CC BY
118
"BicHUK стоматологИ", № 2, 2012
УДК 612.017+616.36
Н. Л. Хлыстун, М. И. Скидан, К. В. Скидан, к. мед. н., И. И. Соколова, д. мед. н., А. П. Левицкий, д. биол. н.
Харьковский национальный медицинский университет ГУ "Институт стоматологии НАМН Украины"
СОСТОЯНИЕ ПАРОДОНТА У КРЫС ПОСЛЕ АППЛИКАЦИИ НА ДЕСНУ ГЕЛЯ С ПЧЕЛИНЫМ ЯДОМ
Аппликация пчелиного яда на десну крыс вызывает снижение активности лизоцима, антиоксидантно - проокси-дантного индекса АПИ и увеличение степени дисбиоза, а также активности эластазы. В костной ткани пародонта снижается лишь индекс минерализации. Ключевые слова: десна, пародонт, пчелиный яд, воспаление, дисбиоз, протеолиз, антиоксиданты.
Л. М. Хлистун, М. I. Скидан, К. В. Скидан, 1.1. Соколова, А. П. Левицький
Харювський нацюнальний медичний ушверситет ДУ «1нститут стоматологи НАМН Укра'ши»
СТАН ПАРОДОНТА У ЩУР1В П1СЛЯ АПЛ1КАЦ11 НА ЯСНА ГЕЛЯ З БДЖОЛИНОЮ ОТРУТОЮ
Аплжащя бджолиноХ отрути на ясна щурiв викликае зни-ження активностi лiзоциму, антиоксидантно - прокосида-нтного шдексу АП1 та збшьшення ступеню дисбюзу та активностi еластази. В тстковш тканит пародонту зни-жуеться лише тдекс мiнералiзацil.
Ключовi слова: ясна, пародонт, бджолина отрута, запа-лення, дисбюз, протеолiз, антиоксиданти.
N. L. Khlystun, M. I. Skidan, K. V. Skidan, 1.1. Sokolova, A. P. Levitskij
Kharkiv National Medical University SE "The Institute of Dentistry of the NAMS of Ukraine"
THE STATE OF PERIODONTIUM IN RATS AFTER THE APPLICATION OF GEL WITH APITOXIN ON GUM
The application of apitoxin on rats' gum causes the reduction of the activity of lysozyme, antioxidant-prooxidant index API and growth of the degree of disbiosis, as well as elastase activity. Only the index of mineralization decreases in osseous tissue of peridontium.
Key words: gum, periodontium, apitoxin, inflammation, disbio-sis, proteolysis, antioxidants.
Пчелиный яд содержит ряд биологически активных веществ, обладающих в определенных дозах токсическим действием на организм [1]. Среди этих веществ следует выделить фермент фосфолипазу А2, которая вызывает гемолиз [2], и нейротоксический полипептид мелиттин [3]. Ранее в Институте стоматологии был предложен метод воспроизведения стоматита путем аппликации геля пчелиного яда на слизистую оболочку полости рта [4].
Цель настоящей работы. Изучение состояния мягких и твердых тканей пародонта при воздействии пчелиного яда.
Материалы и методы исследования. В работе был использован фармакопейный препарат пчелиного яда, который вводили в состав 2,5 %-ного геля натриевой соли КМЦ в концентрации 5 мг/мл. Гель с пчелиным ядом в количестве 0,5 мл наносили на десну крыс (крысы линии Вистар, самки, 15 месяцев, живая масса 280±12 г, всего 40 голов). После умерщвления животных под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг), путем тотального кровопускания из сердца, иссекали десну и участок костной ткани альвеолярного отростка нижней челюсти. В гомогенатах десны определяли уровень маркеров воспаления: концентрацию малонового диальдегида (МДА) и активность эластазы [5], активность уреазы (маркера антимикробной обсемененности) и активность лизоцима (показатель неспецифического иммунитета) [6], а также активность антиоксидантного фермента каталазы [5]. По соотношению относительных активностей уреазы и лизоцима рассчитывали степень дисбиоза в десне
[7], а по соотношению активности каталазы и концентрации МДА - антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ [5]. В гомогенате костной ткани альвеолярного отростка определяли общую протеолитическую активность (ОПА) по расщеплению казеина [8], активность эластазы, используя синтетический субстрат
[8], а также активность щелочной (ЩФ) и кислой (КФ) фосфатаз [8]. По соотношению активностей ОПА и эластазы рассчитывали индекс коллагенообра-зования (ИКО), а по соотношению ЩФ/КФ - индекс минерализации (ИМ) [9].
