CC BY
92
УДК 547.913:543.544.32
СОСТАВ ЭФИРНОГО МАСЛА КЕДРОВОГО СТЛАНИКА (PINUS PUMILA) ИЗ ХАБАРОВСКОГО КРАЯ
© А.В. Стародубое1, Д.В. Домрачее2, А.В. Ткачёв2’3
1Дальневосточный научно-исследовательский институт лесного хозяйства, Волочаевская, 71, Хабаровск, 680030 (Россия)
2Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН, пр. Академика Лаврентьева 9, Новосибирск, 630090 (Россия)
ЗНовосибирский государственный университет, ул. Пирогова 2, Новосибирск 630090 (Россия) E-mail: atkachev@nioch.nsc.ru
Методом хромато-масс-спектрометрии изучен состав образцов эфирного масла кедрового стланика (Pinus pumila (РаИ.) Regеl., Pinaceae), произрастающего в Хабаровском крае. Анализ состава 7 образцов эфирного масла из хвои и древесной зелени с верхней, средней и нижней частей кроны показал, что основными компонентами эфирного масла являются a-пинен (23-38%), камфен (5,1-б,б%), Р-мирцен (3,4-б,1%), 3-карен (4,0-14,9%), лимонен (5,3-8,9%), Р-фелландрен (7,0-10,4%) и терпинолен (5,1-8,2%). В составе масла обнаруживается более 30 сесквитепеновых компонентов, среди которых доминируют кариофиллен (0,8-2,3%), гумулен (0,5-2,2%), 5-кадинен (2,1-4,5%), Т-кадинол (0,б-2,0%) и a-кадинол (0,7-2,5%), а также два дитерпеновых углеводорода — цембрен (0,4-1,5%) и изоцембрен (0,1-0,5%).
Ключевые слова: Pinus pumila, Pinaceae, Japanese stone pine, кедровый стланик, сосна кедровая стлани-ковая, сосна низкая, сосна стелющаяся, эфирное масло, монотерпеноиды, сесквитерпеноиды, хромато-масс-спектрометрия.
Работа выполнена при финансовой поддержке Программы интеграционных исследований СО РАН на 2009-2011 гг. (интеграционный проект №53 «Генофонд хвойных Урала и Сибири: структура, принципы сохранения и использование в селекционных программах»).
Введение
Кедровый стланик (сосна низкая, сосна кедровая стланиковая, сосна стелющаяся, англ.: Japanese stone pine) - Pinus pumila (РаИ.) Regеl. (Pinaceae) - вечнозеленое хвойное деревце с широко раскинутыми ветвями или сильно ветвистый крупный кустарник высотой до б-8 м с толщиной ствола 10-12 см у шейки корня. Ареал охватывает Дальний Восток, Восточную Сибирь, северо-восток Монголии, северо-восток Китая, северную Японию, Корею. Концентрируется кедровый стланик в основном по горным хребтам, выходя за верхнюю границу леса, где образует сплошные труднопроходимые заросли, а также в приморской полосе Охотского и Берингова морей, Татарского пролива и Тихоокеанского побережья (Курильские острова). В других районах Земли в естественных условиях стланик не встречается. Семена (так называемые орешки) употребляются в пищу в сыром виде и используются в кондитерском производстве. Различные части кедрового стланика (корни, побеги, хвоя, «орешки») в виде разнообразных продуктов (отваров, настоев, смолы (живицы) как таковой, жирного и эфирного масел) широко используются в традиционной медицине.
Вторичные метаболиты кедрового стланика исследовались начиная с 1970 г., когда были охарактеризованы экстрактивные вещества древесины [1]. Затем были изучены моно- и сесквитерпеновые углеводороды и некоторые окисленные производные живицы кедрового стланика [2], из живицы выделены новые дитерпеноидные компоненты [3], сесквитерпеновые соединения [4] и производные антикопаловой кислоты
* Автор, с которым следует вести переписку.
[5]. В экстракте хвои идентифицированы лабдановые кислоты и некоторые другие компоненты [б]. Эфирное масло кедрового стланика к настоящему моменту подробно изучено только для популяций из Японии [7, 8].
Настоящая работа посвящена изучению состава образцов эфирного масла, полученных из кедрового стланика Pinus pumila (РаИ.) Regеl. (Pinaceae), произрастающего в Хабаровском крае.
