CC BY
2
Российский медико-биологический вестник
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Том 31, № 4, 2023 имени академика И. П. Павлова
йй!: https://doi.org/10.17816/PAVL0VJ121795
Состояние микробиоценоза толстой кишки и антиоксидантных свойств колоноцитов крыс на фоне экологического дисбиоза и применения пробиотика Бифидумбактерин® и симбиотика Аципол®
В . А. Королев, О . А. Медведева, В . А. Ряднова, А. В . Шевченкон, И . В . Королев, Е. В . Королев
Курский государственный медицинский университет, Курск, Российская Федерация
АННОТАЦИЯ
Актуальность. Микробное сообщество толстой кишки (ТК) представляет собой единую микроэкологическую систему, которая быстро реагирует количественными и качественными изменениями на воздействие внешних и внутренних факторов, т. е . развивается состояние называемое дисбиозом . Изменения в составе микробиоценоза ТК могут приводить к ряду заболеваний, а также развитию иммунопатологических и аллергических состояний .
Цель. Оценить состояние микробиоценоза ТК и антиоксидантных свойств колоноцитов крыс на фоне экологического дисбиоза и применения пробиотика Бифидумбактерин® и симбиотика Аципол® .
Материалы и методы. В эксперименте у крыс моделировали интоксикацию фунгицидом Тирам® (диметилкарбамотиоилсульфанил КМ-диметилкарбамодитиоат, 1,6 мг для одного животного массой 200 г) в течение 28 дней, что приводило к развитию экологического дисбиоза, в последующем проводили коррекцию выявленных изменений в течение 21 дня пробиотиком Бифидумбактерин® (0,14 мл для одного животного массой 200 г) и симбиотиком Аципол® (0,08 мл для одного животного массой 200 г) . Состав мукозной микрофлоры ТК крыс изучали при помощи бактериологического метода исследования . Активность ферментов антиоксидантной защиты колоноцитов изучали по содержанию супероксиддисмутазы и каталазы . Состояние процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию диеновых коньюгатов и малонового диальдегида .
Результаты. При введении Тирама® зарегистрировано уменьшение количества облигатных и условно-патогенных представителей микробиоценоза ТК, а также интенсификация процессов перекисного окисления липидов в условиях ослабления антиоксидантной защиты в колоноцитах . В результате применения препаратов Бифидумбактерин® и Аципол® отмечено увеличение количества облигатных бактерий на фоне снижения содержания факультативных представителей микробиоты ТК, причем наиболее выраженное влияние на значения определяемых показателей оказала коррекция симбиотиком Аципол® . При изучении изменений биохимических показателей в колоноцитах животных зарегистрировано, что использование обоих препаратов способствовало нормализации содержания малонового диальдегида в ткани ТК, кроме того, применение аципола привело к снижению концентрации диеновых коньюгатов в колоноцитах .
Заключение. Все исследуемые сроки введения Тирама® оказали влияние на качественный и количественный состав микробиоты ТК и биохимические показатели в колоноцитах животных Применение препаратов Бифидумбактерин® и Аципол® привело к восстановлению качественного и количественного состава микроорганизмов ТК, а также оказало положительное влияние на содержание продуктов перекисного окисления липидов в колоноцитах, но более выраженная эффективность была выявлена у симбиотика Аципол® .
Ключевые слова: микробиоценоз толстой кишки; экологический дисбиоз; Тирам; система антиоксидантной защиты; перекисное окисление липидов; Бифидумбактерин; Аципол
Для цитирования:
Королев В.А., Медведева О.А., Ряднова В.А., Шевченко А.В., Королев И.В., Королев Е.В. Состояние микробиоценоза толстой кишки и антиоксидантных свойств колоноцитов крыс на фоне экологического дисбиоза и применения пробиотика Бифидумбактерин® и симбиотика Аципол® // Российский медико-биологический вестник имени академика И. П. Павлова. 2023. Т. 31, № 4. С. 643-654. й01: https://doi.org/10.17816/PAVL0VJ121795
Рукопись получена: 06 . 02 . 2023
Рукопись одобрена: 01. 06 . 2023
Опубликована: 31.12 . 2023
© Эко-Вектор, 2023 Все права защищены
DOI: https://doi.org/10.17816/PAVL0VJ121795
The State of Colon Microbiocenosis and Antioxidant Properties of Rat Colonocytes in Environmental Dysbiosis and Use of Probiotic Bifidumbacterin® and Symbiotic Acipol®
Vladimir A. Korolev, Ol'ga A. Medvedeva, Vera A. Ryadnova, Alina V. ShevchenkoH, Ivan V. Korolev, Egor V. Korolev
Kursk State Medical University, Kursk, Russian Federation
ABSTRACT
INTRODUCTION: The microbial community of the colon is a single microecological system which quickly responds to the exposure to external and internal factors with quantitative and qualitative changes with the result of development of the condition termed dysbiosis . The changes in the composition of colon microbiocenosis can lead to a number of diseases and to the development of immunopathological and allergic conditions
AIM: To evaluate the state of the colon microbiocenosis and antioxidant properties of rats' colonocytes against a background environmental dysbiosis and the use of probiotic Bifidumbacterin® and symbiotic Acipol® .
MATERIALS AND METHODS: In the experiment, intoxication in rats was modeled with the fungicide Thiram® (dimethylcarbamothioylsulfanyl N,N-dimethylcarbamodithioate, 1. 6 mg per animal of 200 g mass) for 28 days, which led to the development of environmental dysbiosis . The detected changes were subsequently corrected within 21 days with the probiotic Bifidumbacterin® (0 .14 ml per animal of 200 g mass) and the symbiotic Acipol® (0 . 08 ml per animal of 200 g mass) The composition of the microflora of colon mucosa of rats was studied using a bacteriological method The activity of antioxidant protection enzymes of colonocytes was studied by the content of superoxide dismutase and catalase . The condition of lipid peroxidation processes was assessed by the content of diene conjugates and malondialdehyde .
RESULTS: In introduction of Thiram®, reduction of the amount of obligate and opportunistic representatives of colon microbiocenosis was noted, as well as intensification of lipid peroxidation processes in the conditions of weakening of antioxidant protection in colonocytes . Application of Bifidumbacterin® and Acipol® resulted in increase in the amount of obligate bacteria and decrease in the content of opportunists of the colon microbiota with the strongest effect of Acipol® on the values of the determined parameters . When studying changes in biochemical parameters in animal colonocytes, both drugs were found to contribute to the normalization of the content of malondialdehyde in the colon tissue, besides, Acipol® led to a decrease in the concentration of diene conjugates in colonocytes .
CONCLUSION: Introduction of Thiram® in all the specified periods affected the qualitative and quantitative composition of the microbiota and biochemical parameters in the colonocytes of the animals . The use of Bifidumbacterin® and Acipol® preparations resulted in the restoration of the qualitative and quantitative composition of colonic microorganisms, and also had a positive effect on the content of lipid peroxidation products in colonocytes, but more efficient was found to be Acipol® symbiotic .
