CC BY
52Клиническая медицина
УДК 612.017.1:616-002.31
СОСТОЯНИЕ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПОЛОСТИ РТА ПРИ ОСТРОМ ГНОЙНОМ ПЕРИОСТИТЕ
© 2019 М.Ю. Игнатов12, Н.В. Исакова12, Н.А. Полянин2, Н.Н. Цыбиков3
1ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Самара 2ФГБУ «426 военный госпиталь» Министерства обороны Российской Федерации, Самара 3ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Чита
Проведено исследование уровня цитокинов ИЛ-lß, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 и аутоантител к ним в сыворотке крови, ротовой и зубодесневой жидкостях у больных острым гнойным периоститом. При развитии абсцесса выявлено увеличение уровня провоспалительных (ИЛ-lß, ИЛ-6, ИЛ-8) и уменьшение противовоспалительных (ИЛ-4, ИЛ-10) цитокинов в ротовой и десневой жидкостях. При этом содержание аутоантител класса sIgA к ИЛ-8 увеличивалось, к ИЛ-10 - уменьшалось.
Ключевые слова: цитокины, аутоантитела, острый гнойный периостит, зубодесневая жидкость, ротовая жидкость.
Введение. Значительное число пациентов лечебных учреждений стоматологического профиля занимают больные с одонтогенными заболеваниями челюстно-лицевой области [7]. Тенденция к увеличению числа таких пациентов стала наблюдаться еще в 60-70-х годах и, несмотря на принимаемые меры, остановить этот процесс не удается.
В последние годы накопилось достаточно много информации о роли про- и противовоспалительных цитокинов в механизмах формирования воспалительных реакций в челюстно-лицевой области [2, 4, 5, 6, 10]. Однако в большинстве исследований, как правило, исследуются либо смешанная слюна, либо сыворотка крови, и лишь в единичных работах отображается цитокиновый профиль зубодесневой жидкости (ДЖ) [6]. При наличии такой информации чрезвычайно сложно интерпретировать результаты разрозненных исследований. Вместе с тем до настоящего времени остается открытым вопрос о механизмах элиминации цитоки-нов из полости рта. Не исключено, что в этом процессе участвует гематосаливаторный барьер, наличие которого не оспаривается [3]. Наряду со сказанным, вероятно, что элиминация цитокинов возможна, в том числе, и аутоантителами (аАт).
Целью настоящего исследования явилось определение уровня цитокинов и аутоантител к ним у пациентов до и после лечения острого гнойного периостита в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях.
Материалы и методы исследования. Обследовано 25 больных с острым гнойным периоститом, мужского пола, в возрасте 18-25 лет (средний возраст 20,4 ± 2,2). Контрольную
группу составили 15 мужчин, не имевших соматической и стоматологической патологии (средний возраст 21,0 ± 2,5).
У всех исследуемых производили одномоментный забор сыворотки крови (СК), ротовой (РЖ) и десневой (ДЖ) жидкостей. Ротовую жидкость получали через 10 минут после полоскания полости рта физиологическим раствором путем сплевывания в пластиковые пробирки, зубодесневую - с помощью шприц-тюбика с зашлифованной иглой. Полученные субстраты помещали в эппендорфы и хранили при -20 °С в рефрижераторе до момента исследования.
У всех обследованных лечение одонтогенного абсцесса проводилось традиционными методами: удаление «причинного» зуба, вскрытие абсцесса, местное применение бактерицидных препаратов, а также ежедневное проведение физиотерапевтических процедур. На 7 день после лечения производили одномоментный забор сыворотки крови, ротовой и десне-вой жидкостей.
Уровень цитокинов (ИЛ-1Р, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10) определяли методом твердофазного ИФА с использованием реактивов ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск. Уровень ауто-антител к цитокинам исследовали оригинальным методом, опубликованным ранее [8].
Статистический анализ проведен с использованием пакета программ «Statistika 6.0» (StatSoft Inc., США). Учитывая нормальное распределение данных, при сравнении групп использовался t-критерий Стьюдента для независимых выборок, различия считали значимыми при р < 0,05. Результаты исследования представлены как М ± SD.