Экспериментальная часть
Сбор и подготовка растительного материала
Древесная зелень. Образцы древесной зелени кедрового стланика собирали в Городском лесничестве на территории Николаевского лесхоза Хабаровского края (южный склон г. Полигон перед перевалом Северный (LAT 53o 15', LON 140o 29'). Древесную зелень отбирали на склоне крутизной 20o и протяженностью 500 м (сверху вниз) в верхней, средней и нижней частях склона, которые различаются лесорастительными условиями*. Отбор в вертикальном разрезе растения производился в трех интервалах: верхней, средней и нижней частях кроны. Отбор проб проводился в соответствии с методикой биометрических расчетов [9] по минимальной выборке: древесную зелень по ГОСТ 217б9-84 [10] равными долями отбирали с 10-20 экземпляров деревьев, после чего смешивали. Минимальная масса общей пробы составляла более 10 кг. Наибольший диаметр веточек в нижнем отрубе не превышал S мм. Древесная зелень представляла собой совокупность хвои, коры и древесины. Массовая доля хвои и неодревесненных побегов составляла б0-80%, коры и древесины - 15-35%. Массовая доля других органических примесей составляла не более 5%, а доля неорганических примесей не превышала 0,2%.
Собранное сырье сохраняли до проведения пародистилляции (3-8 дней) при температуре - 20 oc, непосредственно перед пародистилляцией давали сырью самопроизвольно нагреться до комнатной температуры.
Хвоя. Образцы хвои снимали со срубленных побегов в день сбора (образец 1-1) и после выдерживания после сбора в течение суток при температуре +10+15 oc (образец 1-2).
Характериситики отобранных для пародистилляции образцов приведены в таблице 1.
Получение эфирного масла
Эфирное масло получали методом пародистилляции в лабораторной установке из нержавеющей стали при температуре пара 100-110 oc и давлении 1,0-1,5 атм. Полученное масло отлеляли во флорентийской склянке из стекла емкостью 20 л. После завершения дистилляции склянку оставляли на 1 сутки для завершения расслоения, воду сливали, масло фильтровали через бумажный фильтр. Выход эфирного масла из древесной зелени растения рассчитывался в процентах как от массы загружаемого сырья, так и от абсолютно сухой массы, для чего навески сырья высушивали в бюксах в сушильной камере при +40 oc до постоянного веса.
Характериситики полученных образцов эфирного масла приведены в таблице 2.
Физико-химические измерения
Плотность масла определяли при помощи набора ареометров при +20 oc. Показатель преломления в трёхкратной повторности измеряли на лабораторном рефрактометре при +20 oc. Кислотное число определяли по ГОСТ 17823.1-72 [11].
Хромато-масс-спектрометрическое исследование
Подготовка образцов для анализа. Анализируемую смесь (1-10 мкл) растворяли в 500 мкл ацетона, и к полученному раствору добавляли 100 мкл гексанового раствора смеси, содержащей равные весовые количества нормальных углеводородов CS, C9 ... C24 суммарной концентрации 0,1%.
Хромато-масс-спектрометрия. Хромато-масс-спектрограммы регистрировались на приборах Agilent 5973N (НИОХ СО РАН) и Agilent 5973N EI/PCI (Факультет естественных наук, Новосибирский государственный университет). Разделение компонентов исследуемых эфирных масел проводили на газовых хроматографах серии Agilent б890, входящих в состав упомянутых хромато-масс-спектрометрических систем. Разделение осуществляли на кварцевой капиллярной колонке HP-5ms длиной 30 м и внутренним диаметром
*
Детальное описание лесорастительных условий - состава древесного, кустарникового, травяно-кустарничкового ярусов, а также мохового и лишайникового покровов доступны в Лаборатории автора по дополнительному запросу:
А.В. Стародубов, Дальневосточный научно-исследовательский институт лесного хозяйства, Волочаевская, 71, Хабаровск, 680030 (Россия); тел./факс: (4212)216798, электронная почта: Forest@fefri.khv.ru
0,25 мм, неподвижная фаза — сополимер 5%-дифенил-95%-диметилсилоксан, толщина пленки неподвижной фазы 0,25 мкм. Температура испарителя — 280 °С, объем пробы — 1 мкл, разделение потока 100 : 1. Температурный режим колонки:
50 °С (2 мин) - 50-240 °С (4°/мин) - 240-280 °С (20°/мин) - 280 °С (5 мин).
