CC BY
29
УДК 616.149.66018.74-02:616.36-031.81 ]-07
СОСТОЯНИЕ ЭНДОТЕЛИЯ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ДИФФУЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ
А. П. Щекотова
В патогенезе хронических гепатитов (ХГ) и прогрессировании их в цирроз печени (ЦП) большое значение имеет нарушение внутрипеченочной гемодинамики, что может быть связано с повреждением эндоте-лиальной выстилки синусоидов и эндотели-альной дисфункцией (ЭД). Высокоспецифичными маркерами ЭД служат десквамирован-ные эндотелиоциты (ДЭЦ), оксид азота (N0), эндотелин-1 (ЕМ), васкулоэндотелиальный фактор роста (УЕСБ), фактор Виллебранда ^Ш) [1, 2]. Увеличение количества ДЭЦ, как маркера повреждения эндотелия, выявляется при многих патологических состояниях [3]. N0 и печень тесно связаны друг с другом: эта активная молекула может вырабатываться как непосредственно самими гепатоцита-ми, так и клетками ретикулоэндотелиальной системы печени. Выработка N0 осуществляется под действием N0-синтаз: нейрональ-ной и эндотелиальной (€N08), которые являются конституциональными изоформами. Индуцибельная синтаза N0 (Ш08) вырабатывается в разных клетках, в том числе и в гепатоцитах под действием провоспалитель-ных цитокинов, при этом избыток N0 оказывает цитолитическое, провоспалительное и проканцерогенное действие, стимулирует апоптоз. ЕN0S осуществляет базальную выработку N0, что обеспечивает оптимальный тонус сосудов, предотвращает апоптоз клеток, в том числе и гепатоцитов, способствует оптимальной перфузии в печени, предотвращает агрегацию тромбоцитов, нейтрализует свободные радикалы, обладает антимикроб-
ным эффектом [1, 2, 4]. Исследование N0 в крови при острых процессах в печени выявило активизацию его выработки, при хронических заболеваниях печени возникает угнетение процессов биосинтеза N0 [1, 4, 6]. Фармакологическая модуляция синтеза N0 — будущее терапии болезней печени. Тем не менее имеется противоречивость результатов исследований N0 при ХДЗП (хронические диффузные заболевания печени) [7, 8]. Антагонистом N0 по влиянию на тонус сосудов является ЕМ, он также является фактором роста и регенерации тканей при воспалении, регулирует ангиогенез. Максимальное количество ЕМ вырабатывается при эндотоксинемии, гипоксии, ишемии; повышение ЕМ отмечено и при опухолях. В некоторых исследованиях было отмечено повышение концентрации ЕМ при ЦП, которое коррелировало с выраженностью фиброза и портальной гипертензии [1, 2]. 0дним из маркеров повреждения эндотелия является УЕОЕ, который вырабатывается в эндотелии, макрофагах и других клетках. Этот фактор инициирует процессы ремоделирования существующих сосудов и формирование новых, влияет на проницаемость сосудов. Роль УЕОЕ в патогенезе заболеваний печени изучена мало [2, 5]. Показателем повреждения эндотелия считают vWF, значение его при ХДЗП практически не изучено [2].
Цель исследования — определить маркеры дисфункции и повреждения эндотелия у больных с ХДЗП, оценить выраженность повреждения и дисфункции эндотелия в группах больных с ХГ и ЦП.
Материалы и методы
Обследовано 80 пациентов с ХДЗП. Больные были разделены на две группы: в 1-ю группу включены 50 больных ХГ, 2-я группа состояла из 30 пациентов с ЦП преимущественно вирусной этиологии. Группа контроля составила 20 здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту.
Количество ДЭЦ в плазме крови определялось по методу J. Hladovec (1978) [5]. NO определяли с помощью теста, который основан на принципе превращения нитрата в нитрит методом ИФА с использованием набора «Systems» (США) на аппарате «StatFax» (США). Уровень Et-1 в плазме исследовали методом ИФА с использованием набора «Biomedica Gruppe» (США). VEGF определяли методом ИФА c использованием набора «Biosource» (США). Оценка функциональной активности vWF проводилась методом, основанным на его способности вызывать агглютинацию тромбоцитов в присутствии антибиотика ристоцетина, с использованием набора фирмы НПО «Ренам» на агрегометре «Биола-230».
Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с применением t-критерия Стьюдента. Результаты обработаны при помощи пакета программ Statistica 6.0.