Результаты и обсуждение. Уровень провоспалительных цитокинов (ИЛ-1Р, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-10) у здоровых и больных острым гнойным периоститом оказался значительно выше в ротовой жидкости по сравнению с показателями сыворотки и зубодесневой жидкости (табл. 1).
Таблица 1
Содержание цитокинов у больных острым гнойным периоститом (M ± SD)
Показатель Здоровые (n = 15) Больные (n = 25)
СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ
ИЛ-ip, пг/мл 5,2 ± 1,3 199,8 ± 38,0# 31,2 ± 4,1# 32,5 ± 10,5# 205,5 ± 20,1# 75,5 ± 8,5#,**
ИЛ-4, пг/мл 5,1 ± 1,1 10,7 ± 4,0# 1,5 ± 0,6# 9,4 ± 2,0# 7,0 ± 2,3#,* 0,8 ± 0,2#,**
ИЛ-6, пг/мл 5,8 ± 1,3 49,6 ± 16,8# 4,4 ± 1,6# 5,2 ± 1,6# 143,3 ± 25,1#,* 16,2 ± 5,6#,**
ИЛ-8, пг/мл 1,5 ± 0,1 19,7 ± 2,5# 14,2 ± 1,2# 2,6 ± 0,6# 122,8 ± 32,1#,* 83,9 ± 39,2#,**
ИЛ-10, пг/мл 0 4,4 ± 1,8 0 6,0 ± 2,3 1,7 ± 0,5* 0,8 ± 0,3
Примечание: # - значимые отличия по сравнению с сывороткой здоровых; * - значимые отличия при сравнении смешанной слюны здоровых и больных; ** - значимые отличия при сравнении зубодесневой жидкости здоровых и больных.
Вероятно, полученный факт отражает преимущественно местный процесс генерации цитокинов, играющих доминирующую роль в экологическом равновесии ротовой полости.
Следует обратить внимание на относительно низкое содержание интерлейкинов в десневой жидкости. На наш взгляд, это обстоятельство обусловлено тем, что в составе транссудата, накапливаемого в зубодесневой бороздке, в большей степени находятся интактные фагоциты. Однако на последних этапах собственной миграции нейтрофилов в ротовую полость
начинается контакт и фагоцитоз сапрофитной, условно-патогенной и патогенной микрофлоры, сопровождаемый генерацией цитокинов [9].
Наряду со сказанным при развитии острого гнойного периостита содержание большинства цитокинов значительно возрастало во всех исследуемых субстратах. Однако концентрация ИЛ-4 в ротовой и десневой жидкостях уменьшалась по сравнению с содержанием у здоровых лиц, а уровень ИЛ-10 в ротовой жидкости даже снижался. Последнее является ожидаемым, так как в этом случае речь идет об противовоспалительных цитокинах, уровень которых зачастую снижается при острых воспалительных процессах [5], что, вероятно, отражает их «потребление» в динамике воспаления.
Вместе с тем следует отметить, что в ротовой жидкости при остром гнойном периостите резко возрастало содержание ИЛ-6 и ИЛ-8 (р < 0,001), а концентрация ИЛ-1Р продолжала оставаться на высоком уровне.
Обращает на себя внимание достаточно высокий прирост провоспалительных цитокинов в десневой жидкости. Особенно это касается ИЛ-1Р, ИЛ-6 и ИЛ-8.
Оказалось, что после лечения содержание ИЛ-1Р значительно снижалось в сыворотке крови (табл. 2). Однако, наряду со сказанным, в сыворотке крови после лечения возрастал уровень ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 и ФНОа. Вместе с тем содержание ИЛ-4 ощутимо снижалось.
