CC BY
55
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Журнал ГрГМУ 2011 № 1
УДК: 616.61-092:616.361-089
СОСТОЯНИЕ ТКАНЕВОГО ГОМЕОСТАЗА ПОЧЕЧНОЙ ПАРЕНХИМЫ ЧЕРЕЗ 72 ЧАСА ОТ НАЧАЛА МОДЕЛИРОВАНИЯ ВНЕПЕЧЕНОЧНОГО
ОБТУРАЦИОННОГО ХОЛЕСТАЗА
Л.С. Кизюкевич', к.м.н, доцент; О.Е. Кузнецов2, к.б.н.; И.Э. Гуляй, к.б.н. 1 - УО «Гродненский государственный медицинский университет» 2 - УЗ «Гродненская областная клиническая больница»
Эксперимент выполнен на 68 беспородных белых крысах-самцах, массой 250±50 г. В комплексе гистологических, гистохимических и биохимических методов исследований установлено, что 72-часовая перевязка общего желчного протока сопровождается значительным увеличением в сыворотке крови концентрации биологически активных компонентов желчи (желчных кислот, билирубина), общих липидов, холестерина, активности АЛТ и АСТ. При этом почти в 40 раз увеличивается концентрация общих желчных кислот в моче. В гомогенатах почек опытных крыс активизируются процессы ПОЛ: возрастает содержание малонового диальдегида, уровень диеновых коньюгатов и активность каталазы, снижается концентрация а-токоферола. Основные структурно-метаболические нарушения в почечной паренхиме наблюдаются со стороны эпителиальных клеток проксимальных канальцев нефронов: увеличивается их высота и уменьшается объем ядер, отмечается дезорганизация микроворсинок щеточной каемки. На апикальной поверхности эпителиоцитов и в просвете проксимальных канальцев возрастает активность маркерного фермента микроворсинок щеточной каемки - ЩФ. Появляются признаки почечной недостаточности: полиурия, глюкозурия, уменьшение рН и удельного веса мочи, снижение концентрации ионов натрия в моче, повышение концентрации мочевины в сыворотке крови, уменьшение ее min клиренса.
Ключевые слова: холестаз, желчь, желчные кислоты, гомеостаз, нефрон, почки.
The experiment was carried out on 68 outbread white male rats weighing 250 ±50 g. Complex employment of histological, histochemical and biochemical methods of investigation showed that a 72-hour ligation of the common bile duct was accompanied by a marked increase in concentration of biologically active bile constituents (bile acids, bilirubin), common lipids, cholesterol in blood serum, as well as by the increase in alanine-aminotransferase (GPT) and aspartate aminotransferase (GOT) activity. At the same time there was a 40-fold increase in the concentration of common bile acids in urine. The processes of lipid peroxidation were activated in renal homogenates of the experimental rats: the level of malondialdehyde and diene conjugates as well as catalase activity increased, but the concentration of а-tocopherol decreased. Major structural changes and metabolic disorders of renal parenchyma were observed in epithelial cells lining proximal tubules of nephrons: their height increased and the size of their nuclei decreased, there was disorganization of brush border microvilli. Activity of the marker enzyme for the brush border microvilli -alkaline phosphatase- rose on the apical surface of epithelial cells and in the lumen ofproximal tubules. Signs of renal failure appeared: polyuria, glycosuria, decreased pH and urine specific gravity, reduced concentration of sodium ions in urine, elevated concentration of blood urea and reduced minimum urea clearance.
Key words: cholestasis, bile, bile acids, homeostasis, nephron, kidneys.
Введение
Непроходимость желчных путей и последующее нарушение оттока желчи приводит к развитию такого грозного осложнения, как механической желтухи, составляющей в среднем 50% от всех видов желтух [11]. Данный вид желтухи является одним из основных и наиболее серьезных осложнений заболеваний органов гепатопанк-реатодуоденальной зоны, частота тяжелых последствий и летальность при ней остаются высокими, что в значительной мере обусловлено развивающейся интоксикацией [21]. В условиях, когда возрастает количество желчных кислот и билирубина в крови, разные тканевые барьеры по-разному проницаемы для данных биологически активных веществ. При этом большое их количество проникает в межклеточную жидкость тех паренхиматозных органов, которые способны к активной резорбции [1-5, 15]. Все это может приводить к различным висцеральным синдромам, в том числе поражению почек [7]. Несмотря на то, что почечные дисфункции при механической желтухе хорошо известны, они, однако, остаются постоянной проблемой в гепатобилиарной практике [24]. Почечный синдром при болезнях пищеварительной системы протекает скрыто и обычно трудно диагностируется, что, несомненно, делает актуальным изучение проблемы сочетанной патологии [8]. Проблема изучения закономерностей структурной организации и регуляции
систем жизнеобеспечения в условиях здоровья и при развитии патологического процесса имеет ключевое значение в современной биологии и медицине. В этом случае на первый план должны выступать поиск, выявление и изучение динамики состояния ключевых звеньев гоме-остаза целостного организма в порочном развитии от здоровья к пред болезни и, соответственно, болезни [18].