Газ-носитель — гелий с постоянным потоком 1 мл/мин. Температура интерфейса между хроматографом и масс-селективным детектором - 280 °С. Масс-спектры регистрировались на квадрупольном масс-спектрометре НР MSD 5971 при ионизации электронным ударом с энергией ионизирующих электронов 70 эВ. Данные собирались со скоростью 1,9 скан./сек в диапазоне 30-650 а.е.м. (Agilent 5973N) или 3 скан./сек в диапазоне области 29-500 а.е.м. (Agilent 5973N EI/PCI). Задержка между вводом пробы в испаритель хроматографа и началом записи хромато-масс-спектрограммы составляла 3,0 мин.
Вычисление линейных индексов удерживания Jx проводили по формуле
t — t
J = J + 100k Rx Rn , (1)
x n t — t
R( n+k) Rn
где Jn = 100n - индекс удерживания н-алкана, содержащего в молекуле n атомов углерода; tR - абсолютные времена удерживания компонентов; tx - время удерживания исследуемого вещества; а tn и tn+k - времена удерживания ближайших реперных н-алканов, с числом атомов углерода соответственно n и n + к, причем обычно tn < tx < tn+k.
Идентификация компонентов. Компоненты исследуемых смесей идентифицировали по полным масс-спектрам, значениям линейных индексов удерживания, приведенных в руководстве [12], и собственной библиотекой хромато-масс-спектрометрических данных.
Количественный анализ выполняли методом внутренней нормировки по площадям газохроматографических пиков без использования корректирующих коэффициентов. За 100% принимали сумму площадей пиков компонентов с линейными индексами удерживания в диапазоне 850-2000.
Результаты хромато-масс-спектрометрического исследования образцов показаны в таблице 3.
Таблица 1. Характеристика исследованных образцов сырья Pinuspumila (РаП.) Regеl.
№ Характер растительного материала Части кроны, с которых проводился отбор материала Дата сбора Часть склона Высота над уровнем моря, м
1-1 хвоя нижняя + средняя + верхняя 10.07.2007 средняя 320
1-2 хвоя нижняя + средняя + верхняя 10.07.2007 средняя 320
2-1 древесная зелень верхняя 18.10.2007 средняя 320
2-2 древесная зелень средняя 18.10.2007 средняя 320
2-3 древесная зелень нижняя 18.10.2007 средняя 320
2-4 древесная зелень нижняя + средняя + верхняя 23.10.2007 верхняя 350
2-5 древесная зелень нижняя + средняя + верхняя 23.10.2007 нижняя 290
Таблица 2. Характеристика полученных образцов эфирного масла Pinus pumila (РаП.) Regеl.
Выход масла Характеристики масла 1
Вес Продолжитель- мл в расчете на в пересчете плотность, Показатель кислотное
№ сырья, кг ность пародис-тилляции, ч вес свежесобранное сырье, % на вес абсолютно сухого сырья, % г/см3 преломления число
1-1 20,0 10,0 80 0,34 0,б4 0,8б1 1,4731 0,25
1-2 25,0 8,0 120 0,41 0,77 0,8б1 1,4739 0,25
2-1 13,4 8,0 б5 0,42 0,91 0,8б4 1,4752 0,25
2-2 12,0 10,0 74 0,54 1,13 0,8б8 1,47б8 0,25
2-3 14,8 8,5 77 0,45 0,91 0,8б9 1,4774 0,25
2-4 19,0 8,0 92 0,42 0,89 0,8бб 1,4750 0,25
2-5 15,5 8,0 б9 0,39 0,75 0,8б7 1,47бб 0,25
Результаты и обсуждение
Как видно из таблицы 3, все 7 исследованных образцов эфирного масла Ріпш' ритіїа (Раїї.) Regеl. схожи между собой по составу: во всех образцах доминирующими оказываются одни и те же компоненты, причем их соотношения меняются в очень узких пределах. Эфирное масло из хвои (образцы 1-1 и 1-2) отличаются повышенным содержанием а-пинена, р-мирцена и терпинолена и пониженным содержанием 3-карена. В образцах, отобранных в вертикальном разрезе деревьев (образцы 2-1, 2-2 и 2-3), чем ближе к вершине, тем больше в масле доля монотерпеноидов и больше доля сесквитерпе-новых соединений. Образцы масла из растений с разных частей склона (образцы 2-4 и 2-5) заметно различаются по содержанию двух монотерпенов — 3-карена и лимонена.