Таблица 2
Динамика цитокинов у больных острым гнойным периоститом до и после лечения (М ± 8Б)
Показатели До лечения (п=25) После лечения(п=25)
СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ
ИЛ-1Р, пг/мл 32,5 ± 10,5 165,5 ± 20,1 98,2 ± 9,7 3,6 ± 1,2 р = 0,049 195,7 ± 31,1* р < 0,001 75,5 ± 8,5* р < 0,001
ИЛ-4, пг/мл 9,5 ± 2,0 7,0 ± 2,3 0,8 ± 0,2 7,8 ± 2,2 р = 0,029 6,23 ± 2,4 0,04 ± 0,01* р < 0,001
ИЛ-6, пг/мл 3,7 ± 1,6 143,3 ± 25,1 16,2 ± 5,6 35,0 ± 11,4* р < 0,001 172,2 ± 32,1* р = 0,006 22,1 ± 7,5* р = 0,014
ИЛ-8, пг/мл 2,6 ± 0,61 122,8 ± 32,1 83,9 ± 39,2 3,2 ± 0,5* р = 0,049 266,4 ± 37,8* р < 0,001 200,8 ± 41,1* р < 0,001
ИЛ-10, пг/мл 6,0 ± 2,3 1,7 ± 0,5 0,8 ± 0,3 7,3 ± 2,7* р < 0,001 2,9 ± 0,9* р < 0,001 18,9 ± 5,7* р < 0,001
ФНОа, пг/мл 1,6 ± 0,6 5,7 ± 1,5 10,6 ± 4,0 5,0 ± 1,3* р < 0,001 2,0 ± 0,9* р < 0,001 3,3 ± 0,9* р < 0,001
Примечание: * - достоверность различий при сравнении между показателями групп пациентов до и после лечения.
Выявленная динамика уровня цитокинов, вероятно, отражает высокую местную резистентность, сопровождаемую ростом уровня провоспалительных цитокинов. Аналогичная закономерность обнаруживалась ранее при оценке фагоцитарной и метаболической активности нейтрофилов из зубодесневой бороздки [1].
При оценке уровня цитокинов в ротовой жидкости были выявлены следующие закономерности. Оказалось, что лечение острого гнойного периостита сопровождалось увеличением ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-10, снижением ИЛ-4, ФНОа. Однако в десневой жидкости концентрация ИЛ-1 Р, ИЛ-4, ФНОа снижалась. Вместе с тем возрастал уровень ИЛ-8, ИЛ-6,
ИЛ-10 (р < 0,001). Выявленная динамика уровня цитокинов в зубодесневой жидкости отражает достаточно сложные взаимоотношения в процессе реализации защитно-компенсаторных реакций.
Хорошо известно, что к некоторым цитокинам, особенно в условиях их гиперпродукции, образуются аутоантитела, способные участвовать в элиминации, и, следовательно, регуляции уровня цитокинов.
Представлялось интересным оценить уровень аутоантител класса sIgA в ротовой и дес-невой жидкостях к некоторым цитокинам. Полученные данные представлены в таблице 3.
Таблица 3
Содержание аутоантител класса зЗ^А к цитокинам у больных острым гнойным периоститом в ротовой и десневой жидкости до и после лечения (М ± 8Б)
Изучаемые показатели Здоровые (п=15) Больные (п=25)
До лечения После лечения
РЖ ДЖ РЖ ДЖ РЖ ДЖ
аАт к ИЛ-6, ед.оп.пл. 0,11 ± 0,02 0,13 ± 0,07 0,12 ± 0,07 0,15 ± 0,07 0,10 ± 0,06 0,11 ± 0,007
аАт к ИЛ-8, ед.оп.пл. 0,11 ± 0,02 0,12 ± 0,07 0,12 ± 0,05 0,16 ± 0,04* 0,16 ± 0,06 0,21 ± 0,04
аАт к ИЛ-10, ед.оп.пл. 0,13 ± 0,05 0,14 ± 0,04 0,10 ± 0,01# 0,11 ± 0,02# 0,15 ± 0,02** р = 0,03 0,18 ± 0,02** р = 0,01
Примечание: # - значимые отличия по сравнению с показателями здоровых, * - значимые отличия между показателями РЖ и ДЖ, ** - значимые отличия между показателями РЖ и ДЖ групп до и после лечения.
Уровень аутоантител к ИЛ-8 возрастал в десневой жидкости в подавляющем большинстве случаев (р < 0,05). Аналогичная закономерность выявлена по отношению к концентрации аутоантител ротовой жидкости больных с острым гнойным периоститом.