Keywords: colon microbiocenosis; environmental dysbiosis; Thiram; antioxidant protection system; lipid peroxidation; Bifidumbacterin; Acipol
For citation:
Koroiev VA, Medvedeva OA, Ryadnova VA, Shevchenko AV, Koroiev IV, Koroiev EV. The State of Colon Microbiocenosis and Antioxidant Properties of Rat Colonocytes in Environmental Dysbiosis and Use of Probiotic Bifidumbacterin® and Symbiotic Acipoi®. I. P. Pavlov Russian Medical Biological Herald. 2023;31(4):643-654. DOI: https://doi.org/10.17816/PAVL0VJ121795
Received: 06 . 02 . 2023 Accepted: 01. 06 . 2023 Published: 31.12 . 2023
eco. vector © Eco-Vector, 2023
All rights reserved
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АОЗ — антиоксидантная защита
ДК — диеновые коньюгаты
КАТ — каталаза
МДА — малоновый диальдегид
ПОЛ — перекисное окисление липидов
СОД — супероксиддисмутаза
ТК — толстая кишка
LD50 — dosis letalis 50% (средняя летальная доза пестицида, необходимая для убийства половины членов тестируемой популяции после определенной продолжительности теста)
АКТУАЛЬНОСТЬ
Микробное сообщество толстой кишки (ТК) представляет собой единую микроэкологическую систему, которая быстро реагирует количественными и качественными изменениями на воздействие внешних и внутренних факторов, т. е . развивается состояние называемое дисбиозом [1, 2] . Изменения в составе микробиоценоза ТК могут приводить к ряду заболеваний, а также развитию иммунопатологических и аллергических состояний [3, 4]
К внешним факторам воздействия на макроорганизм можно отнести действие пестицидов, в частности действие фунгицидного токсичного препарата Тирам®, который относится к 3-му классу опасности для человека [5, 6] . В результате действия экзогенных ксенобиотиков происходит увеличение продукции свободных радикалов и активируются процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), развивается окислительный стресс, что свидетельствует о несостоятельности системы антиоксидантной защиты (АОЗ) [7, 8] .
В настоящее время коррекция дисбиоза осуществляется в соответствии с Отраслевым стандартом 91500 .1 1. 0004-2003 «Протокол ведения больных. Дис-бактериоз кишечника», согласно которому традиционно применяются биотерапевтические препараты про-биотики, пребиотики и синбиотики. Многочисленные исследования показывают, что вышеперечисленные препараты безопасны и эффективны для применения при различных заболеваниях, сопровождающихся изменением качественного и/или количественного состава микробиоценоза ТК [9, 10] .
Цель — оценить состояние микробиоценоза толстой кишки и антиоксидантных свойств колоноцитов крыс на фоне экологического дисбиоза и применения пробиотика Бифидумбактерин® и симбиотика Аципол® .
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Экспериментальное исследование выполнено на базе НИИ Экспериментальной медицины Курского государственного медицинского университета . Животные содержались в условиях вивария на стандартном пищевом рационе в осенне-зимний период Все
манипуляции с животными выполняли с соблюдением международных и отечественных норм гуманного обращения с лабораторными животными: Директива 2010/63/Еи Европейского Парламента и Совета Европейского союза от 22 сентября 2010 г . по охране животных, используемых в научных целях, приказ Минздрава России № 199н от 01 апреля 2016 г. «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики» . Экспериментальное исследование утверждено региональным этическим комитетом Курского государственного медицинского университета (Протокол № 4 от 30 .1 1. 2017) .
Эксперимент проводился на 80 крысах популяции Вистар массой 200-220 граммов, которых разделили на 8 групп по 10 особей в каждой:
- 1 группа — контрольная, в нее входили здоровые интактные крысы (группа «контроль (интакт-ные)»), выведение животных из эксперимента в данной группе производили на 28 сутки;
- 2 группа — животным моделировали интоксикацию (группа «Тирам® 7 суток»), крысы получали пестицид Тирам® (диметилкарбамотиоилсульфанил NN диметилкарбамодитиоат) чистотой 97% (Б1дта-АШг1сЬ, США) вместе с гранулированным кормом 1 раз в день утром в дозе 8 мг/кг (1,6 мг для одного животного массой 200 г), после чего выводили животных из эксперимента на 7 сутки;
- 3 группа — животным моделировали интоксикацию (группа «Тирам® 14 суток»), крысы получали пестицид Тирам® чистотой 97% (Б^та-АШпсЬ, США) вместе с гранулированным кормом 1 раз в день утром в дозе 8 мг/кг (1,6 мг для одного животного массой 200 г), после чего выводили животных из эксперимента на 14 сутки;
- 4 группа — животным моделировали интоксикацию (группа «Тирам® 21 сутки»), крысы получали пестицид Тирам® чистотой 97% (Б^та-АШпсЬ, США) вместе с гранулированным кормом 1 раз в день утром в дозе 8 мг/кг (1,6 мг для одного животного массой 200 г), после чего выводили животных из эксперимента на 21 сутки
- 5 группа — животным моделировали интоксикацию (группа «Тирам® 28 суток»), крысы получали пестицид Тирам® чистотой 97% (Б^та-АШпсЬ, США) вместе с гранулированным кормом 1 раз в день утром
в дозе 8 мг/кг (1,6 мг для одного животного массой 200 г), после чего выводили животных из эксперимента на 28 сутки;
- 6 группа — животные, получавшие пестицид Тирам® с кормом 1 раз в сутки в течение 28 дней, затем их переводили на стандартный пищевой рацион на 21 день, также данной группе животных вводили дистиллированную воду per os (группа «контроль (стандартный рацион + вода)»), после чего выводили животных из эксперимента через 49 суток;
- 7 группа — у животных моделировали интоксикацию на протяжении 28 суток с последующим применением per os пробиотика Бифидумбактерин® (бифидо-бактерии бифидум; ВИТАФАРМА, Россия) в количестве 0,14 мл (для одного животного массой 200 г) в течение 21 дня, после чего выводили животных из эксперимента через 49 суток;
- 8 группа — у животных моделировали интоксикацию на протяжении 28 суток, с последующим применением per os синбиотика Аципол® (лактобактерии ацидофильные, грибки кефирные; ЛЕККО, Россия) в количестве 0,08 мл (для одного животного массой 200 г) в течение 21 дня, после чего выводили животных из эксперимента через 49 суток
Расчет дозы Тирама® выполнялся исходя из токсикологических данных, где средняя летальная доза пестицида, необходимая для убийства половины членов тестируемой популяции после определенной продолжительности теста (англ . : dosis letalis 50%; LD50), для крыс составляет 400 мг/кг . В связи с тем что в эксперименте использовались дозы 1/50 LD50, после расчета доза для крыс массой 200 грамм составила 400 мг/кг/50 = 8 мг/кг, животные получали 1,6 мг вместе с гранулированный кормом . Животных кормили комбикормом ЛБК-120-45-2021 (Комбикормовая Провинция, Россия) — гранулы 8 мм, состав: пшеница, ячмень, кукуруза, шрот подсолнечный, мука мясокостная, мука рыбная, солодовый росток, мука травяная люцерновая, дрожжи кормовые, заменитель цельного молока, соль, масло растительное, мел
В одном флаконе пробиотика Бифидумбактерин® содержится 5 доз препарата, в 1 дозе содержится 107 живых бифидобактерий. В пересчете на крысу 200 г необходимо 285714,28 бифидобактерий. Препарат разводили водой (в один флакон добавляли 25 мл воды) и вводили животным в количестве 0,14 мл ((285714,28 х 25)/ 5 000 0000 = 0,14 мл) [11].