Цель работы - дать комплексную оценку структурно-функциональным нарушениям, развивающимся со стороны почечной паренхимы через 72 часа от начала моделирования экспериментального обтурационного подпеченочного холестаза.
Материалы и методы
В работе использован материал от 68 беспородных белых крыс-самцов, массой 250±50 г. У опытных животных (38 крыс) под эфирным наркозом моделировали 72-часовой обтурационный подпеченочный холестаз путем перевязки и последующего пересечения общего желчного протока (ОЖП) между двумя шелковыми лигатурами в области ворот печени - на расстоянии 0,5 см от места слияния долевых печеночных протоков. При постановке эксперимента всем опытным животным с целью исключения влияния операционного стресса на развитие функциональных и биохимических нарушений со стороны внутренних органов и систем организма ста-
вился адекватный контроль [16]. У всех крыс контрольной группы производилась ложная операция - ОЖП оставался интактным. Оперированные животные содержались в клетках со свободным доступом к воде и пище. За сутки до окончания эксперимента (через 48 часов) опытных и контрольных крыс помещали в отдельные метаболические клетки для сбора мочи.
Применяя общепринятые биохимические методики [6, 9] и используя биохимический микроанализатор Architect С 8000, производства Abbott Laboratories (США) и Biological alkali micro - analyzer, type: OP- 266/1 (Radelkis), в суточном объеме мочи определяли концентрацию общих желчных кислот, уробилина, общего билирубина, содержание белка и глюкозы, удельный вес, рН, концентрацию и суточную экскрецию мочевины и ионов натрия и калия. В сыворотке крови по окончании эксперимента определяли концентрацию общих желчных кислот, общего билирубина, мочевины, электролитов (ионов Na+ и K+), холестерина, общих липидов, активность щелочной фосфатазы, АЛТ, АСТ, ЛДГ и у-ГТП. На основе полученных данных рассчитывали минимальный клиренс мочевины и ее концентрационный индекс (U/P) [12-13, 22]. По количеству собранной мочи и результатам биохимических исследований сыворотки крови и мочи оценивали степень нарушения функции почек - ведь только комплексный анализ биохимических показателей может способствовать ранней диагностике острой почечной недостаточности [19]. В конце опытного срока после предварительного эфирного наркоза животных забивали де-капитацией. Кусочки ткани почки фиксировали в охлажденном ацетоне и жидкости Карнуа, после чего заключали в парафин. В парафиновых срезах изучали активность ЩФ по G. Gomori (1950), содержание РНП по Эйнарсону и гликопротеинов по Шабадашу [23]. В приготовленных гистологических препаратах с помощью окуляр-микрометра проводили морфометрические исследования канальцев нефрона. Для цитохимического анализа кусочки ткани почки, содержащие корковое и мозговое вещество, тотчас после забоя животных помещали в жидкий азот. В криостатных срезах свежезамороженного материала в эпителиоцитах различных отделов канальцевого аппарата нефронов гистохимическими методами изучали активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) по M. Nachlas et al. (1957), дегидрогеназы восстановленного НАД (НАДН-ДГ) по M.Nachlas et al. (1958), лактатдегид-рогеназы (ЛДГ) по R. Hess et al. (1958) и кислой фосфатазы (КФ) по G. Gomori (1950) [23]. Количественную оценку активности продуктов реакции проводили с помощью компьютерной программы Bioscan NT 2.0 и выражали в единицах оптической плотности (ед.о.п. х 103). В гомоге-натах почек определялись продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ) - диеновые коньюгаты [14], малоновый диальдегид [17] и факторы антиоксидантной защиты - активность каталазы [10] и концентрация а-токо-ферола [20].
