CC BY
12
КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА
А. В. Новицкая, О. Н. Ержанов
СОСТОЯНИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО МЕТАБОЛИЗМА В КРОВИ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ХОЛЕЦИСТИТОМ
Кафедра биологической химии Карагандинской государственной медицинской академии, КГ КП ОКБ
В настоящее время проблема острого холецистита в ургентной хирургии занимает одно из ведущих мест, что связано с увеличением числа больных желчно-каменной болезнью.
Из проводимых ранее исследований достоверно известно, что одним из повреждающих факторов при остром холецистите является окислительный стресс [7, 12].
Степень выраженности окисления биомолекул зависит от интенсификации генерации активных форм кислорода (АФК) и состояния анти-оксидантной защиты. Нарушение равновесия этих систем приводит к интенсификации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), деструкции белков, нуклеиновых кислот и гликозо-аминогликанов, представляющих собой универсальный ответ клеток и тканей на воспаление.
Согласно литературным данным, ранее исследование системы ПОЛ в лейкоцитах не проводилось. Учитывая роль этих клеток в воспалительном процессе, необходимо изучить окислительный метаболизм в лейкоцитах при остром холецистите.
Цель исследования - изучение системы перекисного окисления липидов в лейкоцитах периферической крови у больных острым холециститом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования послужила венозная кровь 42 пациентов, находящихся на стационарном лечении в хирургическом отделении Областной клинической больницы г. Караганды, и кровь 10 практически здоровых лиц. Среди обследуемых было 20 мужчин и 32 женщины, все в возрасте от 42 до 63 лет.
Были проведены клинические и биохимические исследования. Клинические методы включали в себя сбор анамнеза, данных физикального обследования, работу с историями болезни. При работе с пациентами уделялось внимание возрасту больных, сопутствующей патологии. Биохимические исследования проводились в лаборатории на кафедре биологической химии КГМА в 2006 г.
В зависимости от характера лечения и выраженности патологических изменений пациенты были условно разделены на 3 группы. В I группу вошли 19 больных (7 мужчин и 12 женщин) с острым калькулезным холециститом, получавшие только консервативное лечение. Во II - 12 пациентов (5 мужчин и 7 женщин), оперированные после стихания острого приступа. В III группу вошли 11 больных (4 мужчин и 7 жен-
щин), которые были прооперированы по экстренным показаниям. Контрольную группу составили 10 практически здоровых лиц (4 мужчин и 6 женщин).
У всех больных проводился двукратный забор венозной крови объемом 5 мл. Первый забор крови осуществлялся при поступлении в отделение, второй забор у I группы проводился на 3 сут пребывания в стационаре, у больных II и III групп - на 3 сут после оперативного вмешательства.
Для биохимического исследования использовались лейкоциты - не позднее, чем через час после забора крови. Лейкоциты выделяли следующим образом: гепаринизированную кровь (20 ед/мл) центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин. Собирали верхний слой клеток, содержащий лейкоциты. Примесь эритроцитов разрушали 0,83% раствором хлорида аммония. Лейкоциты дважды отмывали охлажденным физиологическим раствором. Концентрацию клеток в суспензии доводили до 100-200 тыс/мкл. Полученный лизат использовали для исследования.
Интенсивность ПОЛ в лейкоцитах оценивали по содержанию продуктов, образующихся на разных этапах липоперекисного каскада: первичные продукты - диеновые коньюгаты (ДК), кетодиены (КД) по методу В. Н. Ушкаловой, Г. Д. Кадочниковой. ДК и КД экстрагировали смесью гексан - изопропанол (1:1), гексановый экстракт изучали на спектрофотометре СФ-26 в УФ-области при длине волны 232 нм для ДК и 268 нм для КД [11]; вторичные продукты - малоновый диальдегид (МДА) по методу М. С. Гончаренко и А. М. Латыповой в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) [3].
Для определения других катаболитов ПОЛ использовали методический прием Е. А. Львовской и соавт., позволяющий оценить содержание суммарных первичных (СПП) и суммарных вторичных продуктов (СВП) ПОЛ и шиффовых оснований (ШО) [6]. Для этого гексановый экстракт последовательно измеряли при длине волны 220 нм, 232 нм, 268 нм, 400 нм. Отношение Е232/ Е220 позволяет судить о концентрации СВП, а отношение Е400/Е220 дает возможность судить об уровне ШО.
Полученные данные обрабатывались методом вариационной статистики. Математическую обработку осуществляли с использованием стандартного пакета программ. Определяли среднее квадратное отклонение, ошибку среднего арифметического. Достоверность различий оценивали по критерию Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
У больных I группы при поступлении в клинику показатели, характеризующие процессы ПОЛ, достоверно превышали значения контроля. Об этом свидетельствует увеличение ДК в лейкоцитах в 5,5 раза, КД - в 2,4 раза, МДА - в 8 раз по сравнению с контролем (табл. 1).