Таблица 3. Состав образцов эфирных масел Ріпияритіїа (Раїї.) Regеl. по результатам хромато-масс-спектрометрии и данным литературы [7, 8]
Название компонента I Номера образцов по таблице 2 Лит. данные
1-1 1-2 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 [7] [8]
Содержание компонентов в % от цельного масла*
3-гексен-1-ол - - - - - - - 0,1
сантен 884 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,3 0,3 0,17 0,2
трициклен 921 0,5 0,5 0,5 0,4 0,4 0,5 0,5 0,38 0,5
а-туйен 926 1,1 1,0 0,3 0,3 0,3 0,6 0,7
а-пинен 932 37,4 38,1 27,6 26,9 23,1 33,2 30,6 9,95 18,5
камфен 947 5,8 5,4 5,6 5,1 4,6 6,1 6,6 5,24 5,2
сабинен 973 0,6 0,3 0,4 0,2 0,2 0,3 0,2 0,30 0,5
Р-пинен 975 3,2 2,9 4,3 3,0 2,8 2,7 3,7 1,20 1,3
Р-мирцен 991 6,1 5,3 4,6 3,4 4,2 3,4 4,6 1,52 1,7
а-фелландрен 1004 0,8 0,7 0,7 0,8 0,8 0,8 0,9 0,3
3-карен 1010 5,4 6,9 14,9 12,8 9,4 10,5 4,0 11,77 10,4
а-терпинен 1017 0,7 0,5 0,5 0,5 0,5 0,6 0,5 0,13 0,1
пара-цимол 1024 0,4 0,3 0,3 0,2 0,3 0,3 0,3 0,1
лимонен 1028 8,2 7,9 8,9 6,9 6,5 5,3 8,1 9,13 4,9
Р-фелландрен 1028 8,0 7,0 10,4 10,4 9,1 9,0 9,5 0,42 1,2
цис-Р-оцимен 1038 + + 0,1 + + + +
2-гептилацетат 1043 + + 0,1 0,2 0,2 + +
транс-Р-оцимен 1048 0,1 + 0,3 0,3 0,3 0,2 0,2 0,33і
у-терпинен 1058 1,0 0,7 0,6 0,6 0,6 0,7 0,6 0,23 0,2
пара-мента-2,4(8)-диен - - - - - - - 0,07
терпинолен 1088 8,2 6,8 5,3 5,1 5,2 6,9 5,9 2,15 3,1
4-терпинеол 1077 0,3 0,4 0,3 0,3 0,4 0,4 0,3 0,39 0,2
а-терпинеол 1091 0,4 0,4 0,4 0,5 0,8 0,6 0,5 0,10
линалоол - - - - - - - 0,07
метилхавикол 1199 0,1 + 0,1 + 0,1 0,1 0,1
метиловый эфир тимола 1236 0,1 + 0,1 + 0,2 0,2 0,3
линалилацетат - - - - - - - 0,10
борнилацетат 1287 1,3 0,6 0,3 0,2 0,3 0,3 0,5 0,43 0,2
а-терпенилацетат 1351 1,3 1,4 1,3 1,5 2,2 1,4 1,5 0,1
а-кубебен 1351 0,1 + 0,1 0,2 0,2 0,1 0,1 0,33 0,1
а-копаен 1378 0,1 + 0,1 0,2 0,3 0,1 0,2 0,62 0,2
Р-бурбонен - - - - - - - 0,13 0,1
Р-элемен 1392 + + + 0,1 0,1 + 0,1 4,81 0,3
лонгифолен 1408 0,3 0,3 0,4 0,5 0,8 0,5 1,1
кариофиллен 1422 0,8 1,3 0,9 1,6 2,3 1,4 1,8 0,40 2,8
Р-копаен - - - - - - - 7,5
аромадендрен 1440 + + - + 0,2 + 0,1
мурола-3,5-диен - - - - - - - 0,1
гумулен 1456 0,5 0,8 0,8 1,6 2,2 1,2 1,5 0,86 2,0
Е-Р-фарнезен - - - - - - - 0,1
транс-мурола-4(14),5-диен - - - - - - - 0,3
9-эпи-кариофиллен 1469 - - - - - - 0,2
Продолжение таблицы 3
Название компонента I 1-1 1-2 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 [7] [8]
транс-кадина-1(6),4-диен 1476 0,1 0,2 0,1 0,2 0,3 0,2 0,2 0,2
у-муролен 1480 0,2 0,3 0,2 0,3 0,5 0,3 0,4 0,8
гермакрен Б 1484 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,1 7,62
бициклосесквифелландрен 1494 + + + + 0,2 + + 0,3
углеводород С15Н24 * 1497 0,1 0,2 0,1 0,2 0,4 0,2 0,3
