CC BY
81
Сибирский медицинский журнал, 2010, № 2
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ
© МАРТЫНОВ А.М., ДАРГАЕВА Т.Д. — 2010
СОСТАВ ПОЛИСАХАРИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ VIOLA LANGSDORFII
А.М. Мартынов, Т.Д. Даргаева ^Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах; 2Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений, Москва,
директор — акад. РАМН В.А. Быков)
Резюме. Выделены комплексы полисахаридов из надземной части Viola langsdorffii, с помощью физикохимических методов исследования установлен состав моносахаридов и их количественное соотношение. Ключевые слова: Viola langsdorffii Fischer ex Ging., полисахариды.
THE COMPOSITION OF POLYSACHARIDE COMPLEXES OF VIOLA LANGSDORFII
А.М. Martynov, Т.D. Dargaeva ('Irkutsk State Institute for Medical Advanced Studies,
2All-Russian Scientific Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants, Moscow)
Summary. The polysaccharide complexes have been extracted from overground part of Viola langsdorffii. The composition of monosaccharides and their quantity proportions were established by physical and chemical methods of research.
Key words: Viola langsdorffii Fischer ex Ging., Polysaccharides.
Фиалка Лангсдорфа Viola langsdorffii Fischer ex Ging. — многолетнее травянистое растение из сем. Violaceae, распространенное в Восточной Сибири, на Дальнем Востоке: на Сахалине, Камчатке и Курилах, применяемое в народной медицине: надземная часть издавна используется в качестве болеутоляющего, противовоспалительного и при аллопеции; корни — при желтухе, диарее, опоясывающем лишае [2, 5].
В надземной части фиалки Лангсдорфа найдены флавоноиды: витексин, ориентин, робинин, лютеолин-7-гликозид, афзелин; фенолкарбоновые кислоты и аминокислоты [4, 5], состав полисахаридов не изучен.
Цель работы — выделение и исследование состава полисахаридных комплексов надземной части фиалки Лангсдорфа.
Материалы и методы
Объектом изучения служила надземная часть фиалки Лангсдорфа, заготовленная в период массового цветения 2007-2008 гг. в Сахалинской области. Высушенное сырье измельчали и просеивали через сито 2 мм. Для выделения полисахаридных фракций использовали экстракцию водой и водными растворами кислот, солей и оснований [3]. Осаждение полисахаридов из водных растворов осуществляли спиртом этиловым. При исследовании полисахаридных комплексов травы фиалки Лангсдорфа выделены водорастворимые полисахариды (ВРСП), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлозы А и Б (ГЦ А и ГЦ Б). Схема выделения представлена на рис. 1.
Для извлечения низкомолекулярных сахаров и фенольных соединений 100 г растительного сырья трехкратно экстрагировали 70%-ным спиртом этиловым спиртом этиловым спиртом этиловым при нагревании на водяной бане с обратным холодильником (1:10).
Из воздушно-сухого шрота (шрот 1), оставшегося после экстракции, извлекали водорастворимые полисахариды: добавляли 1.5 л воды и на-
гревали в течение 1 ч. Повторное извлечение полисахаридов проводили дважды при соотношении сырья и экстрагента 1:10. Сырье отделяли центрифугированием. Полученные объединенные экстракты упаривали под вакуумом до 20% от первоначального объема. Затем полисахариды осаждали трехкратным количеством 96%-ного спирта этилового, выпавшие осадки отфильтровывали под вакуумом, затем последовательно промывали 96%-ным спиртом этиловым, ацетоном и высушивали.
Пектиновые вещества исчерпывающе извлекали из сырья, оставшегося после выделения водорастворимых полисахаридов, смесью 0,5% растворов щавелевой кислоты и оксалата аммония (1:1) при 80-85°С. Экстракцию проводили трехкратно. Объединенные извлечения кон-
Рис. 1. Схема выделения полисахаридов из надземной части фиалки Лангсдорфа.