Активное консервативное лечение, прово-
Медицина и экология, 2007, 2
Таблица 1.
Показатели ПОЛ в лейкоцитах крови больных I группы
Группа ДК КД СПП СВП ШО МДА
у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк нмоль/106лейк
Контроль 3,03±0.76 4,8±0,9 0,013±0,002 0,03±0,01 0,085±0,3 1,55±0,22
I группа 1 сут 16,94±0,45* 11,59±0,35* 0,889±0,02* 0,611±0,02* 0,274±0,024 12,38±0,38*
I группа 3 сут 13,022±0,4* 9,008±0,35* 0,75±0,01* 0,52±0,02* 0,355±0,127 9,27±0,32*
* р<0,05 по сравнению с контролем
димое этим больным, привело к снижению ДК и КД на 23%, МДА - на 26%, СПП - на 16%, СВП -на 15% по сравнению с исходными данными при поступлении. Содержание ШО в динамике лечения повысилось на 30% по сравнению с исходными данными при поступлении.
У больных II группы интенсивность ПОЛ в лейкоцитах крови была более выражена, что связано с увеличением содержания цитотоксиче-ского малонового диальдегида. Высокий исходный уровень катаболитов после операции на 3 сут заметно снизился, но значения контроля не достиг (табл. 2).
Наибольшие изменения в крови были зафиксированы у больных III группы, тяжесть состояния которых требовала экстренного хирургического вмешательства. При сравнении с I группой выявлено, что у больных iIi группы содержание ДК и КД в лейкоцитах достоверно выше показателей группы сравнения в 1,7 раза, СПП - в 1,2 раза, МДА - в 2,8 раза.
Увеличение СПП и СВП свидетельствует о перераспределении спектра катаболитов липопе-рекисного каскада в сторону цитотоксических метаболитов, характерных для стадии пропага-ции - альдегидов, алкеналей и гидроксиалкена-лей. Параллельно в плазме отмечается увеличение содержания МДА, который в свою очередь способен повреждать белковые молекулы.
Высокий уровень ПОЛ на 3 сут исследования и его замедленная нормализация, по-видимому, обусловлены стрессом, действием
Показатели ПОЛ в лейко
наркоза, гипоксией, явлениями интоксикации, самой операционной травмой.
По нашему мнению, последствиями образования малонового альдегида и других суммарных вторичных продуктов, являющихся агрессивными соединениями стадии пропагации, является каскад неблагоприятных биохимических реакций, таких как индукция дальнейших процессов ПОЛ, способность взаимодействовать с сульфгидрильными группами в составе белков, изменять биологические функции ферментов и рецепторов.
Анализируя полученные данные, выявлено, что у всех больных острым холециститом в лейкоцитах развивается синдром липоперокси-дации, что документируется стойкой аккумуляцией катаболитов ПОЛ, образующихся на стадиях инициации и пропагации липоперекисного каскада. При этом максимальная степень их нарушений в лейкоцитах зафиксирована у лиц III группы, что обусловлено тяжелым состоянием больных вследствие синдрома интоксикации и процессами морфологической деструкции в стенках желчного пузыря.
Таким образом, что при остром холецистите в лейкоцитах происходит нарушение системы ПОЛ с накоплением промежуточных и конечных катаболитов, оказывающих негативное воздействие на саму клетку.
ВЫВОДЫ
1. У больных острым холециститом в лейкоцитах развивается синдром липопероксидации,
Таблица 2.
крови больных II группы
Группа ДК КД СПП СВП ШО МДА
у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк нмоль/106лейк
Контроль 3,03±0.76 4,8±0,9 0,013±0,002 0,03±0,01 0,085±0,3 1,55±0,22
II группа 1 сут 17,03±0,47* 14,31±0,67* 0,8±0,01* 0,68±0,03* 0,279±0,02 26,22±1,76*
II группа 3 сут 14,59±0,6* 12,59±0,73* 0,83±0,01* 0,729±0,04* 0,305±0,02 24,29±2,3*
* р<0,05 по сравнению с контролем Таблица 3. Показатели ПОЛ в лейкоцитах крови больных холециститом III группы
Группа ДК КД СПП СВП ШО МДА
у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк у.е./106лейк нмоль/106лейк
Контроль 3,03±0,76 4,8±0,9 0,013±0,002 0,03±0,01 0,085±0,3 1,55±0,22
III группа 1 сут 29,45±3,68* 18,98±1,59* 1,126±0,47* 0,64±0,2* 0,232±0,08 34,88±0,37*
III группа 3 сут 13,05±0,44* 9,57±0,33* 0,7±0,06* 0,51±0,05* 0,31±0,05 17,95±0,75*
* р<0,05 по сравнению с контролем 42
что документируется стойкой аккумуляцией ката-болитов ПОЛ.