бициклогермакрен 1500 0,2 0,2 0,2 0,2 0,3 0,2 0,2 1,9
а-муролен 1502 0,5 0,8 0,5 0,8 1,1 0,7 0,9 1,87 1,4
Р-бизаболен 1511 + + 0,3 0,4 0,6 0,3 0,5
у-кадинен 1517 0,8 1,3 0,7 1,2 1,6 1,0 1,4 8,7
каламенен - - - - - - - 0,13
5-кадинен 1527 2,1 3,3 1,9 3,4 4,5 2,9 3,4 11,89п 0,4
транс-кадина-1,4-диен 1536 + + + 0,2 0,2 + 0,2 0,2
а-кадинен 1541 + + + 0,2 0,2 + 0,2
Е-а-бизаболен 1545 0,3 + 0,5 0,4 0,7 0,4 0,3 0,8
гермакрен Б-4-ол - - - - - - - 0,6
спатуленол 1580 - - + + 0,2 + + 0,24 0,6
глобулол 1587 - + 0,2 0,3 0,5 0,3 0,3 0,2
гумулен-6,7-эпоксид 1612 - - + + 0,2 + +
1-эпи-кубенол 1632 + + 0,1 0,3 0,5 0,2 0,2 0,5
Т-кадинол 1643 0,6 0,9 1,0 1,7 2,0 1,3 1,3 2,17 2,3
Т-муролол 1644 0,2 0,4 0,4 0,7 0,9 0,5 0,6 2,8
кубенол - - - - - - - 0,5
5-кадинол 1649 0,2 0,3 0,3 0,5 0,6 0,4 0,4 0,9
а-кадинол 1658 0,7 1,1 1,4 2,2 2,5 1,6 1,6 5,82 7,3
а-бизаболол 1688 + - + 0,5 0,8 0,4 0,6
цембрен 1937 0,4 0,8 0,9 1,3 1,5 0,8 0,9
изоцембрен 1950 0,1 0,2 0,3 0,5 0,5 0,3 0,3
маноилоксид - - - - - - - 0,3
маноол - - - - - - - 0,4
эпи-маноол - - - - - - - 0,5
сандаракопимариналь - - - - - - - 0,4
Сумма идентифицированных, %: 99,7 99,9 99,7 99,7 99,8 99,9 99,8 80,97 94,3
Примечания: “"Приведены компоненты, содержание которых хотя бы в одном образце не ниже 0,1%; знак «+» означает, что компонент присутствует, но его содержание <0,1%. ^Неустановленный изомер оцимена. *Неидентифицированный сесквитерпеновый углеводород с масс-спектром т/2: 204 (57%), 189 (66), 175 (24), 161 (94), 147 (28), 133 (45), 119 (87), 107 (77), 105 (100), 93 (63), 91 (67), 81 (34), 79 (39), 77 (26), 67 (18), 55 (22), 41 (28). пСмесь 5-каданен + геранилацетат.
Состав эфирного масла, полученного из кедрового стланика, изучался ранее на примере популяций из Японии [7, 8]. В работе [7] описан состав эфирного масла, полученного пародистилляцией хвои с выходом 2% («20 мл/кг, в расчете на сухую хвою). Значительное количество компонентов авторам не удалось идентифицировать, причём, судя по массам приведённых в работе молекулярных ионов, не идентифицированными окзались в основном сесквитерпеновые и кислородсодержащие сесквитер-пеноиды. Следует отметить значительное содержание в масле гермакрена Б (7,62%). Выход эфирного масла, полученного гидродистилляцией хвои, составил 2,33% [8]. Особенностью состава этого масла является отсутствие гермакрена Б на фоне значительного содержания ряда других сесквитерпеновых углеводородов (в сумме более 25% от цельного масла): Р-копаен (7,5%), кариофиллен (2,8%), гумулен (2,0%), у-кадинен (8,7%), а-муролен (1,4%), Т-кадинол (2,3%), Т-муролол (2,8%) и а-кадинол (7,3%). В этом образце был также обнаружен не идентифицированный дитерепеновый углеводород (4,8%).