Для электронномикроскопических исследований кусочки ткани коркового вещества почечной паренхимы (2-3 мм2) фиксировали при комнатной температуре в 1% растворе OsO4 на 0,05 М какодилатном буфере (рН = 7,2). Материал дегидрировали в нескольких порциях этилового спирта возрастающей концентрации и абсолютном ацетоне, после чего заливали в аралдит. Срезы контрастировали 2% раствором уранилацетата и цитратом свинца [25], после чего просматривали в электронном микроскопе JEM-100 CX II фирмы "JROL" (Япония).
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием программных пакетов
Statistica 8.0 (StatSoft Inc.) и Prism 5 for Windows (GraphPad Software Inc.). Для обработки данных использовался двусторонний непарный t-критерий Стьюдента в случае нормального распределения данных в выборке и равенства дисперсий выборок. В случае отклонения распределения данных в выборке от нормального использовали двусторонний непарный U-критерий Манна-Уитни. Результаты считались достоверными при значениях Р <0,05, когда вероятность различий была больше или равна 95%. Данные в таблицах представлены в виде M±m, где M - среднее значение, m - стандартная ошибка среднего.
Результаты и их обсуждение
Результаты исследований показали, что на протяжении 72 часов подпеченочного холестаза погибает 10,5% животных. У выживших опытных крыс спустя 72 часа эксперимента в сыворотке крови в 56 раз увеличивается концентрация общих желчных кислот и почти в 18 раз -концентрация общего билирубина, достоверно возрастает активность у-ГТП, АЛТ, АСТ, содержание мочевины, холестерина и общих липидов, при этом активность ЩФ и концентрация электролитов (натрия и калия) остаются в пределах нормы (таблица 1).
Таблица 1 - Биохимические показатели сыворотки крови крыс через 72 часа от начала моделирования экспериментального обтурационного подпеченочного холестаза (M±m)
Показатели Контрольные животные Опытные животные
Общие желчные кислоты (мкмоль/л) 14,1±1,8 797,7±72,4***
Общий билирубин (мкмоль/л) 9,30±0,56 166,20±9,87***
Холестерин (ммоль/л) 2,36±0,10 7,70±0,56***
Общие липиды (г/л) 3,61±0,29 11,67±0,77***
Мочевина (ммоль/л) 4,57±0,23 7,61± 0,98***
АЛТ (и/Ц 48,45±2,77 641,5±84,56***
АСТ (и/Ц) 311,7±11,59 983,7±93,07***
ЛДГ (и/Ц) 2224,8±179,9 2126,4±136,5
у-ГТП (ммоль/(ч-л) 0,85±0,10 2,30±0,07***
ЩФ (и/Ц) (Ед/л) 515,10±69,28 463,20±34,64
Концентрация № + (ммоль/л) 146,30±2,17 146,80±1,89
Концентрация К + (ммоль/л) 4,56±0,14 4,66±0,26
Примечание: *показатель достоверности Р < 0,05; **показатель достоверности Р < 0,01; *** показатель достоверности Р < 0,001
На этом фоне наблюдаются заметные изменения со стороны экскреторной функции почек - диурез возрастает почти в два раза, более чем в 40 раз повышается в моче концентрация общих желчных кислот, на 50% увеличивается концентрация глюкозы, достоверно уменьшается концентрация уробилина, ионов натрия, рН мочи и ее удельный вес, на 56,4% возрастает суточная экскреция мочевины, при этом концентрация мочевины, электролитов (ионов калия) и суточная экскреция электролитов (№+ и К+) практически не отличаются от контрольных величин (таблица 2). До 58,3%, относительно контроля, снижается минимальный клиренс мочевины.
В гомогенатах почек опытных животных активируются процессы перекисного окисления липидов - в 2,8 раза увеличивается активность каталазы (Р < 0,001), достоверно возрастает уровень диеновых коньюгатов и содержание малонового диальдегида, при этом снижается концентрация а-токоферола (таблица 3).