В одной капсуле синбиотика Аципол® содержится 107 живых ацидофильных лактобацилл. В пересчете на крысу 200 г необходимо 85714,28 лактоба-цилл Препарат разводили водой (капсулу растворяли в 10 мл воды) и вводили животным в количестве 0,08 мл ((85714,28 х 10)/ 1 000 0000 = 0,08 мл) [11] .
Выведение животных из эксперимента осуществляли под эфирным рауш-наркозом После окончания
эксперимента у животных всех опытных групп оценивали качественный и количественный состав муцинового слоя толстой кишки, состояние ПОЛ и АОЗ в колоноци-тах животных .
Исследование микрофлоры слизистой оболочки толстой кишки животных проводили по методике Л . И . Кафарской и В . М . Коршунова и выражали в lg КОЕ/г массы биологического материала [12-14] . Для подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) применяли формулу:
где K — колониеобразующая единица (lg КОЕ/г), E — общее количество бактерий, k — количество внесенного материала (мл), v — количество чашек Петри, n — разведение (10-2, 10-4) .
Для идентификации микроорганизмов использовали масс-спектрометр Maldi Biotyper Microflex (Bruker, Германия) .
Для исследования активности ферментов АОЗ и состояния ПОЛ готовили гомогенат ТК экспериментальных животных. Для получения гомогената ТК забирали часть органа, отмывали его холодным 0,9% раствором хлорида натрия в течение 35-50 с . Перед исследованием участок ТК взвешивали, затем измельчали и гомогенизировали с помощью пестикового гомогенизатора, добавляя при этом 0,1 М калий-фосфатный буфер с рН 7,4, предварительно охлажденный до 0°С, в соотношении «ткань-буфер» 1:6. Из полученных гомогенатов проводили отбор проб для дальнейших исследований Пробы хранили при температуре минус 80°С (низкотемпературный морозильник SUFsg 5001; Liebherr, Германия) в лабораторной зоне без дальнейшей транспортировки
Активность ферментов системы АОЗ изучали по содержанию каталазы (КАТ) и супероксиддисмутазы (СОД)
Активность фермента КАТ определяли биохимическим методом в 96-луночном микропланшете с помощью биохимического анализатора Clima RAC (Испания), используя коммерческие наборы Catalase Assay Kit, 707002, 96 тестов (Cayman Chemical, США) . Для определения активности КАТ использовался диапазон измерения от 2 до 35 нмоль/мин/мл . Чувствительность — 2 нмоль/мин/мл. Длина волны измерения — 540 нм . Анализ основан на реакции фермента с метанолом в присутствии Н2О2 . Активность КАТ выражается в мкат/л .
Активность фермента СОД определяли биохимическим методом в 96-луночном микропланшете с помощью биохимического анализатора Clima RAC (Испания), используя коммерческие наборы Superoxide Dismutases Assay Kit, 706002, 96 тестов (Cayman Chemical, США) Активность СОД определяли с использованием тетра-золиевой соли для выявления супероксидных радикалов, образованных ксантин оксидазой и гипоксантином
DOI: https://doi.org/10.17816/PAVLOVJ121795
Рис. 1. Схематическое изображение отбора литературных источников в соответствии с рекомендациями PRISMA [8].
Российский медико-биологический вестник
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Том 31, № 4, 2023 имени академика И. П. Павлова
при длине волны измерения 440-460 нм . Активность СОД выражается в у. е .
Состояние ПОЛ оценивали по содержанию диеновых коньюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) . Содержание ДК определяли спектрофотометрическим методом . К исследуемым образцам добавляли экстрагирующую смесь гептана с изопропиловым спиртом, после отбирали гептановую фазу и добавляли к ней 96% этиловый спирт. В кювете с длиной оптического пути 10 мм определяли оптическую плотность раствора против этилового спирта с гептаном при длине волны 233 нм с помощью биохимического анализатора Clima RAC (Испания), используя коммерческие наборы CEA634Ge ELISA Kit for Diene Conjugates (Cloud-Clone Corp . , США) . Содержание ДК выражается в у. е .
Для определения концентрации МДА использовался метод конкурентного ингибирования с применением иммуноферментного анализа при длине волны 450 нм при помощи коммерческих наборов CEA597Ge ELISA Kit for Malondialdehyde (Cloud-Clone Corp . , США) . Реакция конкурентного ингибирования запускается между меченым биотином МДА и немеченым МДА с предварительно нанесенными на микропланшет антителами, специфичными к МДА . После инкубации несвязанный конъюгат смывали . Далее авидин, конъюгированный
пероксидазой хрена, добавляли в каждую лунку микропланшета и инкубировали с помощью микропланшетного ридера Varioscan Flash (Thermo Fisher Scientific, США). Количество связавшегося конъюгата перокси-дазы хрена обратно пропорционально концентрации МДА в образце . Интенсивность окрашивания обратно пропорциональна концентрации МДА в образце . Концентрация МДА выражается в ммоль/л .
Полученные данные статистически обрабатывались с использованием программы «Statistica 10 . 0» (Stat Soft Inc . , США) . Результаты исследования представлены как среднее значение со стандартной ошибкой (M ± m) . Для определения нормальности распределения признака использовали критерий Колмогорова-Смирного [15]. Для определения статистически значимых различий между группами использовался t-критерий Стьюдента Различия между группами считались статистически значимыми при р < 0,05 .