Результаты и их обсуждение. На рис. 1 представлены результаты определения в десне уровня маркеров воспаления, из которого видно, что воздействие пчелиного яда вызывает разнохарактерные изменения избранных маркеров: быстрое повышение концентрации МДА (1-3 сутки) с последующим спадом активности, однако достоверно превышающем исходный показатель даже на 12-е сутки, и медленное, но поступательное увеличение активности эластазы.
0 ™—|—|—|—|—|—|—|—|—|—|—|—|
0 123456789 10 11 12 сутки
Рис. 1. Уровень маркеров воспаления в десне крыс после аппликации геля с пчелиным ядом.
© Хлыстун Н. Л., Скидан М. И., Скидан К. В.,Соколова И. И.,
Левицкий А. П., 2012.
"Вiсник стоматологИ", № 2, 2012
9
На рис. 2 представлены результаты определения активности уреазы (маркер микробной обсемененно-сти) и лизоцима (маркер неспецифического иммунитета). Из представленных данных видно, что активность уреазы растет, достигая максимума на 7-е сутки, а затем (на 12-е сутки) практически возвращается к исходному уровню. Напротив, активность лизоцима резко снижается уже в первые сутки и затем продолжает медленно снижаться более, чем в 3 раза ниже исходного уровня.
2,3 ^400
22,1
г'
1,9 1,8
уреаза
1 2 3 4 5
6 7 сутки
8 9 10 11 12
0,8 -
0,0
усиление протеолиза обусловливает деструкцию тканей пародонта.
В отличие от десны, костная ткань пародонта крыс слабо реагирует на аппликацию пчелиного яда, о чем свидетельствуют данные, представленные в таблице. Как видно из этих данных, в костной ткани отсутствуют достоверные изменения активности проте-аз и щелочной фосфатазы. Лишь в более поздние сроки (7-12 дни) достоверно возрастает активность кислой фосфатазы. Как следствие, снижается индекс минерализации (рис. 4). При этом индекс коллагено-образования ИКО достоверно не изменяется.
Таблица
Ферментативные показатели альвеолярной кости нижней челюсти крыс после аппликаций на десну геля с пчелиным ядом
Рис. 2. Активность уреазы и лизоцима в десне крыс после аппликации геля с пчелиным ядом.
На рис. 3 представлены результаты определения индекса АПИ, который отражает баланс антиокси-дантных и прооксидантных факторов десны, а также показатель степени дисбиоза этой ткани. Как видно из этих данных, индекс АПИ очень быстро снижается уже в первые сутки воздействия пчелиного яда и далее этот показатель стабилизируется, но на более низком уровне по сравнению с нормой. Напротив, степень дисбиоза быстро увеличивается в первые сутки, а затем медленно нарастает, превышая на 12-й день норму почти в 3,5 раза.
4,0 3,2 -
2,4 -
J
1,6 -
Срок, ОПА, Эластаза, ЩФ, КФ,
сутки мк-кат/кг мк-кат/кг мкат/кг мкат/кг
0 29,6±2,8 5,97±0,57 28,3±1,8 2,75±0,09
1 38,5±3,9 6,41±0,48 28,0±0,9 3,07±0,17
p>0,05 p>0,3 p>0,7 P>0,1
3 35,5±3,6 7,78±0,81 26,7±1,5 2,92±0,22
p>0,3 p>0,05 p>0,4 p>0,3
7 35,8±4,1 7,15±0,60 26,5±2,1 3,66±0,26
p>0,3 p>0,05 p>0,4 p<0,05
12 34,2±2,2 6,62±0,46 25,8±1,9 3,36±0,21
p>0,3 p>0,3 p>0,3 p<0,05
Примечание : р - показатель достоверности различий с "0" временем
11 -| 6,5
0 12 3 4
56 сутки
7 8 9 10 11 12
567 сутки
Рис. 3. Степень дисбиоза (СД) и индекс АПИ в десне крыс после аппликации на десну геля, содержащего пчелиный яд.