Гистологические исследования почек животных с холестазом показали, что здесь по сравнению с контролем в проксимальных канальцах корковых и юкстамедул-лярных нефронов достоверно увеличивается высота выстилающих их эпителиоцитов, приводя при этом к уменьшению просвета канальцев (особенно это заметно в корковых нефронах на фоне даже незначительного умень-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Журнал ТрТМУ 2011 № 1
Таблица 2 - Показатели экскреторной функции почек крыс через 72 часа от начала моделирования экспериментального обтурацион-ного подпеченочного холестаза (M±m)
Показатели Контрольные животные Опытные животные
Диурез (мл) 8,5±1,4 16,1±2,0**
Общие желчные кислоты (мкмоль/л) 11,9±2,0 488,8±54,3***
Уробилин (мкмоль/л) 0,57±0,09 0,27±0,09*
Общий билирубин (мкмоль/л) 0,73±0,14 0,47±0,21
Уд. вес 1,026±0,002 1,015±0,002***
рн 6,3±0,1 5,5±0,2***
Глюкоза (ммоль/л) 0,6±0,1 0,9±0,1*
Концентрация мочевины (ммоль/л) 389,20±35,14 385,30±48,93
Концентрация ионов натрия (ммоль/л) 159,10±11,63 117,60±12,38*
Концентрация ионов калия (ммоль/л) 49,56±4,91 47,76±5,81
Суточная экскреция мочевины (ммоль/сут) 2,64±0,28 4,13±0,70*
Суточная экскреция ионов натрия (ммоль/сут) 1,78±0,13 1,34±0,20
Суточная экскреция ионов калия (ммоль/сут) 0,36±0,04 0,51±0,07
Примечание: *показатель достоверности Р < 0,05; **показатель достоверности Р < 0,01; *** показатель достоверности Р < 0,001
Таблица 3 - Показатели перекисного окисления липидов в почках крыс через 72 часа от начала моделирования экспериментального обтурационного подпеченочного холестаза (M±m)
Показатели Контрольные животные Опытные животные
Диеновые конъюгаты (Ед/г ткани) 9,84±0.49 15,92±1.13***
Малоновый диальдегид (мкмоль/г ткани) 15,81±0.20 19,26±0.54***
а-токоферол (мкмоль/г ткани) 30,95±0.80 25,55±0.88***
Примечание: *показатель достоверности Р < 0,05; **показатель достоверности Р < 0,01; *** показатель достоверности Р < 0,001
шения диаметра канальцев). Увеличение высоты эпите-лиоцитов проксимальных извитых канальцев корковых нефронов происходит параллельно с уменьшением объема их ядер. Объем ядер в эпителиоцитах дистальных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов увеличивается. Других заметных морфометрических изменений в канальцевом аппарате корковых и юкстамедуллярных нефронов опытных животных, относительно контрольных крыс, не наблюдается (таблица 4).
При электронномикроскопическом исследовании почек опытных животных отмечается дезорганизация микроворсинок щеточной каемки эпителиоцитов проксимальных канальцев. В цитоплазме эпителиоцитов у основания их микроворсинок наблюдаются многочисленные, по сравнению с аналогичными клетками контрольных животных, скопления везикул и пузырьков с повышенной электронной плотностью.
Результаты цитохимических исследований канальце-вого аппарата почечной паренхимы показали, что при 72-часовом подпеченочном холестазе в цитоплазме эпи-телиоцитов различных участков проксимальных и дистальных извитых канальцев корковых и юкстамедулляр-ных нефронов наблюдаются незначительные разнонаправленные изменения (усиление или снижение) активности окислительно-восстановительных ферментов аэробного и анаэробного кликолиза, кислой фосфатазы, содержания РНП и гликопротеинов. Это является свидетельством того, что состояние тканевого гомеостаза почечной паренхимы на протяжении первых трех суток холестаза продолжает поддерживаться на компенсаторном уровне - цитоплазматические структуры эпителио-
Таблица 4 - Морфометрические показатели канальцевого аппарата нефронов почек крыс через 72 часа от начала моделирования экспериментального обтурационного подпеченочного холестаза (M±m)
Показатели Контрольные животные Опытные животные
Диаметр проксимальных извитых канальцев корковых нефронов (мкм) 31,20±0,31 30,73±1,09
Диаметр проксимальных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов (мкм) 31,78±0,30 32,23±0,57
Диаметр дистальных извитых канальцев корковых нефронов (мкм) 20,66±0,23 19,93±0,45
Диаметр дистальных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов (мкм) 20,86±0,23 21,38±0,38
Высота эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев корковых нефронов (мкм) 10,46±0,13 11,39±0,29**
Высота эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов(мкм) 10,24±0,11 11,05±0,20**
Высота эпителиоцитов дистальных извитых канальцев корковых нефронов (мкм) 6,87±0,10 7,17±0,14
Высота эпителиоцитов дистальных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов (мкм) 6,77±0,11 6,83±0,17
Объем ядер эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев корковых нефронов (мкм3) 81,39±3,23 65,06±4,19*
Объем ядер эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов (мкм3) 75,69±2,73 67,26±3,47
Объем ядер эпителиоцитов дисталь-ных извитых канальцев корковых нефронов (мкм3) 63,21±1,64 66,10±2,45
Объем ядер эпителиоцитов дисталь-ных извитых канальцев юкстамедуллярных нефронов (мкм3) 66,80±2,02 77,80±4,41*
Примечание: *показатель достоверности Р < 0,05; **показатель достоверности Р < 0,01; *** показатель достоверности Р < 0,001
цитов (митохондрии, лизосомы, эндоплазматическая сеть) менее пораженных участков канальцевого аппарата нефронов берут на себя повышенную функциональную нагрузку с более пораженных участков. При этом наиболее чувствительной к повреждающему действию повышенных концентраций желчных кислот в крови и моче оказывается цитолемма апикальной части эпителиоцитов проксимальных канальцев нефронов. В микроворсинках щеточной каемки отмечается достоверное увеличение активности их маркерного фермента - ЩФ (Р < 0,05), субстратные продукты реакции которой в отдельных участках проксимальных канальцев почти полностью заполняют просвет этих структур (рисунок 1, рисунок 2).
