CC BY
57
В. Н. БУБЕНЧИКОВА, С. А. ПРОХОРОВА
СОСТАВ И КАПИЛЛЯРОУКРЕПЛЯЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ВОДОРАСТВОРИМОГО ПОЛИСАХАРИДНОГО КОМПЛЕКСА КОЗЛОБОРОДНИКА ЛУГОВОГО (TRAGOPOGON PRATENSIS)
Кафедра фармакогнозии и ботаники ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет»,
Россия, 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3. E-mail: kaf.farmakognoz@kurskmed.com
Из травы козлобородника лугового методом экстракции горячей водой извлекался водорастворимый полисахаридный комплекс, выход которого составил 10,42%. Проведено качественное и количественное изучение моносахаридного состава и исследовано снижение проницаемости капилляров на кроликах.
Ключевые слова: козлобородник луговой, водорастворимый полисахаридный комплекс, экстракция горячей водой, снижение проницаемости капилляров.
V. N. BUBENCHIKOVA, S. A. PROKHOROVA
COMPOSITION AND REDUCE THE PERMEABILITY OF CAPILLARIES OF WATER-SOLUBLE POLYSACCHARIDE COMPLEXES FROM HERB TRAGOPOGON PRATENSIS
Department of pharmacognosy and botany, Kursk state medical university,
Russia, 305041, Kursk, steet K. Marksa, 3. E-mail: kaf.farmakognoz@kurskmed.com
Water-soluble polysaccharide complexes from herb Tragopogon pratensis were isolated by hot water extraction. Exit the water-soluble polysaccharide complexes amounted 10,42%. Their qualitative and quantitative composition were studied and found their reduce the permeability of capillaries in rabbits.
Key words: Tragopogon pratensis, water-soluble polysaccharide complexes, hot water extraction, reduce the permeability of capillaries.
Введение
Среди огромного количества лекарственных растений, находящихся в арсенале современной фитотерапии, существуют виды, фармакологическая активность которых научно не подтверждена, но они с успехом используются в народной медицине разных стран на протяжении тысячелетий. Одним из них и является козлобородник луговой - вид, широко распространенный на территории Центрального Черноземья. Род Tragopogon L. (от греч. tragos - козел, pogon - борода) впервые выделен и описан Карлом Линнеем, хотя был известен еще в Древнем мире. Его представители -двулетние и многолетние растения с млечным соком. Отвар корней козлобородника лугового используется при катаре верхних дыхательных путей, бронхите и при почечно-каменной болезни [2].
Несмотря на давнее использование козлобородника лугового в народной медицине, химический состав его практически не изучен.
Цель нашей работы заключалась в выделении и исследовании водорастворимого полисахаридного комплекса травы козлобородника лугового и изучении его отхаркивающих свойств.
Объектом исследования служила воздушно-сухая измельченная трава козлобородника лугового, заготовленная в 2008 г. в Курской области в период массового цветения растений.
Методика исследования
Для выделения водорастворимого полисахаридного комплекса воздушно-сухое измельченное сырье предва-
рительно обрабатывали 70%-ным спиртом этиловым для удаления полифенольных соединений. Затем воздушносухой шрот экстрагировали водой в соотношении 1:20 к массе сырья при нагревании до 95° С в течение 1 часа при постоянном перемешивании. Повторное извлечение полисахаридов проводили дважды водой в соотношении 1:10. Растительный материал отделяли центрифугированием и объединенные экстракты упаривали до 1/5 первоначального объема. Полисахариды осаждали тройным объемом 96%-ного спирта этилового при комнатной температуре. Выпавший плотный осадок полисахаридов отделяли, промывали 70%-ным спиртом этиловым, ацетоном. Полученные водорастворимые полисахаридные комплексы лиофильно высушивали [1].
Для установления моносахаридного состава водорастворимого полисахаридного комплекса проводили гидролиз 2н кислотой серной. Навеску вещества (0,05) помещали в ампулу емкостью 5-10 мл, прибавляли 2,5 мл раствора кислоты серной, запаивали ампулу и гидролизовали при температуре 100-105° С в течение 6 часов. Гидролизат нейтрализовывали бария карбонатом по универсальному индикатору до нейтральной реакции, отфильтровывали и осаждали спиртом этиловым. Образовавшийся осадок обрабатывали катионитом КУ-2 до кислой реакции. Разделение и идентификацию нейтральных моносахаридов проводили методом нисходящей хроматографии на бумаге в системе растворителей н-бутанол-пиридин-вода (6:4:3) параллельно со стандартными образцами сахаров. Кислые моносахара разделяли в системе «этилацетат - кислота муравьиная - вода - кислота уксусная» (18:1:4:3). Проявитель -
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010 УДК 577 114:58Z "8
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
Таблица 1
Характеристика водорастворимого полисахаридного комплекса, выделенного из травы козлобородника лугового
Выход ВРПС из воздушно-сухого сырья, % Моносахаридный состав, % к полисахаридному комплексу
Глюкоза Г алактоза а з о н и ю а р < Ксилоза Галактуроновая кислота
10,42 2,3 15,1 16,9 1,6 1,7
Таблица 2
Влияние водорастворимого полисахаридного комплекса травы козлобородника лугового на проницаемость капилляров у кроликов
Препарат Доза, мг/кг Латентный период появления пятен, мин Увеличение латентного периода появления пятен Диаметр пятен окрашивания, см Уменьшение диаметра пятен, %
мин %
Контроль 3,98±0,17 1,70±0,04
Полисахаридный комплекс 100 9,09±0,29* 5,11 128,40 0,97±0,04* 57,06
Примечание: различия по сравнению с контролем статистически достоверны при Р<0,05, п=10.