Результаты исследования
и обсуждение
Обследовано 80 больных с ХДЗП, средний возраст составил 44 года (ХГ — 36 лет, ЦП — 52 года): мужчин — 45 человек, женщин — 35. Давность заболевания в среднем составляла 11,8 г. (при ХГ — 4 г., при ЦП — 19,5 г.). При ХГ выявлена фаза интеграции. ЦП вирусной этиологии — у 75%, криптоген-ный и алкогольный — в 25% случаев.
Показатели функционального состояния эндотелия при ХДЗП значимо отличались от аналогичных параметров у практически здоровых лиц (табл. 1). Увеличение количества ДЭЦ подтверждает наличие выраженного повреждения сосудистого эндотелия при ХДЗП. Достоверное снижение уровня N0 свидетельствует о недостаточной базовой выработке N0 в эндотелии, что в сочетании с повышением концентрации Еь1 указывает на дисбаланс соединений, влияющих на тонус сосудов.
Уровень УБОЕ при ХДЗП был достоверно повышен, что может свидетельствовать о неоангиогенезе и сосудистой перестройке в печени на фоне повреждения эндотелия. Активность vWF как маркера повреждения эндотелия также была достоверно повышена.
Таблица 1
Показатели Контрольная группа (n=26) Группа с ХДЗП (n=80) р
ДЭЦ, 104/л 3,02±1,21 7,01±1,92 0,001
NO, мкмоль/л 29,43±3,34 15,8±3,7 0,001
Et-1, фмоль/л 0,3±0,13 0,74±0,18 0,0001
VEGF, пг/мл 158,86±72,83 285,82±115,07 0,001
vWF, % 80,11±2,77 111,05±4,8 0,01
Примечание. р — достоверность отличий в сравниваемых группах.
Сравнительный анализ лабораторных показателей функционального состояния эндотелия у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени и в группе контроля ^±5)
Показатели дисфункции и повреждения эндотелия были более выраженными при ЦП по сравнению с больными ХГ (табл. 2).
При проведении корреляционного анализа установлено наличие достоверной
прямой взаимосвязи между количеством ДЭЦ и уровнем ЕМ, УЕОЕ и vWF и обратной достоверной взаимосвязи между количеством ДЭЦ и уровнем N0 как при ХГ, так и при ЦП (табл. 3).
Таблица 2
Сравнительный анализ лабораторных показателей функционального состояния эндотелия у больных хроническим гепатитом, циррозом печени и в группе практически здоровых лиц
Исследуемые показатели Контрольная группа (п=26) ХГ (п=50) ЦП (п=30) р (<)
М±8 М±8 М±8 p1(<) p2(<) ц3(<)
ДЭЦ, 104/л 3,02+1,21 5,89+1,18 8,12+2,67 0,001 0,001 0,01
N0, мкмоль/л 29,43±3,34 18,7+3,02 13,07+4,52 0,001 0,001 0,01
Е1>1, фмоль/л 0,3+0,13 0,68+0,23 0,79+0,24 0,001 0,001 0,01
УЕОБ, пг/мл 158,86+72,83 249,51+94,25 374,95+116,6 0,01 0,001 0,001
vWF, % 80,11+2,77 102,1+4,75 120+4,86 0,003 0,0001 0,01
Примечание. р1 — достоверность отличий в группах здоровых и больных ХГ;
р2 — достоверность отличий в группах здоровых и больных ЦП; р3 — достоверность отличий в группах больных ХГ и ЦП.
Таблица 3
Корреляционный анализ показателей дисфункции и повреждения эндотелия при хроническом гепатите и циррозе печени
Исследуемые показатели ХГ (п=50) ЦП (п=30)
г p г p
ДЭЦ и N0 -0,57 0,003 -0,92 0,00001
ДЭЦ и ЕЫ 0,76 0,00004 0,85 0,000005
ДЭЦ и VEGF 0,61 0,015 0,86 0,0003
ДЭЦ и vWF 0,55 0,014 0,8 0,000004
N0 и Ег-1 -0,91 0,00001 -0,74 0,0003
N0 иVEGF -0,49 0,125 -0,9 0,00001
N0 и vWF -0,57 0,017 -0,78 0,000006
Ег-1 и vWF 0,5 0,14 0,72 0,0003
VEGF и vWF 0,72 0,013 0,85 0,0002
Примечание. г — коэффициент корреляции; р — достоверность коэффициента корреляции.