РЕЗУЛЬТАТЫ
Первым этапом работы было изучение влияния субхронической интоксикации Тирамом® в течение 7, 14, 21 и 28 суток на состав кишечной микробиоты крыс по сравнению с интактными животными (табл 1)
Таблица 1. Состав мукозной микробиоты (1д КОЕ/г) толстой кишки крыс при введении Тирама®, М ± т
Выделенные микроорганизмы Контроль (интактные, 1 группа) Тирам® 7 сут. (2 группа) Тирам® 14 сут. (3 группа) Тирам® 21 сут. (4 группа) Тирам® 28 сут. (5 группа)
Lactobacillus spp. (лактобактерии) 6,32 ± 0,66 3,89 ± 0,41** 3,65 ± 0,48*** 3,11 ± 0,44*** 2,50 ± 0,25***
Bifidobacterium spp. (бифидобактерии) 8,95 ± 1,29 5,43 ± 0,54* 4,87 ± 0,51** 3,14 ± 0,36*** 3,00 ± 0,27***
Escherichia coli (кишечные палочки) c нормальной ферментативной активностью 4,75 ± 0,60 4,05 ± 0,49 3,53 ± 0,43 2,86 ± 0,33** 2,18 ± 0,18***
Escherichia coli (кишечные палочки) со сниженной ферментативной активностью 3,10 ± 0,44 2,06 ± 0,22* 1,58 ± 0,14*** 1,33 ± 0,18*** 1,11 ± 0,11***
Enterobacter spp. (энтеробактеры) 2,21 ± 0,24 1,79 ± 0,18 1,50 ± 0,19* 1,36 ± 0,17** 1,21 ± 0,08***
Klebsiella spp. (клебсиеллы) 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0
Morganella spp. (морганеллы) 1,05 ± 0,12 0 ± 0*** 0 ± 0*** 0 ± 0*** 0 ± 0***
Acinetobacterspp. (ацинетобактеры) 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0
Salmonella spp. (сальмонеллы) 3,67 ± 0,46 3,00 ± 0,31 3,12 ± 0,33 2,69 ± 0,36 2,16 ± 0,27**
Citrobacter spp. (цитробактеры) 1,89 ± 0,26 1,32 ± 0,19 1,12 ± 0,11** 1,05 ± 0,15** 1,08 ± 0,11**
Enterococcus spp. (энтерококки) 1,57 ± 0,16 1,21 ± 0,12 1,17 ± 0,18 1,10 ± 0,08* 1,04 ± 0,12*
Staphylococcus spp. (коагулазоотрицательные стафилококкки) 2,32 ± 0,29 2,06 ± 0,31 1,66 ± 0,18 1,21 ± 0,16*** 1,10 ± 0,13***
Staphylococcus aureus (золотистые стафилококки) 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0
Proteus spp. (протеи) 0 ± 0 0±0 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0
Грибы рода Candida 2,59 ± 0,31 0 ± 0*** 0 ± 0*** 0 ± 0*** 0 ± 0***
Примечания: * — p < 0,05; ** — p < 0,01; *** — p < 0,001 по сравнению с 1 группой
Введение Тирама® в течение 7 суток привело к изменению качественного и количественного состава микробиоценоза ТК крыс, что выражалось в снижении количества облигатных бифидобактерий в 1,6 раза (p < 0,05), лактобактерий — в 1,6 раза (p < 0,01), а кишечных палочек со сниженной ферментативной активностью — в 1,5 раза (p < 0,05) . Кроме того, в составе микробиоты опытной группы отсутствовали морганеллы и грибы рода Candida, идентифицированные у интактных крыс .
В группе животных, получавших Тирам® на протяжении 14 суток, сократилось количество бактерий рода Bifidobacterium в 1,8 раза (p < 0,01) и рода Lactobacillus в 1,7 раза (p < 0,001) . При этом lg KOE/г E . coli со сниженной ферментативной активностью снизился в 2 раза (p < 0,001) .В опытной группе отмечалось снижение удельного содержания условно-патогенных цитробактеров в 1,7 раза (p < 0,01) и энтеробактеров в 1,5 раза (p < 0,05) . В отличие от интактных животных в составе микробиоценоза ТК описываемой опытной группы отсутствовали факультативные морганеллы и грибы рода Candida.
Изменения динамического равновесия микробиоты ТК крыс, которым вводили Тирам® в течение 21 суток, проявлялись в существенном снижении количества облигатных симбионтов . Удельное содержание бифидобактерий сократилось в 2,9 раза (p < 0,001), а лактобактерий — в 2 раза (p < 0,001) . Отмечалось снижение количества Escherichia coli с нормальной и со сниженной ферментативной активностью в 1,7 раза (p < 0,01) и в 2,3 раза (p < 0,001) соответственно . Среди факультативных представителей кишечной микробиоты имело место снижение числа как грамотрицательных, так и грамположительных бактерий. Так, значение определяемого показателя в отношении энтеробактеров сократилось в 1,6 раза (p < 0,01), цитробактеров — в 1,8
Наиболее выраженное снижение активности КАТ в 1,9 раза (р < 0,001) по сравнению с контролем отмечалось при введении Тирама® в течение 28 суток, тогда как введение Тирама® на протяжении 21 суток
раза (p < 0,01), а идентифицированные в контрольной группе морганеллы не определялись в ТК крыс опытной группы . Зарегистрировано достоверное снижение числа коагулазоотрицательных стафилококков в 1,9 раза (p < 0,001) и энтерококков в 1,4 раза (p < 0,05) по сравнению с контрольной группой интактных животных . Грибы рода Candida не обнаружены у крыс, получавших Тирам® на протяжении 21 суток, как и в описанных ранее опытных группах
Наиболее выраженные изменения состава микробиоты ТК в результате воздействия Тирама® зафиксированы при сроке его введения, равном 28 суткам . Наиболее существенное сокращение значений определяемого показателя зафиксировано в отношении облигатных симбионтов ТК: бифидобактерий в 3 раза (p < 0,001), лактобактерий в 2,5 раза (p < 0,001), а также кишечных палочек с нормальной ферментативной активностью в 2,2 раза (p < 0,001) и со сниженной ферментативной активностью в 2,8 раза (p < 0,001) . Произошло снижение числа условно-патогенных эн-теробактерий, представленных энтеробактерами в 1,8 раза (p < 0,001), сальмонеллами в 1,7 раза (p < 0,01) и цитробактерами в 1,75 раза (p < 0,01) . Содержание факультативных грамположительных бактерий характеризовалось уменьшением значений определяемого показателя для коагулазоотрицательных стафилококков в 2,1 раза (p < 0,001) и для энтерококков в 1,5 раза (p < 0,05) В составе микробиоценоза описываемой экспериментальной группы не выявлено бактерий рода Morganella и грибов рода Candida
Состояние антиоксидантного статуса колоноцитов крыс оценивалось по активности КАТ и СОД, а также количественного содержания продуктов ПОЛ — МДА и ДК (табл . 2) .