2. Высокий исходный уровень катаболитов в I группе больных, получавших только консервативное лечение, во II группе, пациенты которой были прооперированы после стихания острого процесса, и в III группе пациентов, которым было выполнено экстренное оперативное вмешательство, заметно снизился на 3 сут, но значения контроля не достиг.
3. Выявлена прямая зависимость между тяжестью патологического процесса и степенью образования, аккумуляции катаболитов липопе-рекисного каскада в лейкоцитах.
ЛИТЕРАТУРА
1. Владимиров Ю. А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства ли-пидного слоя биологических мембран //Биофизика. - 1987. - Т. 32, вып. 5. - С. 830 - 840.
2. Владимиров Ю. А. Роль нарушения липид-ного слоя мембран в развитии патологических процессов //Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1986. - №5. - С. 58 - 91.
3. Гончаренко М. С. Метод оценки ПОЛ / М. С. Гончаренко, А. М. Латыпова //Лаб. дело. -1985. - №1. - С. 63 - 69.
4. Зенков Н. К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах /Н. К. Зен-ков, Е. Б. Меньшиков //Успехи соврем. биологии. - 1993. - №3. - С. 286 - 296.
5. Лейкоцитарный индекс интоксикации в диагностике деструктивных форм острого холецистита /С. Н. Захаров, Ю. М. Свитич, В. А. Баскаков, В. Л. Егошин //Советская медицина. -
1983. - №3. - С. 100 - 102.
6. Львовская М. И. Спектрофотометрическое определение продуктов ПОЛ //Вопр. мед. химии.
- 1991. - №4. - С. 92 - 94.
7. Люлька А. Н. Состояние реактивности организма, активности антиоксидантной системы у больных острым холециститом /А. Н. Люлька, М. И. Горлачев //Врачеб. дело. - 1984. - №12. -С. 78 - 80.
8. Муравлева Л. Е. Окислительный метаболизм в норме и патологии /Л. Е. Муравлева, Б. К. Айтпаев //Медицина и экология. - 1997. -№1. - С. 147 - 152.
9. Петрович Ю. А. Свободнорадикальное окисление и его роль в патогенезе воспаления, ишемии, стрессе /Ю. А. Петрович, Д. В. Гуткин // Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1986.
- №5. - С. 85 - 92.
10. Северина П. П. Биохимические основы патологических процессов. - М.: Медицина, 2000. -298 с.
11. Ушкалова М. К. Исследование параметров, характеризующих активность ПОЛ при изучении адаптации человека к новым климатогеографи-ческим условиям //Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1987. - №5. - С. 571 - 573.
12. Чернавина Г. В. Влияние оперативного вмешательства на перекисное окисление липи-дов в эритроцитах крови больных неосложненной формой холецистита /Г. В. Чернавина, Н. К. Ши-лина //Клинич. хирургия. - 1978. - №10. - С. 69
- 73.
Поступила 31.01.07
А. V. Novitskaya, O. N. Yerzhanov
CONDITION OF OXIDATIVE METABOLISM IN BLOOD OF PATIENTS WITH ACUTE CHOLECYSTITIS
The authors of the article come to the conclusion, that in the patients with acute cholecystitis in leukocytes the syndrome of lypoperoxidation developed, that is confirmed by the stable accumulation of the catabolites of lipid peroxidation. High first catabolites level in all the groups appreciably reduced on the 3 day after the treatment, but it didn't reach the control indices. It had been revealed the straight dependence between the heaviness of pathologic process and the degree of production, accumulation of catabolites of lipoperoxidation cascade in leukocytes.
А. В. Новицкая, О. Н. Ержанов
0ТК1Р ХОЛЕЦИСТИТПЕН АУЫРАТЫН НАУКАСТАРДЫЦ КАНЫНДАРЫ КЫШКЫЛ МЕТАБОЛИЗМН1Ц ЖАРДАЙЫ
Макала авторлары етюр холециститпен ауыратын наукастардын лейкоциттарында липопе-роксидация синдромы дамиды деген корытынды^а келген. Бул ПОЛ катаболиттердщ теракты аккумулациясымен дэлелденедк Барлы; топтардаFы катаболиттердщ бастапкы жоFары денгей емдеудщ Yшiншi тэулИнде эжептэуiр темендейд^ бiрак бакылау мелшерЫе жетпейдк Бул пато-логиялы; процесс пен лейкоциттердщ каскадындаFы катаболиттердщ жинакталу YPДiсi ткелей байланысты екендИн аЙFактайды.
Медицина и экология, 2007, 2