В ротовой и десневой жидкостях мы зарегистрировали сниженное содержание аутоанти-тел класса sIgA к ИЛ-10. Вероятно, выявленный сдвиг отражает «потребление» аутоантител на высокую концентрацию этого цитокина в полости рта.
Содержание аутоантител класса sIgA претерпевало изменения, регистрируемые после лечения. Так, уровень аАт этого класса к ИЛ-6 в ротовой и десневой жидкостях не изменялся. Вместе с тем в зубодесневой жидкости возрастал уровень аутоантител к ИЛ-8, а к ИЛ-10 -увеличивался как в ротовой, так и в десневой жидкостях. Последние сдвиги, вероятно, отражают иммуностимулирующий эффект цитокинов, генерирующихся иммунокомпетентными клетками в динамике лечения.
Вместе с тем колебание уровня аутоантител класса IgG к исследуемым интерлейкинам в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях до и после лечения одонтогенного абсцесса явилось статистически недостоверным (р > 0,005).
Обсуждение. Таким образом, представленные нами данные свидетельствуют о серьезных изменениях в цитокиновом профиле при развитии острого гнойного периостита.
Так, концентрация провоспалительных интерлейкинов при развитии патологического процесса во всех исследуемых субстратах значительно превышает исходные данные в несколько раз. Однако, вопреки нашему ожиданию, концентрация ИЛ-1Р в ротовой жидкости
снизилась по сравнению с его содержанием в слюне здоровых людей. На наш взгляд, эта реакция может быть объяснена пародоксальным снижением фагоцитарных реакций в полости рта вследствие развития острого воспаления. По крайней мере при развитии одонтогенных абсцессов и флегмон челюстно-лицевой области фагоцитарный индекс и фагоцитарное число интактных нейтрофилов, инкубированных со смешанной слюной и зубодесневой жидкостью, снижаются [1].
Уровень других провоспалительных цитокинов, ИЛ-6 и ИЛ-8, в ротовой жидкости возрастал практически на порядок, что адекватно отражает степень местной воспалительной реакции. Хотелось бы подчеркнуть следующее обстоятельство. Забор жидкости всегда производился из контрлатеральной зубодесневой бороздки по отношению к «причинному» зубу. Увеличение концентрации цитокинов на противоположной стороне от одонтогенного абсцесса отражает местную генерализацию процесса при локальном воспалении.
После стандартной терапии острого гнойного периостита нами были выявлены разнонаправленные сдвиги в содержании про- и антивовоспалительных цитокинов. Уменьшение уровня ИЛ-1Р в сыворотке больных, получавших стандартное лечение, отражает снижение степени воспалительной реакции в организме в целом. Однако уровень этого цитокина в ротовой жидкости повышался. На наш взгляд, этот сдвиг отражает «дерепрессию» местного иммунитета.
Уменьшение уровня этого цитокина после лечения является ожидаемым и свидетельствует о снижении степени активации фагоцитов в зубодесневой бороздке. Вместе с тем ожидаемого снижения уровня других провоспалительных цитокинов в сыворотке крови (ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО) не произошло, что, вероятно, отражает некомпенсированные местные воспалительные реакции. Как в случае с ИЛ-1Р, концентрация ИЛ-6 и ИЛ-8 возрастала в ротовой жидкости после лечения острого гнойного периостита, что является подтверждением нашей версии о «дерепрессии» реакции местного иммунитета. Известно, что ИЛ-8 является основным хемокином в местных воспалительных реакциях. Оказалось, что после лечения его концентрация резко повышалась как в смешанной слюне, так и в жидкости зубодесневой бороздки. Данное обстоятельство может свидетельствовать в пользу продолжающейся и усиливающейся рекрутации фагоцитирующих клеток в зону воспаления. Более того, резкое повышение концентрации ИЛ-8 в десневой жидкости может служить прогностическим критерием эффективных саногенетических реакций.