привело к снижению значения определяемого показателя в 1,6 раза (р < 0,001), а в течение 14 суток — в 1,5 раза (р < 0,01) . Активность СОД сократилась во всех опытных группах, достигнув минимума
Таблица 2. Активность ферментов антиоксидантной защиты и содержание продуктов перекисного окисления липидов в гомогенате ткани толстой кишки крыс при введении Тирама®, М ± т
Показатель Контроль (интактные, 1 группа) Тирам® 7 сут. (2 группа) Тирам® 14 сут. (3 группа) Тирам® 21 сут. (4 группа) Тирам® 28 сут. (5 группа)
Малоновый диальдегид, моль/л 0,95 ± 0,10 1,34 ± 0,13* 1,76 ± 0,18*** 2,13 ± 0,22*** 2,44 ± 0,25***
Диеновые конъюгаты, у.е. 0,30 ± 0,04 0,54 ± 0,06*** 0,59 ± 0,07*** 0,66 ± 0,07*** 0,71 ± 0,08***
Каталаза, мкат/л 9,66 ± 0,97 7,17 ± 0,75 6,43 ± 0,70** 5,97 ± 0,61*** 4,98 ± 0,52***
Супероксид-дисмутаза, у.е. 12,85 ± 1,28 8,93 ± 0,89* 7,39 ± 0,80*** 6,12 ± 0,61*** 5,48 ± 0,61***
Примечания: * — p < 0,05; ** — p < 0,01; *** — p < 0,001 по сравнению с 1 группой
в группе «Тирам® 28 суток», т. е . в 2,3 раза (р < 0,001) .
В ходе эксперимента установлено, что содержание МДА и ДК увеличивалось прямо пропорционально срокам применения Тирама® . Так, введение пестицида в течение 7 суток привело к повышению концентрации МДА в 1,4 раза (р < 0,05), а ДК — в 1,8 раза (р < 0,001) по сравнению с контролем. В группе «Тирам® 14 суток» содержание МДА увеличилось в 1,8 раза (р < 0,001) и ДК — в 2 раза (р < 0,001), а в группе «Тирам® 21 сутки» — 2,2 раза (р < 0,001) для обоих показателей . Максимальных различий с контрольными величинами
значения определяемых показателей достигли в ткани ТК животных, получавших Тирам® в течение 28 суток, где зарегистрировано повышение концентрации МДА в 2,6 раза (р < 0,001), а ДК — в 2,4 раза (р < 0,001) .
В группе экспериментальных животных, получавших обычный рацион и воду в течение 21 суток после применения Тирама® (здесь и далее «контроль (стандартный рацион + вода)»), отмечалось увеличение содержания облигатных представителей микробиоценоза по сравнению с показателями крыс, получавших Тирам® в течение 28 суток (табл 3)
Таблица 3. Состав мукозной микробиоты (1д КОЕ/г) толстой кишки крыс при применении бифидумбактерина и аципола, М ± т
Выделенные микроорганизмы Тирам® 28 сут. (5 группа) Контроль (стандартный рацион + вода, 6 группа) Бифидумбак-терин® (7 группа) Аципол® (8 группа)
Lactobacillus spp. (лактобактерии) 2,50 ± 0,25 3,49 ± 0,37х 6,53 ± 0,69*** 8,12 ± 1,03**
Bifidobacterium spp. (бифидобактерии) 3,00 ± 0,27 5,14 ± 0,68ХХХ 9,52 ± 1,26** 7,37 ± 0,86
E. coli (кишечные палочки) c нормальной фермента-тивной активностью 2,18 ± 0,18 2,98 ± 0,30х 5,03 ± 0,50*** 5,36 ± 0,67***
E. coli (кишечные палочки) со сниженной фермента-тивной активностью 1,11 ± 0,11 2,48 ± 0,30ХХХ 4,68 ± 0,57*** 3,25 ± 0,39
Enterobacter spp. (энтеробактеры) 1,21 ± 0,08 3,06 ± 0,35ХХХ 2,12 ± 0,24* 1,23 ± 0,16***
Klebsiella spp. (клебсиеллы) 0 ± 0 3,38 ± 0,45ХХХ 1,49 ± 0,19*** 0 ± 0***
Morganella spp. (морганеллы) 0 ± 0 3,68 ± 0,39ХХХ 1,84 ± 0,18*** 0 ± 0***
Acinetobacterspp. (ацинетобактеры) 0 ± 0 2,53 ± 0,32ХХХ 0 ± 0*** 0 ± 0***
Salmonella spp. (сальмонеллы) 2,16 ± 0,27 5,70 ± 0,60ХХХ 2,17 ± 0,23*** 2,54 ± 0,34***
Citrobacter spp. (цитробактеры) 1,08 ± 0,11 3,47 ± 0,46ХХХ 2,77 ± 0,35 1,94 ± 0,24**
Enterococcus spp. (энтерококки) 1,04 ± 0,12 3,40 ± 0,36ХХХ 1,94 ± 0,21*** 1,80 ± 0,25***
Staphylococcus spp. (стафилококкки) коагулазоотрицательные 1,10 ± 0,13 4,90 ± 0,62ХХХ 2,64 ± 0,35*** 2,59 ± 0,29***
Staphylococcus aureus (золотистые стафилококки) 0 ± 0 3,11 ± 0,41ХХХ 0 ± 0*** 0 ± 0***
Proteus spp. (протеи) 0 ± 0 3,99 ± 0,40ХХХ 0 ± 0*** 0 ± 0***
Грибы рода Candida 0 ± 0 4,50 ± 0,55ХХХ 2,35 ± 0,25*** 1,48 ± 0,19***
Примечания: Х — р < 0,05 по сравнению с 5 группой, ^ — р < 0,01 по сравнению с 5 группой, га — р < 0,001 по сравнению с 5 группой; * — р < 0,05 по сравнению с 6 группой, ** — р < 0,01 по сравнению с 6 группой, *** — р < 0,001 по сравнению с 6 группой
Количество лактобактерий и бифидобактерий возросло в 1,4 раза (p < 0,05) и 1,7 раза (p < 0,001) соответственно по сравнению с контролем . Содержание E. coli с нормальной ферментативной активностью выросло в 1,4 раза (p < 0,05), тогда как количество кишечных палочек со сниженной ферментативной активностью увеличилось в 2,2 раза (p < 0,001) . При этом увеличилось содержание грамотрицатель-ных бактерий рода Enterobacter в 2,5 раза (p < 0,001), Salmonella в 2,6 раза (p < 0,001) и Citrobacter в 3,2 раза
(p < 0,001) . Кокковая микрофлора представлена коа-гулазоотрицательными стафилококками и энтерококками, количество которых возросло в 4,4 и 3,3 раза соответственно (p < 0,001) . Кроме того, в группе «контроль (стандартный рацион + вода)» идентифицированы отсутствовавшие в контроле «Тирам® 28 суток» бактерии вида Staphylococcus aureus, lg КОЕ/г которых достиг значения 3,11 ± 0,41. Видовое разнообразие микробиоты ТК животных группы «контроль (стандартный рацион + вода)» также было
представлено микроорганизмами, идентифицированными как Klebsiella (lg 3,38 ± 0,45), Morganella (Ig 3,68 ± 0,39), Acinetobacter (lg 2,53 ± 0,32), Proteus (lg 3,99 ± 0,40), грибы рода Candida (lg 4,50 ± 0,55) .