Таким образом, аппликации геля, содержащего пчелиный яд, вызывают глубокие нарушения в десне, которые заключаются в ослаблении ее защитных систем (снижение активности лизоцима, снижение индекса АПИ) и, как следствие, в увеличении степени дисбиоза и протеолитической активности. Дисбиоз в дальнейшем приводит к микробной интоксикации, а
Рис. 4. Уровень индекса коллагенообразования (ИКО) и индекса минерализации (ИМ) в альвеолярной кости крыс после аппликации геля с пчелиным ядом.
Безусловно, развитие микробной интоксикации и тканевого протеолиза в десне рано или поздно приводит к патологическим процессам и в костной ткани пародонта.
Для устранения нарушений в пародонте, развивающихся после воздействия пчелиного яда, необходимо направить усилия на активизацию защитных систем (стимуляция иммунитета, усиление антиокси-дантного потенциала) и устранение состояния дис-биоза (применение про- и пребиотиков). Необходимо также ослабить протеолитическую деструкцию (применение ингибиторов протеаз).
Выводы. 1. Аппликация пчелиного яда на десну крыс вызывает снижение защитных систем десны и
,2
0
10
"BicHUK стоматологИ'", № 2, 2012
активизацию провоспалительных процессов протео-литической деструкции и развитие дисбиоза.
2. Костная ткань пародонта слабо реагирует на аппликацию пчелиного яда, хотя в отдаленные сроки после аппликации яда наблюдается снижение индекса минерализации.
Список литературы
1. Сопша I. Л. Сучасний стан проблеми фармакотерапи отруень бджолиною отрутою / 1.Л. Сошна, Л.А. Могирьова, В.С. Даниленко // Лжи. - 1998. - № 1. - С. 47-59.
2. Зубачик В. М. Бюлопчна роль фосфолшази А2 (огляд л^ератури) / В.М. Зубачик // Журнал АМН Укра1ни. - 1999. - Т. 5, № 4. - С. 627-642.
3. Демченко А. П. Милиттин: структура, свойства, взаимодействие с мембраной / А.П. Демченко, Е.Г. Костржевская // Украинский биохимический журнал. - 1986. - Т. 58, № 5. - С. 92-103.
4. Ткачук Н. И. Биохимические изменения в тканях полости рта крыс при воспроизведении стоматита с помощью пчелиного яда / Н. И. Ткачук, В. Я. Скиба, А. П. Левицкий // Вюник стоматологи. - 2007. - № 6. - С. 16-20.
5. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод. рекомендации / [Левицкий А.П., Деньга О.В., Макаренко О.А. и др.]. - Одесса, 2010. - 16 с.
6. Ферментативный метод определения дисбиоза полости рта для скрининга про- и пребиотиков: метод. рекомендации / [Левицкий А. П., Макаренко О. А., Селиванская И. А. и др.]. - К.: ГФЦ, 2007. - 22 с.
7. Пат. 43140 Украша, МПК (2009) G01N 33/48. Споаб оцшки ступеня дисбюзу (дисбактерюзу) оргашв i тканин / Левицький А.П., Деньга О.В., Селiванська 1.О. [та ш.]. -№ u200815092. - заявл. 26.12.08; опубл. 10.08.09, Бюл. № 15.
8. Экспериментальные методы исследования стимуляторов остеогенеза: метод. рекомендации / [Левицкий А. П., Макаренко О. А., Деньга О. В. и др.]. - К.: ГФЦ, 2005. - 30 с.
9. Ферментативний метод оцшки стану юстково! тканини / А. П. Левицький, О. А. Макаренко, I. В. Ходаков [та ш.] // Одеський медичний журнал. - 2006. - № 3. - С. 17-21.
Надшшла 10.05.12
УДК 616.314.17-008.1.-074:577.1.