центрировали под вакуумом и осаждали пятикратным объемом 96%-ного спирта этилового. Осадок отфильтровывали и промывали спиртом этиловым той же концентрации и высушивали.
Гемицеллюлозы А и Б экстрагировали из шрота 3, оставшегося после выделения пектиновых веществ, 10%-ным раствором гидроксида натрия при комнатной температуре в течение 12 ч при соотношении сырья и экстрагента (1:5). Гемицеллюлозу А выделяли путем добавления к извлечению ледяной уксусной кислоты. Осадок отфильтровывали и высушивали. К фильтрату, оставшемуся после выделения гемицеллюлозы А, добавляли трехкратный объем 96%-ного спирта этилового, в результате образовывался осадок гемицеллюлозы Б. Полученный осадок отфильтровывали, промывали спиртом этиловым и высушивали.
Количественное содержание отдельных полисахаридных комплексов, выделенных из надземной части определяли после высушивания гравиметрическим методом [1].
Идентификацию моносахаридного состава полисахаридных комплексов после их предварительного гидролиза серной кислотой (1 моль/л) [6] проводили с помощью бумажной (БХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Моносахариды идентифицировали методом бумажной хроматографии путем сравнения с достоверными образцами [7]. Хроматографирование осуществляли в системах растворителей: н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5) и н-бутанол-пиридин-вода (6:4:3). Проявляли хроматограммы анилинфталатным реактивом, активировали при температуре 100 — 110 °С в сушильном шкафу в течение 10-15 минут. На хроматограммах моносахариды проявлялись в виде коричневых пятен, совпадавших по значению Rf с известными образцами сахаров.
Качественный и количественный состав полисахаридных комплексов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Multichrom for Windows». Использовали металлическую колонку размером 4,6x250 мм с сорбентом Ультрасил-МН2. Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (85:15). Анализ проводили при температуре колонки 85°С со скоростью подачи элюента 3 мл/ мин. Продолжительность анализа составляла 30 мин. Детектирование осуществляли с помощью спектрофотометрического детектора при длине волны 190 нм.
Исследованию подвергались гидролизаты водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ, гемицеллюлозы А и Б. Параллельно готовили серию 0,6% водных растворов сравнения сахаров: рамнозы, ксилозы, мальтозы, глюкозы, лактозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы, маннозы и сорбита. По 20 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения сахаров вводили в хроматограф и хроматографировали по выше описанной методике.
Результаты и их обсуждение
Методом последовательной экстракции и осаждением спиртом этиловым из травянистой части фиалки Лангсдорфа получены 4 полисахаридные фракции: водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества, гемицеллюлозы А и Б. Количественное содержание отдельных фракций полисахаридов определяли после высушивания гравиметрическим методом [1]. В результате
Таблица 1
Углеводный состав полисахаридных комплексов фиалки Лангсдорфа
№ п/п Полисахаридный комплекс. Наименование сахара ВРПС ПВ ГЦА ГЦБ
Количественное содержание, %
1. Рамноза 8.б8 12.7 2.92 2.74
2. Ксилоза 4.2 14.72 - 13.87
3. Сорбит 26.33 - 8.15 5.11
4. Глюкоза 0.35 6.83 7.62 -
5. Лактоза 4.21 - - 0.23
б. Арабиноза - 1.81 1.20 -
7. Сахароза 0.02 - 1.44 1.22
8. Фруктоза 0.02 1.32 3.02 -
9. Галактоза 0.34 1.75 0.66 -
10. Манноза 3.17 - 0.17 -
содержание водорастворимых полисахаридов составляло 7,25%, пектиновых веществ — 9.51%, гемицеллюлозы А — 5.5% и гемицеллюлозы Б — 7.01%.