Неодинаковой оказалась динамика аутоантител класса sIgA в ротовой полости к различным цитокинам. Так, к ИЛ-8 их уровень возрастал, а к ИЛ-10 - снижался. В первом случае эта реакция может быть обусловлена резким ростом хемокина в жидкости зубодесневой бороздки, во втором, вероятно, отражает «потребление» аутоантител на появление этого цито-кина в десневой жидкости. При этом концентрация аутоантител класса sIgA к ИЛ-10 в ротовой и десневой жидкостях возрастала после лечения, что указывает на достаточно высокие иммуногенные свойства этого цитокина, а также может служить прогностическим маркером течения патологического процесса.
Выводы: 1. У доноров максимальное содержание цитокинов регистрируется в смешанной слюне по сравнению с сывороткой крови и десневой жидкостью. При развитии одонто-генного абсцесса концентрация провоспалительных цитокинов увеличивается в десневой жидкости, а в смешанной слюне возрастает уровень ИЛ-6, ИЛ-8 и не изменяется содержание
ИЛ-1р. После лечения в ротовой жидкости увеличивается концентрация ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-8
и снижается уровень ФНОа.
2. При одонтогенном абсцессе в десневой жидкости возрастает концентрация аутоанти-
тел класса sIgA к ИЛ-8, в ротовой и десневой жидкостях - уровень аутоантител этого класса
к ИЛ-10 снижается, а после лечения - увеличивается.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 Активность нейтрофилов, инкубированных с ротовой и десневой жидкостями при воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области / М.Ю. Игнатов, Н.Н. Цыбиков, Е.Т. Доманова, Е.Ю. Масло // Забайкальский медицинский вестник. - 2010. - № 1. - С. 14-17.
2 Анализ цитокинового статуса при травматических повреждениях нижней челюсти и их осложнениях / Е.В. Попова, М.Н. Тарасов, Е.А. Чагина, В.Е. Толмачев // Цитокины и воспаление. - 2017. - Т. 16, № 3. -С. 55-57.
3 Гематосаливаторный барьер / Ю. А. Петрович, Р.П. Подорожная, С.М. Киченко // Российский стоматологический журнал. - 2004. - № 4. - С. 39-45.
4 Долгушин И.И. Влияние местного лечения ронколейкином на течение гнойного раневого процесса и функциональную активность раневых фагоцитов у пациентов с одонтогенными флегмонами / И.И. Долгушин, Л.С. Латюшина // Медицинская иммунология. - 2009. - Т. 11, № 1. - С. 95-100.
5 Значение клеточного состава и цитокинпродуцирующей активности клеток раневого отделяемого у больных с острыми одонтогенными воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области / А.В. Лепилин, Н.Б. Захарова, Д.А. Федотенкова, Н.Е. Терешкина // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2015. -Т. 11, № 2. - С. 173-177.
6 Изменение биобаланса цитокинов в десневой жидкости при заболеваниях пародонта и его значение для прогнозирования регенераторных нарушений в тканях пародонта / Л.Ю. Островская, Н.Б. Захарова, А.П. Могила и др. // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2014. - 10 (3). - С. 435-440.
7 Кабанова С.А. Показатели иммунного статуса при тяжелых формах гнойно-воспалительных процессов челюстно-лицевой области / С.А. Кабанова // Российский стоматологический журнал. - 2009. - № 3. - С. 36-39.
8 Содержание некоторых цитокинов и аутоантител к ним в сыворотке крови, ротовой и зубодесневой жидкости при одонтогенных абсцессах челюстно-лицевой области / М.Ю. Игнатов, Н.Н. Цыбиков, Е.Т. Доманова и др. // Стоматология. - 2010. - № 5. - С. 15-16.
9 Цитокиновая регуляция воспаления при бактериально-вирусной коинфекции в тканях пародонта при паро-донтите и периодонтите / В.П. Мудров, М.С. Мяндиев, И.С. Фоменков и др. / Цитокины и воспаление. -2016. - № 2. - С. 212-215.
10 Цитокины как показатель местного иммунного статуса пациентов с хроническим пародонтитом / О.А. Кузнецова, Е.И. Губанова, В.И. Шемонаев // Лекарственный вестник. - 2013. - Т. 7, № 2. - С. 20-26.
Рукопись получена: 15 февраля 2019 г. Принята к публикации: 27 февраля 2019 г.