С. I. Паламарчук, А. В. Борисенко
ДУ "Кшвський нацюнальний медичний утверситет
ОСТЕОСТИМУЛЮЮЧА КОМПОЗИЦ1Я ДЛЯ РЕГЕНЕРАЦ11 АЛЬВЕОЛЯРНО1 К1СТКИ В ЕКСПЕРИМЕНТ1
Запропонована остеостимулююча композищя, яка склада-еться з ентеросгелю, метротдазолу i алфлутопу i яка при усуненш дефекту альвеолярног юстки нижньог щелепи щу-рiв стимулювала процес мiнералiзацii i колагеноутворення, не поступаючись стандарту коллапану Л. Ключов1 слова: остеогенез, нижня щелепа, остеостиму-люючi препарати.
С. И. Паламарчук, А. В. Борисенко
ГУ "Киевский национальный медицинский университет
ОСТЕОСТИМУЛИРУЮЩАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ РЕГЕНЕРАЦИИ АЛЬВЕОЛЯРНОЙ КОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Предложена остеостимулирующая композиция, состоящая из энтеросгеля, метронидазола и алфлутопа, которая при
замещении дефекта альвеолярной кости нижней челюсти крыс стимулировала процесс минерализации и коллагенооб-раования, не уступая стандарту коллапану-Л. Ключевые слова: остеогенез, нижняя челюсть, остеости-мулирующие препараты.
S. I. Palamarchuk, A. V. Borisenko
SE "Kiev National Medical University
THE OSTEOSTIMULATING COMPOSITION FOR THE REGENERATION OF ALVEOLAR BONE IN EXPERIMENT
The osteostimulating composition, containing enterosgel, met-ronidazole and aphluthope, was offered. It stimulated the process of mineralization and collagen formation, not being worse than the standard collapane-L, at the replacement of the defect of alveolar bone of lower jaw in rats.
Key words: osteogenesis, lower jaw, osteostimulating preparations.
1снуе велика кшькють способ1в впливу на pi3Hi ланцюги репаративно1 кютково1 регенераци: безпосе-редня стимулящя попередниюв остеобласпв в перюс-Ti i ендоосп, використання полшотенних стовбурових кттин, трансплантащя аутокттин истки, iмплантацiя остеокондуктивних матерiалiв, застосування факторш росту, ангюгенезу та стимуляторiв мшроциркуляцп [1-6]. На жаль, майже ус запропоноваш остеостиму-люючi препарати не задовольняють в достатнш мiрi вимоги, ям необхвдш для ефективно1 регенераци юстково! тканини.
Тому метою нашого до^дження стала розробка нового композицшного остеостимулюючого препарату, до складу якого входять як антимшробш i антито-ксичш засоби, так i iмуностимулюючi та адаптогенш фактори.
Mumepimu i методи до^дження. Нами запропонована остеостимулююча оригшальна композищя, яка складаетъся з трьох препарата: ентеросгелю (Р.П. № UA/4415/02/01), метронвдазолу (Р.П. № UA/6100/01/01) i ахфлутоп (Р.П. № UA/6889/01/01). Рецептура компози-цп була наступною:
- ентеросгель - 610 мг;
- метротдазол - 500 мг (2 таблетки);
- алфлутоп - 1 мл.
В якост препарату порiвняння було використано "Коллапан" (виробник ООО фiрма "Интермедапатит", Москва, Ро^, Рег. № ФСР 2011/10304, ТУ 9393-00326948713-2006). Коллапан ввдноситься до остеоплас-тичних матерiалiв, якi застосовуються для вiдновлен-ня кiстковоï тканини i л^вання гнiйних ускладнень. До його складу входять: штучний (синтетичний) пд-роксиапатит, колаген, лiнкомiцин [7].
Дослiди було проведено на 35 бших щурах лшп Вiстар (самцi, 13-14 мюящв), яких було подiлено на 7 груп:
1 група — штактт щури (норма);
2 i 3 групи — щури з дефектом кiстковоï тканини без л^вання (евтаназiя на 10-й день (гр. № 2) i на 30-й день (гр. № 3);
© Паламарчук С. I.,Борисенко А. В. ,2012.
