы Ь^АМЕ изучались функциональные и биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции: коэффициент эндотелиальной дисфункции, миокардиальные нагрузочные пробы (адренореактивность, нагрузка сопротивлением), содержание нитрит-ионов сыворотки крови, экспрессию эндотелиальной NO-синтазы. Выявлена активизация эндотелио- и кардиопротективных эффектов эналаприла, лозартана, амлодипина, индапамида и небиволола при сочетанном их введении с резвератролом.
Ключевые слова: эндотелиальная дисфункция, резвератрол, антигипертензивные препараты.
Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009 УДК 611-018.74:615.256