Рисунок 1 - Активность щелочной фосфатазы в микроворсинках щеточной каемки эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев почки контрольной крысы. Окраска по Гомори. Ув. 150
Рисунок 2 - Увеличение активности щелочной фосфатазы в микроворсинках щеточной каемки
эпителиоцитов проксимальных извитых канальцев почки крысы через 72 часа подпеченочного холестаза.
Окраска по Гомори. Ув. 150
Наблюдаемые электронномикроскопические и гистохимические изменения являются прямым морфологическим доказательством начинающихся процессов деструкции микроворсинок щеточной каемки и, как следствие, развития нарушений во второй стадии мочеобра-зования - фазе реабсорбции.
Выводы
1. 72-часовая подпеченочная перевязка общего желчного протока сопровождается нарушением внешнесек-реторной функции печени, стойким и значительным увеличением в сыворотке крови концентрации биологически активных компонентов желчи (желчных кислот, билирубина), общих липидов, холестерина, активности АЛТ и АСТ.
2. В условиях развивающейся холатемии почечная паренхима выполняет повышенную нагрузку по выведению желчных кислот из организма - увеличивается их концентрация в моче.
3. На фоне стойкой холатемии и холатурии спустя трое суток от начала моделирования подпеченочного холестаза в гомогенатах почек опытных крыс активизируются процессы перекисного окисления липидов: возрастает содержание малонового диальдегида, уровень диеновых коньюгатов, активность каталазы и снижается концентрация а-токоферола.
4. У холемичных животных с 72-часовым холеста-зом появляются признаки почечной недостаточности, что сопровождается полиурией, глюкозурией, уменьшением рН и удельного веса мочи, снижением концентрации ионов натрия в моче, повышением концентрации мочевины в сыворотке крови, уменьшением ее min клиренса и концентрационного индекса, а также структурно-метаболическими нарушениями со стороны почечной паренхимы. При этом наблюдается дезорганизация микроворсинок щеточной каемки эпителиоцитов проксимальных канальцев нефронов и увеличение активности их маркерного фермента - ЩФ - как на поверхности микроворсинок, так и в просвете канальцев, что является прямым морфологическим доказательством начинающихся процессов деструкции микроворсинок щеточной каемки и развивающихся нарушений во второй стадии мочеобразования - фазе реабсорбции.
Литература
1. Ганиткевич, Я.В. Динамика содержания желчных кислот в тканях крыс при экспериментальной механической желтухе / Я.В. Ганиткевич, Я.И. Карбач, Т.Д. Ковтун // Укр. бiохiм. журн. -1974. - Т.46, №. 5. - С. 658-660.
2. Ганиткевич, Я.В. Желчные кислоты как факторы гомеос-таза / Я.В. Ганиткевич // Физиологическая роль ПАВ: тез. докл. Всесоюзного симпозиума. - Черновцы, 1975. - С. 30-32.
3. Ганиткевич, Я.В. Поверхностно-активные вещества организма и их изменения при нарушении желчевыделения / Я.В. Ганиткевич // Физиология и патология пищеварения: краткое содержание докл. научн. конференции. - Львов, 1965. - С. 41-44.
4. Ганиткевич, Я.В. Проблема поверхностных явлений в организме и физиологической роли поверхностно-активных веществ / Я.В. Ганиткевич // Физиологическая роль ПАВ: тез. докл. Всесоюзного симпозиума. - Черновцы, 1975. - С. 3-5.