Применение пробиотика Бифидумбактерин® привело к увеличению количества лактобактерий и би-фидобактерий в 1,9 раза (p < 0,001) и 1,8 раза (p < 0,01) соответственно по сравнению с группой «контроль (стандартный рацион + вода)» (табл . 3) . Число кишечных палочек с нормальной ферментативной активностью превысило значение определяемого показателя в группе контроля в 1,7 раза (p < 0,001) . Количество E. coli со сниженной ферментативной активностью было в 1,9 раза (p < 0,001) выше, чем в контроле . Количество бактерий рода Enterobacter уменьшилось в 1,4 раза (p < 0,05), как и содержание клебсиелл (в 2,3 раза, p < 0,001) и морганелл (в 2 раза, p < 0,001) . Показатель КОЕ/г для бактерий рода Salmonella сократился в 2,6 раза (p < 0,001) . Содержание энтерококков уменьшилось в 1,7 раза (p < 0,001), как и количество коагулазоотрицательных стафилококков, значение определяемого показателя для которых снизилось в 1,9 раза (p < 0,001) . Количество грибов рода Candida сократилось в 1,9 раза (p < 0,001) . Идентифицированные в контрольной группе ацинетобактеры, золотистые
В условиях применения пробиотика Бифидумбактерин® статистической значимости достигли значения определяемого показателя в отношении МДА, концентрация которого снизилась в 1,8 раза (р < 0,001) . В отношении животных, получавших с целью коррекции дисбиоза симбиотик Аципол®, установлено сокращение концентрации продуктов ПОЛ. Содержание МДА снизилось в 2,7 раза (р < 0,001), при этом концентрация ДК была в 2,2 раза (р < 0,001) ниже контрольных значений.
стафилококки и протеи не выявлены у крыс, получавших Бифидумбактерин®.
В результате применения препарата Аципол® произошло нарастание содержания лактобактерий в 2,3 раза (p < 0,01) (табл 3) Показатель lg КОЕ/г для кишечных палочек с нормальной ферментативной активностью превысил контрольное значение в 1,8 раза (p < 0,001) . Изменение численности факультативных представителей микробиоты ТК животных характеризовалось снижением количества бактерий, относящихся к родам Enterobacter в 2,5 раза (p < 0,001), Salmonella — в 2,2 раза (p < 0,001), Citrobacter — в 1,8 раза (p < 0,01), Enterococcus — в 1,9 раза (p < 0,001) и Staphylococcus (коагулазоо-трицательные) — в 1,9 раза (p < 0,001) . Содержание грибов рода Candida сократилось в 3 раза (p < 0,001) После коррекции дисбиоза с помощью препарата Аципол® не было выявлено условно-патогенных клеб-сиелл, морганелл, протей, ацинетобактер и золотистых стафилококков
Для значений определяемых показателей АОЗ и содержания продуктов ПОЛ в ткани толстой кишки не установлено статистически значимых различий между группами «Тирам® 28 суток» и «контроль (стандартный рацион + вода)» (табл . 4) .
ОБСУЖДЕНИЕ
ТК как самая «густонаселенная» микроорганизмами часть кишечника играет особенно важную роль в организме человека и рассматривается в качестве самого большого пищеварительного, иммунного и эндокринного органа [16, 17]. Действие на макроорганизм экзогенных ксенобиотиков приводит к изменению динамического равновесия качественного и количественного состава кишечной микробиоты, что сопровождается
Таблица 4. Активность ферментов антиоксидантной защиты и содержание продуктов перекисного окисления липидов в гомогенате ткани толстой кишки крыс при применении пробиотика Бифидумбактерин® и симбиотика Аципол®, М ± т
Показатель Контроль (стандартный рацион + вода, 6 группа) Тирам® 28 сут. (5 группа) Бифидумбактерин® (7 группа) Аципол® (8 группа)
Малоновый диальдегид, ммоль/л 2,31 ± 0,24 2,44 ± 0,25 129 ± 013*** 0l85 ± 0l09***
Диеновые конъюгаты, у.е. 0,65 ± 0,07 0,71 ± 0,08 0l52 ± 0I06 0l29 ± 0l04***
Каталаза, мкат/л 6,74 ± 0,69 4,98 ± 0,52 6I91 ± 0.71 7l11 ± 0l72
Супероксиддисмутаза, у.е. 6,34 ± 0,67 5,48 ± 0,61 8l32 ± 0l84 7l99 ± 0l80
Примечание: *** — p < 0,001 по сравнению с 6 группой
нарушением колонизационной резистентности, терминального пищеварения, иммуномодулирующей функции, синтеза биологически активных веществ, к числу которых относятся продуцируемые симбионтами ТК СОД, КАТ и псевдоКАТ [1, 17] .
Пестициды, являясь высокоактивными соединениями, при поступлении в организм с пищей, могут представлять реальную опасность для здоровья человека, вызывая изменения неспецифических биохимических реакций обмена веществ во всех клетках [18, 19] .
Результаты проведенного эксперимента показывают, что все исследуемые сроки введения экзогенного ксенобиотика Тирама® оказали влияние на качественный и количественный состав микробиоты ТК и биохимические показатели в колоноцитах животных . При этом наибольшая выраженность изменений во всех группах определяемых показателей зарегистрирована у крыс, получавших Тирам® в течение 28 дней, что выражалось в уменьшении количества облигатных и условно-патогенных представителей микробиоценоза ТК; интенсификации ПОЛ в условиях ослабления АОЗ в ткани кишки, что свидетельствует об окислительном стрессе .
Многообразие выполняемых нормомикробиотой функций ведет к тому, что нарушение ее динамического равновесия под действием экзогенных факторов способно усугубить течение основного патологического процесса, индуцируя развитие системной патологии, к числу которой можно отнести воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, ожирение, атеросклероз, сахарный диабет и др [20]
Следует отметить, что описанные результаты исследования по введению Тирама® экспериментальным животным указывают на невозможность восстановления качественного и количественного состава микробиоты ТК, а также нормализации определяемых биохимических показателей за счет адаптационных возможностей макроорганизма в отсутствие коррекции, в связи с чем лабораторный синдром «дисбиоз» требует коррекции .
В результате курсового применения препаратов Бифидумбактерин® и Аципол® отмечалось восстановление вызванных введением Тирама® изменений состояния микробиоценоза ТК в виде увеличения количества облигатных бактерий на фоне снижения содержания факультативных представителей микробио-ты, причем наиболее выраженное влияние на значения определяемых показателей оказала коррекция с помощью Аципола®
При изучении изменений биохимических показателей в ткани ТК животных при применении препаратов Бифидумбактерин® и Аципол® зарегистрировано, что использование обоих препаратов способствовало нормализации содержания МДА в ткани ТК, кроме того, применение Аципола® привело к снижению
концентрации ДК в колоноцитах . Положительное влияние на процессы ПОЛ может быть связано с восстановлением динамического равновесия микробиоты ТК.