Сопоставление полученных нами данных по составу эфирного масла кедрового стланика Ріпи' ритіїа (Раїї.) Regеl. со сведениями, опубликованными в литературе (см. табл. 3), показывает, что во всех исследованных образцах масла доминирующими компонентами являются одни и те же монотерпеновые углеводороды, а их соотношения очень схожи для всех образцов в таблице 3. Исключение составляет лишь Р-фелландрен, содержание которого, по данным работы [7], не превышает 0,42%. Примечательным является присутствие во всех исследованных нами образцах дитерпеновых углеводородов цембрена и изоцембрена. Эти соединения, как было показано в работе [2], совершенно отсутствуют в смоле (живице) кедрового стла-
ника. Во всех исследованных нами образцах суммарное содержание этих веществ примерно одинаково, как и соотношение цембрен/изоцембрен (от 3 : 1 до 4 : 1), что указывает на возможность образования этих углеводородов как артефактов при длительной дистилляции в результате дегитратации цембрановых предшественников — изоцемброла и 4-эпи-изоцемброла, которые в следовых количествах обнаружены в живице [2].
Благодарности
Авторы выражают благодарность И. Д. Стародубовой, Е.И. Стародубовой и В.Г. Стародубову за помощь в сборе растительного материала, А.П. Ковалёву за организацию полевых работ, Ю.Г. Тагильцеву, Р. Д. Колесниковой и А. А. Нечаеву за переработку растительного сырья.
Список литературы
1. Мамонтова Г.А., Лисина А.И., Пентегова В.А. Экстрактивные вещества древесины Pinus pumila (Pall.) Regel. // Известия СО АН СССР. 1970. №12 (вып. 5). С. 121-124.
2. Ралдугин В.А., Хан В.А., Дубовенко Ж.В., Пентегова В.А. Терпеноиды живицы Pinus pumila // Химия природных соединений. 1976. №3. С. 299-302.
3. Ралдугин В.А., Деменкова Л.И., Пентегова В.А. Новые дитерпеноидные компоненты живицы Pinus pumila // Химия природных соединений. 1978. №3. С. 345-349.
4. Хан В.А., Гатилов Ю.В., Дубовенко Ж.В., Пентегова В.А. Моно- и сесквитерпеноиды живиц Pinus koraiensis и P. pumila. Кристаллическая структура lp,4aH,7aH,10pH-гвaйaн-5a,14-диолa // Химия природных соединений. 1980. №4. С. 505-510.
5. Ралдугин В.А., Пентегова В.А. Производные антикопаловой кислоты и другие новые соединения из живицы Pinus pumila // Химия природных соединений. 1983. №2. С. 158-162.
6. Ралдугин В. А., Деменкова Л.И., Пентегова В.А. Лабдановые кислоты и другие компоненты хвои Pinus pumila // Химия природных соединений. 1985. №2. С. 206-211.
7. Yatagai Mitsuyoshi, Sato Toshiya. Terpenes of leaf oils from conifers // Biochemical Systematics and Ecology. 1986. V. 14. N5. Pp. 469-478.
S. Kurose Kohsuke, Okamura Daigo, Yatagai Mitsuyoshi. Composition of the essential oils from the leaves of nine Pinus species and the cones of three of Pinus species // Flavour and Fragrance Journal. 2007. V. 22. Pp. 10-20.
9. Плохинский H.A. Биометрия. М., 1970. 367 с.
10. ГОСТ 21769-84. Зелень древесная. Технические условия. - Взамен ГОСТ 21769-76; Введ. 01.01.1985; Дата последнего издания: 28.06.1984.
11. ГОСТ 17823.1-72. Продукты лесохимические. Метод определения кислотного числа. - Введ. 01.07.1973; Дата последнего издания: 01.06.1999.
12. Ткачёв А.В. Исследование летучих веществ растений. Новосибирск, 2008. 969 с.
Поступило в редакцию 8 июля 2009 г.