5. Гашткевич, Я.В. Новi аспекти фiзiологii жовчовидшення / Я.В. Гашткевич // Фiзiологiчний журнал. - 1975. - Т. 21, № 5. - С. 690-697.
6. Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимичес-кой лабораторной диагностике: в 2 т / В.С. Камышников.- Мн.: Беларусь, 2000.
7. Капитонова, Э.К. Почечный синдром при дискинезии жел-чевыводящих путей у детей / Э.К. Капитонова, М.П. Шейбак // Актуальные вопросы гепатологии: материалы третьего Белорусского симпозиума гепатологов, Гродно, 7-8 окт. 1998 г. - Минск. 1998. - С. 85.
8. Капитонова, Э.К. Сочетанная патология пищеварительной системы и почек у детей / Э.К. Капитонова // Актуальные проблемы современной медицины: матер. научн. конфер., посвященной 60-летию института. - Витебск, 1994. - Т. 2. - С. 1 32.
9. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб,
B.С.. Камышников. - Изд. второе, перераб. и доп. - Минск: Изд-во "Беларусь", 1982. - 366 с.
1 0. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк и [др.] // Лабораторное дело. - 1988. - №1. - С. 16-19.
11. Проскурия, В.В. Неврологические расстройства при механической желтухе / В.В. Проскурия // Сов. мед. - 1988. - №4. -
C. 115 -118.
12. Рябов, С.И. Диагностика болезней почек / С.И. Рябов, Ю.В. Наточин, Б.Б. Бондаренко. - Л.: Медицина. - 1979. - 255 с.
13. Рябов, С.И. Функциональная нефрология / С.И. Рябов, Ю.В. Наточин. - СПб. - 1997. - 304 с.
1 4. Стальная, И.Д. Метод определения диеновой коньюгации ненасыщенных жирных кислот / И.Д. Стальная // Современные методы в биохимии. Под. ред. В.Н. Ореховича. - М.: Медицина. -1977. - С. 63-69.
1 5 . Старосельский, В.Д. Поглощение желчных кислот тканями организма при холатемии / В.Д. Старосельский, А.И. Ромаш-кевич // Сб. трудов Крымского медицинского института. - Симферополь, 1967. - Т. 34. - С. 143-147.
1 6 . Суджян, А. В. Оценка метаболических нарушений у хирургических больных / А.В. Суджян, Н.Б. Розанова // Вестник АМН СССР. - 1991. - № 7. - С. 27-29.
1 7 . Тимошина, Р.С. Содержание соединений, реагирующих с 2-ТБК, в плазме крови здоровых людей и больных некоторыми эндокринопатиями / Р.С. Тимошина // Вопросы мед. химии. -1987. - №1. - С. 72-75.
18. Удут, В.В. Структурная организация гомеостаза при патологическом процессе ЖКТ / В.В. Удут, С.А. Наумов, Е.В. Боро-дулина // Актуальные вопросы гастроэнтерологии: материалы 2-й научно-практ. конференции. - Томск, 1994. - С. 112-114.
1 9 . Ужва, В.П. Ранняя диагностика острой послеоперационной почечной недостаточности / В.П. Ужва, Н.Ф. Мосинцева, А.Я. Гавура // Клин. хирургия. - 1993. - № 3. - С. 28-30.
20. Черняускене, Р.Ч. Одновременное флюорометрическое определение концентраций витамина Е и витамина А в сыворотке крови / Р.Ч. Черняускене, З.З. Варшкявичене, П.С. Грибаускас // Лабораторное дело. - 1984. - №6 - С. 362-365.
21 . Шаповальянц, С.Г. Диагностическая ценность определения уровня молекул средней массы в плазме крови у больных с механической желтухой / С.Г. Шаповальянц, М.М. Тембулатов, А.В. Чжао // Хирургия. - 1990. - № 10. - С. 66-70.
22. Эмануэль, В.Л. Лабораторная оценка функционального состояния почек / В.Л. Эмануэль // Клин. и лаб. диагностика. -1997. - № 10. - С. 25-32.
23. Pearse, A.G.E. Гистохимия теоретическая и прикладная /
A.G.E. Pearse. - М.: Изд-во иностр. литературы. - 1962. - 598 с.
24. Renal dysfunction in obstructive jaundice (see comments) /
B.J. Fogarty [et al.] // Br. J. Surg. - 1995. - Vol. 82, № 7. - P. 877884.
25. Reynolds, E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron opaque stain in electron microscopy / E.S. Reynolds // J. Cell. Biol. -1963. - Vol. 17. - P. 208-212.
Поступила 03.01.2011