Таким образом, полученные результаты указывают на более выраженную эффективность синбиотика Аципола®, в связи с чем данный препарат может быть выбран для комплексной коррекции нарушений, вызванных введением Тирама®
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Все исследуемые сроки введения Тирама® оказали влияние на качественный и количественный состав микробиоты толстой кишки и биохимические показатели в колоноцитах животных. Применение пробиотика Бифидумбактерин® и симбиотика Аципол® привело к восстановлению качественного и количественного состава микроорганизмов толстой кишки, а также оказало положительное влияние на содержание продуктов перекисного окисления липидов в колоноцитах, но более выраженная эффективность была выявлена у сим-биотика Аципол®
ДОПОЛНИТЕЛЬНО
Финансирование. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов: Королев В. А. — концепция и дизайн исследования, анализ и интерпретация данных; Медведева О. А. — концепция и дизайн исследования, проверка критически важного интеллектуального содержания работы; Ряднова В. А. — концепция и дизайн исследования, написание текста; Шевченко А. В. — концепция и дизайн исследования, написание текста; Королев И. В. — анализ и интерпретация данных; Королев Е. В. — статистический анализ, анализ и интерпретация данных. Авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).
Funding. This article was not supported by any external sources of funding.
Conflict of interests. The authors declare no conflicts of interests. Contribution of the authors: A. V. Korolev — concept and design of the study, analysis and interpretation of data; O. A. Medvedeva — concept and design of the study, checking the critical intellectual content of the work; V. A. Ryadnova — concept and design of the study, writing the text; A. V. Shevchenko — concept and design of the study, writing the text; I. V. Korolev — analysis and interpretation of data; E. V. Korolev — statistical analysis, analysis and interpretation of data. The authors confirm the correspondence of their authorship to the ICMJE International Criteria. All authors made a substantial contribution to the conception of the work, acquisition, analysis, interpretation of data for the work, drafting and revising the work, final approval of the version to be published and agree to be accountable for all aspects of the work.
СПИСОК ИСТОЧНИКОВ
1. Нурузова З.А., Байматов Р.А., Жумамуродов С.Т. Воздействие различных факторов на биопленку микроорганизмов // Innova. 2019. № 2. С. 24-30. doi: 10.21626/XXXX-XXXX-2019-2-24-30
2. Clarke G., Stilling R.M., Kennedy P.J., et al. Minireview: Gut Microbiota: The Neglected Endocrine Organ // Мо1. Endocrinol. 2014. Vol. 28, No. 8. P. 1221-1238. doi: 10.1210/me.2014-1108
3. Годовалов А.П., Антонян А.А., Горбунова Е.А. Особенности микрофлоры толстокишечного биотопа, колонизированного S. aureus и C. albicans // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2018. № 5. С. 61-65.
4. Macfarlane G.T., Macfarlane S. Bacteria, colonic fermentatton, and gastrointestinal health // J. AOAC Int. 2012. Vol. 95, No. 1. P. 50-60. doi: 10.5740/jaoacint.sge_macfarlane
5. Максимова В.П., Усалка О.Г., Пацюркевич А.А., и др. Влияние фунгицида Тирама на сигнальные пути, вовлеченные в канцерогенез // Крымский журнал экспериментальной и клинической медицины. 2020. Т. 10, № 3. С. 100.
6. Королев В.А., Медведева О.А., Ряднова В.А., и др. Анализ объемов применения производных тирама в растениеводческом комплексе Курской области // Вестник РУДН. Серия: Экология и безопасность жизнедеятельности. 2020. Т. 28, № 2. С. 103-111. doi: 10.22363/2313-2310-2020-28-2-103-111
7. Jandric-Balen M., Bozikov V., Bistrovic D., et al. Antioxidant enzymes activity in patients with peripheral vascular disease, with and without presence of diabetes mellitus // Coll. Antropol. 2003. Vol. 27, No. 2. P. 735-743.
8. Королев В.А., Седых А.В., Азарова Ю.Э., и др. Состояние глута-тионового звена антиоксидантной защиты организма при фунги-цидной интоксикации и коррекции витамином А и расторопшей // Научные результаты биомедицинских исследований. 2022. Т. 8, № 2. С. 207-220. doi: 10.18413/2658-6533-2022-8-2-0-6
9. Плотникова Е.Ю., Захарова Ю.В. Иммуномодулирующие эффекты пробиотиков // Медицинский совет. 2020. № 15. С. 135-144. doi: 10.21518/2079-701Х-2020-15-135-144
10. Weiss G.A., Hennet T. Mechanisms and consequences of intestinal dysbiosis // Cell Mol. Life Sci. 2017. Vol. 74, No. 16. P. 2959-2977. doi: 10.1007/s00018-017-2509^
11. Хабриев Р.У., ред. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд. М.: Медицина; 2005.
12. Ефимов Б.А., Кафарская Л.И., Коршунов В.М. Современные методы оценки качественных и количественных показателей микрофлоры кишечника и влагалища // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002. № 4. С. 72-78.
13. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Богданова Е.А., и др. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника крыс // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. № 3. С. 61-65.
14. Несвижский Ю.В., Богданова Е.А., Зверев В.В., и др. Микробиоценоз пристеночного муцина желудочно-кишечного тракта крыс с индуцированным дисбиозом // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2007. № 3. С. 57-60.
15. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. М.: Медиа Сфера; 2002.
16. Macfarlane S. Microbial biofilm communities in the gastrointestinal tract // J. Clin. Gastroenterol. 2008. Vol. 42, No. 3, Pt. 1. P. 142-143. doi: 10.97/MCG.0b013e31816207df
17. Хавкин А.И., Комарова О.Н. Продукты метаболизма кишечной микрофлоры: возможна ли избирательная коррекция? // Вопросы современной педиатрии. 2015. № 14 (2). С. 212-218. doi: 10.15690/vsp.v14i2.1289
18. Ракитский В.Н., Чхвиркия Е.Г., Епишина Т.М. Оценка активности антиоксидантных ферментов в организме крыс при хроническом пероральном введении технического продукта — производного триазолов // Здравоохранение Российской Федерации. 2021. Т. 65, № 1. С. 45-49. doi: 10.47470/0044-197X-2021-65-1-45-49
19. Liu K., Li Y., Iqbal M., et al. Thiram exposure in environment: A critical review on cytotoxicity // Chemosphere. 2022. Vol. 295. P. 133928. doi: 10.1016/j.chemosphere.2022.133928
20. Ворвуль А.О., Бобынцев И.И., Медведева О.А. К вопросу о механизмах повышения проницаемости стенки кишечника при стрессе // Человек и его здоровье. 2022. Т. 25, № 2. С. 43-63. doi: 10.21626/vestnik/2022-2/05
REFERENCES
1. Nuruzova ZA, Baimatov RA, Jumamurodov ST. Effects of various factors on micro-organism biomembrane. Innova. 2019;(2):24—30. (In Russ). doi: 10.21626/XXXX-XXXX-2019-2-24-30
2. Clarke G, Stilling RM, Kennedy PJ, et al. Minireview: Gut Microbiota: The Neglected Endocrine Organ. Mol Endocrinol. 2014;28(8):1221-38. doi: 10.1210/me.2014-1108
3. Godovalov AP, Antonyan AA, Gorbunova EA. Peculiarities of microflora of the colonic biotope colonized by S. aureus and C. albicans. Experimental and Clinical Gastroenterology. 2018;(5):61-5. (In Russ).