Чем выше уровень Et-1, VEGF и vWF и ниже уровень NO, тем чаще наблюдалась де-сквамация эндотелия. Достоверная обратная взаимосвязь NO с Et-1, VEGF и vWF свидетельствует о дисбалансе вазоактивных соединений при дисфункции и повреждении эндотелия. Кроме этого была выявлена достоверная прямая взаимосвязь между уровнем VEGF и vWF, как в группе больных ХГ, так и в группе больных ЦП, что может свидетельствовать об активации ангиогенеза при повреждении эндотелия на фоне ХДЗП. Также установлено наличие достоверной прямой взаимосвязи между уровнем Et-1 и vWF и обратной взаимосвязи между NO и VEGF в группе больных ЦП, то есть повреждение эндотелия ведет к снижению его вазодилятирующе-го потенциала, увеличению выработки стимуляторов вазоконстрикции, ангиогенеза и агрегации тромбоцитов. Данные изменения могут приводить к нарушениям печеночной гемодинамики, а также свидетельствовать о процессах перестройки сосудистой системы печени.
Выводы
1. У больных с хроническими диффузными заболеваниями печени выявлены признаки повреждения эндотелия, что проявляется повышением уровня десквамированных эн-дотелиоцитов, васкулоэндотелиального фактора роста и фактора Виллебранда в плазме крови.
2. При хронических диффузных заболеваниях печени имеются признаки дисфункции эндотелия в виде снижения уровня оксида азота и повышения эндотелина-1 в плазме крови.
3. Изменения показателей эндотелиаль-ной дисфункции и маркеров повреждения эндотелия зависят от тяжести поражения печени: они более выраженные при циррозе печени по сравнению с хроническим гепатитом.
4. Дисфункция и повреждение эндотелия
могут являться значимыми патогенетическими факторами прогрессирования хронических заболеваний печени.
Библиографический список
1. Дисфункция эндотелия. Причины, механизмы, фармакологическая коррекция/ Под ред. Н. Н. Петрищева.— СПб.: Изд-во СПб ГМУ, 2003.— 184 с.
2. Звягинцева Т. Д. Современные представления о сосудистом эндотелии в норме и при патологии желудочно-кишечного тракта/Т. Д. Звягинцева, С. В. Гриднева// Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология.— 2005.— № 4.— С. 6—12.
3. Петрищев Н. Н. Диагностическая ценность определения десквамированных эндотелиоцитов в крови//Н Н. Петрищев, О. А. БерковиЧ///Клиническая лабораторная диагностика.— 2001.— № 1.— С. 50— 52.
4. Ратникова Л. И. Значение оксида азота в повреждении гепатоцитов при патологии печени/Л. И. Ратникова, И. В. Мельников// Эпидемиология и инфекционные болезни.— 2002.— № 4.— С. 50—54.
5. Dvorak H. F. Vascular permeability factor (vascular endothelial factor a critical cytokine in tumor angiogenesis and a potential target for diagnosis and therapy)//J. Clin. Med.— 2002.— Vol. 20.— P. 4368—4380.
6. Helmy H. Enhance vasodilatation endothelin autacdusm in paxient relith compensated cirrhosis and the role of nitric oxide/H. Helmy, D. E. Jahan, P. C. Hayes et al.//Jnt.— 2003.— Vol. 1.— P. 410—415.
7. Jastwal M. Nitric oxide in gastrointestinal epithelial cell carcinogenesis: Linking inflammation to oncogenesis /M. Jastwal, N. F. LaRusso, G. J. Gores//Am. J. Physiol.— 2001.— Vol. 61.— P. 6388—6393.
8. Hon W. M. Nitric oxide in liver diseases/ W. M. Hon, V. H. Lee, H. E Khoo et «¿//Annals of the New Jork Academy of sciences.— 2002.—Vol. 962.— P. 278—295.
A. P. Shchekotova
STATE OF EPITHELIUM IN CHRONIC DIFFUSIVE LIVER DISEASES
The aim of work was to characterize the state of epithelium in patients with chronic diffusive liver diseases (CDLD). Materials and methods: DF desquamated endotheliocytes (DEC), nitric oxide (NO), endothelin-1 (Et-1), vasculoendothelial growth factor (VEGF), von Willebrand factor (vWF) were determined in blood plasma of 80 CDLD patients. Results:
DEC quantity in patients was reliably large in comparison with control group: in chronic hepatitis - 5,89±1,18x104/l (р<0,001), in cirrhosis - 8,12±2,67*104/l (р<0,001). Nitric oxide level demonstrated expressed reduction, but Et-1 concentration, VEGF ND and vWF were reliably raised in CDLD patients. Conclusion: in chronic diffusive liver diseases there are signs of damage and dysfunction of epithelium which are more expressed in patients with cirrhosis.
Keywords: hepatitis, cirrhosis, endothelium, circulating endotheliocytes, nitrogen oxide, endothelin-1, vasculoendothelial growth factor, von Willebrand factor.
Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е. А. Вагнера
Материал поступил в редакцию 25.12.2008