анилинфталат, температура проявления 100° С, длительность проявления 10-15 минут [5].
Определение количественного содержания сахаров в гидролизатах полисахаридов проводили денситометрически после хроматографии в тонком слое сорбента [5]. Точную навеску (0,05 г) полисахаридного комплекса растворяли в 5 мл раствора серной кислоты (1 моль/л), запаивали ампулу и проводили гидролиз при температуре 100-105° С в течение 6 часов. Гидролизат нейтра-лизовывали бария карбонатом и осадок отфильтровывали. Фильтрат упаривали до 1 мл и осаждали 10 мл 96%-ного спирта этилового. Образовавшийся осадок бариевых солей уроновых кислот отделяли, промывали 80%-ным спиртом этиловым. Спиртоводный фильтрат объединяли, упаривали в вакууме досуха. Сухой остаток, содержащий сумму нейтральных моносахаридов, растворяли в воде, количественно переносили в мерную колбу на 5 мл и доводили водой до метки. Осадок бариевых солей уроновых кислот снимали с фильтра, диспергировали в 2,5 мл воды, прибавляли катионит КУ-2 (Н+) до рН среды 3-4 по универсальному индикатору. Раствор фильтровали, упаривали в вакууме досуха. Сухой остаток, содержащий сумму кислых моносахаридов, растворяли в воде, количественно переносили в мерную колбу на 5 мл и доводили водой до метки. На пластинку с тонким слоем сорбента наносили микропипеткой 0,025 мл полученных растворов параллельно с растворами образцов нейтральных и кислых моносахаридов. В качестве образцов использовали моносахариды ЧДА, которые дополнительно 3 раза перекристаллизовывали из водно-спиртовых растворов и высушивали. Растворы сахаров наносили микропипеткой и пятна высушивали в токе теплого воздуха. Хроматографирование вели в системе растворителей: н-бутанол - кислота уксусная - вода (3:1:1). После разделения сахаров хроматограмму высушивали на воздухе 2 часа, затем равномерно обрабатывали ани-линдифениламинофосфатным реактивом (5 объемов 4%-ного раствора дифениламина и 1 объем концент-
рированной ортофосфорной кислоты). После выдержки на воздухе в течение 20 минут хроматограмму помещали в термостат на 10 минут. Сахара проявлялись в виде голубовато-зеленых, синих и коричневых пятен на бесцветном фоне. Концентрацию моносахаридов определяли на денситометре ERi фирмы «Карл Цейес Йена» (Германия).
Вторым этапом наших исследований было изучение влияния водорастворимого полисахаридного комплекса, выделенного из травы козлобородника лугового, на проницаемость капилляров, т. к. в возникновении и течении ряда патологических процессов, в том числе и воспаления, проявляющихся в виде геморрагических синдромов, большое значение имеет фактор сосудистой проницаемости.
Эксперименты проводили в соответствии с установленными документами «Об утверждении правил лабораторной практики» (МЗ РФ, приказ от 19 июня 2003 г. № 267), Good Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies (FDA, 21 CFR Part 58, 22.12.1978), OECD Principles on Good Laboratory Practice (OECD, ENV/ MC/ CHEM (98) 17, 1977).
Для исследования капилляроукрепляющего действия использовали модель локальной воспалительной реакции с помощью ксилола на кроликах-альбиносах массой 3,0-3,5 кг по методу Ойвина [4].
У кроликов выстригали шерсть на коже живота (участок 13 см). Препараты вводились внутримышечно за час до введения индикатора проницаемости, роль которого выполнял раствор трипановой сини. Трипа-новую синь вводили в краевую вену уха в виде 1%-ного раствора на 0,9%-ном растворе натрия хлорида из расчета 2 мл на 1 кг массы животного. Длительная циркуляция краски в кровеносном русле позволяет изучить нарушение проницаемости капилляров в течение нескольких часов после ее введения. Показателем проницаемости капилляров служило время появления на коже сине-окрашенных пятен и их диаметр. По разнице во времени появления пятен и их диаметру
до и после введения препаратов судили об их действии на проницаемость капилляров.