4. Macfarlane GT, Macfarlane S. Bacteria, colonic fermentatton, and gastrointestinal health. J AOAC Int. 2012;95(1 ):50-60. doi: 10.5740/jaoacint.sge_macfarlane
5. Maksimova VP, Usalka OG, Patsyurkevich AA, et al. Vliyaniye fungitsida Tirama na signal'nyye puti, vovlechennyye v kantserogenez. Krymskiy Zhurnal Eksperimental'noy i Klinicheskoy Meditsiny. 2020; 10(3):100. (In Russ).
6. Korolev VA, Medvedeva OA, Ryadnova VA, et al. Analysis of thiram derivatives use in plant complex of the Kursk region. RUDN Journal of Ecology and Life Safety. 2020;28(2):103-1 1. (In Russ). doi: 10.22363/2313-2310-2020-28-2-103-111
7. Jandric-Balen M, Bozikov V, Bistrovic D, et al. Antioxidant enzymes activity in patients with peripheral vascular disease, with and without presence of diabetes mellitus. Coll Antropol. 2003; 27(2):735-43.
8. Korolev VA, Sedykh AV, Azarova YuE, et al. Status of the glutathione antioxidant defense in fungicide intoxication and correction with vitamin A and milk thistle. Research Results in Biomedicine. 2022;8(2):207-20. (In Russ). doi: 10.18413/2658-6533-2022-8-2-0-6
9. Plotnikova EYu, Zakharova YuV. Immunomodulatory effects of probiotics. Medical Council. 2020;(15): 135-44. (In Russ). doi: 10.21518/2079-701X-2020-15-135-144
10. Weiss GA, Hennet T. Mechanisms and consequences of intestinal dysbiosis. Cell Mol Life Sci. 2017;74(16):2959-77. doi: 10.1007/s00018-017-2509-x
11. Khabriyev RU, editor. Rukovodstvo po eksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniyu novykh farmakologicheskikh veshchestv. 2nd ed. Moscow: Meditsina; 2005. (In Russ).
12. Efimov BA, Kafarskaia LI, Korshunov VM. Modern methods for the evaluation of qualitative and quantitative changes in the characteristics of intestinal and vaginal microflora. Zhurnal Microbiologii, Epidemiologii i Immunobiologii. 2002;(4):72-8. (In Russ).
13. Vorob'ev AA, NesvizhskiT luV, Bogdanova EA, et al. Study of the parietal microflora in the rat intestine. Zhurnal Microbiologii, Epidemiologii i Immunobiologii. 2005;(3):61-5. (In Russ).
14. NesvizhskiT IuV, Bogdanova EA, Zverev VV, et al. Microbiocenosis of parietal mucin in gastrointestinal tract of rats with induced disbiosis. Zhurnal Microbiologii, Epidemiologii i Immunobiologii. 2007;(3):57-60. (In Russ).
15. Rebrova OYu. Statisticheskiy analiz meditsinskikh dannykh. Primeneniye paketa prikladnykh programm STATISTICA. Moscow: MediaSfera; 2002. (In Russ).
16. Macfarlane S. Microbial biofilm communities in the gastrointestinal tract. J Clin Gastroenterol. 2008;42(3, Pt 1):142-3. doi: 10.97/MCG. 0b013e31816207df
17. Khavkin AI, Komarova ON. Products of metabolism of the intestinal microflora: can we use the selective correction? Current Pediatrics. 2015;14(2):212-8. (In Russ). doi: 10.15690/vsp.v14i2.1289
18. Rakitskii VN, Chkhvirkiya EG, Epishina TM. Evaluation of the activity of antioxidant enzymes during chronic oral administration of a technical product derived from triazoles in the rats. Health Care of the Russian Federation. 2021;65(1):45-9. (In Russ). doi: 10.47470/0044-197X-2021-65-1-45-49
19. Liu K, Li Y, Iqbal M, et al. Thiram exposure in environment: A critical review on cytotoxicity. Chemosphere. 2022;295:133928. doi: 10.1016/j. chemosphere.2022.133928
20. Vorvul AO, Bobyntsev II, Medvedeva OA. On mechanisms of increased intestinal wall permeability under stress. Humans and Their Health. 2022;25(2):43-63. (In Russ). doi: 10.21626/vestnik/2022-2/05
ОБ АВТОРАХ
Королев Владимир Анатольевич, д.б.н., профессор; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4376-4284; eLibrary SPIN: 1180-1442; e-mail: medecol1@yandex.ru
Медведева Ольга Анатольевна, д.б.н., профессор; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2889-155X; eLibrary SPIN: 4394-4097; e-mail: olgafrida@rambler.ru
Ряднова Вера Анатольевна;
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-6957-7869; eLibrary SPIN: 5629-4557; e-mail: veraan8@ya.ru
*Шевченко Алина Владимировна, к.м.н.; ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2261-1577; eLibrary SPIN: 5273-2370; e-mail: alina7227@mail.ru
Королев Иван Владимирович;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6335-431 1; eLibrary SPIN: 5321-6825; e-mail: koroJeyva@kursksmu.net
Королев Егор Владимирович;
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3324-8689; eLibrary SPIN: 1056-3721; e-mail: korolevva@kursksmu.net
AUTHOR'S INFO
Vladimir A. Korolev, Dr. Sci. (Biol.), Professor; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4376-4284; eLibrary SPIN: 1180-1442; e-mail: medecol1@yandex.ru
Ol'ga A. Medvedeva, Dr. Sci. (Biol.), Professor; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2889-155X; eLibrary SPIN: 4394-4097; e-mail: olgafrida@rambler.ru
Vera A. Ryadnova;
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-6957-7869; eLibrary SPIN: 5629-4557; e-mail: veraan8@ya.ru
*Alina V. Shevchenko, MD, Cand. Sci. (Med.); ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2261-1577; eLibrary SPIN: 5273-2370; e-mail: alina7227@mail.ru
Ivan V. Korolev;
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6335-431 1; eLibrary SPIN: 5321-6825; e-mail: korolevva@kursksmu.net
Egor V. Korolev;
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3324-8689; eLibrary SPIN: 1056-3721; e-mail: korolevva@kursksmu.net
* Автор, ответственный за переписку / Corresponding author