Выделенный комплекс водорастворимых полисахаридов представлял собой аморфный порошок желтовато-серого цвета, растворимый в воде, в водных растворах кислот и щелочей, но не растворимый в органических растворителях, осаждается спиртом и ацетоном. После кислотного гидролиза данный комплекс дает положительную реакцию с реактивом Фелинга.
Пектиновые вещества, выделенные из исследуемого объекта, представляли собой аморфный порошок бурвато-серого цвета, растворимый в воде. Водные растворы пектиновых веществ осаждаются 1% раствором алюминия сульфата с образованием пектатов. Гемицеллюлозы А и Б представляли собой аморфный порошок серовато-коричневого цвета.
Методом бумажной хроматографии в гидролизатах были идентифицированы рамноза, ксилоза, сорбит, глюкоза, лактоза, арабиноза, сахароза, фруктоза, галактоза, манноза, а также уроновые кислоты — глюкуроно-вая и галактуроновая.
Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в четырех исследуемых полисахаридных комплексах установлен качественный состав моносахаридов. По времени удерживания стандартных растворов в комплексах водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ, в гемицеллюлозе А и гемицеллюлозе Б идентифицировано 10 моносахаридов: рамноза, ксилоза, сорбит, глюкоза, лактоза, арабиноза, сахароза, фруктоза, галактоза, манноза. Методом внутренней нормализации установлено, что преобладающими в комплексе водорастворимых полисахаридов являются сорбит, рамноза, лактоза; — пектиновых веществ ксилоза, рамноза, глюкоза; в гемицеллюлозе А сорбит, глюкоза, фруктоза; в — гемицеллюлозе Б ксилоза и сорбит. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Таким образом, выделенные из надземной части фиалки Лангсдорфа углеводные комплексы представлены водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами, гемицеллюлозами А и Б, определено их количественное содержание. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в полисахаридных комплексах идентифицированы моносахариды: рамноза, ксилоза, сорбит, глюкоза, лактоза, арабиноза, сахароза, фруктоза, галактоза, манноза; установлено их количественное соотношение. С помощью бумажной хроматографии обнаружены также уроновые кислоты — галактуроновая и глюкуроновая.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. Вып. 2: 2. Зуев В.В. Сем. Ую1асеае — Фиалковые // Флора Сибири
Общие методы анализа. Лекарственное растительное сы- / Под ред. Г.А. Пешковой. — Новосибирск, Наука, 1996. — Т. рье. — М., 1989. 10. — С. 82-101.
3. Кочетков Н.К. Химия биологически активных природных соединений. — М., 1970. — 486 с.
4. Мартынов А.М., Собенин А.М. Фенольные соединения и аминокислоты травы фиалки Лангсдорфа (Viola langsdorffii Fischer ex Ging.) // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. — 2008. — № 4. — С. 37-39.
5. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав и использование / Под ред. А.А. Федорова. — Л.: Наука, 1986. — С. 20-29.
6. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов. Полисахариды. — М.: Высшая школа, 1978. — 256 с.
7. Хроматография на бумаге / Под ред. И.М. Хайса, К. Мацека. — М., 1962. — 851 с.
Информация об авторах: 664079, г. Иркутск, м/р-н Юбилейный, 100. Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, кафедра фармации. Мартынов Альберт Михайлович — к.ф.н., доцент.
Тел. (3952) 465386. E-mail: martinov_irk@mail.ru.
Даргаева Тамара Дарижаповна
© ТАБРИЗ Н.С. — 2010
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ФИТОПРЕПАРАТА «ЭКДИФИТ» В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ТУБЕРКУЛЕЗА
Н.С. Табриз
(Карагандинский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. М.К. Телеуов)
Резюме. В данной работе изучена эффективность применения фитопрепарата «Экдифит» в лечении больных туберкулезом легких, установлено, что препарат «Экдифит» в качестве анаболического, адаптогенного и тонизирующего средства повышает эффективность комплексного лечения туберкулеза легких.