Результаты исследования
В результате проведенных исследований впервые из травы козлобородника лугового выделен водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПС), выход которого составил 10,42% (табл. 1). ВРПС из травы козлобородника лугового представляет собой аморфный порошок светло-кремового цвета; при растворении в воде образует опалесцирующие растворы (рН 1%-ных водных растворов находится в пределах 5-6); растворяется также в водных растворах кислот и щелочей и не растворяется в органических растворителях. ВРПС дает положительную реакцию осаждения со спиртом, ацетоном, реакцию с реактивом Фелинга после кислотного расщепления полисахаридов [3].
Методом хроматографии на бумаге параллельно с достоверными образцами сахаров в исследуемом ВРПС идентифицировали глюкозу, галактозу, арабинозу, ксилозу и галактуроновую кислоту. Денситометрически было установлено количественное содержание моносахаров: галактозы (15,1%), арабинозы (16,9%), глюкозы (2,3%), ксилозы (1,6%), галактуроновой кислоты (1,7%) (табл. 1).
Изучение капилляроукрепляющей активности водорастворимого полисахаридного комплекса травы козлобородника лугового показало, что в случае введения изучаемого препарата пятна окрашивания, свидетельствующие о проникновении трипановой сини через гис-тогематический барьер, появлялись значительно позже по сравнению с контролем, а диаметр пятен достоверно уменьшался. Это свидетельствует о наличии капилляроукрепляющего действия как одного из механизмов противовоспалительной активности изучаемого препарата.
Обсуждение
Таким образом, впервые из травы козлобородника лугового выделен и исследован водорастворимый полисахаридный комплекс. Установлено, что преобладающими моносахарами являются галактоза (15,1%), арабиноза (16,9%). Доказано наличие капилляроукрепляющего действия у водорастворимого полисахаридного комплекса, полученного из травы козлобородника лугового, что позволяет использовать данный препарат в качестве самостоятельного противовоспалительного средства или компонента комплексной терапии. Это позволит расширить ассортимент антифлогистических средств растительного происхождения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бубенчикова В. Н. Фармакогностическое исследование некоторых представителей флоры Центрального Черноземья // Науч. тр. ВНИИФ. - М., 1991. - Т. ХХ1Х. - 308 с.
2. Дикорастущие полезные растения России / Под ред. А. Л. Буданцева, Е. Е. Лесиовской. - СПб, 2001. - 482 с.
3. Степаненко Б. Н. Химия и биохимия углеводов // Полисахариды. - М., 1978. - 256 с.
4. Ойвин И. А., Ойвин В. И., Балуда В. П. О роли фибрина в механизме сосудистой проницаемости // Бюл. эксперим. биологии. -1962. - Т. 54. № 10. - С. 45-47.
5. Филиппов М. П. Колориметрическое определение уронид-ной части в пектиновых веществах // Изв. АН МССР: Сер. биол. и хим. наук. - 1973. - № 3. - С. 76-79.
6. Чернух А. М., Кауфман О. Я. Некоторые особенности патогенеза воспаления и заживления ран // Вестник АМН СССР. -1979. - № 38. - С. 17-20.
Поступила 28.07.2010
Э. Г. ВЕДЕШИНА, А. Н. БОНДАРЕНКО
СОСТОЯНИЕ ГЕМОМИКРОЦИРКУЛЯЦИИ ДЕСНЫ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДАХ ЛЕЧЕНИЯ ПАРОДОНТИТА
Кафедра стоматологии ФПК и ППС Кубанского государственного медицинского университета, Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Кубанская набережная, 52/1, оф. 5. E-mail: vedeshine@bk.ru
У 92 больных хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести проведен мониторинг показателей микроциркуляции крови в тканях пародонта при различных методах лечения. Доказано, что наиболее быстро и эффективно микроциркуляция крови нормализуется у больных при лечении пародонтита с применением жидкого синбиотика нормофлорина® - Д.
Ключевые слова: пародонтит, лечение, оценка микроциркуляции.
E. G. VEDESHINA, A. N. BONDARENKO
CONDITION OF GUM HEMOMICROCIRCULATION WITH DIFFERENT METHODS OF PERIODONTITIS TREATMENT
Dentistry department F. I. Q. and P. R. S. Kuban state medical university,
Russia, 350063, Krasnodar, Kubanskaya naberezhnaya st., 52/1, of. 5. E-mail: vedeshine@bk.ru
We monitored characteristics of microcirculation in periodontal tissues under various treatment methods in 92 patients with chronic generalized periodontitis of moderate degree. It was proved that the most rapid and effective normalization of blood microcirculation achieved in cases with the treatment of periodontitis with the use of liquid sinbiotic normoflorin® - D.
Key words: periodontitis, treatment, evaluation of microcirculation.
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010 УДК 616.314.17 - 008.1 - 08 - 031.81