Ключевые слова: растительный препарат «Экдифит», анаболик, адаптоген, клинические исследование, туберкулез.
THE EFFICIENCY OF PHYTOPREPARATION «ECDYPHYT» IN COMPLEX TREATMENT OF TUBERCULOSIS
N.S. Tabriz
(Karaganda State Medical University, Kazakhstan)
Summary. In this work are studied efficiency of use of phitopreparation «Ecdyphyt» in treatment of patients with pulmonary tuberculosis, as a result «Ecdyphyt» preparation was found to enhance the efficiency of complex therapy of pulmonary tuberculosis as anabolic, adaptogenic and invigorating agent.
Key words: herbal preparation «Ecdyphyt», anabolic, adaptogen, clinical investigation, tuberculosis.
В связи с неблагополучной эпидемической ситуацией по туберкулезу разработка и внедрение в практику эффективных методов его лечения приобретают первостепенное значение в современной фтизиатрии. Важным в этой проблеме представляется комплексный подход к лечению туберкулеза, который позволит значительно уменьшить резервуар туберкулезной инфекции [6]. В последние годы все большее внимания врачей разных специальностей привлекают препараты растительного происхождения, которые эффективно воздействуют на патологический процесс и выгодно отличаются от своих синтетических аналогов широтой терапевтического воздействия и низкой токсичностью [1].
Одной из перспективных групп лекарственных средств растительного происхождения являются фитопрепараты с анаболическим, адаптогенным и тонизирующим действием. Применение этих средств актуально при широком круге нозологий, сопровождающихся нарушением белкового анаболизма, общим истощением организма, потерей веса, астенией, задержкой роста, нарушением компенсаторных и адаптационных процессов [2].
К категории перспективных источников актопротекторных препаратов относится серпуха венценосная (БеттсШс оспгопсйа Ь.) [3,4]. На основе экстракта серпухи венценосной в АО «НПЦ «Фитохимия» создан лекарственный препарат «Экдифит», обладающий анаболическим, адаптогенным и тонизирующим свойством [5].
На базе Карагандинского областного противотуберкулезного диспансера проведена III фаза клинических испытаний препарата «Экдифит» в качестве анаболического, адаптогенного и тонизирующего средства.
Цель данного исследования состояла в изучении эффективности и безопасности применения препарата «Экдифит» в качестве анаболического, адаптогенного и тонизирующего средства у больных туберкулезом легких.
Программа III фазы клинических испытаний утверждена приказом Министра здравоохранения РК протокол №607 от 21.11.08 г.
Материалы и методы
Объектом клинического исследования служил препарат «Экдифит», разработанный на основе экстракта серпухи венценосной (БеттсМа coтonata Ь.). В состав препарата Экдифит входит активное вещество — экстракт серпухи венценосной — 0,24 г; вспомогательные вещества: тальк — 0,005г, стеарат Са — 0,005г, крахмал картофельный — 0,165г, лактоза — 0,24г, микрокристаллическая целлюлоза — 0,025 г.
Третья фаза клинического исследования проведена на 200 больных без ограничения в возрасте с диагнозом туберкулез легких и на 100 пациентах с диагнозом свинцовая и фосфорная интоксикация. Для оценки эффективности препарата «Экдифит» больные рандомизированы на основную и контрольную группы. В основной группе пациенты получали базисную терапию и препарат «Экдифит» по 1 таблетке 2 раза в день в течение месяца. Пациентам контрольной группы проводили базисную терапию без назначения препарата «Экдифит».
Критериями показателей эффективности служило увеличение массы тела, повышение аппетита, улучшение общего состояния, данных клинико-лабораторных и биохимических тестов.
В качестве оценки безопасности препарата «Экдифит» у испытуемых учитывался объективный и субъективный статус, результаты лабораторных показателей, а также изменение биохимических данных в крови.
При проведении второй фазы клинического исследования у пациентов до исследования, и после прове-
